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ILTV Glycoprotein B(gB)与鸡Interleukin-18(IL-18)真核双表达载体的构建及表达
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作者 王淑娟 商艳红 +5 位作者 陈红英 邵攀峰 刘金朋 朱前磊 王子馨 崔保安 《四川农业大学学报》 CSCD 北大核心 2011年第4期549-554,共6页
将ILTVgB基因和鸡IL-18基因插入到真核双表达载体pIRES中,构建共表达gB和IL-18基因的重组质粒pIRES-gB/IL18和表达gB基因的pIRES-gB质粒。通过脂质体将其转染鸡胚成纤维细胞,利用RT-PCR及间接免疫荧光检测重组质粒在体外的表达。将重组... 将ILTVgB基因和鸡IL-18基因插入到真核双表达载体pIRES中,构建共表达gB和IL-18基因的重组质粒pIRES-gB/IL18和表达gB基因的pIRES-gB质粒。通过脂质体将其转染鸡胚成纤维细胞,利用RT-PCR及间接免疫荧光检测重组质粒在体外的表达。将重组质粒通过腿部肌肉多点注射免疫21日龄雏鸡,应用ELISA和流式细胞仪分别检测免疫鸡的体液免疫及细胞免疫水平。结果显示,pIRES-gB/IL18和pIRES-gB转染细胞中分别含gB/IL-18基因的mRNA和gB基因的mRNA。间接免疫荧光检测表明,pIRES-gB/IL18和pIRES-gB在CEF细胞中有效地转录并表达gB蛋白。pIRES-gB/IL18和pIRES-gB免疫雏鸡后均能促进外周血T淋巴细胞亚群数量和血清中特异性抗体水平的增加,但前者的免疫效果明显优于后者,表明gB基因和鸡IL-18基因均获得了表达,且鸡IL-18能明显增强ILTV DNA疫苗诱发的免疫应答。 展开更多
关键词 传染性喉气管炎病毒(ILTV) GLYCOPROTEIN B(gB) interleukin-18基因 真核表达 DNA疫苗
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海兰鸡白细胞介素-18全基因的克隆与序列分析 被引量:9
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作者 陈红英 崔保安 +2 位作者 黄青云 李新生 王学斌 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期48-50,共3页
白细胞介素-18(Interleukin-18,IL-18)是一种能诱导产生IFN-γ的新型细胞因子,在调节Thl型细胞免疫应答中起重要作用。根据GenBank发表的鸡IL-18cDNA基因序列,自行设计一对引物,经植物血凝素(PHA)活化60日龄海兰鸡的脾淋巴细胞后,提取其... 白细胞介素-18(Interleukin-18,IL-18)是一种能诱导产生IFN-γ的新型细胞因子,在调节Thl型细胞免疫应答中起重要作用。根据GenBank发表的鸡IL-18cDNA基因序列,自行设计一对引物,经植物血凝素(PHA)活化60日龄海兰鸡的脾淋巴细胞后,提取其总RNA,经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,扩增产物进行了T-A克隆、测序,获得了中国海兰鸡IL-18基因全序列,其大小为597 bp,与在GenBank中查得的鸡IL-18基因进行比较发现,中国海兰鸡IL-18基因与Schneider报道的鸡IL-18基因序列完全一致,为进一步研究鸡IL-18基因表达、生物学活性和应用奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡IL-18基因 克隆 序列测定
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固始鸡白细胞介素18全基因的克隆与序列分析 被引量:5
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作者 陈红英 崔保安 +3 位作者 金钺 贾艳艳 刘金朋 段志刚 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期478-481,共4页
根据GenBank发表的鸡IL-18cDNA基因序列,自行设计1对引物,应用RT-PCR技术,无需用非特异性免疫原如ConA,PHA等刺激分离的脾淋巴细胞,直接提取总RNA,扩增固始鸡IL-18基因,并进行克隆和测序.测序结果:获得了固始鸡IL-18基因全序列,其大小为... 根据GenBank发表的鸡IL-18cDNA基因序列,自行设计1对引物,应用RT-PCR技术,无需用非特异性免疫原如ConA,PHA等刺激分离的脾淋巴细胞,直接提取总RNA,扩增固始鸡IL-18基因,并进行克隆和测序.测序结果:获得了固始鸡IL-18基因全序列,其大小为597 bp;序列比较分析发现,克隆的固始鸡IL-18基因与Schneider报道的鸡IL-18基因序列核苷酸同源性为99.8%,有1个碱基发生非同义变异,氨基酸同源性为99.5%;固始鸡与人和其他动物的IL-18基因序列分析和系统进化分析表明,IL-18基因存在种属的差异性,亲缘关系越近,同源性越高. 展开更多
关键词 鸡IL-18基因 克隆 序列分析
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海兰鸡IL-18全基因的克隆与序列分析 被引量:3
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作者 陈红英 崔保安 +4 位作者 黄青云 魏战勇 王学斌 方丽云 陈泽贵 《动物医学进展》 CSCD 2005年第11期49-52,共4页
IL-18是一种能诱导产生IFN-γ的新型细胞因子,在调节Th1型细胞免疫应答中起重要作用。根据GenBank发表的鸡IL-18cDNA基因序列,自行设计一对引物,经植物血凝素(PHA)活化60日龄海兰鸡的脾淋巴细胞后,提取其总RNA,经反转录-聚合酶链反应(RT... IL-18是一种能诱导产生IFN-γ的新型细胞因子,在调节Th1型细胞免疫应答中起重要作用。根据GenBank发表的鸡IL-18cDNA基因序列,自行设计一对引物,经植物血凝素(PHA)活化60日龄海兰鸡的脾淋巴细胞后,提取其总RNA,经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,扩增产物进行了T-A克隆、测序,获得了中国海兰鸡IL-18基因全序列,其大小为597 bp,与GenBank中查得的鸡IL-18基因进行比较发现,中国海兰鸡IL-18基因与Schneider报道的鸡IL-18基因序列完全一致,为进一步研究鸡IL-18基因表达、生物学活性和应用奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡IL-18基因 克隆 序列测定
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NDV F基因真核表达质粒的构建及其与鸡IL-18基因联合免疫的初步研究 被引量:3
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作者 陈红英 崔沛 +4 位作者 李新生 崔保安 段廷云 陈果 李成 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期511-516,共6页
为了探索鸡新城疫病毒(NDV)F蛋白的免疫原性及鸡白细胞介素-18(IL-18)的免疫增强作用,通过PCR和酶切方法将NDV F基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建真核表达质粒pcDNA-F。用质粒pcDNA-F单独或与鸡IL-18重组真核表达质粒pIL-18联合... 为了探索鸡新城疫病毒(NDV)F蛋白的免疫原性及鸡白细胞介素-18(IL-18)的免疫增强作用,通过PCR和酶切方法将NDV F基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建真核表达质粒pcDNA-F。用质粒pcDNA-F单独或与鸡IL-18重组真核表达质粒pIL-18联合免疫14日龄SPF鸡。首免后每周采取外周血及外周抗凝血,应用ELISA和MTT法分别检测免疫鸡的体液免疫及细胞免疫水平。二免后第14 d用NDV强毒F48E9株进行攻击。结果表明,质粒pcDNA-F与pIL-18联合免疫显著提高鸡体的细胞免疫水平,并且提供了50%免疫保护,这为ND的防治开辟了新的途径。 展开更多
关键词 鸡新城疫病毒 F基因 真核表达 鸡白细胞介素-18
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鸡IL-18成熟蛋白基因原核表达载体的构建及多克隆抗体的制备 被引量:2
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作者 刘一尘 张春杰 +4 位作者 程相朝 张谦 李银聚 吴庭才 赵战勤 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2009年第2期110-113,共4页
应用RT-PCR技术得到鸡IL-18成熟蛋白基因(chicken mature interleukin-18),将克隆片段与原核表达载体pET28a+连接,构建了重组表达载体pET28a+-ChMIL18,转化至大肠杆菌BL21感受态细胞,获得重组表达菌株。经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析后,... 应用RT-PCR技术得到鸡IL-18成熟蛋白基因(chicken mature interleukin-18),将克隆片段与原核表达载体pET28a+连接,构建了重组表达载体pET28a+-ChMIL18,转化至大肠杆菌BL21感受态细胞,获得重组表达菌株。经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析后,用含有融合蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳颗粒免疫家兔,制备兔抗鸡IL-18多克隆抗体,Western-Blot检测抗体效价和特异性。结果表明,鸡IL-18在BL21中得到了表达,相对分子质量约为23kD,获得了具有较高效价的特异性多克隆抗体。为进一步研究鸡IL-18成熟蛋白的生物学活性和作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡IL-18成熟蛋白基因 原核表达 多克隆抗体
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鸡IL-18基因的克隆与序列测定 被引量:21
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作者 温纳相 黄青云 +1 位作者 陈金顶 曹素芳 《动物医学进展》 CSCD 2003年第2期64-66,共3页
根据Genbank发表的鸡IL-18基因序列,设计一对引物,提取鸡脾细胞总RNA,经RT-PCR扩增和扩增产物的克隆、测序,获得了中国江西土鸡IL-18基因片段,其大小为597bp,与Schneider报道的鸡IL-18基因序列完全一致,为进一步研究鸡IL-18的基因表达... 根据Genbank发表的鸡IL-18基因序列,设计一对引物,提取鸡脾细胞总RNA,经RT-PCR扩增和扩增产物的克隆、测序,获得了中国江西土鸡IL-18基因片段,其大小为597bp,与Schneider报道的鸡IL-18基因序列完全一致,为进一步研究鸡IL-18的基因表达、生物学活性和应用奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡IL-18基因 CDNA克隆 序列测定 白细胞介素-18 细胞免疫调节因子
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表达鸡白细胞介素18重组禽痘病毒的构建及其表达产物生物学活性的检测
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作者 陈红英 黄青云 +3 位作者 崔保安 李新生 管倩 刘金朋 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2008年第6期6-10,共5页
为构建表达鸡IL-18的重组禽痘病毒,将含痘病毒启动子LP2EP2驱动的鸡IL-18基因插入到禽痘病毒转移载体pSY681中,获得重组转移载体pSY681/ChIL-18。将pSY681/ChIL-18转染已感染亲本禽痘病毒S-FPV-017株的鸡胚成纤维细胞,使其在鸡胚成纤维... 为构建表达鸡IL-18的重组禽痘病毒,将含痘病毒启动子LP2EP2驱动的鸡IL-18基因插入到禽痘病毒转移载体pSY681中,获得重组转移载体pSY681/ChIL-18。将pSY681/ChIL-18转染已感染亲本禽痘病毒S-FPV-017株的鸡胚成纤维细胞,使其在鸡胚成纤维细胞内与禽痘病毒基因组发生同源重组,产生表达鸡IL-18的重组禽痘病毒rFPV-ChIL-18。在含有X-gal的营养琼脂培养基上进行蓝斑筛选后,对重组病毒rFPV-ChIL-18又进行了多次蚀斑克隆。以重组禽痘病毒DNA为模板,利用鸡IL-18基因特异引物进行PCR,扩增出1条约0.6 kb的带。收集含鸡IL-18蛋白的细胞上清液进行MTT试验,表达的产物能明显提高鸡淋巴细胞的转化率。 展开更多
关键词 鸡IL-18基因 重组禽痘病毒 构建 生物学活性
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NDV F与ChIL-18融合基因“自杀性”质粒的构建
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作者 刘勤妮 聂奎 《安徽农学通报》 2008年第5期21-24,共4页
根据GeneBank公布的鸡新城疫病毒(NDV)Lasota株F基因和鸡源性白细胞介素18(ChIL-18)基因序列分别设计特异性引物,且在鸡NDV F基因引物上游引入BamHⅠ位点、下游引入SalⅠ位点,在Ch IL-18基因引物上游引入SalⅠ位点、下游引入HindⅢ、Bam... 根据GeneBank公布的鸡新城疫病毒(NDV)Lasota株F基因和鸡源性白细胞介素18(ChIL-18)基因序列分别设计特异性引物,且在鸡NDV F基因引物上游引入BamHⅠ位点、下游引入SalⅠ位点,在Ch IL-18基因引物上游引入SalⅠ位点、下游引入HindⅢ、BamHⅠ位点。以鸡新城疫病毒Lasota株RNA为模板RT-PCR扩增其F基因,将F基因插入pMD18-T的BamHⅠ与SalⅠ位点中。同时扩增上游带有SalⅠ位点、下游带有HindⅢ、BamHⅠ位点的ChIL-18基因,并将其插入到含有F基因的pMD18-T质粒的SalⅠ、HindⅢ位点之间,从而使NDV F基因与ChIL-18基因形成具有一个完整阅读框的融合基因,然后将融合基因片段定向克隆到pSFV单一启动子(CMV)下游,构建成F-ChIL-18融合基因重组"自杀性"质粒pSFV-F-ChIL-18。 展开更多
关键词 鸡新城疫病毒F基因 鸡源性白细胞介素18 甲病毒载体 核酸疫苗
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