转基因玉米NK603结构特异定量PCR方法的建立 被引量：3

1

作者 宋君 雷绍荣 +3 位作者 向冰 刘勇 王东 尹全 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第6期2044-2048,共5页

根据转基因玉米NK603载体构建特异序列,设计引物和Taqman探针,建立了转基因玉米NK603载体构建特异结构定量PCR检测方法,并采用该法检测了2%含量的NK603标准品(不确定度为10%)。结果显示,采用本文构建的方法获得的标准曲线斜率,在-3.6～-... 根据转基因玉米NK603载体构建特异序列,设计引物和Taqman探针,建立了转基因玉米NK603载体构建特异结构定量PCR检测方法,并采用该法检测了2%含量的NK603标准品(不确定度为10%)。结果显示,采用本文构建的方法获得的标准曲线斜率,在-3.6～-3.1之间,相关系数大于0.99,扩增效率为98.1%,在90%～110%的范围内。样品检测结果(1.6%)接近已知含量(2%,不确定度为10%)。表明本文建立的转基因玉米NK603结构特异定量PCR检测方法,可以在日常检验中推广应用。 展开更多

关键词 NK603 zSSⅡb 载体构建特异片段 定量检测

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转基因玉米MON863结构特异定量PCR方法的建立 被引量：3

2

作者 宋君 王东 +4 位作者 游米沙 尹全 刘勇 雷绍荣 向云 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第4期1251-1255,共5页

根据转基因玉米MON863载体构建特异结构,设计引物和Taqman探针,建立了转基因玉米MON863载体构建特异结构定量PCR检测方法,并采用该法定量检测了1%含量的MON863标准品(不确定度为10%)。结果显示,采用本文构建的方法获得标准曲线斜率,在-... 根据转基因玉米MON863载体构建特异结构,设计引物和Taqman探针,建立了转基因玉米MON863载体构建特异结构定量PCR检测方法,并采用该法定量检测了1%含量的MON863标准品(不确定度为10%)。结果显示,采用本文构建的方法获得标准曲线斜率,在-3.6～-3.1之间,相关系数大于0.99,扩增效率为105.436%,在90%～110%的范围内。待检样品的定量检测结果(1.08%)非常接近真实值(1%,不确定度为10%),表明本文建立的转基因玉米MON863结构特异定量PCR检测重复性好,灵敏度和准确度高,可以在日常检验中推广应用。 展开更多

关键词 MON863 zSSⅡb 载体构建特异片段 定量检测

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实时荧光定量PCR检测转基因玉米MON863结构特异基因的测量不确定度 被引量：17

3

作者 宋君 雷绍荣 +6 位作者 刘勇 向冰 王东 尹全 张富丽 刘文娟 常丽娟 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第33期20312-20315,共4页

[目的]对实时荧光定量PCR检测转基因玉米MON863结构特异基因的测量不确定度进行评定。[方法]使用转基因玉米MON863结构特异实时定量PCR方法测定含量为1%的转基因玉米MON863样品(CRM)中结构特异片段的含量,并从扩增反应、数据处理以及微... [目的]对实时荧光定量PCR检测转基因玉米MON863结构特异基因的测量不确定度进行评定。[方法]使用转基因玉米MON863结构特异实时定量PCR方法测定含量为1%的转基因玉米MON863样品(CRM)中结构特异片段的含量,并从扩增反应、数据处理以及微量移液器等不确定度来源,评定测量的不确定度。[结果]研究得到uA=1.7×10-2,uB=9.0×10-4,uC=1.7×10-2,U95=0.036,测量结果为1.08%±0.036。[结论]转基因玉米MON863结构特异实时定量PCR方法检测结果的主要不确定度来自检验过程中的随机效应。 展开更多

关键词 转基因玉米MON863 结构特异基因含量 不确定度

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实时荧光定量PCR检测转基因玉米NK603结构特异基因的测量不确定度研究 被引量：4

4

作者 宋君 雷绍荣 +5 位作者 刘勇 王东 刘文娟 尹全 张富丽 常丽娟 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2012年第4期1147-1151,共5页

应用四川省农业科学院分析测试中心实验室建立的转基因玉米NK603结构特异实时定量PCR方法测定含量为2%的转基因玉米NK603样品中结构特异片段的含量,并从扩增反应、数据处理以及微量移液器等不确定度来源,评定了测量的不确定度。结果表明... 应用四川省农业科学院分析测试中心实验室建立的转基因玉米NK603结构特异实时定量PCR方法测定含量为2%的转基因玉米NK603样品中结构特异片段的含量,并从扩增反应、数据处理以及微量移液器等不确定度来源,评定了测量的不确定度。结果表明,uA=0.0003,uB=0.001,uC=0.001,U95=0.002,测量结果为1.6%±0.002%。NK603结构特异实时定量PCR方法检测结果的主要不确定度来自检验过程中的随机效应。 展开更多

关键词 转基因玉米NK603 结构特异基因含量 不确定度

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菊苣质体同源片段的克隆及非抗生素标记的质体定点整合表达载体构建 被引量：3

5

作者 王玉华 郝建国 贾敬芬 《草业学报》 CSCD 北大核心 2009年第6期72-81,共10页

依据烟草、玉米、拟南芥和大豆质体基因组rps7基因和16S rDNA基因的保守序列设计引物,以菊苣质体基因组DNA为模板,PCR扩增到1段4.8 kb的片段。序列分析表明,该片段全长4 751 bp(GenBank登录号为GQ199478),包括449 bp的rps7基因5′端序列... 依据烟草、玉米、拟南芥和大豆质体基因组rps7基因和16S rDNA基因的保守序列设计引物,以菊苣质体基因组DNA为模板,PCR扩增到1段4.8 kb的片段。序列分析表明,该片段全长4 751 bp(GenBank登录号为GQ199478),包括449 bp的rps7基因5′端序列、793 bp的rps12基因、72 bp的trnV基因、1 315 bp的16S rDNA基因5′端以及大部分的基因间隔区,该序列与烟草对应区段的相似性为92%,与莴苣对应区段的相似性为97%。以此片段作为定点整合外源基因的同源重组片段,构建了非抗生素标记的菊苣质体定点整合表达载体pJBADH-GFP,酶切分析及PCR检测证明构建的载体符合预期设计。该载体的构建为建立高效、稳定的菊苣质体转化和无抗生素筛选体系奠定基础,为进一步通过质体基因工程手段将更多感兴趣的基因导入菊苣进行遗传改良,或以菊苣质体作生物反应器生产动物口服疫苗等搭建技术平台。 展开更多

关键词 菊苣 质体同源片段 非抗生素标记 定点整合 表达载体

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八氢番茄红素脱氢酶(Pds)基因果实特异表达载体的构建 被引量：2

6

作者 刘顺枝 孙莉丽 +1 位作者 杨礼香 王小兰 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第13期196-199,共4页

八氢番茄红素脱氢酶(Pds)是番茄红素合成的关键酶,本研究通过PCR法获取pds基因和E8启动子序列,将目的基因和E8启动子序列构建到植物表达载体pMD1中,构建了含果实特异表达启动子的pds基因的植物表达载体。并采用PCR、限制性内切酶酶切和... 八氢番茄红素脱氢酶(Pds)是番茄红素合成的关键酶,本研究通过PCR法获取pds基因和E8启动子序列,将目的基因和E8启动子序列构建到植物表达载体pMD1中,构建了含果实特异表达启动子的pds基因的植物表达载体。并采用PCR、限制性内切酶酶切和序列测定分析法,对重组质粒进行鉴定。结果表明:番茄果实特异性表达pds的重组质粒构建成功;通过农杆菌直接转化技术将其成功转入转化农杆菌LBA4404、EHA105中,为下一步pds在番茄果实中特异表达奠定了基础。 展开更多

关键词 八氢番茄红素脱氢酶 果实特异性启动子 载体构建

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3种不同启动子构建ACC脱氨酶基因植物表达载体 被引量：2

7

作者 黄海泉 黄美娟 +3 位作者 范志祥 李建永 刘璇 刘飞虎 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期706-710,共5页

从阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)UW4菌株克隆出ACC脱氨酶(1-aminocyclopropane-1-carboxylicacid deaminase)基因连接至pGEM-Tvector上,并采用3种不同启动子(组成型表达启动子CaMV35S、花特异表达启动子CHSA及衰老特异表达启动子SAG... 从阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)UW4菌株克隆出ACC脱氨酶(1-aminocyclopropane-1-carboxylicacid deaminase)基因连接至pGEM-Tvector上,并采用3种不同启动子(组成型表达启动子CaMV35S、花特异表达启动子CHSA及衰老特异表达启动子SAG12)分别构建ACC脱氨酶基因的植物表达载体,经PCR及酶切鉴定均已构建成功,为后期选择不同的花卉等植物材料遗传转化研究打下基础。 展开更多

关键词 ACC脱氨酶基因 花特异表达启动子 衰老特异表达启动子 植物表达载体构建

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人呼吸道合胞病毒FHRA-HRB片段的表达纯化与鉴定 被引量：1

8

作者 夏超 沈良华 +5 位作者 李满妹 唐维 易善泽 牛得伟 王峰 李药兰 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期301-307,共7页

目的:克隆呼吸道合胞病毒融合F蛋白(RSV-F)中FHRA-HRB基因片段,构建体外的原核表达载体,对FHRA-HRB蛋白进行表达纯化,为进一步研究FHRA-HRB蛋白构效关系及抗RSV活性提供实验依据.方法:用Trizol法从RSV感染的Hep-2细胞中提取病毒RNA,逆... 目的:克隆呼吸道合胞病毒融合F蛋白(RSV-F)中FHRA-HRB基因片段,构建体外的原核表达载体,对FHRA-HRB蛋白进行表达纯化,为进一步研究FHRA-HRB蛋白构效关系及抗RSV活性提供实验依据.方法:用Trizol法从RSV感染的Hep-2细胞中提取病毒RNA,逆转录得c DNA,使用Primer 6.0软件设计特异性引物,聚合酶链反应(PCR)扩增得到FHRA-HRB片段,测序成功后,将FHRA-HRB插入p ET-15b脱磷载体中,转化入Rosettagami表达宿主,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导FHRA-HRB的体外表达,Ni-NTA亲和层析法纯化蛋白.用Western-blot法鉴定FHRA-HRB蛋白表达.结果:成功扩增了大小约1100 bp的FHRA-HRB片段,克隆进p ET-15b载体后,菌液PCR验证与测序分析结果表明FHRA-HRB片段序列与预期一致且读码框插入正确,表达载体构建成功.工程菌经IPTG诱导后成功表达大小约43 000的FHRA-HRB蛋白,经Ni-NTA agarose纯化后FHRA-HRB蛋白纯度达95%以上.纯化后的FHRA-HRB蛋白经Western-blot鉴定其大小正确.结论:成功构建p ET-15b-FHRA-HRB表达载体,经表达纯化后,得到了纯度较高的FHRA-HRB蛋白,纯化蛋白经Western-blot鉴定正确.本研究为进一步研究其抗RSV活性和开发以F蛋白为靶点的抗RSV药物提供实验依据. 展开更多

关键词 呼吸道合胞病毒 FHRA-HRB片段 载体构建 蛋白表达

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香蕉果实特异表达启动子驱动下的乙肝表面抗原基因植物表达载体的构建 被引量：1

9

作者 胡伟 徐碧玉 +4 位作者 张建斌 杨晓颖 李美英 宁文彬 金志强 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期691-694,共4页

研制经济方便的新型乙肝植物口服疫苗是全球控制乙型肝炎的现实要求。研制乙肝植物口服疫苗遇到的一个主要的困难是HBsAg基因在受体植物中的表达量低。香蕉是植物口服疫苗理想的受体。因此,以香蕉为受体,进一步提高HBsAg基因表达量的研... 研制经济方便的新型乙肝植物口服疫苗是全球控制乙型肝炎的现实要求。研制乙肝植物口服疫苗遇到的一个主要的困难是HBsAg基因在受体植物中的表达量低。香蕉是植物口服疫苗理想的受体。因此,以香蕉为受体,进一步提高HBsAg基因表达量的研究非常必要。从pBIL2载体上克隆了香蕉果实特异表达的BanLec启动子,并引入了HindⅢ、BamHⅠ酶切位点;利用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切YEPFLAG-HBS获得了HBsAg基因;通过BamHⅠ酶切位点,利用T4DNA连接酶连接了BanLec启动子和HBsAg基因,形成BanLec-HBsAg连接片段;再把该片段通过EcoRⅠ、HindⅢ酶切位点插入pCAMBIA2300植物表达载体,成功构建香蕉果实特异表达启动子驱动下的乙肝表面抗原基因表达载体。 展开更多

关键词 香蕉 果实特异表达启动子 乙肝表面抗原 表达载体 构建

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人工雄性不育基因及恢复基因表达载体的构建 被引量：3

10

作者 宋洪元 丁建刚 +2 位作者 曹必好 雷建军 宋明 《西南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期249-253,共5页

结合Cre/loxp定位重组系统和杂种一代的育种特点,构建了雄性不育基因表达载体pCABARTABn和相应的恢复基因表达载体pBINPLUSCre。将位于质粒pTTABn中的雄性不育基因表达盒(含TA29启动子、barnase基因及Nos终止子)切下插入中间克隆载体pGl... 结合Cre/loxp定位重组系统和杂种一代的育种特点,构建了雄性不育基因表达载体pCABARTABn和相应的恢复基因表达载体pBINPLUSCre。将位于质粒pTTABn中的雄性不育基因表达盒(含TA29启动子、barnase基因及Nos终止子)切下插入中间克隆载体pGloxp2个同向lox位点之间,再将上述表达盒连同lox位点切下插入pCAMBar,获得以除草剂Basta为筛选剂的雄性不育基因表达载体pCABARTABn。PCR方法从溶原菌BM25.8基因组DNA扩增出Cre基因,克隆测序验证无误后插入PBI525CaMV35S-35S双启动子和Nos终止子之间,再将表达盒切下插入pBINPLUS质粒相应位点,得到恢复基因植物表达载体pBINPLUSCre。 展开更多

关键词 Cre/loxp定位重组系统 雄性不育基因 恢复基因 表达载体构建

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新型HMW-GS基因1Dy12.1^(*t)植物双元表达载体的构建及其遗传转化 被引量：1

11

作者 张艳贞 王轲 +1 位作者 张静 晏月明 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期683-687,共5页

为了建立快速研究高分子量谷蛋白亚基(high molecular weightglutenin subunit,HMW-GS)基因功能活性的植物表达体系,以自主克隆的新型HMW-GS基因1Dy12.1*t为目的基因,利用限制性内切酶XhoⅠ和SalⅠ切割后5’端能形成相同粘性末端的特性... 为了建立快速研究高分子量谷蛋白亚基(high molecular weightglutenin subunit,HMW-GS)基因功能活性的植物表达体系,以自主克隆的新型HMW-GS基因1Dy12.1*t为目的基因,利用限制性内切酶XhoⅠ和SalⅠ切割后5’端能形成相同粘性末端的特性,成功构建了1Dy12.1*t的植物双元表达载体pBINHP-GluT。该载体选择使用胚乳特异性强启动子,利用已知HMW-GS基因内部均不含有的XbaⅠ和KpnⅠ内切酶位点引入1Dy12.1*t编码区,并将1Dy12.1*t的表达调控置于T-DNA区内,从而奠定了其在不同HMW-GS基因功能活性研究上的便利性。通过根癌农杆菌烟草叶盘转化研究目的基因1Dy12.1*t在植物体的表达特性,SDS-PAGE和western blotting鉴定结果表明,1Dy12.1*t在转基因烟草种子胚乳中得到高效表达,进一步证实了所克隆基因的正确性和所构建载体的有效性。 展开更多

关键词 HMW-GS基因 双元表达载体 遗传转化 植物体 高分子量谷蛋白亚基 SDS-PAGE 限制性内切酶 基因功能

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几个杨树木质部特异启动子片段表达载体的构建与功能分析 被引量：2

12

作者 张爽 武会 杜克久 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期199-203,共5页

木质部纤维素合酶基因(CesA)在植物正常生长期的木质部特异表达,受到外界压力时可诱导在韧皮部表达,因而被用作杨树抗桑天牛转基因研究中的特异性表达启动子。将前期分离的CesA上游DNA片段JCesAP、YCesAP和MDCesAP分别替换植物表达载体p... 木质部纤维素合酶基因(CesA)在植物正常生长期的木质部特异表达,受到外界压力时可诱导在韧皮部表达,因而被用作杨树抗桑天牛转基因研究中的特异性表达启动子。将前期分离的CesA上游DNA片段JCesAP、YCesAP和MDCesAP分别替换植物表达载体pCAMBIA1302中的组成型启动子CaMV35S,构建成新的植物组织特异性表达载体pJCesAP-GFP、pYCesAP-GFP和pMDCesAP-GFP,然后采用农杆菌介导法转化烟草,均得到完整的再生烟草植株。经PCR初步检测证明目的基因已整合到烟草基因组中。荧光检测JCesAP、YCesAP和MDCesAP片段均能启动GFP蛋白的表达,在395 nm激发光下出现黄绿色荧光,显示3个CesA片段均具有在木质部特异表达的启动子活性。 展开更多

关键词 木质部特异启动子 载体构建 转基因 绿色荧光蛋白

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拟南芥AtTTG1基因的克隆及用于转化花生的MAR调控表达载体构建 被引量：2

13

作者 陈湘瑜 郑国栋 +1 位作者 黄金堂 庄伟建 《花生学报》 2014年第2期1-6,共6页

黄曲霉毒素污染对花生产业危害巨大,通过基因工程改变花生果种皮结构以提高花生抗黄曲霉能力。根据GenBank中拟南芥AtTTG1基因的cDNA编码区设计引物,通过RT-PCR克隆AtTTG1基因,结果显示,克隆获得的片段长1026bp,与基因库中数据比对相同... 黄曲霉毒素污染对花生产业危害巨大,通过基因工程改变花生果种皮结构以提高花生抗黄曲霉能力。根据GenBank中拟南芥AtTTG1基因的cDNA编码区设计引物,通过RT-PCR克隆AtTTG1基因,结果显示,克隆获得的片段长1026bp,与基因库中数据比对相同,该片段编码341个氨基酸,预测其蛋白分子量为86.96KDa,等电点为4.85。结合实验室已获得的花生果种皮特异启动子S19和MAR序列调控的植物表达载体pLMAR,构建了植物高效表达载体pLMAR-S19-TTG1,并将其导入根癌农杆菌EHA105。为进一步对花生进行遗传转化,获得转基因高抗黄曲霉花生奠定基础。 展开更多

关键词 花生 抗黄曲霉 AtTTG1 基因 核基质结合区(MAR) 果种皮特异启动子 载体构建

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植物无标记转化的诱导表达Cre/loxP重组系统的构建 被引量：1

14

作者 段小瑜 张录霞 +2 位作者 马超 郝青楠 马兵钢 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2008年第1期30-34,共5页

应用Cre/loxP系统位点专一性重组的特点构建诱导表达的定位重组系统,用以特异性的敲除转基因植物的标记基因。为了获得诱导表达启动子,从大豆基因组DNA中用pfu酶克隆热激蛋白启动子gmhsp17.5c,将其克隆到pUC118-HincⅡ载体并测序。结果... 应用Cre/loxP系统位点专一性重组的特点构建诱导表达的定位重组系统,用以特异性的敲除转基因植物的标记基因。为了获得诱导表达启动子,从大豆基因组DNA中用pfu酶克隆热激蛋白启动子gmhsp17.5c,将其克隆到pUC118-HincⅡ载体并测序。结果表明,508nt的gmhsp17.5c与已报道序列(GenBank,AF544399)比较,核苷酸的同源性为99.8%。利用该诱导启动子分别构建了含gmhsp17.5c-cre基因组件和gmhsp17.5c-gus基因组的诱导型植物表达载体pC23HC和pC23HG。此外1个含有loxP-gus-loxP组件的组成型植物表达载体pC23LG被构建。通过对3个植物表达载体做多重酶切及亚克隆后测序分析表明载体pC23HC全长10947bp,载体pC23HG全长11396bp,载体pC23LG全长11900bp,符合预期设计。一套由pC23HC和pC23LG组成的植物无标记转化的诱导表达Cre/loxP重组系统被构建,为进一步将诱导表达的标记基因删除系统用于植物的无标记转化奠定基础。 展开更多

关键词 Cre/loxP定位重组系统 标记基因 载体构建 热激启动子

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菊苣叶绿体同源片段的克隆及多顺反子定点整合表达载体的构建

15

作者 王玉华 韩晓玲 +1 位作者 黄丛林 贾敬芬 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2010年第1期11-17,共7页

利用叶绿体基因组进化中高度保守的特点,根据烟草叶绿体基因组全序列设计合成引物,从菊苣叶绿体基因组中扩增包括rps7-rps12-trnV-16S rDNA基因在内的一段序列(GenBank登录号为GQ199478),并以此作为定点整合外源基因的同源重组片段。以... 利用叶绿体基因组进化中高度保守的特点,根据烟草叶绿体基因组全序列设计合成引物,从菊苣叶绿体基因组中扩增包括rps7-rps12-trnV-16S rDNA基因在内的一段序列(GenBank登录号为GQ199478),并以此作为定点整合外源基因的同源重组片段。以叶绿体基因强启动子prrn驱动选择标记基因aadA及报告基因gfp构建多顺反子表达盒prrn-aadA-gfp-psbA-3,′然后将表达盒克隆进菊苣叶绿体同源片段中,获得菊苣叶绿体定点整合表达载体pJAG,酶切分析证明所构建的载体符合预期设计。该载体的构建为建立菊苣的叶绿体转化体系奠定基础,为进一步通过叶绿体基因工程手段将更多感兴趣的基因导入菊苣进行遗传改良,或以菊苣叶绿体作生物反应器生产动物口服疫苗等搭建技术平台。 展开更多

关键词 菊苣 叶绿体同源片段 多顺反子 定点整合表达载体

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甘菊DFL::EGFP高效融合蛋白表达载体的构建

16

作者 王翊 付建新 戴思兰 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期102-108,共7页

增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)是一种优化的突变型GFP,DFL是从甘菊中分离出的LFY基因的同源序列。为了研究DFL基因的功能和表达模式,研究利用小片段克隆法将linker序列插入到EGFP基因5′端启始密码子前... 增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)是一种优化的突变型GFP,DFL是从甘菊中分离出的LFY基因的同源序列。为了研究DFL基因的功能和表达模式,研究利用小片段克隆法将linker序列插入到EGFP基因5′端启始密码子前面,在pBI121载体的CaMV35S启动子的3′端后面插入一段多克隆位点,成功地构建了pBI-DFL-EGFP表达载体。通过设计特异引物,利用PCR技术扩增得了到拟南芥LFY基因的启动子序列,用粘性末端PCR技术将pBI-DFL-EGFP表达载体中CaMV35S启动子替换成LFY基因启动子,构建成了pLFY-DFL-EGFP表达载体。用含有pBI-DFL-EGFP和pLFY-DFL-EGFP质粒的农杆菌侵染洋葱表皮细胞,在荧光显微镜下分别用蓝光激发,均观测到了荧光。这一结果表明,融合蛋白DFL∷EGFP表达载体构建成功,同时还证明了通过PCR技术克隆到的LFY启动子序列具有启动子功能。 展开更多

关键词 小片段克隆 粘性末端PCR 表达载体构建 LFY启动子 DFL∷EGFP融合蛋白

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番茄果实特异表达载体pBI121-2A11-HB-1的构建及其对农杆菌的转化

17

作者 叶红红 尹明安 +1 位作者 朱敏 任小林 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第19期174-179,共6页

为了解乙烯生物合成调控机理,本研究利用聚合酶链式反应技术,从番茄Micro-Tom中克隆2A11果实特异型启动子和LeHB-1基因,构建LeHB-1正义和反义果实特异表达载体,并导入根癌农杆菌GV3101中,为下一步通过转基因操作来研究转录因子LeHB-1在... 为了解乙烯生物合成调控机理,本研究利用聚合酶链式反应技术,从番茄Micro-Tom中克隆2A11果实特异型启动子和LeHB-1基因,构建LeHB-1正义和反义果实特异表达载体,并导入根癌农杆菌GV3101中,为下一步通过转基因操作来研究转录因子LeHB-1在果实发育过程中的生物学功能奠定了实验基础。 展开更多

关键词 番茄 特异表达载体pBI121-2A11-HB-1 载体构建 农杆菌转化体系

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OsWRKY10基因特异性dsRNA干涉载体构建

18

作者 窦彩虹 陈应武 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第7期2682-2683,共2页

[目的]明确Osdg中T-DNA插入位点的基因是否为引起突变表型的基因。[方法]采用OsWRKY10基因5’端、不含WRKY保守域的长300 bp的cDNA片段,构建抑制OsWRKY10基因表达的特异性dsRNA干涉重组表达载体pCam-35SWInW。采用冻溶法将pCam-35SWInW... [目的]明确Osdg中T-DNA插入位点的基因是否为引起突变表型的基因。[方法]采用OsWRKY10基因5’端、不含WRKY保守域的长300 bp的cDNA片段,构建抑制OsWRKY10基因表达的特异性dsRNA干涉重组表达载体pCam-35SWInW。采用冻溶法将pCam-35SWInW载体导入根癌农杆菌超毒力菌株EHA105,对其进行PCR检测。[结果]该研究成功构建了重组表达载体pCam-35SWInW。采用相应限制性内切酶对重组表达载体进行酶切鉴定,其中以XhoⅠ消解重组质粒,可获得1 kb左右的DNA片段。在抑制基因表达方面,发卡结构比反义结构更为有效。[结论]该研究成功构建了抑制OsWRKY10表达的特异性dsRNA干涉载体,可用于进一步的基因功能研究。 展开更多

关键词 OsWRKY10基因 特异性dsRNA干涉载体 构建

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sⅡ系列缺失启动子载体的构建

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作者 石琰璟 黄淑燕 周志芳 《科学技术与工程》 2009年第3期568-571,共4页

为检测新型sⅡ根部特异启动子的功能,采用PCR的方法,扩增胡萝卜根部特异启动子sⅡ基因的启动子序列,得到该启动子-650bp和-1000bp区域片段。在启动子片段的5’和3’端分别引入了克隆所需的限制性酶切位点,分别定向克隆到经改造的质粒载... 为检测新型sⅡ根部特异启动子的功能,采用PCR的方法,扩增胡萝卜根部特异启动子sⅡ基因的启动子序列,得到该启动子-650bp和-1000bp区域片段。在启动子片段的5’和3’端分别引入了克隆所需的限制性酶切位点,分别定向克隆到经改造的质粒载体pBI121和pBITM2MARⅡ中,取代原有的组成型启动子CaMV35S,获得了四个含有胡萝卜根部特异启动子sⅡ基因不同缺失片段区域与GUS报告基因的融合检测载体。该系列载体通过农杆菌介导转入胡萝卜,检测sⅡ不同长度片段启动子在胡萝卜根部驱动报告基因的表达情况,分析该启动子的功能。 展开更多

关键词 根部特异启动子 sⅡ启动子 载体构建 农杆菌介导转化

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小鼠ret中间片段真核表达载体的构建

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作者 曹安堂 刘海超 李扬 《湖北农业科学》 北大核心 2012年第10期2121-2123,共3页

利用RT-PCR法从小鼠睾丸组织中获得ret的中间片段,首先将其连接到pMD18-T载体上,转化DH5α后通过阳性克隆子的鉴定以及序列测定,将序列正确的ret中间片段双酶切下来后连接到真核表达载体pcDNA3.1上。结果表明成功构建了ret中间片段的真... 利用RT-PCR法从小鼠睾丸组织中获得ret的中间片段,首先将其连接到pMD18-T载体上,转化DH5α后通过阳性克隆子的鉴定以及序列测定,将序列正确的ret中间片段双酶切下来后连接到真核表达载体pcDNA3.1上。结果表明成功构建了ret中间片段的真核表达载体pcDNA3.1-ret。 展开更多

关键词 小鼠ret中间片段 RT-PCR 真核表达载体 构建

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