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羰基还原酶ChKRED20可溶性表达的提升及酶学性质研究
1
作者
沈悦
郑红
范新炯
《安徽医科大学学报》
北大核心
2025年第8期1365-1372,共8页
目的探究提升羰基还原酶ChKRED20可溶性的方法并测定其酶学性质。方法合成ChKRED20基因并转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中进行异源表达,通过增减和改变His-tag位置、改变发酵条件等研究蛋白可溶性,并进一步优化诱导时间、温度及异丙基硫代...
目的探究提升羰基还原酶ChKRED20可溶性的方法并测定其酶学性质。方法合成ChKRED20基因并转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中进行异源表达,通过增减和改变His-tag位置、改变发酵条件等研究蛋白可溶性,并进一步优化诱导时间、温度及异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)浓度等以提升重组蛋白的表达,随后研究重组酶的酶学性质。结果利用ChKRED20原核表达菌株,在大肠埃希菌表达体系内去除His-tag并进行发酵条件优化,以获得最优可溶蛋白表达;无His-tag ChKRED20比携带N端和C端His-tag的蛋白酶活性分别提高了0.77和1.28倍;最适温度为55℃,最适pH为8.0;且该酶在较高温度下、碱性环境中仍具有较好的适应性。结论去除His-tag及优化发酵条件可以大大提升ChKRED20在大肠埃希菌中的可溶性。
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关键词
羰基还原酶
chkred20
HIS-TAG
酶学性质
大肠埃希菌
蛋白可溶性
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职称材料
题名
羰基还原酶ChKRED20可溶性表达的提升及酶学性质研究
1
作者
沈悦
郑红
范新炯
机构
安徽医科大学基础医学院干细胞与组织研究中心
出处
《安徽医科大学学报》
北大核心
2025年第8期1365-1372,共8页
基金
国家自然科学基金项目(编号:82173725、31400680)
高校中青年教师培养行动项目(编号:DTR2024005)。
文摘
目的探究提升羰基还原酶ChKRED20可溶性的方法并测定其酶学性质。方法合成ChKRED20基因并转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中进行异源表达,通过增减和改变His-tag位置、改变发酵条件等研究蛋白可溶性,并进一步优化诱导时间、温度及异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)浓度等以提升重组蛋白的表达,随后研究重组酶的酶学性质。结果利用ChKRED20原核表达菌株,在大肠埃希菌表达体系内去除His-tag并进行发酵条件优化,以获得最优可溶蛋白表达;无His-tag ChKRED20比携带N端和C端His-tag的蛋白酶活性分别提高了0.77和1.28倍;最适温度为55℃,最适pH为8.0;且该酶在较高温度下、碱性环境中仍具有较好的适应性。结论去除His-tag及优化发酵条件可以大大提升ChKRED20在大肠埃希菌中的可溶性。
关键词
羰基还原酶
chkred20
HIS-TAG
酶学性质
大肠埃希菌
蛋白可溶性
Keywords
carbonyl reductase
chkred20
His-tag
enzymatic properties
Escherichia coli
protein solubility
分类号
R34 [医药卫生—基础医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
羰基还原酶ChKRED20可溶性表达的提升及酶学性质研究
沈悦
郑红
范新炯
《安徽医科大学学报》
北大核心
2025
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