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CpG寡脱氧核苷酸对慢性哮喘小鼠模型气道炎症的预防作用 被引量：4
1
作者 金美玲 揭志军 +3 位作者 蔡映云 袁正宏 胡芸文 任涛 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期358-363,共6页
目的研究含非甲基化的胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤(CpG)寡脱氧核苷酸(CpG-oligodeoxynueleotides,CpG- ODN)能否预防或减轻慢性哮喘小鼠气道炎症的发生。方法40只雌性C57BL／6小鼠随机均分为4组,A组(慢性哮喘组)、B组(CpG-ODN干预组)和C组(GpC-... 目的研究含非甲基化的胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤(CpG)寡脱氧核苷酸(CpG-oligodeoxynueleotides,CpG- ODN)能否预防或减轻慢性哮喘小鼠气道炎症的发生。方法40只雌性C57BL／6小鼠随机均分为4组,A组(慢性哮喘组)、B组(CpG-ODN干预组)和C组(GpC-ODN对照组)分别腹腔注射卵蛋白致敏,然后用卵蛋白雾化吸入激发以制作慢性哮喘模型,D组(生理盐水对照组)用生理盐水进行致敏和激发。B组在致敏同时(d1, d14)和激发阶段(每2周1次)分别给予60μg／mLCpG-ODN腹腔注射,共6次。C组将CpG替换为鸟嘌呤-磷酸-胞嘧啶(GpC)作为对照。在末次激发24 h后,取血测嗜酸粒细胞(eosinophil,EOS)数,血清IgE、IgG1和IgG2α;收集支气管肺泡灌洗液(bronehoalveolar lavage fluid,BALF)作细胞分类计数;测定肺组织中白介素-4 (interleukin-4,IL-4)、白介素-13(interleukin-13,IL-13)和γ-干扰素的mRNA(interferon-γ,IFN-γ)表达量;以及肺组织病理学检查。结果A组外周血EOS数[(89±10)×104／mL]、血清IgE值[(279±53)ng／mL)、IgG1(A值2．151±0．628)、IgG2α(A值0．772±0．245)、BALF中EPS(6．3±1．3)]×105／mL)及百分比[(18．1±3．0)％]较D组明显增高(P<0．01);且肺组织中IL-4、IL-13和IFN-γ等细胞因子mRNA表达量[(分别为(5．72±3．89)×10-2、(9．45±5．91)×10-2和(3．23±1．69)×10-2)]也明显高于D组(P<0．05)。用CpG-ODN干预后(B组),除IgG2α(A值1．186±0．414)和IFNγmRNA表达量[(18．91±9．85)×10-2]增高外(P<0．05),其余指标均低于A组(P<0．05)。C组的上述各指标与A组相比差异均无显著性(P>0．05)。结论CpG- ODN对小剂量OVA反复激发所致的慢性气道炎症有一定的预防作用。 展开更多
关键词 慢性哮喘 气道炎症 cpg-寡脱氧核苷酸 小鼠
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体外筛选对鸡具有免疫刺激活性的CpG寡脱氧核苷酸 被引量：8
2
作者 朱鸿飞 朱建中 +4 位作者 李光富 卢春 邵国青 范红结 陈溥言 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期83-86,共4页
分别用有丝分裂原和CpG寡脱氧核苷酸 (CpGODN)对SPF鸡全血 ,经低速离心分离的外周血单个核细胞(PBMC)和脾脏细胞 ,用淋巴细胞分离液分离的PBMC和脾脏细胞进行刺激 ,用3 H TdR掺入法测定并比较上述鸡免疫细胞在不同培养温度和细胞浓度下... 分别用有丝分裂原和CpG寡脱氧核苷酸 (CpGODN)对SPF鸡全血 ,经低速离心分离的外周血单个核细胞(PBMC)和脾脏细胞 ,用淋巴细胞分离液分离的PBMC和脾脏细胞进行刺激 ,用3 H TdR掺入法测定并比较上述鸡免疫细胞在不同培养温度和细胞浓度下的转化效果 ,从而建立了适用于大批量筛选对鸡具有免疫刺激活性CpGODN的淋巴细胞转化方法。进一步用该方法筛选自行设计合成的 38条ODN。结果表明 ,用低速离心法分离的鸡PBMC ,在细胞含量为10 7mL-1、 37℃、 5 %CO2 条件下 ,经CpGODN刺激 6 4～ 6 6h后 ,可以得到稳定的高效转化 ;不含CpG模体的ODN不具有免疫刺激活性 ;CpGODN 10、 11和 14具有最佳的免疫刺激活性 ,刺激指数大于 10。 展开更多
关键词 鸡 CPG寡脱氧核苷酸 CpG模体 淋巴细胞转化 免疫刺激活性
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CpG寡脱氧核苷酸增强免疫抑制小鼠对乙肝疫苗的免疫应答(英文) 被引量：4
3
作者 秦卫兵 蒋建伟 +4 位作者 杨宁 陈巧儿 王一峰 韦相才 欧汝强 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期647-650,共4页
目的 :探讨CpG寡脱氧核苷酸 (ODN)增强免疫抑制小鼠对乙肝疫苗的免疫应答效果。方法 :选用环磷酰胺 (CTX)所致免疫抑制模型小鼠 ,以乙肝疫苗和 2 0 μgCpGODN联合或单独左胫前肌肌注免疫C5 7BL/6小鼠。 2wk后以同样剂量加强免疫 1次 ,再... 目的 :探讨CpG寡脱氧核苷酸 (ODN)增强免疫抑制小鼠对乙肝疫苗的免疫应答效果。方法 :选用环磷酰胺 (CTX)所致免疫抑制模型小鼠 ,以乙肝疫苗和 2 0 μgCpGODN联合或单独左胫前肌肌注免疫C5 7BL/6小鼠。 2wk后以同样剂量加强免疫 1次 ,再过 3wk后摘除眼球取血 ,用ELISA法检测抗 HBsIgG抗体和IL 12的水平。同时 ,无菌取脾脏做HE染色 ,观察脾脏淋巴细胞的数量和细胞核的变化。结果 :CpGODN与疫苗联合注射组产生的绝对抗体量比单独注射疫苗组提高 1倍 ;注射组产生IL 12的水平较单独注射疫苗组也有明显升高。光镜下各组脾脏淋巴细胞的变化如下 :正常对照组脾脏可见大量的淋巴细胞 ;与正常对照组相比较 ,CTX组的淋巴细胞明显稀少 ;而CTX加CpG组的淋巴细胞数明显增多 ,细胞核也明显增大。结论 展开更多
关键词 CPG寡脱氧核苷酸 免疫抑制小鼠 佐剂作用
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超顺磁性氧化铁标记反义寡脱氧核苷酸探针在转染细胞磁共振成像中的应用 被引量：4
4
作者 文明 李必波 +3 位作者 欧阳羽 蒋明东 罗弋 李少林 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期554-558,I0001,共6页
目的制备超顺磁性氧化铁(SPIO)标记的反义寡脱氧核苷酸(ASODN)探针,探讨其应用于转染细胞磁共振(MR)成像的可行性。方法采用化学交联法将SPIO标记于c-erbB2癌基因的ASODN制成ASODN探针,原子力显微镜检测探针形态,高效液相凝胶色谱法检... 目的制备超顺磁性氧化铁(SPIO)标记的反义寡脱氧核苷酸(ASODN)探针,探讨其应用于转染细胞磁共振(MR)成像的可行性。方法采用化学交联法将SPIO标记于c-erbB2癌基因的ASODN制成ASODN探针,原子力显微镜检测探针形态,高效液相凝胶色谱法检测联接率和生物活性,聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测稳定性。将ASODN探针转染高表达c-erbB2癌基因的SK-Br3肿瘤细胞株,普鲁士蓝染色后于光学显微镜下观察细胞内铁分布,原子吸收光谱法测定细胞内铁含量,MR扫描观察细胞信号强度变化情况。结果制备的ASODN探针近似球形,粒径在25～40nm间,分散均匀,联接率为100%,仍保持原有生物活性,稳定性好。转染ASODN探针后的SK-Br3细胞胞浆内可见多少不等的蓝色铁颗粒,细胞内铁含量明显高于未转染ASODN探针的其他各组细胞(P均<0.01);MR扫描显示其信号强度最弱,信噪比值明显低于其他各组细胞(P均<0.05)。结论成功制备SPIO标记ASODN探针,该探针能有效进入SK-Br3细胞内,明显降低MR扫描下的转染细胞信号强度。 展开更多
关键词 磁共振成像 超顺磁氧化铁 反义寡脱氧核苷酸 靶向对比剂
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反义c-myc寡脱氧核苷酸对血管平滑肌细胞增殖、迁移和凋亡的影响 被引量：4
5
作者 马雅銮 高天祥 +3 位作者 王家宁 祁雅慧 殷红 冯桂芬 《首都医科大学学报》 CAS 1998年第3期205-208,共4页
为研究硫代磷酸修饰的反义ｃｍｙｃ寡脱氧核苷酸（ＯＤＮ）对血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）的增殖、迁移及凋亡的影响。应用脂质体分别介导硫代磷酸修饰的反义ｃｍｙｃＯＤＮ、正义ｃｍｙｃＯＤＮ和错配ｃｍｙｃＯＤＮ进入体外培养... 为研究硫代磷酸修饰的反义ｃｍｙｃ寡脱氧核苷酸（ＯＤＮ）对血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）的增殖、迁移及凋亡的影响。应用脂质体分别介导硫代磷酸修饰的反义ｃｍｙｃＯＤＮ、正义ｃｍｙｃＯＤＮ和错配ｃｍｙｃＯＤＮ进入体外培养的大鼠主动脉ＳＭＣ内，观察其对ＳＭＣ细胞ｃｍｙｃ表达、增殖、迁移和凋亡的影响。结果：①反义ＯＤＮ降低ｃｍｙｃ蛋白的表达。②反义ｃｍｙｃＯＤＮ抑制ＳＭＣ增殖、迁移，并诱导ＳＭＣ凋亡。而正义ＯＤＮ及错配ＯＤＮ则无上述作用。结果提示：应用反义技术抑制ｃｍｙｃ表达在防治经皮腔内冠状动脉成形术（ＰＴＣＡ）术后再狭窄中具有潜在作用。 展开更多
关键词 C-MYC 平滑肌细胞 增殖 迁移 凋亡 寡脱氧核苷酸
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反义bcl-2硫代磷酸寡脱氧核苷酸对小细胞肺癌细胞株NCI-H446的抑制作用及诱导细胞凋亡的研究 被引量：5
6
作者 陈鑫基 胡建达 +1 位作者 战榕 吕联煌 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期374-378,共5页
目的 :观察反义bcl- 2硫代磷酸寡脱氧核苷酸 (AS -PS -ODN)对小细胞肺癌细胞株NCI-H44 6mRNA、蛋白以及增殖、活力和凋亡的影响。方法 :合成bcl- 2AS -PS -ODN作用于小细胞肺癌细胞株NCI-H44 6,半定量RT -PCR检测bcl- 2mRNA表达 ;免疫... 目的 :观察反义bcl- 2硫代磷酸寡脱氧核苷酸 (AS -PS -ODN)对小细胞肺癌细胞株NCI-H44 6mRNA、蛋白以及增殖、活力和凋亡的影响。方法 :合成bcl- 2AS -PS -ODN作用于小细胞肺癌细胞株NCI-H44 6,半定量RT -PCR检测bcl- 2mRNA表达 ;免疫细胞化学染色和流式细胞仪检测Bcl- 2蛋白表达 ;通过克隆形成率、细胞计数、流式细胞仪DNA倍体分析、TUNEL等指标观察bcl- 2AS -PS -ODN对细胞增殖、活力和凋亡的影响。结果 :①bcl- 2AS -PS -ODN能特异性地降低NCI-H44 6细胞bcl- 2mRNA和Bcl- 2蛋白的表达。 1μmol/LAS -PS-ODN作用 2 4h后bcl- 2mRNA表达量下降 69 5 % ,48h后Bcl- 2蛋白下降 62 7%。②bcl- 2AS -PS -ODN能够抑制细胞增殖和活力 ,诱导细胞凋亡 ,1μmol/LAS -PS -ODN作用 2 4h后 ,细胞凋亡率约为 2 2 3 % - 3 2 7%。 结论 :bcl- 2AS -PS -ODN能够特异性降低bcl- 2mRNA、蛋白表达 ,抑制NCI-H44 6细胞的增殖和活力 。 展开更多
关键词 硫代磷酸寡脱氧核苷酸 小细胞 肺癌细胞株 NCI-H446 BCL-2 细胞凋亡
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CpG基序的寡脱氧核苷酸对人轮状病毒乳鼠腹泻模型的保护作用 被引量：3
7
作者 徐志伟 李孟荣 +2 位作者 陈益平 石海矾 狄军波 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2008年第9期1010-1016,共7页
目的:探讨含CpG基序的寡脱氧核苷酸(CpG oligodeoxynucleotide,CpG ODN)干预对人轮状病毒(human rotavirus,HRV)感染乳鼠的保护作用机制。方法:64只ICR乳鼠随母鼠按窝随机均分为4组:正常对照组、HRV感染组、CpG ODN预处理组、CpG ODN治... 目的:探讨含CpG基序的寡脱氧核苷酸(CpG oligodeoxynucleotide,CpG ODN)干预对人轮状病毒(human rotavirus,HRV)感染乳鼠的保护作用机制。方法:64只ICR乳鼠随母鼠按窝随机均分为4组:正常对照组、HRV感染组、CpG ODN预处理组、CpG ODN治疗组。观察各组乳鼠的治疗反应和排毒情况;免疫组化法检测小肠组织Toll样受体9(Toll-like receptor 9,TLR9)、IFN-γ的表达。结果:HRV感染组乳鼠的腹泻天数、排毒时间及重型腹泻发病率均高于CpG ODN预处理组和CpGODN治疗组(P<0.05);CpG ODN预处理组、CpG ODN治疗组TLR9、IFN-γ表达水平明显高于正常对照组和HRV感染组(P<0.01),并且两者存在正相关(P<0.05)。结论:CpG ODN预处理和治疗都能提高HRV感染乳鼠小肠组织TLR9、IFN-γ的表达,对HRV感染乳鼠有保护作用。 展开更多
关键词 CpG基序的寡脱氧核苷酸 轮状病毒 TOLL样受体9 IFN-Γ
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TLR9在CpG寡脱氧核苷酸所致种属特异性免疫效应中的意义 被引量：3
8
作者 李宁 范学工 +1 位作者 汤参娥 朱才 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期533-535,共3页
目的:探讨TLR9在CpG寡脱氧核苷酸(CpG-ODN)种属特异性免疫效应中的意义。方法:CpG-ODN体外刺激人、猕猴、小鼠外周血单个核细胞(PBMC),ELISA测培养液IFN-α含量;RT-PCR检测PBMC中TLR9的表达水平。结果:CpG-ODN2216有效诱导人PBMC分泌IFN... 目的:探讨TLR9在CpG寡脱氧核苷酸(CpG-ODN)种属特异性免疫效应中的意义。方法:CpG-ODN体外刺激人、猕猴、小鼠外周血单个核细胞(PBMC),ELISA测培养液IFN-α含量;RT-PCR检测PBMC中TLR9的表达水平。结果:CpG-ODN2216有效诱导人PBMC分泌IFN-α,而对猕猴和小鼠却无明显的免疫刺激活性;TLR9在人PBMC中均有表达,并且在CpG-ODN介导激活的人PBMC中表达上调;TLR9在猕猴PBMC中不表达。结论:TLR9是构成CpG-ODN种属特异性的重要分子基础。 展开更多
关键词 CPG寡脱氧核苷酸 Α干扰素 TOLL样受体9 种属特异性
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K型和D型CpG寡脱氧核苷酸对猪外周血单个核细胞免疫刺激活性的比较研究 被引量：2
9
作者 朱鸿飞 李光富 +3 位作者 朱建中 卢春 邵国清 张兆松 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期542-544,553,共4页
目的:比较K、D两型CpG寡脱氧核苷酸(CpG 0DN)对猪外周血单个核细胞(PBMC)免疫刺激活性的差异.方法:用人工合成的@K型和D型两类CpG 0DN和不含CpG基元的对照0DN D48分别刺激已分离的猪PBMC,3H-TdR掺入法测定每分闪烁次数(cpm)值,计算刺激... 目的:比较K、D两型CpG寡脱氧核苷酸(CpG 0DN)对猪外周血单个核细胞(PBMC)免疫刺激活性的差异.方法:用人工合成的@K型和D型两类CpG 0DN和不含CpG基元的对照0DN D48分别刺激已分离的猪PBMC,3H-TdR掺入法测定每分闪烁次数(cpm)值,计算刺激指数(SI).双抗体夹心ELISA法测定活化细胞上清中IFN-γ和IL-2表达水平.结果:D和K型CpGODN对猪PBMC增殖均具有较强刺激作用,K型的增殖效应高于D型.含'GTCGTT'基元的2006作用尤为显著,但不能有效刺激猪PBMC分泌IFN-γ和IL-2.D型刺激增殖效应低于K型,但能有效地促进猪PBMC分泌IFN-γ和IL-2.结论:K型和D型CpG 0DN在刺激猪PBMC增殖及其分泌IFN-γ、IL-2的水平有所不同. 展开更多
关键词 CPG寡脱氧核苷酸 CPG基元 IFN—γ IL—2 猪
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血管内皮生长因子反义寡脱氧核苷酸联合血管生成素-1对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜血管渗漏及新生血管生成的影响 被引量：8
10
作者 曾莉 常以力 邵毅 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2012年第10期905-908,共4页
目的观察血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)反义寡脱氧核苷酸(ASODN)联合血管生成素-1(angiogenin-1,Ang-1)对糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)大鼠视网膜血管渗漏及新生血管生成的影响。方法选取健... 目的观察血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)反义寡脱氧核苷酸(ASODN)联合血管生成素-1(angiogenin-1,Ang-1)对糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)大鼠视网膜血管渗漏及新生血管生成的影响。方法选取健康雄性SD大鼠60只,随机分为正常对照组(A组)5只和糖尿病组55只,糖尿病组通过链脲佐菌素腹腔注射诱导糖尿病模型成功后再饲养3个月行眼底荧光血管造影检查,确定DR大鼠模型且视网膜病变程度相仿的大鼠,随机抽取45只分为DR对照组(B组,5只)、PBS缓冲液对照组(C组,10只)、VEGFASODN干预组(D组,10只)、Ang-1干预组(E组,10只)、联合干预组(F组,10只)。C组玻璃体内注射PBS缓冲液5μL;D组玻璃体内注射浓度为100μmol·L-1VEGFASODN5μL;E组玻璃体内注射浓度为160mg·L-1Ang-15μL;F组玻璃体内注射100μmol·L-1VEGFASODN及160mg·L-1Ang-1各5μL;3d后再次行上述操作。各组大鼠行眼底荧光血管造影检查,对比观察不同组别大鼠视网膜血管渗漏情况,病理组织切片光学显微镜下突破内界膜的观察视网膜新生血管芽细胞核数。结果 A、B、C、D、E和F组视网膜新生血管渗漏面积分别为0、(20.98±1.14)mm2、(21.47±1.65)mm2、(14.60±1.55)mm2、(13.80±1.19)mm2、(10.81±1.35)mm2;D、E、F组新生血管渗漏面积低于B、C组,差异有统计学意义(F=103.99,P<0.05);F组渗漏面积低于D、E组,差异有统计学意义(F=190.94,P<0.05);B组与C组之间差异无统计学意义(t=0.22,P>0.05)。A、B、C、D、E和F组突破内界膜的新生血管芽细胞核数分别为(1.13±0.31)个、(80.31±5.21)个、(81.08±2.57)个、(37.37±3.41)个、(41.07±2.09)个、(14.41±1.23)个;D、E、F组突破内界膜的血管芽细胞核数均低于B、C组,差异有统计学意义(F=1339.41,P<0.05);F组突破内界膜的血管芽细胞核数低于D、E组,差异有统计学意义(F=714.91,P<0.05);B组与C组之间差异无统计学意义(t=0.35,P>0.05)。结论 VEGF ASODN联合Ang-1玻璃体内注射能明显抑DR大鼠视网膜新生血管的生成,减少视网膜血管渗漏。 展开更多
关键词 糖尿病视网膜病变 血管内皮生长因子 反义寡脱氧核苷酸 血管生成素-1
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CpG寡脱氧核苷酸的免疫刺激特性及应用研究进展 被引量：3
11
作者 司兴奎 陈建红 +1 位作者 张济培 顾万军 《动物医学进展》 CSCD 2008年第7期71-75,共5页
CpG基序是指含有非甲基化的胞嘧啶(C)和鸟嘌呤(G)二核苷酸为核心序列的基序为5′-R-D-CpG-Y-Y-3′的DNA或寡脱氧核苷酸序列,是DNA具有免疫刺激活性的结构基础。随着对CpG特性研究的不断深入,CpG寡脱氧核苷酸在激活先天性免疫、作为疫苗... CpG基序是指含有非甲基化的胞嘧啶(C)和鸟嘌呤(G)二核苷酸为核心序列的基序为5′-R-D-CpG-Y-Y-3′的DNA或寡脱氧核苷酸序列,是DNA具有免疫刺激活性的结构基础。随着对CpG特性研究的不断深入,CpG寡脱氧核苷酸在激活先天性免疫、作为疫苗佐剂、对变态反应进行免疫治疗、抗肿瘤应用及基因治疗等方面均显示出较广阔的应用前景。现就CpG寡脱氧核苷酸的免疫激活作用、细胞识别及结构特征、治疗疾病方面的应用及毒理作用加以探讨。 展开更多
关键词 CPG寡脱氧核苷酸 免疫刺激 结构特征
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抑制性寡脱氧核苷酸对肝损伤小鼠pSTAT4、pSTAT6和T-bet表达的影响及其意义 被引量：2
12
作者 全俊 刘悦晖 +1 位作者 范学工 李宁 《中国感染控制杂志》 CAS 2010年第3期151-154,共4页
目的探讨抑制性寡脱氧核苷酸(suppressive oligodeoxynucleotide,Sup ODN)对刀豆蛋白A(ConA)诱导肝损伤小鼠兔抗鼠磷酸化信号转导和转录激动子4抗体(pSTAT4)、pSTAT6和T-bet表达的影响及其意义。方法 Balb/C小鼠40只被随机分为4组,分别... 目的探讨抑制性寡脱氧核苷酸(suppressive oligodeoxynucleotide,Sup ODN)对刀豆蛋白A(ConA)诱导肝损伤小鼠兔抗鼠磷酸化信号转导和转录激动子4抗体(pSTAT4)、pSTAT6和T-bet表达的影响及其意义。方法 Balb/C小鼠40只被随机分为4组,分别为生理盐水(NS,空白对照)组、环孢菌素A(CsA)组(阳性对照)、Con ODN组(对照ODN)、Sup ODN组(实验组)。ConA(20mg/kg)尾静脉注射Balb/C小鼠造模,造模同时分别给予Sup ODN、Con ODN、CsA或NS 0.3 mL腹腔注射,分别于干预后8 h和24 h摘取小鼠脾脏,提取蛋白检测pSTAT4、pSTAT6和T-bet的表达。结果无论是干预后8 h还是24 h,Sup ODN组pSTAT4及T-bet蛋白的表达水平与NS、Con ODN及CsA组相比,均显著下降(均P<0.01);而pSTAT6蛋白表达水平,Sup ODN组与NS、Con ODN及CsA组差异均无显著性(均P>0.05)。结论 Sup ODN可能通过抑制细胞内转录因子pSTAT4和T-bet的表达,抑制小鼠Th1型免疫应答,最终实现其对肝损伤的保护作用。 展开更多
关键词 抑制性寡脱氧核苷酸 刀豆蛋白A pSTAT4 pSTAT6 T BET 肝损伤
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PCNA反义寡脱氧核苷酸对牛晶状体上皮细胞体外增殖活性的影响 被引量：5
13
作者 翁景宁 博士生 张惠蓉 《眼科研究》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期199-201,共3页
目的使用增殖细胞核抗原反义寡脱氧核苷酸（ＰＣＮＡ ＡＳＯＤＮ）作用于牛晶状体上皮细胞，观察其对细胞增殖活性的影响，以探讨ＰＣＮＡ ＡＳＯＤＮ技术防治后发性白内障形成的新途径。方法应用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法检测细胞增殖活性，... 目的使用增殖细胞核抗原反义寡脱氧核苷酸（ＰＣＮＡ ＡＳＯＤＮ）作用于牛晶状体上皮细胞，观察其对细胞增殖活性的影响，以探讨ＰＣＮＡ ＡＳＯＤＮ技术防治后发性白内障形成的新途径。方法应用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法检测细胞增殖活性，用流式细胞仪检测晶状体上皮细胞 ＰＣＮＡ蛋白的表达。结果 ＰＣＮＡ ＡＳＯＤＮ ３０～５０ μｍｏｌ／Ｌ可使细胞增殖显著受抑制，其 ＣＰＭ值分别从对照组的 ６ ６９９． ６７下降为 ５ ９８６． ３３，５ ５２５． ３３和 ５ １５４． ６７，ＰＣＮＡ蛋白在晶状体上皮细胞的表达阳性率下调至１２．３２％，与对照组比较有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。ＰＣＮＡ ＳＯＤＮ组则作用不明显，与对照组比较无显著性差异（Ｐ＞０．０５），而ＰＣＮＡ　ＡＳＯＤＮ组与ＰＣＮＡ　ＳＯＤＮ组比较差异显著（Ｐ＜０．０１）。结论ＰＣＮＡ　ＡＳＯＤＮ可以显著抑制牛晶状体上皮细胞体外增殖活性，其抑制作用可能通过阻断ＰＣＮＡ ｍＲＮＡ的翻译过程而影响 ＰＣＮＡ蛋白表达。 展开更多
关键词 晶状体上皮细胞 增殖细胞核抗原 反义寡脱氧核苷酸
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纳米微粒介导反义寡脱氧核苷酸逆转乳腺癌细胞多药耐药的实验研究 被引量：1
14
作者 彭志平 李少林 +3 位作者 文明 蒋明东 段红 王树斌 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期498-501,共4页
目的探讨纳米微粒介导耐药基因mdr-1、mrp反义寡脱氧核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)转染对多药耐药乳腺癌MCF-7/ADR细胞的影响。方法采用纳米微粒介导mdr-1、mrp-ASODN转染耐药细胞株MCF-7/ADR,RT-PCR、Western blot检... 目的探讨纳米微粒介导耐药基因mdr-1、mrp反义寡脱氧核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)转染对多药耐药乳腺癌MCF-7/ADR细胞的影响。方法采用纳米微粒介导mdr-1、mrp-ASODN转染耐药细胞株MCF-7/ADR,RT-PCR、Western blot检测转染48h后细胞耐药基因mdr-1、mrp的表达;MTT法检测经转染后MCF-7/ADR细胞对阿霉素(ADR)、表柔比星(epirubicin)、5-氟脲嘧啶(5-FU)和紫杉醇(paclitaxel)的敏感性。结果纳米微粒介导mdr-1、mrpASODN转染48h后,MCF-7/ADR细胞的mdr-1、mrp在mRNA和蛋白质表达水平上均显著降低(P<0.05);细胞对ADR、表柔比星、5-氟脲嘧啶和紫杉醇的耐药指数均显著降低(P<0.05)。结论耐药基因反义寡脱氧核苷酸能在体外抑制耐药基因的表达,从而提高细胞的药物敏感性;纳米微粒具有较好的体外介导反义寡脱氧核苷酸转染效果。 展开更多
关键词 乳腺癌 多药耐药 反义寡脱氧核苷酸 纳米微粒
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抑制性寡脱氧核苷酸对小鼠CD4^+ Th1细胞功能性分化的影响 被引量：1
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作者 李沙陵 戴霞红 +4 位作者 范学工 李宁 刘洪波 代洪 周蓉蓉 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1089-1094,共6页
目的:观察抑制性寡脱氧核苷酸对小鼠脾脏CD4+T细胞Th1分化的影响。方法:分离小鼠脾脏淋巴细胞,以免疫磁珠阳性选择法纯化CD4+T细胞,以荧光活化细胞分拣术分析其分选纯度,在抗-CD3ε抗体、抗-CD28抗体和IL-12作用下,加入抑制性寡脱氧核... 目的:观察抑制性寡脱氧核苷酸对小鼠脾脏CD4+T细胞Th1分化的影响。方法:分离小鼠脾脏淋巴细胞,以免疫磁珠阳性选择法纯化CD4+T细胞,以荧光活化细胞分拣术分析其分选纯度,在抗-CD3ε抗体、抗-CD28抗体和IL-12作用下,加入抑制性寡脱氧核苷酸或对照寡脱氧核苷酸培养72 h后,用ELISA检测上清IFN-γ和IL-4的分泌,用RT-PCR检测细胞T-bet mRNA的表达。结果:抑制性寡脱氧核苷酸能明显抑制CD4+T细胞IFN-γ的分泌,促进IL-4的分泌,同时还抑制T-bet mRNA的表达。结论:在促Th1细胞因子刺激下,抑制性寡脱氧核苷酸对小鼠体外CD4+T细胞的功能性分化有作用,既促进Th2分化,又抑制Th1分化。 展开更多
关键词 抑制性寡脱氧核苷酸 TH1 淋巴细胞 T-BET
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NF-κB圈套寡脱氧核苷酸技术的发展和应用 被引量：3
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作者 李丽 吴立玲 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期163-166,共4页
NF κB是一种重要的核转录因子 ,可被多种刺激因素激活 ,并转位至细胞核 ,与相应的靶基因结合 ,启动基因转录。NF κB的靶基因包括编码细胞因子、粘附分子、诱导型一氧化氮合酶等的基因 ,因此与多种炎性疾病、自身免疫性疾病和肿瘤的发... NF κB是一种重要的核转录因子 ,可被多种刺激因素激活 ,并转位至细胞核 ,与相应的靶基因结合 ,启动基因转录。NF κB的靶基因包括编码细胞因子、粘附分子、诱导型一氧化氮合酶等的基因 ,因此与多种炎性疾病、自身免疫性疾病和肿瘤的发生有关。人工合成的双链NF κB圈套寡脱氧核苷酸含有NF κB结合位点 ,可与游离的NF κB结合 ,从而圈套了NF κB ,阻止其活化。NF κB圈套寡脱氧核苷酸已成功用于多种疾病的发病机制及治疗学研究 。 展开更多
关键词 NF-ΚB 核转录因子 圈套寡脱氧核苷酸 疾病 发病机制
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脂质体介导寡脱氧核糖核苷酸转染人视网膜色素上皮细胞的转染率及分布测定 被引量：2
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作者 李晓青 曾水清 徐莉莉 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2008年第6期1111-1114,共4页
目的:观察阳离子脂质体LipofectamineTM 2000介导的寡脱氧核糖核苷酸(ODNs)在体外培养的人视网膜色素上皮(RPE)细胞中的转染效率及其在细胞中的分布。方法:在阳离子脂质体LipofectamineTM 2000的介导下将人工合成的FAM荧光标记的ODNs转... 目的:观察阳离子脂质体LipofectamineTM 2000介导的寡脱氧核糖核苷酸(ODNs)在体外培养的人视网膜色素上皮(RPE)细胞中的转染效率及其在细胞中的分布。方法:在阳离子脂质体LipofectamineTM 2000的介导下将人工合成的FAM荧光标记的ODNs转入人RPE细胞中,荧光显微镜下观察转染后20 min、1 h、2 h、4 h、6 h、12 h、24 h其在细胞内的分布,流式细胞仪检测其在RPE细胞中的转染效率;并用MTT法检测脂质体处理组、脂质体-ODNs复合物处理组和正常对照组的细胞增生活性,观察脂质体的毒性。结果:LipofectamineTM 2000能迅速将FAM-ODNs转入人RPE细胞的胞质和胞核内,4～6 h达高峰,转染效率高达(85.85±5.75)%,与其他时点比较差异有统计学意义(P<0.05),24 h后其转染率还有(70.11±5.81)%;且脂质体对RPE细胞无明显细胞毒性,3组间细胞增生活性比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:LipofectamineTM 2000能有效地将FAM-ODNs转入人RPE细胞中,可作为一种安全有效的基因转移载体用于基因治疗。 展开更多
关键词 阳离子脂质体 基因转移 寡脱氧核糖核苷酸 视网膜色素上皮细胞 人
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bcl-2、IL-6、IL-6R反义寡脱氧核苷酸对小细胞肺癌细胞作用的比较 被引量：1
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作者 祝亮方 陈鑫基 +3 位作者 胡建达 林振兴 陈英玉 黄绿叶 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期232-237,共6页
目的:比较bcl-2、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、白介素-6受体(interleukin-6 receptor,IL-6R)反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸(antisense phosphorothiate oligodeoxynucleotide,AS-PS-ODN)对小细胞肺癌细胞株NCI-H446细胞增殖及诱导凋亡的... 目的:比较bcl-2、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、白介素-6受体(interleukin-6 receptor,IL-6R)反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸(antisense phosphorothiate oligodeoxynucleotide,AS-PS-ODN)对小细胞肺癌细胞株NCI-H446细胞增殖及诱导凋亡的作用,初步探讨反义核苷酸技术治疗中靶基因的选择策略。方法:合成反义寡脱氧核苷酸bcl-2AS-PS-ODN、IL-6AS-PS-ODN、IL-6RAS-PS-ODN,分别作用于NCI-H446细胞株,通过细胞克隆形成实验检测细胞增殖活性的变化,细胞凋亡线粒体流式检测及DNA倍体分析检测细胞凋亡,半定量RT-PCR检测相关基因表达水平的变化。结果:(1)bcl-2AS-PS-ODN、IL-6AS-PS-ODN、IL-6RAS-PS-ODN均能够抑制肺癌细胞增殖活性和诱导细胞凋亡,其中以IL-6AS-PS-ODN抑制作用最强,bcl-2AS-PS-ODN次之,IL-6RAS-PS-ODN作用最弱。(2)3种反义寡脱氧核苷酸均能下调肺癌细胞相应基因的表达水平,其中以IL-6下调幅度最大,达(84.1±5.01)%;bcl-2和IL-6R基因下调幅度相近,分别为(62.6±3.42)%和(60.3±4.45)%。(3)反义核苷酸作用后除了引起自身基因表达下调外,还伴对其他基因表达的调节作用,如IL-6AS-PS-ODN作用使bcl-2基因表达下调(32.2±0.20)%;而bcl-2AS-PS-ODN作用使IL-6基因表达上调(74.3±4.13)%。结论:IL-6AS-PS-ODN较bcl-2AS-PS-ODN和IL-6RAS-PS-ODN能更有效地诱导小细胞肺癌细胞凋亡,IL-6是NCI-H446小细胞肺癌反义核苷酸治疗较为合适的靶基因。 展开更多
关键词 小细胞肺癌 反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸 IL-6 BCL-2 IL-6R 凋亡
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K-ras基因点突变的反义寡脱氧核苷酸对人胰腺癌靶基因表达的抑制作用 被引量：1
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作者 陈熹 王永向 +2 位作者 纪宗正 高亮 南克俊 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期147-149,共3页
目的　观察针对于胰腺癌K ras基因点突变的反义寡核苷酸对靶基因表达的抑制作用。方法　脂质体将人工合成的针对于K ras基因第 12位密码子点突变的反义寡核苷酸转染体外培养的人胰腺癌细胞株PC 2 ,用免疫组化和原位杂交技术检测靶基因... 目的　观察针对于胰腺癌K ras基因点突变的反义寡核苷酸对靶基因表达的抑制作用。方法　脂质体将人工合成的针对于K ras基因第 12位密码子点突变的反义寡核苷酸转染体外培养的人胰腺癌细胞株PC 2 ,用免疫组化和原位杂交技术检测靶基因的表达。结果　转染 4 8h后 ,反义寡核苷酸作用组胰腺癌细胞株PC 2的ras蛋白和K rasmRNA的表达程度较正义组和对照组均明显降低 (P <0 .0 5 )。结论　针对于K ras基因点突变的反义寡核苷酸作用于体外培养的胰腺癌细胞 。 展开更多
关键词 K—ras基因 反义寡脱氧核苷酸 胰腺癌 靶基因表达 抑制作用 基因突变
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反义寡脱氧核苷酸及卵泡刺激素对卵巢黏液性囊腺癌细胞增殖细胞核抗原表达的影响 被引量：1
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作者 李双 王林 +1 位作者 刘合芳 朱长虹 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期68-70,共3页
目的观察卵泡刺激素受体(FSHR)反义寡脱氧核苷酸(antisense ODN)及卵泡刺激素(FSH)对体外培养人卵巢黏液性囊腺癌(OMC)细胞增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法OMC细胞与不同浓度的FSH、antisenseODN和无义ODN(nonsense ODN)共培育48... 目的观察卵泡刺激素受体(FSHR)反义寡脱氧核苷酸(antisense ODN)及卵泡刺激素(FSH)对体外培养人卵巢黏液性囊腺癌(OMC)细胞增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法OMC细胞与不同浓度的FSH、antisenseODN和无义ODN(nonsense ODN)共培育48、72 h后,采用免疫细胞化学SP法检测细胞核内PCNA的表达。结果FSH明显增强PCNA的表达,而antisense ODN则显著降低PCNA的表达,与对照组比较,差异均有显著性意义(均P<0.05或P<0.01);应用nonsense ODN未观察到其对PCNA表达的影响。同时,antisense ODN可明显拮抗FSH促PCNA表达增加的作用,差异有极显著性意义(P<0.01)。结论在OMC发展过程中,FSH具有一定的促进作用,anti-sense ODN可有效抑制癌细胞的增殖以及FSH的促增殖作用。 展开更多
关键词 卵泡刺激素 卵泡刺激素受体 反义寡脱氧核苷酸 卵巢肿瘤 增殖细胞核抗原
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