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基于转录组分析CSFV感染猪睾丸支持细胞对屏障功能相关基因的影响
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作者 马尧丹 俞晖 +4 位作者 陈海恩 杨阳开心 葛书君 吴江 康恺 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第5期22-32,共11页
为探究猪瘟病毒(CSFV)感染对猪睾丸支持细胞(ST)mRNA表达谱的影响,本试验以感染CSFV 24和48 h的ST细胞和未感染ST细胞为模型,通过蛋白免疫印迹试验(WB)和间接免疫荧光(IIF)染色检测CSFV E2蛋白的表达;构建4个cDNA文库进行转录组测序,对... 为探究猪瘟病毒(CSFV)感染对猪睾丸支持细胞(ST)mRNA表达谱的影响,本试验以感染CSFV 24和48 h的ST细胞和未感染ST细胞为模型,通过蛋白免疫印迹试验(WB)和间接免疫荧光(IIF)染色检测CSFV E2蛋白的表达;构建4个cDNA文库进行转录组测序,对差异表达基因(DEGs)进行基因本体论(GO)功能注释和京都基因与基因组百科全书数据库(KEGG)富集分析并筛选血睾屏障相关DEGs,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)、WB和IIF对DEGs进行验证。结果显示,CSFV感染24和48 h后,ST细胞均表达了E2蛋白;与Control 24 h相比,CSFV 24 h的ST细胞共鉴定出86个显著差异DEGs(P <0.05);与Control 48 h相比,CSFV 48 h的ST细胞共鉴定出1 481个显著差异DEGs(P <0.05)。DEGs极显著富集在27个GO功能条目上,主要包括生物学过程、细胞组分和分子功能(P <0.01);极显著富集的KEGG信号通路主要包括肿瘤坏死因子(TNF)信号通路、晚期糖基化终产物受体(AGE-RAGE)信号通路、白细胞介素-17(IL-17)信号通路和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路等(P <0.01)。DEGs的qPCR验证结果显示,与Control 24 h相比,CSFV 24 h的CLDN11、H2AFX和CDH2表达量极其或极显著上调(P<0.001或P <0.01),TJP1、OCLN和GJA1表达量显著下调(P <0.05);与Control48 h相比,CSFV 48 h的FASLG、TGFB1、IL-6和H2AFX表达量极其或极显著上调(P <0.001或P <0.01),TJP1、OCLN、GJA1、CLDN11和CDH2表达量极显著下调(P <0.01)。差异表达蛋白WB验证结果显示,与Control 24 h相比,CSFV 24 h的TJP1、CLDN11和GJA1蛋白表达量极其或极显著下调(P <0.001或P <0.01),CLDN11蛋白表达量极其显著上调(P <0.001);与Control 48 h相比,CSFV 48 h的TJP1、CLDN11、OCLN和GJA1蛋白表达量极其或极显著下调(P <0.001或P <0.01)。IIF结果显示,与Control 48 h相比,CSFV 48 h的TJP1蛋白相对荧光面积极显著下调(P <0.01),CLDN11、OCLN和GJA1蛋白相对荧光面积显著下调(P <0.05)。以上验证结果与转录组测序结果基本一致。结果表明,CSFV感染24和48 h均会影响ST细胞屏障功能相关基因的表达,本试验为进一步探究CSFV对ST细胞屏障的影响机制提供了数据支持。 展开更多
关键词 猪瘟病毒(csfv) 猪睾丸支持细胞 mRNA差异表达 基因本体论(GO)功能注释 京都基因与基因组百科全书数据库(KEGG)富集分析
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1例CSFV、PCV2和PRRSV混合感染的流行病学调查
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作者 王翠 《养殖与饲料》 2025年第8期41-45,共5页
[目的]为确诊广西柳州某商品代育肥猪的发病原因并控制疫情。[方法]通过现场调研、观察临床症状和解剖,采集病死猪的脾、肺、肾、淋巴组织、粪便和环境棉拭子进行实验室荧光RT-PCR/PCR检测,并进行流行病学调查与分析。[结果]通过现场调... [目的]为确诊广西柳州某商品代育肥猪的发病原因并控制疫情。[方法]通过现场调研、观察临床症状和解剖,采集病死猪的脾、肺、肾、淋巴组织、粪便和环境棉拭子进行实验室荧光RT-PCR/PCR检测,并进行流行病学调查与分析。[结果]通过现场调研、临床症状观察及剖解初步判断该商品代育肥猪场感染了猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),实验室荧光RT-PCR/PCR检测该商品代育肥猪感染了PRRSV、PCV2型和猪瘟病毒(CSFV)。发病的主要原因为不规范引种、饲养管理不当、环境卫生差、生物安全管理不到位,采取综合防控措施后猪只死亡率降低至0%,腹泻、喘气、呼吸困难等临床症状缓解,疫情得到有效控制。[结论]猪病防控需加强引种把关、定期监测、疫苗防控及生物安全管理等综合性防控措施。 展开更多
关键词 流行病学调查 混合感染 疫苗防控 猪瘟 猪圆环病毒2型 猪繁殖与呼吸综合征
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猪瘟病毒E2基因部分表位区重组猪伪狂犬病病毒的构建及生物学特性研究
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作者 王林青 张刘辉 +3 位作者 陈曦艋 马世杰 宋月 陈红英 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第4期1815-1824,共10页
【目的】猪瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)和猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus, PRV)是当前影响生猪产业发展的两种重要病原,目前无高效的药物治疗方法,主要依靠疫苗接种进行预防。本试验旨在构建含有CSFV E2基因部分表... 【目的】猪瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)和猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus, PRV)是当前影响生猪产业发展的两种重要病原,目前无高效的药物治疗方法,主要依靠疫苗接种进行预防。本试验旨在构建含有CSFV E2基因部分表位区的重组PRV毒株,并探究其生物学特性,为开发同时预防CSFV和PRV的二联疫苗提供参考。【方法】首先使用基因工程技术将包含CSFV E2蛋白B/C/D/A 4个表位区的一段基因插入pG-EGFP重组质粒的BamHⅠ位点,构建重组质粒pG-E2AD-EGFP;然后将质粒转染已接种PRV三基因缺失毒株rPRV NY-gE^(-)/gI^(-)/TK^(-)的ST细胞,在ST细胞内发生同源重组,利用蚀斑纯化法拯救出带绿色荧光蛋白的重组病毒rPRV-E2AD-EGFP。使用CRISPR/Cas9敲除载体敲除EGFP基因,经蚀斑纯化得到无荧光的重组病毒rPRV-E2AD。利用PCR扩增和Western blotting检测重组病毒rPRV-E2AD的E2基因A-D表位区表达情况。通过半数组织培养感染剂量(TCID50)法检测不同理化性质处理后病毒增殖情况,对重组病毒培养特性、理化特性进行评价。【结果】通过细胞内同源重组和病毒蚀斑纯化,得到了同时表达CSFV E2AD抗原和EGFP的重组病毒rPRV-E2AD-EGFP。通过CRISPR/Cas9技术敲除EGFP基因,得到了无EGFP基因表达的重组病毒rPRV-E2AD。Western blotting检测结果显示,该毒株表达蛋白大小约27 ku,与预期CSFV E2AD抗原大小一致。rPRV-E2AD毒株与亲本株在ST、IPEC-J2、PK-15、Vero细胞中生长特性基本一致,均在感染后12 h引起细胞融合,36 h出现细胞脱落。理化特性检测结果显示,重组毒株与亲本株在相同理化条件处理下,培养特性相似。【结论】本研究成功获得重组病毒rPRV-E2AD,且外源基因不影响亲本株的增殖特性,试验结果为研发重组CSFV E2基因活载体疫苗提供了候选毒株,也为PRV活载体疫苗的开发提供了研究基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒(csfv) 伪狂犬病病毒(PRV) 重组病毒 E2基因
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2022—2024年西南地区部分规模化猪场健康猪群4种重要疫病的病原学调查与分析
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作者 赵婵娟 鄢行安 曹立亭 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第5期33-42,共10页
在动物疫病防控中,定期的病原学检测能够为规模化猪场在疫病暴发前或发病初期提供明确的预警信号。本试验聚焦于西南地区的重庆、四川和贵州三省市,对部分规模化猪场中健康猪群携带的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)... 在动物疫病防控中,定期的病原学检测能够为规模化猪场在疫病暴发前或发病初期提供明确的预警信号。本试验聚焦于西南地区的重庆、四川和贵州三省市,对部分规模化猪场中健康猪群携带的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)和戊型肝炎病毒(HEV)进行调查和分析。在2022—2024年每年3—5月,从西南地区10个区县的47家规模化猪场的健康仔猪群中采集了5 349份全血样本和4 275份鼻拭子样本,通过聚合酶链式反应(PCR)对所有样本进行了PRRSV、PRV、CSFV和HEV检测。结果显示,PRRSV、PRV和CSFV在西南地区已得到有效控制。2022年、2023年和2024年,西南地区临床健康猪群中经典PRRSV(C-PRRSV)毒株的阳性率分别为0.22%(4/1 811)、0.27%(5/1 831)和0(0/1 707),高致病性PRRSV(HP-PRRSV)毒株的阳性率分别为0.28%(5/1 811)、0.16%(3/1 831)和0.18%(3/1 707);PRV的阳性率分别为0.07%(1/1 505)、0.19%(3/1 541)和0(0/1 229);CSFV的阳性率分别为0.28%(5/1 811)、0(0/1 831)和0(0/1 707)。然而,HEV的阳性率呈上升趋势,从2022年的0.11%(2/1 811)、2023年的0.44%(8/1 831)增加到2024年的1.23%(21/1 707)。结果表明,西南地区的规模化猪场已经实现了对PRRSV、PRV和CSFV的有效预防和净化;但在生猪流动性较大的区域,仍能零星监测到相关病毒。与此同时,快速上升的HEV阳性率应引起规模化猪场管理者的高度关注,对HEV的监测和防控需进一步加强。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 伪狂犬病病毒(PRV) 猪瘟病毒(csfv) 戊型肝炎病毒(HEV) 病原学调查
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猪瘟病毒E^(rns)结构蛋白鼠源单个B细胞抗体的制备和鉴定
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作者 黄禹丰 吴睿智 +9 位作者 徐璐 邹兴启 车斯琪 李芳韬 夏应菊 赵俊杰 赵启祖 刘业兵 贾伟新 朱元源 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第9期18-27,共10页
研制猪瘟病毒(CSFV)E^(rns)结构蛋白单克隆抗体(简称“单抗”),对研究E^(rns)抗原结构和建立CSFV诊断方法具有重要意义。本试验利用单个B细胞抗体技术制备系列单抗,用CSFV E^(rns)蛋白免疫BALB/c小鼠,通过流式分选技术分选特异性结合E^(... 研制猪瘟病毒(CSFV)E^(rns)结构蛋白单克隆抗体(简称“单抗”),对研究E^(rns)抗原结构和建立CSFV诊断方法具有重要意义。本试验利用单个B细胞抗体技术制备系列单抗,用CSFV E^(rns)蛋白免疫BALB/c小鼠,通过流式分选技术分选特异性结合E^(rns)蛋白的单个B细胞,利用巢式聚合酶链式反应(PCR)扩增IgG抗体重链和轻链可变区基因,分别构建IgG抗体重链和轻链完整基因重组质粒,然后将重链和轻链重组质粒共转染至人胚胎肾细胞(HEK-293T)中进行单抗表达、纯化,并对单抗进行蛋白免疫印记(WB)、间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和间接免疫荧光(IFA)鉴定。流式分选结果显示,本试验分选得到48个特异性结合E^(rns)蛋白的单个B细胞。PCR扩增结果显示,从48个B细胞中扩增得到16对配对的IgG抗体重链和轻链可变区基因。WB、间接ELISA和IFA结果显示,本试验成功制备得到13株能与CSFV发生反应的E^(rns)单抗,其中1株(E0M11)仅与CSFV疫苗毒株(HCLV株、Thiverval株)反应,不与CSFV流行毒株(IVDC-HeB-01、IVDC-HuB-06)和牛流行性腹泻病毒(BVDV)反应。结果表明,本试验建立了快速筛选CSFV单抗的技术平台,制备的单抗有望用于CSFV鉴别诊断方法的建立,具有一定的临床应用价值。 展开更多
关键词 猪瘟病毒(csfv) 单克隆抗体 单个B细胞抗体技术 E^(rns)蛋白
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云南地区部分猪场猪呼吸道疾病综合症(PRDC)患病猪群中PRRSV,PCV-2,CSFV,PRV混合感染调查 被引量:25
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作者 舒相华 尹革芬 +4 位作者 杨志雷 宋春莲 李文贵 潘伟荣 刘旭川 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期54-58,共5页
针对云南省不同地区不同季节猪呼吸道疾病综合征进行流行病学调查,根据其临床特征,在不同规模养殖场共采集1 164份血清样品,利用ELISA和RT-PCR方法检测其猪瘟抗原CSFV,猪繁殖与呼吸综合征抗原PRRSV,猪伪狂犬病PRV gE抗体及猪圆环病毒2型... 针对云南省不同地区不同季节猪呼吸道疾病综合征进行流行病学调查,根据其临床特征,在不同规模养殖场共采集1 164份血清样品,利用ELISA和RT-PCR方法检测其猪瘟抗原CSFV,猪繁殖与呼吸综合征抗原PRRSV,猪伪狂犬病PRV gE抗体及猪圆环病毒2型PCV-2特异抗体。结果表明:各季节和不同生长阶段猪群存在一种及两种以上的病毒混合感染,四重感染相对较少。从全年看单独感染占39.10%,PCV-2感染率最高,其次是PRV,PRRSV和CSFV;二重感染占26.13%,以PCV-2+PRV最常见,其次是PCV-2+PRRSV、PRV+PRRSV;三重感染占8.05%,PCV-2+PRRSV+PRV最常见;有四重感染出现,仅占1.57%。从季节来看,春季和夏季混合感染最高,分别为76.53%和60.74%,冬季和秋季的混合感染率分别为59.50%和53.55%。从年龄和性别看,育肥猪的混合感染率高于仔猪,分别为68.66%和61.11%,种公猪的感染率高于母猪,分别为70.00%和55.51%。说明4种病毒有单独感染或混合感染,推测其中PCV-2在混合感染中可能充当免疫抑制的角色,混合感染使PRDC症状更明显,死亡率增高。 展开更多
关键词 猪呼吸道疾病综合征 猪瘟病毒 猪圆环病毒2型 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪伪狂犬病病毒
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一步法CSFV和PRRSV双重实时荧光定量RT-PCR诊断方法的建立与初步应用 被引量:3
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作者 袁秀芳 路斌 +2 位作者 徐丽华 李军星 王一成 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第4期537-543,共7页
根据猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的序列,分别设计了1对特异性引物和1条Taq Man探针,建立了一步法检测CSFV和PRRSV双重实时荧光定量RT-PCR方法。结果表明,建立的方法特异性高,与PCV2,PRV,PPV,PEDV,JEV,BVDV无交叉反应... 根据猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的序列,分别设计了1对特异性引物和1条Taq Man探针,建立了一步法检测CSFV和PRRSV双重实时荧光定量RT-PCR方法。结果表明,建立的方法特异性高,与PCV2,PRV,PPV,PEDV,JEV,BVDV无交叉反应;可以检出20个拷贝数的模板RNA,比常规RT-PCR方法的灵敏度高10倍;对同一样品进行4次重复试验,变异系数(CV)低于4%,方法重复性好。应用建立的荧光定量RT-PCR和常规RT-PCR对50份疑似病例组织进行检测,结果荧光定量RT-PCR检出30份PRRSV阳性,13份CSFV阳性,均高于常规RT-PCR方法的检出数(24份PRRSV阳性,10份CSFV阳性)。本研究建立的双重实时荧光定量RT-PCR方法具有快速、特异性好、灵敏度高的特点,可用于PRRSV和CSFV的实验室快速诊断和流行病学调查。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒 双重实时荧光定量RT-PCR
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稳定表达猪miRNA let-7c细胞株的建立及其对CSFV的调控作用 被引量:1
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作者 张旭 张彦明 +2 位作者 张倩 程媛媛 谭晓妮 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2010年第12期1-6,12,共7页
【目的】构建含有let-7c前体基因的重组质粒pGene-pre-let-7c,建立稳定表达猪miRNAlet-7c细胞株,研究let-7c对猪瘟病毒(CSFV)复制的调控作用。【方法】利用RNA22软件筛选出CSFV基因组3′-UTR潜在的let-7c结合位点,PCR扩增出let-7c前体片... 【目的】构建含有let-7c前体基因的重组质粒pGene-pre-let-7c,建立稳定表达猪miRNAlet-7c细胞株,研究let-7c对猪瘟病毒(CSFV)复制的调控作用。【方法】利用RNA22软件筛选出CSFV基因组3′-UTR潜在的let-7c结合位点,PCR扩增出let-7c前体片段,连接到表达载体pGenesil-1.1-dBm2上,构建重组质粒pGene-pre-let-7c,采用脂质体法将重组质粒转染猪脐静脉血管内皮细胞(SUVEC),经G418抗性压力筛选获得阳性细胞株。对获得的阳性细胞株进行接毒试验,检测CSFV的复制情况。用MTT比色法检测阳性细胞的增殖情况。【结果】成功扩增出let-7c前体基因,并构建了pGene-pre-let-7c重组质粒。重组质粒转染SUVEC细胞后筛选获得了稳定表达let-7c的细胞株。let-7c可下调CSFV在细胞中的复制。【结论】let-7c可下调CSFV的RNA复制水平。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 猪脐静脉血管内皮细胞 MIRNA let-7c
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CSFV及美洲型、欧洲型PRRSV多重qRT-PCR鉴别检测方法的建立及应用 被引量:2
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作者 施开创 邹联斌 +4 位作者 胡杰 张步娴 莫胜兰 官家明 陈汉忠 《家畜生态学报》 北大核心 2015年第3期63-68,共6页
根据猪瘟病毒(CSFV)以及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因组序列特点,设计3对特异性引物和3条TaqMan探针,经过反应条件的优化,建立了能同时检测并区分CSFV以及美洲型、欧洲型PRRSV的多重TaqMan荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)方法。该方法具... 根据猪瘟病毒(CSFV)以及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因组序列特点,设计3对特异性引物和3条TaqMan探针,经过反应条件的优化,建立了能同时检测并区分CSFV以及美洲型、欧洲型PRRSV的多重TaqMan荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)方法。该方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点,可以特异扩增CSFV和PRRSV,而与猪的其它常见病毒无交叉反应;对CSFV及美洲型、欧洲型PRRSV3种重组质粒标准品的检出下限均为2.68拷贝/μL;组内及组间重复试验的变异系数均小于1.5%。应用该方法对253份临床疑似样品进行检测,结果病原阳性106份,其中20份为CSFV阳性,86份为美洲型PRRSV阳性,11份为CSFV和美洲型PRRSV混合感染,未检测到欧洲型PRRSV。试验表明,研究建立的多重qRT-PCR方法可用于CSFV和PRRSV的快速鉴别检测及流行病学调查。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒 多重TaqMan荧光定量RT-PCR
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猪瘟病毒E^(rns)蛋白原核表达及其多克隆抗体制备
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作者 宋丹丹 金奕欣 +5 位作者 黄袁慧 王文锋 闵开骏 张传亮 罗廷荣 李晓宁 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期2835-2842,共8页
【目的】制备猪瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)E^(rns)蛋白多克隆抗体,为进一步研究E^(rns)蛋白结构和功能及解析CSFV的致病机理提供理论依据。【方法】采用生物信息学方法预测E^(rns)蛋白结构。以真核表达载体pCMV-HA-E^(r... 【目的】制备猪瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)E^(rns)蛋白多克隆抗体,为进一步研究E^(rns)蛋白结构和功能及解析CSFV的致病机理提供理论依据。【方法】采用生物信息学方法预测E^(rns)蛋白结构。以真核表达载体pCMV-HA-E^(rns)为模板,PCR克隆CSFV E^(rns)基因,构建原核表达载体pET-32a-E^(rns)。将pET-32a-E^(rns)转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,添加IPTG诱导E^(rns)蛋白表达,确定Erns蛋白表达形式。利用Ni-NTA亲和层析法纯化蛋白,以获得高纯度的E^(rns)蛋白。采用背部皮下多点注射法免疫小鼠,经4次免疫后采集小鼠血液,分离血清制备获得Erns蛋白多克隆抗体,并检测其效价和特异性。【结果】E^(rns)蛋白不含信号肽和跨膜结构域,为亲水性蛋白,含有多个B细胞抗原表位;E^(rns)基因片段大小为681 bp,其重组蛋白主要以包涵体形式表达;E^(rns)蛋白多克隆抗体对原核表达的重组蛋白效价为1∶64000,对真核表达的重组蛋白效价为1∶1000,且能特异性识别CSFV。【结论】制备获得的E^(rns)蛋白多克隆抗体具有效价高和特异性强等特点,可用于ELISA和Western blotting检测细胞中E^(rns)蛋白水平。E^(rns)蛋白多克隆抗体的制备有助于更好地理解E^(rns)蛋白在CSFV感染和免疫过程中的作用,对深入研究E^(rns)蛋白功能、CSFV生物学特性及猪瘟的防治和诊断方法的开发具有重要意义。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E^(rns)蛋白 原核表达 多克隆抗体
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2005-2023年中国猪群中猪瘟病毒流行报告:Meta分析及系统评价 被引量:1
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作者 黄石磊 罗干 +3 位作者 程鹏 牛铮 郭建华 邹宏 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期2058-2070,共13页
【目的】全面了解中国猪群中猪瘟病毒(CSFV)的流行感染情况,为后期CSFV的流行病学调查提供证据。【方法】本研究在中国知网、万方、维普、PubMed、Web of Science和Science Direct国内外6种主要数据库中检索中国猪群CSFV流行情况的相关... 【目的】全面了解中国猪群中猪瘟病毒(CSFV)的流行感染情况,为后期CSFV的流行病学调查提供证据。【方法】本研究在中国知网、万方、维普、PubMed、Web of Science和Science Direct国内外6种主要数据库中检索中国猪群CSFV流行情况的相关文献,检索时间范围为2005年1月1日-2023年1月1日。通过文献筛选、文献质量评分和CSFV流行率的数据提取,对文献中提取的数据利用StataMP17软件进行Meta分析和系统评价,分析CSFV的整体流行率,利用Meta回归分析和亚组分析CSFV整体流行率的异质性来源和影响因素。【结果】从6种主要数据库中共筛选出55篇CSFV流行情况的相关文献纳入本次Meta分析及系统评价,其中18篇文献被纳为高质量文献,37篇文献纳为中等质量文献。Meta分析结果表明,2005-2023年中国猪群中CSFV的整体流行率为12%(95%CI:0.09~0.15);Meta回归分析和亚组分析结果表明,文献的异质性来源不包括采样时间和猪种类(P>0.05),而影响CSFV流行率的因素包括诊断方法、季节变化、气候因素、海拔高度、纬度因素、经度因素及地区分布(P<0.05)。【结论】本研究从数据上确定了中国猪群中CSFV整体流行情况,其整体流行率不高,流行趋势为地区性的散在流行,以慢性和非典型毒株流行为主。本研究结果对掌握猪群CSFV流行的全局状况和有效防控及猪瘟(CSF)净化有一定的参考意义。 展开更多
关键词 猪瘟病毒(csfv) META分析 系统评价 流行病学
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抗猪瘟病毒NS3(p80)蛋白单克隆抗体的制备及其特性鉴定 被引量:15
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作者 鲁絮 张彦明 +5 位作者 郑增忍 穆杨 龚振华 李葳 徐浩 余欣 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期464-468,共5页
在大肠杆菌Rosetta(DE3)中表达猪瘟病毒石门株NS3基因部分功能片段,以纯化的重组NS3(p80)蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经间接ELISA筛选及3次连续克隆化获得了4株可分泌抗NS3单抗的杂交瘤细胞(2G7,2F11,5D2... 在大肠杆菌Rosetta(DE3)中表达猪瘟病毒石门株NS3基因部分功能片段,以纯化的重组NS3(p80)蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经间接ELISA筛选及3次连续克隆化获得了4株可分泌抗NS3单抗的杂交瘤细胞(2G7,2F11,5D2和6F11),通过小鼠体内诱生法制备腹水,并对杂交瘤细胞和单克隆抗体的特性进行鉴定。结果表明,杂交瘤细胞染色体正常,抗体分泌稳定,单抗效价高,亲和力各不相同,Ig亚类鉴定均为IgG1。Westernblot分析证明4株单抗均能与原核表达的NS3蛋白特异性结合,6F11株与真核表达的NS3蛋白有较强的特异性反应。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 NS3基因 表达 蛋白纯化 单克隆抗体
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RT-LAMP可视化检测猪瘟病毒及特异性鉴别猪瘟兔化弱毒疫苗 被引量:12
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作者 邓显文 谢芝勋 +9 位作者 谢志勤 刘加波 庞耀珊 谢丽基 范晴 罗思思 黄莉 黄娇玲 曾婷婷 黄秀琴 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期338-343,共6页
【目的】建立可视化检测猪瘟病毒(CSFV)及特异性鉴别猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)的逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),为临床检测CSFV野毒株及特异性鉴别HCLV毒株提供技术支持。【方法】根据Gen Bank中CSFV非结构蛋白NS5B基因的保守序列... 【目的】建立可视化检测猪瘟病毒(CSFV)及特异性鉴别猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)的逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),为临床检测CSFV野毒株及特异性鉴别HCLV毒株提供技术支持。【方法】根据Gen Bank中CSFV非结构蛋白NS5B基因的保守序列,设计两套针对CSFV和HCLV的特异性引物,并优化RT-LAMP反应条件,同时用LA-320C浊度仪实时监测其浊度变化。【结果】优化的RT-LAMP仅需在63℃水浴锅中反应50 min即可完成检测,且能通过肉眼观察反应液的颜色变化直接判定结果;所有CSFV样本的检测结果均为阳性(翠绿色),其他非CSFV样本的检测结果均为阴性(桔红色),且能特异性鉴别HCLV毒株,与实时浊度监测结果一致。该方法对CSFV和HCLV的最小检测限分别是100和101 copies,敏感度分别是常规RT-PCR的100倍和10倍。【结论】建立的RT-LAMP特异性强、灵敏度高、方法简便,尤其适合基层进行CSFV感染的快速检测及特异性鉴别HCLV,对有效防控CSF具有重要意义。 展开更多
关键词 猪瘟病毒(csfv) 猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV) RT-LAMP 浊度 特异性 敏感度
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猪瘟病毒 猪细小病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪伪狂犬病病毒多重PCR方法的建立以及初步应用 被引量:22
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作者 赵耘 秦玉明 +4 位作者 张广川 赵启祖 宁宜宝 戴志红 谢磊 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2007年第2期3-6,共4页
猪瘟病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪伪狂犬病病毒均能导致猪繁殖障碍,对养猪生产影响很大。本研究通过设计4对针对这4种病毒的特异引物建立了多重PCR方法,分别对其最佳反应条件、特异性及敏感性进行了测定,结果表明:其... 猪瘟病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪伪狂犬病病毒均能导致猪繁殖障碍,对养猪生产影响很大。本研究通过设计4对针对这4种病毒的特异引物建立了多重PCR方法,分别对其最佳反应条件、特异性及敏感性进行了测定,结果表明:其敏感性可达到CSFV 10 TCID50,PPV 10TCID50,PRRSV 1 TCID50,PRV 100 TCID50 CSFV 10TCID50,PPV 10TCID50,PRRSV 1 TCID50,PRV 100 TCID50。同时具有较好的特异性,对猪瘟病毒石门株、猪瘟病毒兔化弱毒株、PRV闽南A株、PPV弱毒疫苗株、PRRSV KY 35株及PRRSV B13株6个毒株均能扩增出相应的片段,而BVDV、BDV均未扩增出相应的片段。本方法的建立对于这4种病毒病的早期快速检测具有十分重要的意义。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 猪细小病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪伪狂犬病病毒 多重PCR
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猪瘟病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及优化 被引量:8
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作者 冯春花 朱艳平 +1 位作者 郭东光 岳锋 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第3期608-614,共7页
以原核表达、纯化的猪瘟病毒(CSFV)E2主要抗原区蛋白为目标检测物,通过对各反应条件的筛选和优化,建立了检测CSFV抗体的间接ELISA检测方法。结果表明,本研究的最佳抗原包被浓度和最佳血清稀释度分别为1.0μg/mL和1∶200;最佳抗原包被条... 以原核表达、纯化的猪瘟病毒(CSFV)E2主要抗原区蛋白为目标检测物,通过对各反应条件的筛选和优化,建立了检测CSFV抗体的间接ELISA检测方法。结果表明,本研究的最佳抗原包被浓度和最佳血清稀释度分别为1.0μg/mL和1∶200;最佳抗原包被条件和最佳封闭时间均为37℃1h;最佳酶标二抗稀释度和作用时间分别为1∶10 000和37℃45min;阴性临界值判断标准为当D450nm<0.30时猪血清样品为CSFV抗体阴性;批内和批间重复试验变异系数分别为4.8%和6.9%,表明该检测方法具有较高的稳定性;特异性试验结果表明,间接ELISA方法与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒(PCV)、猪细小病毒(PPV)阳性血清均无交叉反应;应用该间接ELISA方法随机检测80份猪血清样品,与进口阻断ELISA试剂盒相比其阳性符合率为83.58%,阴性符合率为76.92%,总体符合率为80.25%。结果表明本试验建立的间接ELISA方法具有很好的临床应用价值。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2蛋白 间接ELISA 抗体检测
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广西猪瘟病毒E2基因克隆及序列分析 被引量:5
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作者 陆增荣 张民秀 +9 位作者 肖雄 王艺 刘芳 刘欢 卢冰霞 刘磊 郭旋 黎木兰 黄福标 黄伟坚 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期528-531,共4页
【目的】了解广西猪瘟病毒(CSFV)流行毒株的变异规律及其与疫苗株的基因差异,为正确选择猪瘟疫苗和防制广西猪瘟提供参考依据。【方法】以广西本地的阳性猪瘟病料为研究对象,应用RT-PCR扩增CSFV的E2基因,经克隆、测序后用DNASTAR软件对... 【目的】了解广西猪瘟病毒(CSFV)流行毒株的变异规律及其与疫苗株的基因差异,为正确选择猪瘟疫苗和防制广西猪瘟提供参考依据。【方法】以广西本地的阳性猪瘟病料为研究对象,应用RT-PCR扩增CSFV的E2基因,经克隆、测序后用DNASTAR软件对其序列进行比对分析,并绘制遗传进化树。【结果】从41份疑似猪瘟病料中共扩增出4个阳性样品的E2基因(1140bp),经序列比对分析发现,扩增获得的4株CSFV毒株(GXGG1、GXLC1、GXLC2和GXNN1)与兔化弱毒株(HCLV)、Shimen强毒株的核苷酸同源性为82.1%~82.3%和82.9%~83.4%、其推导氨基酸同源性为88.4%~89.2%和88.9%~90.0%,4株毒株间的E2基因核苷酸及其推导氨基酸同源性分别为90.8%~99.6%和94.2%~99.5%,且均属于基因群Ⅱ;E2基因推导的氨基酸表明,E2蛋白空间结构及抗原结构的氨基酸位点693Cys、737Cys、792Cys、818Cys、828Cys、856Cys、833Pro、834Thr、837Arg均未发生变异,但其单抗识别位点G713E、N729D、K734R发生变异。【结论】近年来广西CSFV流行毒株的变异未出现较大差异,与HCLV株、Shimen强毒株亲缘关系较远,但与Paderborn株、GXWZ02株亲缘关系较近。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2基因 序列分析 同源性 氨基酸变异 广西
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猪瘟病毒FJFQ-39株的毒力鉴定 被引量:4
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作者 戴志红 赵耘 +5 位作者 宁宜宝 秦玉明 谢磊 张广川 王在时 张仲秋 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期694-698,726,共6页
为探索一种相对客观、稳定的方法鉴定猪瘟病毒(CSFV)FJFQ-39株的毒力。本研究采用2×103TCID50的FJFQ-39株分别肌肉接种6头敏感猪,通过RT-nPCR检测扁桃体和血液监测动物感染情况,对动物临床症状和病理变化进行系统评分,结合体温分析... 为探索一种相对客观、稳定的方法鉴定猪瘟病毒(CSFV)FJFQ-39株的毒力。本研究采用2×103TCID50的FJFQ-39株分别肌肉接种6头敏感猪,通过RT-nPCR检测扁桃体和血液监测动物感染情况,对动物临床症状和病理变化进行系统评分,结合体温分析,判定病毒毒力。同时用相同剂量的石门株接种4头敏感猪作对照。FJFQ-39和石门接种猪的扁桃体和血液均检测到CSFV核酸;FJFQ-39接种猪的最大临床症状评分(CS)平均值为3.53.5±1.0、病理评分(PS)平均值为3.3±0.9(低于5),平均最高体温为39.3±0.2℃(低于40℃);石门接种猪的最大CS平均值为25.5±2.1、PS平均值为29.5±2.4(大于15),平均最高体温为41.8±0.2℃(高于41.0℃)。实验结果表明:猪瘟病毒FJFQ-39株和石门株均成功感染了动物;评分系统结合体温测定评价CSFV毒力是可行的;FJFQ-39属于低毒力株,而石门属于强毒株。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 毒力 临床症状评分 病理评分 体温
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猪瘟病毒糖基化E2蛋白在重组杆状病毒中的表达与鉴定 被引量:4
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作者 李文良 毛立 +3 位作者 张纹纹 杨蕾蕾 王小敏 江杰元 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第2期341-345,共5页
为获得糖基化的重组猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白,通过PCR扩增出去除C端跨膜区的猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)E2蛋白基因,前面包含糖基化信号肽,末端引入StrepⅡ标签序列,将其克隆到Bac-to-Bac杆状病毒表达系统pFastBacTMHT B载体中,筛选获得阳性... 为获得糖基化的重组猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白,通过PCR扩增出去除C端跨膜区的猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)E2蛋白基因,前面包含糖基化信号肽,末端引入StrepⅡ标签序列,将其克隆到Bac-to-Bac杆状病毒表达系统pFastBacTMHT B载体中,筛选获得阳性重组质粒pF-ge2,转化至含有杆状病毒穿梭载体的DH10Bac感受态大肠杆菌中,经蓝白菌落筛选和PCR鉴定,获得重组表达载体rBac-ge2。在脂质体介导下转染对数生长期的Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rAc-gE2。Western-blot试验结果表明,重组蛋白得到正确表达,具有良好的抗原性;用糖苷酶PNGase F处理后重组蛋白分子量减小到40 000,证明重组蛋白为糖基化蛋白。这为进一步研究E2蛋白的功能及CSFV新型亚单位疫苗的开发奠定了基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2蛋白 糖基化 杆状病毒表达系统
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抗猪瘟病毒单链抗体基因的构建及其推导的蛋白质三级结构的分子模拟 被引量:6
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作者 刘金凤 吴健敏 +3 位作者 覃绍敏 白安斌 陈凤莲 曹颖颖 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第4期817-823,共7页
为利用抗猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)单链抗体基因(ScFv)建立CSFV病原快速检测方法,以抗猪瘟病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株总RNA为模板,通过RT-PCR扩增重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL),以柔性多肽(Gly4Ser)3为接... 为利用抗猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)单链抗体基因(ScFv)建立CSFV病原快速检测方法,以抗猪瘟病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株总RNA为模板,通过RT-PCR扩增重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL),以柔性多肽(Gly4Ser)3为接头(Linker),经重叠延伸反应将VH、VL基因拼接为完整的CSFV-ScFv基因,并进行克隆、测序分析。结果显示,所克隆单链抗体基因全长732 bp,包括363 bp的VH、45 bp的Linker和324 bp的VL,为VH-Linker-VL结构,编码的氨基酸序列含有明确的互补决定区(CDR)和框架区(FR)以及特征性的半胱氨酸残基,并与多种鼠源单链抗体基因高度同源,具有重组功能性鼠源抗体可变区特征。对CSFV-ScFv基因所编码蛋白质三级结构进行预测,显示其形成口袋样形状的空间构象,理论上具有良好的抗原结合活性。表明本研究成功构建了CSFV-ScFv基因。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 单链抗体 序列分析 分子模拟
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猪瘟标记疫苗研究现状 被引量:7
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作者 邹海涛 兰邹然 姜平 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第11期111-115,共5页
猪瘟是一种严重危害养猪业的烈性传染病,病死率很高,被世界动物卫生组织(OIE)列为必须报告的动物传染病。在我国,猪瘟弱毒疫苗的应用一定程度上控制了该病的暴发和流行,但是目前尚没有方法可以区别猪瘟疫苗免疫抗体和野毒感染抗体,猪瘟... 猪瘟是一种严重危害养猪业的烈性传染病,病死率很高,被世界动物卫生组织(OIE)列为必须报告的动物传染病。在我国,猪瘟弱毒疫苗的应用一定程度上控制了该病的暴发和流行,但是目前尚没有方法可以区别猪瘟疫苗免疫抗体和野毒感染抗体,猪瘟病毒的隐性感染和散发仍然影响我国生猪产品质量及出口。因此,新型猪瘟标记疫苗的研制成为目前猪瘟防控工作的迫切需求。论文在介绍猪瘟病毒分子特征及传统疫苗的基础上,对国内外新型猪瘟标记疫苗研究取得的进展进行了系统的阐述。 展开更多
关键词 猪瘟 猪瘟病毒 标记疫苗
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