期刊导航
期刊开放获取
上海教育软件发展有限公..
期刊文献
+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
检索
高级检索
期刊导航
共找到
2
篇文章
<
1
>
每页显示
20
50
100
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
文摘
详细
列表
相关度排序
被引量排序
时效性排序
人源化抗Cry1B毒素蛋白单链抗体的原核表达及生物学活性测定
被引量：
5
1
作者
徐重新
张存政
+3 位作者
张霄
刘媛
黄鹰
刘贤金
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第3期47-52,共6页
利用含有重组噬菌粒的噬菌体直接侵染大肠杆菌(Escherichia coli)HB2151,原核分泌表达了抗苏云金芽孢杆菌(Ba-cillus thuringiensis,Bt)Cry1B毒素蛋白的单链抗体(single chain-variable fragment,scFv),经纯化、鉴定抗原结合活性后,建立...
利用含有重组噬菌粒的噬菌体直接侵染大肠杆菌(Escherichia coli)HB2151,原核分泌表达了抗苏云金芽孢杆菌(Ba-cillus thuringiensis,Bt)Cry1B毒素蛋白的单链抗体(single chain-variable fragment,scFv),经纯化、鉴定抗原结合活性后,建立了Cry1B毒素蛋白的ELISA检测方法。方法以展示scFv抗体的重组噬菌体感染E.coli HB2151,经PCR和基因测序检测克隆scFv基因片段的完整性,用SDS-PAGE方法检测scFv在E.coli HB2151宿主菌中的表达水平,用ELISA测定法检测scFv的抗原结合活性,通过时间梯度优化获得可溶性表达蛋白的最佳培养时间。结果表明:经PCR、DNA电泳及基因测序等,均证实重组噬菌体对E.coli HB2151宿主菌侵染成功,SDS-PAGE电泳结果表明scFv抗体表达成功,纯化后的蛋白质量浓度为132μg.mL-1。以纯化的scFv蛋白为基础建立了对Cry1B毒素蛋白的间接竞争ELISA法,方法的抑制中质量浓度(IC50)为1.398μg.mL-1,最低检测限(IC10)为0.025 7μg.mL-1,线性检测范围为0.5～5.0μg.mL-1,scFv对Cry1C的交叉反应率为7.51%;与Cry1Ab、Cry1Ac的交叉反应率均小于0.1%;在培养温度30℃,1 mmol.L-1IPTG诱导条件下,scFv在E.coliHB2151宿主中的最佳诱导表达时间为12 h。本研究成功地将抗Cry1B毒素蛋白的scFv在E.coli HB2151中进行了可溶性表达,获得了具有抗原结合活性的scFv融合型抗体,为实际生产应用与试剂盒研发提供了基础。
展开更多
关键词
cry1b毒素
蛋白
单链抗体
可溶性表达
抗原结合活性
在线阅读
下载PDF
职称材料
抗Bt(Cry1B)毒素单链抗体在sf9昆虫细胞中的表达及活性测定
被引量：
1
2
作者
徐重新
张霄
+4 位作者
张存政
刘媛
谢雅晶
黄鹰
刘贤金
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2013年第5期985-991,共7页
通过构建pFastBacTM HT-A-scFv重组质粒,并将重组质粒化转DH10BacTM Escherichia coli感受态细胞,进行蓝白斑筛选,获得阳性克隆.PCR和基因测序检测证实挑取的白斑阳性单克隆存在完整、正确的单链抗体基因.提取阳性克隆中的重组杆状病毒...
通过构建pFastBacTM HT-A-scFv重组质粒,并将重组质粒化转DH10BacTM Escherichia coli感受态细胞,进行蓝白斑筛选,获得阳性克隆.PCR和基因测序检测证实挑取的白斑阳性单克隆存在完整、正确的单链抗体基因.提取阳性克隆中的重组杆状病毒穿梭载体（Bacmid-scFv）侵染sf9昆虫细胞,细胞发生明显病变特征.通过SDS-PAGE、Western blotting和间接竞争性ELISA等方法检测,发现单链抗体在sf9昆虫细胞中表达成功,测得纯化后蛋白浓度为103.000 0 μg/ml,Cry1B毒素对单链抗体的抑制中浓度（IC50）为1.010 0 μg/ml,最低检测线IC10为0.011 3μg/ml,线性检测范围为0.500 0～10.000 0 μg/ml.可溶性scFv对抗原类似物无交叉反应.
展开更多
关键词
cry1b毒素
单链抗体
真核表达系统
酶联免疫分析
在线阅读
下载PDF
职称材料
题名
人源化抗Cry1B毒素蛋白单链抗体的原核表达及生物学活性测定
被引量：
5
1
作者
徐重新
张存政
张霄
刘媛
黄鹰
刘贤金
机构
江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所/江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地/农业部农产品质量安全控制技术与标准重点实验室
南京师范大学生命科学学院/江苏省微生物与功能基因组学重点实验室
出处
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第3期47-52,共6页
基金
国家973计划项目(2012CB722505)
国家自然科学基金项目(31272109
31201535)
文摘
利用含有重组噬菌粒的噬菌体直接侵染大肠杆菌(Escherichia coli)HB2151,原核分泌表达了抗苏云金芽孢杆菌(Ba-cillus thuringiensis,Bt)Cry1B毒素蛋白的单链抗体(single chain-variable fragment,scFv),经纯化、鉴定抗原结合活性后,建立了Cry1B毒素蛋白的ELISA检测方法。方法以展示scFv抗体的重组噬菌体感染E.coli HB2151,经PCR和基因测序检测克隆scFv基因片段的完整性,用SDS-PAGE方法检测scFv在E.coli HB2151宿主菌中的表达水平,用ELISA测定法检测scFv的抗原结合活性,通过时间梯度优化获得可溶性表达蛋白的最佳培养时间。结果表明:经PCR、DNA电泳及基因测序等,均证实重组噬菌体对E.coli HB2151宿主菌侵染成功,SDS-PAGE电泳结果表明scFv抗体表达成功,纯化后的蛋白质量浓度为132μg.mL-1。以纯化的scFv蛋白为基础建立了对Cry1B毒素蛋白的间接竞争ELISA法,方法的抑制中质量浓度(IC50)为1.398μg.mL-1,最低检测限(IC10)为0.025 7μg.mL-1,线性检测范围为0.5～5.0μg.mL-1,scFv对Cry1C的交叉反应率为7.51%;与Cry1Ab、Cry1Ac的交叉反应率均小于0.1%;在培养温度30℃,1 mmol.L-1IPTG诱导条件下,scFv在E.coliHB2151宿主中的最佳诱导表达时间为12 h。本研究成功地将抗Cry1B毒素蛋白的scFv在E.coli HB2151中进行了可溶性表达,获得了具有抗原结合活性的scFv融合型抗体,为实际生产应用与试剂盒研发提供了基础。
关键词
cry1b毒素
蛋白
单链抗体
可溶性表达
抗原结合活性
Keywords
Cryl
b
toxin
single chain varia
b
le fragments（scFv）
solu
b
le expression
antigen
b
inding activity
分类号
Q936 [生物学—微生物学]
在线阅读
下载PDF
职称材料
题名
抗Bt(Cry1B)毒素单链抗体在sf9昆虫细胞中的表达及活性测定
被引量：
1
2
作者
徐重新
张霄
张存政
刘媛
谢雅晶
黄鹰
刘贤金
机构
江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所江苏省食品质量安全重点实验室--省部共建国家重点实验室培育基地/农业部农产品质量安全控制技术与标准重点实验室
南京师范大学生命科学学院/江苏省微生物与功能基因组学重点实验室
出处
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2013年第5期985-991,共7页
基金
国家“973”计划项目(2012CB722505)
国家自然科学基金项目(31272109、31201535)
江苏省农业自主创新基金项目[CX(12)5042]
文摘
通过构建pFastBacTM HT-A-scFv重组质粒,并将重组质粒化转DH10BacTM Escherichia coli感受态细胞,进行蓝白斑筛选,获得阳性克隆.PCR和基因测序检测证实挑取的白斑阳性单克隆存在完整、正确的单链抗体基因.提取阳性克隆中的重组杆状病毒穿梭载体（Bacmid-scFv）侵染sf9昆虫细胞,细胞发生明显病变特征.通过SDS-PAGE、Western blotting和间接竞争性ELISA等方法检测,发现单链抗体在sf9昆虫细胞中表达成功,测得纯化后蛋白浓度为103.000 0 μg/ml,Cry1B毒素对单链抗体的抑制中浓度（IC50）为1.010 0 μg/ml,最低检测线IC10为0.011 3μg/ml,线性检测范围为0.500 0～10.000 0 μg/ml.可溶性scFv对抗原类似物无交叉反应.
关键词
cry1b毒素
单链抗体
真核表达系统
酶联免疫分析
Keywords
Cryl
b
toxin
single-chain fragment varia
b
le（scFv） anti
b
ody
eukaryotic expression system
ELISA
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
在线阅读
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人源化抗Cry1B毒素蛋白单链抗体的原核表达及生物学活性测定
徐重新
张存政
张霄
刘媛
黄鹰
刘贤金
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
5
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
抗Bt(Cry1B)毒素单链抗体在sf9昆虫细胞中的表达及活性测定
徐重新
张霄
张存政
刘媛
谢雅晶
黄鹰
刘贤金
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2013
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
已选文献
上一页
1
下一页
到第
页
确定
用户登录
登录
IP登录
使用帮助
返回顶部
