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构建反转录病毒小向导RNA表达载体用于小鼠T细胞基因功能研究
被引量：
1
1
作者
赵艳娜
邱荣
+1 位作者
沈南
唐元家
《上海交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第12期1585-1590,共6页
目的·构建反转录病毒小向导RNA(small guide RNA,sgRNA)表达载体,用于小鼠T细胞分化调控及其基因功能的研究。方法·表达短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)的反转录病毒载体(MSCV-LTR-miR30-PIG,LMP)经过Xho1和Sal1双酶切后...
目的·构建反转录病毒小向导RNA(small guide RNA,sgRNA)表达载体,用于小鼠T细胞分化调控及其基因功能的研究。方法·表达短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)的反转录病毒载体(MSCV-LTR-miR30-PIG,LMP)经过Xho1和Sal1双酶切后,回收得到反转录病毒载体骨架。以慢病毒sgRNA表达载体为模版,通过PCR扩增获得U6-sgRNA-PGK-Puro-BFP片段。利用同源重组将U6-sgRNA-PGK-Puro-BFP片段组装进反转录病毒载体骨架。为了验证系统的有效性,设计靶向Il17a、Rorc和Irf4的sgRNA序列并进行克隆。分离Cas9转基因小鼠CD4 T细胞分别进行sgRNA反转录病毒感染,诱导其向Th17细胞分化。细胞因子染色,流式检测Il17a阳性细胞比例。2组独立样本数据比较采用非配对t检验。结果·①成功构建反转录病毒sgRNA载体。②利用反转录病毒载体向小鼠CD4 T细胞递送sgRNA并实现Il17a基因敲除。③Rorc-sgRNA和Irf4-sgRNA阳性群体中,Il17a阳性群体比率显著降低(P<0.05)。结论·利用sgRNA反转录病毒载体成功向目的细胞递送sgRNA并实现基因敲除。Rorc和Irf4基因敲除结果提示该系统可用于小鼠T细胞基因功能研究。
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关键词
CRISPR/
cas
9
cas9转基因小鼠
反转录病毒载体
TH17细胞分化
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职称材料
题名
构建反转录病毒小向导RNA表达载体用于小鼠T细胞基因功能研究
被引量：
1
1
作者
赵艳娜
邱荣
沈南
唐元家
机构
上海交通大学医学院附属仁济医院风湿病科
中国科学院大学上海营养与健康研究所
出处
《上海交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第12期1585-1590,共6页
基金
国家自然科学基金(81871287,31630021)
上海交通大学医学院高水平地方高校创新团队(SSMU-ZDCX20180100)。
文摘
目的·构建反转录病毒小向导RNA(small guide RNA,sgRNA)表达载体,用于小鼠T细胞分化调控及其基因功能的研究。方法·表达短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)的反转录病毒载体(MSCV-LTR-miR30-PIG,LMP)经过Xho1和Sal1双酶切后,回收得到反转录病毒载体骨架。以慢病毒sgRNA表达载体为模版,通过PCR扩增获得U6-sgRNA-PGK-Puro-BFP片段。利用同源重组将U6-sgRNA-PGK-Puro-BFP片段组装进反转录病毒载体骨架。为了验证系统的有效性,设计靶向Il17a、Rorc和Irf4的sgRNA序列并进行克隆。分离Cas9转基因小鼠CD4 T细胞分别进行sgRNA反转录病毒感染,诱导其向Th17细胞分化。细胞因子染色,流式检测Il17a阳性细胞比例。2组独立样本数据比较采用非配对t检验。结果·①成功构建反转录病毒sgRNA载体。②利用反转录病毒载体向小鼠CD4 T细胞递送sgRNA并实现Il17a基因敲除。③Rorc-sgRNA和Irf4-sgRNA阳性群体中,Il17a阳性群体比率显著降低(P<0.05)。结论·利用sgRNA反转录病毒载体成功向目的细胞递送sgRNA并实现基因敲除。Rorc和Irf4基因敲除结果提示该系统可用于小鼠T细胞基因功能研究。
关键词
CRISPR/
cas
9
cas9转基因小鼠
反转录病毒载体
TH17细胞分化
Keywords
CRISPR/
cas
9
cas
9
transgenic mouse
retroviral vector
Th17 cell differentiation
分类号
R593.24 [医药卫生—内科学]
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作者
出处
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被引量
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1
构建反转录病毒小向导RNA表达载体用于小鼠T细胞基因功能研究
赵艳娜
邱荣
沈南
唐元家
《上海交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2020
1
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