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日粮纳米锌水平对公羊睾丸和附睾Cu-ZnSOD表达的影响 被引量：8
1
作者 任有蛇 秦小伟 +4 位作者 郭丽娜 赵辉 刘文忠 张建新 张春香 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1622-1630,共9页
旨在研究日粮纳米锌对公羊睾丸和附睾铜锌超氧化物歧化酶基因(Cu-ZnSOD)mRNA和蛋白表达的影响。将16只9月龄体重相近、健康状况良好的晋中绵羊公羊随机分成4组,分别喂给基础日粮(对照组),基础日粮+纳米锌(50、100和150mg·kg-1 DM)... 旨在研究日粮纳米锌对公羊睾丸和附睾铜锌超氧化物歧化酶基因(Cu-ZnSOD)mRNA和蛋白表达的影响。将16只9月龄体重相近、健康状况良好的晋中绵羊公羊随机分成4组,分别喂给基础日粮(对照组),基础日粮+纳米锌(50、100和150mg·kg-1 DM)。预饲期10d,正试期80d。试验结束时采集绵羊睾丸和附睾组织。采用RT-PCR、Western blotting和免疫组化技术检测其Cu-ZnSOD mRNA、Cu-ZnSOD蛋白表达及在睾丸中定位情况。结果显示:绵羊睾丸和附睾组织Cu-ZnSOD mRNA表达量顺序是附睾头≥睾丸>附睾体>附睾尾。日粮添加50~100mg·kg-1纳米锌可增加其睾丸和附睾组织Cu-ZnSOD mRNA和蛋白表达量。免疫组化结果显示CuZnSOD在睾丸的生精细胞中有强阳性信号,间质细胞有弱阳性信号。综上表明,绵羊睾丸和附睾不同区段CuZnSOD mRNA和蛋白表达有差异。日粮添加适量锌可提高睾丸和附睾中Cu-ZnSOD mRNA和蛋白表达量,其作用机制仍需进一步研究。 展开更多
关键词 cu-znsod RT-PCR WESTERN BLOTTING 睾丸 附睾 公羊
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甘蓝型油菜Cu/ZnSOD和FeSOD基因的克隆及菌核病菌诱导表达 被引量：17
2
作者 杨鸯鸯 李云 +4 位作者 丁勇 徐春雷 张成桂 刘英 甘莉 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期71-78,共8页
依据拟南芥、芥菜型油菜和白菜已知超氧化物歧化酶(SOD)保守序列设计引物,用同源序列法和RT-RACE技术克隆甘蓝型油菜Cu/ZnSOD和FeSOD基因,经序列分析和基因片段拼接,得到Cu/ZnSOD和FeSOD基因的全长cDNA,分别为756 bp(GenBank登录号AY970... 依据拟南芥、芥菜型油菜和白菜已知超氧化物歧化酶(SOD)保守序列设计引物,用同源序列法和RT-RACE技术克隆甘蓝型油菜Cu/ZnSOD和FeSOD基因,经序列分析和基因片段拼接,得到Cu/ZnSOD和FeSOD基因的全长cDNA,分别为756 bp(GenBank登录号AY970822)和1 037 bp(GenBank登录号EF634058)。以cDNA序列设计引物,获得1 322 bp的Cu/ZnSOD基因组DNA(GenBank登录号DQ431853)和1 659 bp的FeSOD基因组DNA(GenBank登录号EF634057)。生物信息学分析表明,Cu/ZnSOD基因ORF框长459 bp,编码152个氨基酸残基的蛋白质,在基因组序列结构上具有7个外显子和6个内含子。而FeSOD基因ORF框长792 bp,编码263个氨基酸残基的蛋白质,在基因组序列结构上具有8个外显子和7个内含子。二者外显子和内含子交接处完全符合GT/AG规则。利用获得的Cu/ZnSOD的cDNA片段作探针,对菌核病菌诱导甘蓝型油菜叶片的mRNA进行Northern blot分析,结果显示在同一品种(系)中菌核病菌诱导后Cu/ZnSOD mRNA表达量比诱导前升高,抗(耐)型油菜Cu/ZnSOD mRNA表达量明显高于感病型。油菜叶片SOD酶活性分析结果也获得了完全一致的结果。以上结果表明,甘蓝型油菜SOD基因与菌核病抗性相关。 展开更多
关键词 Cu/Zn-超氧化物歧化酶 Fe-超氧化物歧化酶 甘蓝型油菜 菌核病菌 基因表达分析
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东方山羊豆Cu/ZnSOD基因的克隆及表达分析 被引量：14
3
作者 李玉坤 王学敏 +3 位作者 高洪文 仁爱琴 王赞 孙桂枝 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期95-101,共7页
超氧化物歧化酶是一种广泛存在于真核生物中的金属酶类,在植物的抗逆性中起到重要的作用。文章采用RACE方法,从东方山羊豆中克隆了Cu/ZnSOD基因,并对其进行了初步分析。该基因cDNA序列全长935 bp,开放阅读框600 bp,编码199个氨基酸,蛋... 超氧化物歧化酶是一种广泛存在于真核生物中的金属酶类,在植物的抗逆性中起到重要的作用。文章采用RACE方法,从东方山羊豆中克隆了Cu/ZnSOD基因,并对其进行了初步分析。该基因cDNA序列全长935 bp,开放阅读框600 bp,编码199个氨基酸,蛋白质分子量为20.35 kDa。通过实时荧光定量PCR结果分析,该基因在东方山羊豆叶中表达量最多,茎中次之,根中最少。在NaCl和PEG诱导下,Cu/ZnSOD基因表达量先上调后下降。NaCl诱导24 h后,该基因的表达量显著低于对照。ABA胁迫抑制了该基因的表达。亚细胞定位结果表明,Cu/ZnSOD蛋白定位于叶绿体中。实验结果证明,Cu/ZnSOD基因主要在东方山羊豆的绿色组织中表达,在抵抗渗透性胁迫方面起到一定作用。 展开更多
关键词 东方山羊豆 Cu/ZnSOD基因 基因克隆 实时荧光定量PCR 亚细胞定位
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盐角草和盐芥3个超氧化物歧化酶基因的克隆和功能分析(英文) 被引量：3
4
作者 吴凡 余梅 +3 位作者 鲁茂龙 李娟 王荣富 王先磊 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1957-1964,共8页
为了探究盐生植物的耐盐机制,比较不同盐生植物超氧化物歧化酶(SOD)基因耐盐性的大小,采用RACE技术克隆了盐角草锰和铜/锌两种SOD的cDNA全长。序列分析表明,盐角草MnSOD基因(SeMSD,GenBank登录号为JQ061158)含有699bp的开放阅读框,编码... 为了探究盐生植物的耐盐机制,比较不同盐生植物超氧化物歧化酶(SOD)基因耐盐性的大小,采用RACE技术克隆了盐角草锰和铜/锌两种SOD的cDNA全长。序列分析表明,盐角草MnSOD基因(SeMSD,GenBank登录号为JQ061158)含有699bp的开放阅读框,编码一个长233个氨基酸的多肽,其预测相对分子量为25.7kD。Cu/ZnSOD基因(SeCSD,GenBank登录号为JQ061160)开放阅读框长为684bp,并编码228个氨基酸的多肽,相对分子量为23.3kD。根据已获得的这两个cDNA序列和GenBank公布的盐芥MnSOD基因序列(ThMSD,EF140719),构建了3个原核表达载体pET30a-SeMSD、pET30a-SeCSD和pET30a-ThMSD,并将它们转化大肠杆菌BL21,成功表达出了目的蛋白。通过优化IPTG的诱导浓度,在6.5%和7.5%盐度下对这3个SOD基因的耐盐能力验证结果显示,相比对照菌BL21(pET30a),转化了pET30a-SeMSD和pET30a-ThMSD载体的重组菌具有更高的耐盐性,而转化pET30a-SeCSD载体的重组菌没有表现出耐盐性的提高。 展开更多
关键词 盐角草 MNSOD Cu/ZnSOD 克隆 耐盐性
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Cu/ZnSOD基因敲除小鼠——研究耳蜗氧化损伤的理想模型 被引量：1
5
作者 张欣欣 韩东一 +4 位作者 丁大连 戴朴 杨伟炎 姜泗长 Richard J.Salvi 《听力学及言语疾病杂志》 CAS CSCD 2001年第4期209-212,共4页
目的　确定一个理想的耳蜗氧化损伤模型。方法　对 5只Cu/ZnSOD基因敲除纯合突变 (Cu/ZnSOD无活性 ,Sod1- / - )小鼠和 10只Cu/ZnSOD杂合突变 (5 0 %Cu/ZnSOD失活 ,Sod1+/ - )小鼠及 5只野生小鼠 (Cu/Zn SOD活性正常 ,Sod1+/ +)进行ABR... 目的　确定一个理想的耳蜗氧化损伤模型。方法　对 5只Cu/ZnSOD基因敲除纯合突变 (Cu/ZnSOD无活性 ,Sod1- / - )小鼠和 10只Cu/ZnSOD杂合突变 (5 0 %Cu/ZnSOD失活 ,Sod1+/ - )小鼠及 5只野生小鼠 (Cu/Zn SOD活性正常 ,Sod1+/ +)进行ABR检测及内、外毛细胞计数。应用PCR技术检测Cu/ZnSOD基因敲除小鼠耳蜗mtDNA缺失情况。结果　Cu/ZnSOD基因敲除小鼠耳蜗内外毛细胞大量缺失 (P <0 .0 0 1) ,ABR检测 ,Sod1- / -小鼠ABR阈值在 8,16 ,32kHz及Sod1+/ -小鼠ABR阈值在 16 ,32kHz明显增大 (P <0 .0 0 1)。Cu/ZnSOD基因敲除小鼠耳蜗mtDNA有三种缺失 ,分别为mtDNA 386 7bp、mtDNA 372 6bp及mtDNA 432 6bp缺失。结论　Cu/ZnSOD基因敲除小鼠耳蜗在细胞及分子水平上均表现出受到ROS损伤的改变 ,是一个理想的耳蜗氧化损伤模型。 展开更多
关键词 Cu/ZnSOD基因敲除 活性氧 模型 耳蜗氧化损伤
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林蛙油灌胃对小鼠肝组织中Cu/ZnSOD基因表达的影响
6
作者 杜智恒 王慰慰 白秀娟 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期58-63,共6页
以小鼠为动物模型,通过直接灌胃的方法,验证不同剂量林蛙油抗氧化、抗衰老的作用;利用Realtime PCR的方法分析小鼠肝脏组织中与抗氧化相关基因Cu/ZnSOD的时空表达规律。结果表明,5周龄组和15月龄组小鼠灌胃林蛙油后,肝组织中Cu/ZnSOD基... 以小鼠为动物模型,通过直接灌胃的方法,验证不同剂量林蛙油抗氧化、抗衰老的作用;利用Realtime PCR的方法分析小鼠肝脏组织中与抗氧化相关基因Cu/ZnSOD的时空表达规律。结果表明,5周龄组和15月龄组小鼠灌胃林蛙油后,肝组织中Cu/ZnSOD基因表达量显著增加,但总体上看,5周龄鼠0.45 g·kg-1剂量组Cu/ZnSOD基因表达增加量要普遍高于2.25 g·kg-1剂量组,但与1.35 g·kg-1剂量组差异不显著;而15月龄鼠1.35 g·kg-1剂量组Cu/ZnSOD基因表达增加量要显著高于0.45和2.25 g·kg-1剂量组,但0.45和2.25 g·kg-1剂量组差异不显著;而且15月龄组Cu/ZnSOD基因表达量升高的速度较慢,一般在灌胃第30天或第45天才出现显著差异。 展开更多
关键词 林蛙油 Cu ZnSOD基因 表达 肝脏
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桑螟胞外铜锌超氧化物歧化酶基因的克隆与融合表达及重组蛋白酶活性检测 被引量：2
7
作者 刘云财 苏航 +4 位作者 王沛城 徐雅岚 魏天铖 王华兵 徐豫松 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期188-195,共8页
桑螟（Glyphodes pyloalis）是蚕区桑园的主要害虫之一,鉴定其抵御各种环境胁迫相关的基因,是制定防治新策略的重要理论依据。对桑螟幼虫转录组数据的分析中,发现桑螟胞外铜锌超氧化物歧化酶（ec Cu/Zn SOD）基因在应对高温胁迫时的表... 桑螟（Glyphodes pyloalis）是蚕区桑园的主要害虫之一,鉴定其抵御各种环境胁迫相关的基因,是制定防治新策略的重要理论依据。对桑螟幼虫转录组数据的分析中,发现桑螟胞外铜锌超氧化物歧化酶（ec Cu/Zn SOD）基因在应对高温胁迫时的表达量发生显著变化。为了明确ec Cu/Zn SOD在桑螟应对不良环境中发挥的作用,克隆和鉴定了其编码基因Gpec Cu/Zn SOD（Gen Bank登录号：MG566057）。Gpec Cu/Zn SOD基因的开放阅读框长726 bp,编码241个氨基酸,编码蛋白质序列与脐橙螟（Amyelois transitella）的一种SOD蛋白基因（Gen Bank登录号：XP_013197347.1）编码氨基酸序列的一致性高达83%。采用邻近相接法构建桑螟与其他昆虫的Cu/Zn SOD系统发生树,结果显示Cu/Zn SOD被分为ec Cu/Zn SOD和ic Cu/Zn SOD两类,主要是随物种进化而进化。采用半定量RT-PCR检测不同温度处理桑螟5龄幼虫的Gpec Cu/Zn SOD基因表达情况,结果显示幼虫体内的Gpec Cu/Zn SOD在高温（40℃）和低温（4℃）条件下表达量最高。构建p Cold-Gpec Cu/Zn SOD重组表达质粒,并在大肠埃希菌中实现异源表达。利用镍柱亲和层析法分离纯化重组Gpec Cu/Zn SOD蛋白,采用WST-1法测定重组Gpec Cu/Zn SOD蛋白在40℃时的酶活性最高,并且经60～70℃处理后仍然具有较高的酶活性。采用牛津杯法分析重组Gpec Cu/Zn SOD的抗氧化活性表明：过表达Gpec Cu/Zn SOD的大肠埃希菌抗氧化的能力显著增强,显示Gpec Cu/Zn SOD具有较强的抗氧化功能。研究结果暗示Gpec Cu/Zn SOD在桑螟应对高温胁迫过程中发挥着重要作用。 展开更多
关键词 桑螟 高温胁迫 胞外铜锌超氧化物歧化酶 基因克隆 融合表达 酶活力
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猪囊尾蚴铜/锌超氧化物歧化酶(Cu/ZnSOD)基因的克隆和表达 被引量：3
8
作者 李爱华 Tong Soo Kim 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1124-1128,共5页
目的克隆猪囊尾蚴胞质含铜/锌的超氧化物歧化酶基因(Cu/ZnSOD),并比较其与其它寄生蠕虫相应基因结构的相似性。方法通过获取其它生物Cu/ZnSOD基因的保守区域,设计保守引物,用于扩增该寄生虫的Cu/ZnSOD基因。结果Cu/ZnSOD基因编码一15.6... 目的克隆猪囊尾蚴胞质含铜/锌的超氧化物歧化酶基因(Cu/ZnSOD),并比较其与其它寄生蠕虫相应基因结构的相似性。方法通过获取其它生物Cu/ZnSOD基因的保守区域,设计保守引物,用于扩增该寄生虫的Cu/ZnSOD基因。结果Cu/ZnSOD基因编码一15.6kDa的蛋白,该蛋白的推导序列中含有这类酶的活性和二级结构所需要的所有保守的氨基酸残基,并且与其它寄生虫的相应序列有高达70.6%的相似度。抑制剂研究试验表明所克隆的SOD属于Cu/ZnSOD,该蛋白在大肠杆菌中得以成功表达,表达产物具有SOD活性。免疫印迹试验发现猪囊尾蚴Cu/ZnSOD对人不仅具有抗原性,而且与其它几种蠕虫的Cu/ZnSOD有广泛的交叉免疫反应。结论克隆并表达出猪囊尾蚴Cu/ZnSOD,它与其它寄生吸虫和绦虫的Cu/ZnSOD在氨基酸水平具有很高的相似度,因此是理想的广谱抗寄生虫药物和疫苗的靶蛋白,值得进一步研究。 展开更多
关键词 猪囊尾蚴 超氧化物歧化酶 克隆 CDNA
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