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Cathepsin B在感染才女虫虾夷扇贝中表达规律的研究
1
作者 杭雲娜 孙红妍 +6 位作者 唐安琪 毛俊霞 田莹 王许波 郝振林 丁君 常亚青 《大连海洋大学学报》 北大核心 2025年第1期55-64,共10页
为探究组织蛋白酶B(Cathepsin B,CatB)在虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis)应答才女虫(Polydora)侵染中的分子功能,本研究进行了虾夷扇贝CatB基因(PyCatB)的基因组鉴定、序列特征和基因表达分析,解析了感染才女虫虾夷扇贝中PyCatB的酶... 为探究组织蛋白酶B(Cathepsin B,CatB)在虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis)应答才女虫(Polydora)侵染中的分子功能,本研究进行了虾夷扇贝CatB基因(PyCatB)的基因组鉴定、序列特征和基因表达分析,解析了感染才女虫虾夷扇贝中PyCatB的酶活性变化特征和基因表达变化规律。结果表明:PyCatB基因全长为9 267 bp,包含9个外显子,8个内含子;其cDNA长度为1 219 bp, 5′UTR长度为103 bp, 3′UTR长度为99 bp;开放阅读框(ORF)长度为1 017 bp,编码338个氨基酸;PyCatB预测含有N端信号肽、前肽Propeptide C1和肽酶peptidase C1A cathepsin B 3个保守功能域;此外还具有催化三联体结构(Cys116、His284、Asn304)、Gln110氧阴离子孔、GCNGG基序及C194~C205固定残基片段形成的特征性闭塞环,这些结构对PyCatB的催化活性起着重要的作用;系统进化分析表明,各物种CatB的进化地位与生物进化地位一致;酶活性分析显示,感染才女虫虾夷扇贝外套膜组织的CatB酶活性显著高于健康扇贝;基因表达分析表明,除闭壳肌外,PyCatB在健康虾夷扇贝成体各组织中均有不同水平的表达;研究发现,PyCatB基因参与广泛的生理过程;PyCatB在患病虾夷扇贝的外套膜不同区域的表达量均要显著高于健康扇贝,但在健康和患病扇贝血淋巴细胞中的表达无显著性差异,推测PyCatB主要通过外套膜组织参与虾夷扇贝的免疫应答过程进而抵御才女虫的侵染。本研究为虾夷扇贝应答才女虫侵染机制的解析提供了科学参考。 展开更多
关键词 虾夷扇贝 才女虫病 组织蛋白酶b 酶活性 表达规律
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猪Cathepsin B基因cDNA分子克隆、序列分析及遗传多态性分析 被引量：4
2
作者 陈磊 李学伟 +2 位作者 朱砺 李强 李明洲 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期385-392,共8页
采用RT-PCR结合克隆测序的方法,从猪肌肉组织总RNA中克隆出了猪组织蛋白酶B(Cathepsin B,CTSB)基因的cDNA序列,并推导出其编码的氨基酸序列。猪CTSB基因开放阅读框(ORF)全长1008 bp,编码335个氨基酸。同源性分析结果表明,猪与人、鼠、牛... 采用RT-PCR结合克隆测序的方法,从猪肌肉组织总RNA中克隆出了猪组织蛋白酶B(Cathepsin B,CTSB)基因的cDNA序列,并推导出其编码的氨基酸序列。猪CTSB基因开放阅读框(ORF)全长1008 bp,编码335个氨基酸。同源性分析结果表明,猪与人、鼠、牛的CTSB基因cDNA编码区(CDS)同源性分别为85%、81%、90%,推测的氨基酸序列同源性分别为81%、79%、91%。利用同源性结合序列特征预测表明该蛋白具有信号肽和前肽序列。蛋白质结构同源建模分析表明,该蛋白具有木瓜蛋白酶家族的典型空间结构,包括1个底物结合凹槽和3个相互靠近的活性位点。另外采用PCR-SSCP方法,在147头个体中分析了CTSB基因第6内含子内的SS-CP位点多态性,检测到3个等位基因6种基因型。FF基因型个体的各项嫩度指标最高,其最大剪切力与硬度值分别为6.56 kg和23.55 kg.s,极显著地高于EE和EF基因型个体(P<0.01),平均剪切力为4.85 kg,显著地高于EF基因型个体(P<0.05)。 展开更多
关键词 猪 CTSb基因 基因克隆 嫩度
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Cathepsin B反义RNA抑制乳腺癌细胞的侵袭和迁移 被引量：2
3
作者 王海燕 张和军 +3 位作者 葛爱敏 黄扬 陈水平 万榕 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期161-167,共7页
目的:探讨人cathepsin B(CatB)反义RNA在乳腺癌细胞侵袭与迁移中的作用。方法:构建携CatB反义RNA的重组质粒pBudCE4.1-antiCatB,采用脂质体法将重组质粒瞬时转染人乳腺癌细胞MDA-MB-231。Western blotting法检测MDA-MB-231细胞中CatB蛋... 目的:探讨人cathepsin B(CatB)反义RNA在乳腺癌细胞侵袭与迁移中的作用。方法:构建携CatB反义RNA的重组质粒pBudCE4.1-antiCatB,采用脂质体法将重组质粒瞬时转染人乳腺癌细胞MDA-MB-231。Western blotting法检测MDA-MB-231细胞中CatB蛋白的表达,MTT法检测MDA-MB-231细胞的增殖,细胞-基质黏附实验检测反义CatB对MDA-MB-231细胞黏附能力的影响,体外侵袭、迁移实验分析反义CatB表达对MDA-MB-231细胞体外侵袭和迁移能力的影响。结果:成功构建pBudCE4.1-antiCatB表达载体。转染MDA-MB-231细胞后,与未转染组细胞和转染空载体组细胞相比,转染组MDA-MB-231细胞的CatB蛋白表达水平明显降低[(0.96±0.02)vs(1.98±0.23),(1.84±0.08),P<0.05];转染组细胞的增殖受到明显抑制[(0.255±0.017)vs(0.458±0.033),(0.421±0.022),P<0.01];转染组细胞的黏附(基质胶或纤维黏连蛋白)能力明显下降[(0.054±0.017)vs(0.111±0.018),(0.107±0.017),P<0.01;或(0.052±0.008)vs(0.120±0.014),(0.113±0.009),P<0.01];转染组细胞的侵袭和迁移能力也明显降低[(52.80±7.76)vs(124.00±44.54),(116.80±32.87),P<0.01;(60.25±8.73)vs(132.50±12.15),(119.20±25.13),P<0.01]。结论:CatB反义RNA可抑制乳腺癌细胞体外生长、黏附、迁移和侵袭能力。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 cathepsin b基因 反义RNA 转染 黏附 侵袭
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柔嫩艾美耳球虫Cathepsin B基因的克隆表达及活性研究 被引量：2
4
作者 刘任强 蔡建平 汪明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1838-1843,共6页
旨在利用同源克隆法从柔嫩艾美尔球虫(Eimeria tenella)中克隆组织蛋白酶B基因(Etcat B),为进一步研究其基因表达和基因功能奠定基础。选用未孢子化的柔嫩艾美耳球虫Houghton株,通过对已公布的柔嫩艾美尔球虫序列进行分析,利用RT-PCR的... 旨在利用同源克隆法从柔嫩艾美尔球虫(Eimeria tenella)中克隆组织蛋白酶B基因(Etcat B),为进一步研究其基因表达和基因功能奠定基础。选用未孢子化的柔嫩艾美耳球虫Houghton株,通过对已公布的柔嫩艾美尔球虫序列进行分析,利用RT-PCR的方法克隆EtcatB基因的cDNA序列,并将其重组于transE1原核表达载体中,鉴定后,重组质粒转入大肠杆菌Rosetta进行诱导表达。利用纯化所得Etcat B蛋白制备兔抗多抗,同时利用明胶酶谱法初步验证其活性。利用Real-time PCR和Western blot的方法检测Etcat B在球虫发育不同阶段和孢子化不同阶段的表达水平。成功克隆得到一个长度为1 539bp的Etcat B基因,并重组表达了球虫的组织蛋白酶B。SDS-PAGE电泳结果显示,在1mmol·L-1 IPTG 37℃诱导4h下,主要以包涵体的形式表达;4℃过夜诱导可以使之转为可溶性表达。表达产物在低pH、有还原剂存在的环境中,可以降解明胶,初步证明重组表达的酶具有一定的活性,Etcat B在配子体和裂子体时期表达较高,未孢子化和子孢子阶段表达相对较低,孢子化过程中表达逐步增加。Etcat B基因的克隆和表达研究,为进一步探究该基因在鸡球虫入侵及其他生物学功能中所起的作用提供了理论基础。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 组织蛋白酶b 克隆 表达
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小麦颖果与根部Cathepsin B-like蛋白的初步研究 被引量：2
5
作者 刘阳 周竹青 +4 位作者 梅方竹 周广生 蔡静桐 杨文丽 张智慧 《湖北农业科学》 北大核心 2013年第17期4044-4047,共4页
利用免疫组织化学技术观察了小麦(Triticum aestivum L.)灌浆时期颖果内以及苗期根部原生韧皮部Cathepsin B-like蛋白的分布以及活性变化。结果表明,在开花后1~9 d的小麦颖果内,Cathepsin Blike蛋白主要分布在内果皮细胞以及灌浆池两侧... 利用免疫组织化学技术观察了小麦(Triticum aestivum L.)灌浆时期颖果内以及苗期根部原生韧皮部Cathepsin B-like蛋白的分布以及活性变化。结果表明,在开花后1~9 d的小麦颖果内,Cathepsin Blike蛋白主要分布在内果皮细胞以及灌浆池两侧的维管束中;在开花后12~24 d的颖果中,糊粉层内的Cathepsin B-like蛋白含量逐渐增加,两侧维管束细胞中的Cathepsin B-like蛋白消失,颖果背部内果皮细胞的Cathepsin B-like蛋白含量减少并在细胞边缘出现聚集现象;在小麦苗期根部的原生韧皮部中,随着韧皮部筛分子的成熟,筛分子内的Cathepsin B-like蛋白含量逐渐下降直至消失。 展开更多
关键词 cathepsin b-like蛋白 小麦(Triticum AESTIVUM L.) 颖果 根部 发育
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Cathepsin B-RNAi-lentivirus新生血管形成的研究抑制小鼠视网膜 被引量：3
6
作者 周国宏 孔丽 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期452-455,共4页
背景 视网膜新生血管性疾病是一种严重影响视力的眼病.研究表明,cathepsin B参与新生血管的生成,寻找抑制视网膜新生血管形成的药物可为此类疾病的分子机制研究提供依据. 目的 研究cathepsin B-RNAi-lentivirus对小鼠视网膜新生血管的... 背景 视网膜新生血管性疾病是一种严重影响视力的眼病.研究表明,cathepsin B参与新生血管的生成,寻找抑制视网膜新生血管形成的药物可为此类疾病的分子机制研究提供依据. 目的 研究cathepsin B-RNAi-lentivirus对小鼠视网膜新生血管的抑制作用. 方法 将7日龄清洁级C57BL/6J小鼠与其母鼠共同置于氧体积分数为（75±2）％的密闭氧箱内5d,制作视网膜新生血管模型,5d后返回正常环境.应用随机数字表法将60只小鼠随机分为模型对照组、阴性对照组和基因治疗组,每组20只.模型对照组小鼠不给予任何药物干预,阴性对照组小鼠玻璃体腔内注射空载体与辅助载体包装成的无目的基因的空病毒颗粒（NC-GFP-LV）1 μl,基因治疗组以同样的方法注射eathepsin B-RNAi-lentivirus 1μl.注射5d后各组分别应用随机数字表法随机处死7只小鼠,获取14只眼的视网膜,采用real-time PCR法检测小鼠视网膜中cathepsin BmRNA的表达量（2△△Ct）,另外同时间点同法分别处死8只小鼠,获取16只眼球的视网膜,采用Western blot法检测各组小鼠视网膜中cathepsin B蛋白的相对表达量（cathepsin B/β-actin）.注射5d后各组分别取剩余5只小鼠行异硫氰酸葡聚醛荧光素（FITC-dextran）心脏灌注,并处死动物,制备10只眼的视网膜铺片,荧光显微镜下观察和比较各组小鼠视网膜新生血管的形态和数量. 结果 基因治疗组小鼠视网膜中cathepsin B mRNA的表达水平（2-△△Ct）为0.740.12,明显低于模型对照组及阴性对照组的1.66±0.17和1.58±0.29,差异均有统计学意义（q=0.746、1.588,P＜0.01）.基因治疗组小鼠视网膜中cathepsin B蛋白的表达水平（cathepsin B/β-actin）为0.64±0.06,明显低于模型对照组及阴性对照组的0.93±0.09和0.96±0.09,差异均有统计学意义（q=0.637、0.894,P＜0.01）.小鼠视网膜荧光染色结果显示,模型对照组和阴性对照组小鼠视网膜新生血管分层及分支多,血管走形扭曲,部分血管可见荧光素渗漏；基因治疗组小鼠血管走形较直,血管分支少,新生血管数量少. 结论 Cathepsin B-RNAi-lentivirus转染能有效抑制小鼠视网膜新生血管的形成. 展开更多
关键词 慢病毒 组织蛋白酶b 新生血管
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视网膜新生血管形成中Cathepsin B的变化 被引量：3
7
作者 周国宏 于文贞 黎晓新 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2007年第10期745-748,共4页
目的通过观察Cathepsin B的变化,探讨视网膜新生血管的发病机制。方法取C57BL/6J7d龄小鼠30只,随机分为对照组和实验组,实验组在缺氧环境中建立视网膜新生血管动物模型。采用苏木精-伊红染色、视网膜ADP酶染色铺片及免疫组织化学法进行... 目的通过观察Cathepsin B的变化,探讨视网膜新生血管的发病机制。方法取C57BL/6J7d龄小鼠30只,随机分为对照组和实验组,实验组在缺氧环境中建立视网膜新生血管动物模型。采用苏木精-伊红染色、视网膜ADP酶染色铺片及免疫组织化学法进行检测,同时测定眼组织Cathepsin B活性。结果组织病理学见突破内膜新生血管内皮细胞核数,无血管区面积及无血管区面积/视网膜面积,实验组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01);对照组与实验组Cathepsin B平均光密度、Cathepsin B活性比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论C57BL/6J构建小鼠视网膜新生血管动物模型后,小鼠视网膜组织Cathepsin B表达增加、活性增强,CathepsinB可能是视网膜新生血管产生的一个重要因素。 展开更多
关键词 组织蛋白酶b 视网膜新生血管 C57bL/6J鼠
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日本囊对虾Cathepsin B基因在不同卵巢发育时期的表达 被引量：3
8
作者 程成 林鹏 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期159-163,共5页
采用实时定量PCR技术,以18SrRNA为内标基因,检测日本囊对虾Cathepsin B基因在mRNA水平不同卵巢发育时期的表达。结果显示,Cathepsin B在卵黄合成前期表达最高,内源性卵黄合成期和外源性卵黄合成期表达水平基本一致,而在成熟期表达水平... 采用实时定量PCR技术,以18SrRNA为内标基因,检测日本囊对虾Cathepsin B基因在mRNA水平不同卵巢发育时期的表达。结果显示,Cathepsin B在卵黄合成前期表达最高,内源性卵黄合成期和外源性卵黄合成期表达水平基本一致,而在成熟期表达水平急剧下降。其中卵黄合成前期与其它3期相比具有显著性差异(P<0.05),内源性卵黄合成期和外源性卵黄合成期Cathepsin B不具有显著性差异(P>0.05),而成熟期与前边三期相比具有显著性差异(P<0.05)。推测Cathepsin B可能在日本囊对虾卵巢发育中发挥了作用。 展开更多
关键词 日本囊对虾 卵巢发育 基因表达
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大鼠脑外伤后溶酶体酶Cathepsin-B和D的表达 被引量：10
9
作者 张延波 陈溪萍 +6 位作者 陶陆阳 秦正红 李生兴 杨丽 杨菊 张运阁 刘冉 《法医学杂志》 CAS CSCD 2006年第6期404-406,410,F0002,共5页
目的研究大鼠脑外伤后溶酶体酶cathepsin-B和-D是否被激活及其不同时段表达变化,阐述其与凋亡执行因子caspase-3表达的关系,并探讨对脑外伤诊断及形成时间的意义。方法采用自由落体打击法建立脑外伤动物模型,并对模型及对照样本进行免... 目的研究大鼠脑外伤后溶酶体酶cathepsin-B和-D是否被激活及其不同时段表达变化,阐述其与凋亡执行因子caspase-3表达的关系,并探讨对脑外伤诊断及形成时间的意义。方法采用自由落体打击法建立脑外伤动物模型,并对模型及对照样本进行免疫荧光、双标和激光共聚焦检测,结果用SPSS10.0软件处理。结果脑外伤后1hcathepsin-B表达即增加,4～8d达高峰,脑外伤后32d仍处于高表达水平;cathepsin-D的表达于脑外伤后12h增加,4～8d达高峰,32d的表达仍然高于12h的表达水平。脑外伤初期,cathepsin-B和-D阳性细胞与caspase-3阳性细胞重叠较少,脑外伤后6h开始增加,32d仍然有很多阳性细胞重叠。结论脑外伤后cathepsin-B和-D被激活,其激活在脑外伤早期可能抑制细胞凋亡执行因子caspase-3的激活,之后(6h后)则与caspase-3起协同作用,共同促进细胞死亡;cathepsin-B和-D表达的时程变化对于脑外伤的法医学诊断和中晚期的时间推断有参考意义。 展开更多
关键词 脑外伤 溶酶体 cathepsin—b cathepsin—D caspase-3
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醒脑静注射液对急性心肌梗死患者血清中IL-1β、TGF-β1、溶酶体酶Cathepsin-B的含量影响研究 被引量：1
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作者 高树霞 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2016年第5期1271-1274,共4页
目的:探讨醒脑静注射液对急性心肌梗死患者血清中IL^(-1)β、TGF-β1、溶酶体酶Cathepsin-B的含量的影响。方法:收集安丘市人民医院收治的急性心肌梗死患者60例,随机分为对照组和实验组,各30例,对照组患者给予西医常规治疗,实验组患者... 目的:探讨醒脑静注射液对急性心肌梗死患者血清中IL^(-1)β、TGF-β1、溶酶体酶Cathepsin-B的含量的影响。方法:收集安丘市人民医院收治的急性心肌梗死患者60例,随机分为对照组和实验组,各30例,对照组患者给予西医常规治疗,实验组患者在对照组基础上给予醒脑静注射液静滴,两组均治疗2周,治疗前后,对所有患者的血清TGF-β1、IL^(-1)β、Cathepsin-B、CRP含量、血浆D-D、FIB水平及心功能进行检测。结果:治疗后,与对照组比较,1实验组患者的血清IL^(-1)β、TGF-β1含量明显较低,差异具有统计学意义(P<0.05);2实验组患者的血清Cathepsin-B含量明显较低(P<0.05);3实验组患者的血清CRP含量明显较低(P<0.05);4实验组患者的血浆D-D、FIB含量明显较低(P<0.05);5实验组患者的LVEF明显较高,LVEDd和LVESd均明显较低(P<0.05)。结论:醒脑静注射液能够显著降低急性心肌梗死患者血清TGF-β1、IL^(-1)β、Cathepsin-B、CRP含量及血浆D-D、FIB水平,改善患者的心功能,对临床有指导意义。 展开更多
关键词 醒脑静注射液 急性心肌梗死 IL-1Β TGF-Β1 cathepsin-b
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艾灸对实验性类风湿性关节炎家兔滑膜组织NLRP3炎性小体激活因素Cathepsin-B、ROS水平的影响 被引量：11
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作者 陈俊 刘华辉 +7 位作者 路晓清 席东来 王燚 杨慎峭 周海燕 马文彬 吴菲 杨馨 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2022年第9期152-157,I0032-I0034,共9页
目的观察艾灸对类风湿性关节炎(RA)的抗炎消肿作用,研究艾灸对实验性RA家兔滑膜NLRP3 mRNA、组织蛋白酶B(Cathepsin-B)mRNA的表达和活性氧(ROS)含量的影响,探索艾灸对RA中NLRP3炎性小体激活状态的影响。方法日本大耳白兔24只,按体质量... 目的观察艾灸对类风湿性关节炎(RA)的抗炎消肿作用,研究艾灸对实验性RA家兔滑膜NLRP3 mRNA、组织蛋白酶B(Cathepsin-B)mRNA的表达和活性氧(ROS)含量的影响,探索艾灸对RA中NLRP3炎性小体激活状态的影响。方法日本大耳白兔24只,按体质量、性别分层,随机分为空白对照组(简称空白组)、RA模型组(简称模型组)、艾灸治疗组(简称艾灸组),每组8只。将弗氏完全佐剂(FCA)按0.5 mL/kg体质量剂量注入模型组、艾灸组动物双膝关节腔内。同法将等量的无菌生理盐水注入空白组动物作为对照。艾灸治疗艾灸组动物双侧“肾俞”“足三里”,每穴各5壮,每日1次。6 d为1个疗程,共治疗3个疗程,疗程之间休息1 d。治疗后观测各家兔左、右膝关节周长,治疗后第21天进行膝关节滑膜组织取材,采用RT-PCR法检测各组家兔膝关节滑膜组织中NLRP3 mRNA、Cathepsin-B mRNA的表达;采用ROS检测试剂盒检测各组家兔膝关节滑膜组织中ROS的含量。结果造模后白兔双膝关节周长较空白组明显增高(P<0.01);艾灸治疗后白兔双膝关节周长较模型组显著下降(P<0.05)。与空白组比较,模型组的NLRP3 mRNA、Cathepsin-B mRNA的表达和ROS荧光强度均显著升高(P<0.01);而与模型组比较,艾灸组的NLRP3 mRNA、Cathepsin-B mRNA的表达和ROS荧光强度均降低明显(P<0.05)。结论艾灸对实验性RA家兔膝关节滑膜炎症过程具有明显的抑制作用;艾灸“肾俞”“足三里”穴通过下调Cathepsin-B的表达和抑制ROS的生成从而抑制NLRP3的激活可能是艾灸治疗RA改善其病理过程的机制之一。 展开更多
关键词 NLRP3 艾灸 类风湿性关节炎 cathepsin-b ROS
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组织蛋白酶B/NLRP3通路对LPS诱导巨噬细胞M1/M2极化的影响 被引量：1
12
作者 王宜博 代玉婷 +4 位作者 蔡江晓 李忠林 秦伟伟 孙立新 韩伟 《中国免疫学杂志》 北大核心 2025年第1期63-68,共6页
目的:评价组织蛋白酶B(CTSB)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)通路对LPS诱导巨噬细胞极化的影响。方法:体外培养生长状态良好的RAW264.7小鼠单核巨噬细胞系,根据随机数字表法分为3组(n=6):对照组(C组)、LPS组(L组)、LPS+CA074-me... 目的:评价组织蛋白酶B(CTSB)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)通路对LPS诱导巨噬细胞极化的影响。方法:体外培养生长状态良好的RAW264.7小鼠单核巨噬细胞系,根据随机数字表法分为3组(n=6):对照组(C组)、LPS组(L组)、LPS+CA074-me(CTSB抑制剂)组(B组)。C组常规培养24 h,L组加入LPS浓度为1μg/ml的培养基培养24 h,B组在LPS诱导前予以CTSB抑制剂CA074-me 30μmol/L预处理1 h后在含LPS 1μg/ml的培养基中共培养24 h。24 h后通过显微镜观察细胞形态变化,通过采用ELISA法测定上清液IL-1β、IL-18的浓度,Western blot检测细胞中组织蛋白酶B前体(pro-CTSB)、成熟组织蛋白酶B(mature-CTSB)、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1(caspase-1)的表达,采用qRT-PCR法检测细胞CD32、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶1(Arg-1)、CD206 mRNA表达水平,流式细胞术检测M1型巨噬细胞表面标志物CD86和M2型巨噬细胞表面标志物CD206阳性表达率。结果:与C组相比,L组和B组细胞形态均改变,细胞变大并出现伪足,细胞上清液中IL-1β、IL-18浓度均上升,pro-CTSB、mature-CTSB、NLRP3、ASC和caspase-1表达升高,CD32、iNOS mRNA表达上调,CD86阳性率、CD206阳性率均上升(P<0.01),B组Arg-1、CD206 mRNA表达上调(P<0.01);与L组相比,B组细胞伪足减少,形态更接近C组,细胞上清液中IL-1β、IL-18浓度下降,mature-CTSB、NLRP3、ASC和caspase-1表达降低,CD32、iNOS mRNA及CD86阳性率下降,pro-CTSB表达、Arg-1、CD206 mRNA表达及CD206阳性率升高(P<0.01)。结论:抑制CTSB/NLRP3通路能够减轻炎症反应,减少LPS诱导的RAW264.7细胞向M1型巨噬细胞极化,促进其向M2型巨噬细胞极化。 展开更多
关键词 组织蛋白酶b NLR家族 热蛋白结构域包含蛋白3 脂多糖类 巨噬细胞
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八子补肾胶囊对衰老小鼠骨质量的保护作用及其对SIRT6/NF-κB/cathepsin K通路的影响 被引量：13
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作者 李蕊 李琳 +6 位作者 田怿淼 朱如愿 陈贝贝 张浩 夏兵可 张东伟 王丽丽 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期313-318,328,共7页
目的探讨八子补肾胶囊(BZBS)对D-半乳糖(D-gal)和亚硝酸钠(NaNO2)诱导的衰老小鼠的骨保护作用及可能的作用机制。方法ICR雄性小鼠连续腹腔注射D-gal和NaNO2三个月造成衰老小鼠模型,并于造模第25天开始用BZBS干预,连续干预65 d。然后收... 目的探讨八子补肾胶囊(BZBS)对D-半乳糖(D-gal)和亚硝酸钠(NaNO2)诱导的衰老小鼠的骨保护作用及可能的作用机制。方法ICR雄性小鼠连续腹腔注射D-gal和NaNO2三个月造成衰老小鼠模型,并于造模第25天开始用BZBS干预,连续干预65 d。然后收集股骨,分别用HE染色评价骨微结构的变化,三点弯曲实验评估骨生物力学性能,Micro-CT扫描观察骨组织形态计量学参数,红外光谱法分析骨材料特性,免疫组织化学染色法测定骨组织中的SIRT6、NF-κB和cathepsin K蛋白表达水平。结果BZBS能明显抑制D-gal和NaNO2诱导的衰老小鼠的骨形态破坏,提高骨组织矿物质含量。此外,BZBS能上调衰老小鼠血清中的T-AOC、SOD、GSH、GSH/GSSG水平,降低MDA水平,提高骨组织中SIRT6的表达,抑制NF-κB乙酰化,降低cathepsin K的表达。结论BZBS能提高衰老小鼠的骨质量,这种作用可能与调节氧化还原平衡进而调控SIRT6/NF-κB/cathepsin K信号通路有关。 展开更多
关键词 八子补肾胶囊 衰老 老年性骨质疏松 SIRT6/NF-κb/cathepsin K信号通路
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叉角厉蝽组织蛋白酶B基因克隆及表达分析
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作者 陈岗 岳茂婷 +5 位作者 丁以纾 何文德 吴子云 陈晓 吴国星 高熹 《南方农业学报》 北大核心 2025年第7期2080-2088,F0002,共10页
【目的】克隆叉角厉蝽(Eocanthecona furcellata)组织蛋白酶B基因(EfCAB)并进行表达分析,探究EfCAB蛋白在叉角厉蝽生命活动中发挥的作用,为其生理功能研究打下基础。【方法】通过PCR扩增克隆EfCAB基因开放阅读框(ORF)序列;使用生物信息... 【目的】克隆叉角厉蝽(Eocanthecona furcellata)组织蛋白酶B基因(EfCAB)并进行表达分析,探究EfCAB蛋白在叉角厉蝽生命活动中发挥的作用,为其生理功能研究打下基础。【方法】通过PCR扩增克隆EfCAB基因开放阅读框(ORF)序列;使用生物信息学软件分析EfCAB蛋白理化性质、跨膜结构、信号肽和亚细胞定位情况。对不同物种的组织蛋白酶B氨基酸序列进行比对和相似性分析,利用MEGA 11.0构建系统发育树。采用实时荧光定量PCR检测EfCAB基因在叉角厉蝽不同组织(雌成虫的马氏管、唾液腺、卵巢、头、中肠、脂肪体)和不同发育阶段(卵、1~5龄若虫、雌雄成虫)中的表达特征。【结果】EfCAB基因ORF序列长度为1020 bp,共编码339个氨基酸残基;EfCAB蛋白相对分子量为37.23 kD,理论等电点为6.95。EfCAB蛋白无跨膜结构域,不属于跨膜蛋白;EfCAB蛋白第1~18位氨基酸为信号肽,属于分泌蛋白。EfCAB蛋白主要定位在细胞质和线粒体等。叉角厉蝽与茶翅蝽(Halyomorpha halys)组织蛋白酶B氨基酸序列的相似性最高,达87.0%;系统发育分析结果表明,叉角厉蝽与茶翅蝽亲缘关系最近。实时荧光定量PCR检测结果表明,EfCAB基因在马氏管中的相对表达量显著高于其他组织(P<0.05,下同),在中肠中的相对表达量较高,在头中几乎不表达;EfCAB基因在卵中的相对表达量最高且与其他发育阶段差异显著,3龄若虫和雌成虫中的相对表达量较高,在5龄若虫中的相对表达量最低。【结论】EfCAB基因的表达具有组织特异性和阶段特异性,推测EfCAB蛋白在叉角厉蝽的捕食过程中具有消化猎物组织的功能,还起到促进叉角厉蝽胚胎发育的作用。 展开更多
关键词 叉角厉蝽 组织蛋白酶b 基因克隆 表达特征
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建鲤真核重组组织蛋白酶B与冷藏鱼片活性氧水平、细胞凋亡的关系及对品质形成的影响
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作者 钱邓帆 梁张婕 +8 位作者 程筝 李龙飞 汤婕 蒋宇维 郭淇羽 王梓颖 吕明哲 李冉 李树红 《食品与发酵工业》 北大核心 2025年第6期152-158,共7页
组织蛋白酶B(cathepsins B,CTS B)是鱼类死后肌肉中最活跃的溶酶体半胱氨酸蛋白酶之一。同时鱼死后活性氧(reactive oxygen species,ROS)积累可诱导鱼肌肉细胞的凋亡。为探究鱼肉片冷藏期间CTS B与ROS水平、肌肉细胞凋亡之间的潜在关系... 组织蛋白酶B(cathepsins B,CTS B)是鱼类死后肌肉中最活跃的溶酶体半胱氨酸蛋白酶之一。同时鱼死后活性氧(reactive oxygen species,ROS)积累可诱导鱼肌肉细胞的凋亡。为探究鱼肉片冷藏期间CTS B与ROS水平、肌肉细胞凋亡之间的潜在关系以及可能对鱼肉片品质形成的影响,该文将真核表达的建鲤CTS B注射于建鲤鱼肉片,4℃冷藏5 d,结果表明冷藏前3 d内,随CTS B活性上升,注射实验组和对照组ROS相对含量、蛋白羰基值、肌肉细胞凋亡率均提高,实验组显著高于对照组,而剪切力与持水力均呈下降趋势,实验组显著低于对照组。冷藏的最后2 d内,2组的细胞凋亡率差异不显著,鱼片品质劣变可能主要与CTS B活性持续显著升高有关。上述结果提示宰后冷藏鱼肉发生肌细胞凋亡,且冷藏初期CTS B活性与ROS氧化可能互相促进、协同发挥作用,加速了鱼肉蛋白氧化和细胞的凋亡。这可能是CTS B除直接的酶解作用外,导致鱼肉片冷藏期间软化、品质劣变的另一潜在原因。 展开更多
关键词 重组组织蛋白酶b 冷藏建鲤鱼肉片 活性氧 细胞凋亡 鱼肉品质
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烟夜蛾组织蛋白酶B酶原基因的克隆、序列分析和原核表达 被引量：10
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作者 赵艳艳 刘建兵 +2 位作者 罗梅浩 郭线茹 原国辉 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1121-1128,共8页
利用反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术从烟夜蛾Helicoverpa assulta(Guene)雌虫卵巢中扩增得到了组织蛋白酶B酶原基因(cathepsin B,CB)cDNA片段,将其克隆至pMD19-T载体。测序结果表明,该片段长度为1017bp,含有组织蛋白酶B酶原基因完... 利用反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术从烟夜蛾Helicoverpa assulta(Guene)雌虫卵巢中扩增得到了组织蛋白酶B酶原基因(cathepsin B,CB)cDNA片段,将其克隆至pMD19-T载体。测序结果表明,该片段长度为1017bp,含有组织蛋白酶B酶原基因完整开放阅读框架(ORF)(Gen Bank登录号:EF154237)。序列分析结果显示:烟夜蛾组织蛋白酶B(HassCB)编码338个氨基酸残基,预测N-末端含有长度为21个氨基酸残基的信号肽序列;去除信号肽序列后,预测成熟蛋白分子量为35.5kDa,等电点为5.96。氨基酸序列比对结果表明,HassCB与其他昆虫的组织蛋白酶B酶原氨基酸序列有较高的一致性。将去除信号肽序列的HassCB(HassCBa)重组到表达载体pGEX-4T-1中,并转入原核细胞中表达,SDS-PAGE和Western印迹分析表明:该基因能在大肠杆菌BL21中表达,电泳检测到一条大约61kDa的目的条带,与预测的融合蛋白分子量相符。用该基因制备多克隆抗体并测得该抗体对重组表达的HassCBa的效价为1∶51200。通过免疫印迹检测证实,此抗体既能识别重组表达的HassCBa,又能识别烟夜蛾卵巢匀浆液中的HassCB。 展开更多
关键词 烟夜蛾 组织蛋白酶b 基因克隆 序列分析 原核表达 免疫印迹
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红景天苷下调组织蛋白酶B和NF-κBp65水平改善大鼠肺纤维化 被引量：12
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作者 刘行仁 白义凤 +2 位作者 梁良 冯静 邓菲 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期128-133,共6页
目的:探讨红景天苷改善大鼠肺纤维化的相关机制。方法:SD大鼠随机分为空白组、肺纤维化模型组、吡非尼酮组和红景天苷高剂量组、中剂量组、低剂量组。测定6组肺系数,血气分析,检测肺泡灌洗液中白蛋白(ALB)、碱性磷酸酶(ALP)、乳清脱氢酶... 目的:探讨红景天苷改善大鼠肺纤维化的相关机制。方法:SD大鼠随机分为空白组、肺纤维化模型组、吡非尼酮组和红景天苷高剂量组、中剂量组、低剂量组。测定6组肺系数,血气分析,检测肺泡灌洗液中白蛋白(ALB)、碱性磷酸酶(ALP)、乳清脱氢酶(LDH)含量,肺组织羟脯氨酸(HYP)含量,血清III型前胶原(PC-III)和IV型胶原(COL4)含量,溶酶体组织蛋白酶B(cathepsin,CB)和NF-κBp65表达的水平。结果:模型组肺系数明显高于空白组(P<0.05),而氧分压明显低于空白组(P<0.05);吡非尼酮组、红景天苷高、中、低剂量组肺系数相比模型组均下降(P<0.05),氧分压则升高(P<0.05)。模型组中ALB,ALP,LDH含量较空白组升高(P<0.05);随着红景天苷浓度的增加,ALB,ALP,LDH呈下降趋势(P<0.05)。模型组谷胱甘肽(GSH)含量较空白组升高(P<0.05);随着红景天苷浓度的增加,GSH含量呈下降趋势(P<0.05)。模型组肺组织中HYP及血清PC-III和COL4含量较空白组升高(P<0.05);随着红景天苷浓度的增加,HYP及血清PC-III和COL4含量呈下降趋势(P<0.05)。模型组CB和NF-κBp65表达较空白组升高(P<0.05);随着红景天苷浓度的增加,CB和NF-κBp65表达呈下降趋势(P<0.05)。结论:红景天苷能改善大鼠肺纤维化,其机制可能与降低大鼠肺组织的CB和NF-κBp65的表达有关。 展开更多
关键词 红景天苷 组织蛋白酶b 肺纤维化 NF-ΚbP65
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日本血吸虫组织蛋白酶BDNA疫苗抗生殖免疫的研究 被引量：37
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作者 易新元 曾宪忠 +3 位作者 曾宪芳 汪世平 舒新华 LarryMcreynolds 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2000年第1期45-47,共3页
目的　探讨日本血吸虫组织蛋白酶ＢＤＮＡ疫苗的保护。方法　分别用Ｓｊ３１ＢＩＮ免疫昆明鼠和ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠，攻击感染后６ｗ 计数成虫负荷及粪便和组织内虫卵数。结果　用构建的Ｓｊ３１ＢＩＮ免疫小鼠可影响成虫发育，肝组织减... 目的　探讨日本血吸虫组织蛋白酶ＢＤＮＡ疫苗的保护。方法　分别用Ｓｊ３１ＢＩＮ免疫昆明鼠和ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠，攻击感染后６ｗ 计数成虫负荷及粪便和组织内虫卵数。结果　用构建的Ｓｊ３１ＢＩＮ免疫小鼠可影响成虫发育，肝组织减卵率为５９－３％～６５－０％ ，肠组织减卵率为５７－６％ ～６２－１％ ，粪便减卵率为８６－５％ 。结论　Ｓｊ３１ＢＩＮ 可诱导小鼠产生抑制雌虫生殖的免疫力。 展开更多
关键词 日本血吸虫 组织蛋白酶b DNA疫苗 抗生殖系统
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组织蛋白酶B抑制剂CA-074Me对小鼠病毒性心肌炎的干预作用 被引量：8
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作者 于小华 张新刚 +3 位作者 王时俊 陈瑞珍 杨英珍 李双杰 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期52-54,59,共4页
目的观察组织蛋白酶B(cathepsinB)抑制剂CA-074Me对病毒性心肌炎小鼠的干预作用。方法55只雄性BALB/c小鼠随机分为正常对照组(N组,n=10)、心肌炎对照组(V组,n=15)、低剂量干预组(L组,n=15)及高剂量干预组(H组,n=15)。后三组经腹腔接种... 目的观察组织蛋白酶B(cathepsinB)抑制剂CA-074Me对病毒性心肌炎小鼠的干预作用。方法55只雄性BALB/c小鼠随机分为正常对照组(N组,n=10)、心肌炎对照组(V组,n=15)、低剂量干预组(L组,n=15)及高剂量干预组(H组,n=15)。后三组经腹腔接种柯萨奇病毒(CVB3m)诱发急性心肌炎,L组和H组于病毒接种后第2d分别腹腔注射CA-074Me0.4mg/kg和4mg/kg,均连续使用7d(2～8d),第15d处死全部存活小鼠并取其心脏,采用RT-PCR和免疫组化等方法半定量分析各组小鼠心肌组织中cathepsinB基因转录及蛋白表达水平。结果V组与N组比较,心肌中cathepsinBmRNA及蛋白表达水均明显增加(P<0.05);L组与V组比较,心肌中cathepsinBmRNA和蛋白表达量降低(P<0.05),小鼠生存率虽然有所升高,但差异无显著性(P>0.05);H组与V组相比,心肌组织中cathepsinBmRNA和蛋白表达量显著降低(P<0.01),心肌损害减轻,小鼠生存率明显升高,差异有高度统计学意义(P<0.05)。结论CA-074Me通过抑制cathepsinB的表达,减轻心肌损害,提高感染小鼠的存活率,对Balb/c小鼠CVB3心肌炎具有良好的治疗作用。 展开更多
关键词 CA-074Me 组织蛋白酶b 病毒 心肌炎
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腌干鲢鱼组织蛋白酶B、L活力变化的响应面法预测研究 被引量：8
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作者 高瑞昌 苏丽 +2 位作者 黄星奕 袁丽 马海乐 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第17期136-140,共5页
以鲢鱼为原料,进行腌制和热泵干燥加工,研究内源组织蛋白酶B、L活性在加工过程中的变化。选取加工过程对鲢鱼(Hypophthalmichthys molitrix)组织蛋白酶B、L活力影响较大的3个工艺参数(温度、pH值、盐质量分数)作为试验因素,并根据酶学... 以鲢鱼为原料,进行腌制和热泵干燥加工,研究内源组织蛋白酶B、L活性在加工过程中的变化。选取加工过程对鲢鱼(Hypophthalmichthys molitrix)组织蛋白酶B、L活力影响较大的3个工艺参数(温度、pH值、盐质量分数)作为试验因素,并根据酶学特性和干燥过程中各理化指标的测定结果确定其试验水平。采用响应面法考察此3因素对组织蛋白酶B、L活性的影响,并根据回归方程对腊干鲢鱼加工过程中的组织蛋白酶活力进行预测。结果表明:回归方程可用于组织蛋白酶B、L实际活力预测;两种酶的潜在活力在加工过程中均呈下降趋势,加工结束时组织蛋白酶B和L的潜在酶活力分别为初始的43.18%和26.08%;通过回归方程对组织蛋白酶B、L在腌制前、腌制后、干燥2d、干燥5d、干燥7d实际活力进行预测,组织蛋白酶B实际酶活力分别为潜在酶活力的36.7%、39.9%、46.5%、46.5%和53.5%,而组织蛋白酶L则为6.6%、5.6%、10.4%、10%和12.6%。 展开更多
关键词 腌干鲢鱼(Hypophthalmichthys molitrix) 热泵干燥 组织蛋白酶b L 响应面 预测模型
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