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快速构建CRISPR/Cas9基因组靶向编辑系统被引量：7: 1; 作者王令张涛 +1 位作者路宏朝尹亚军《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1117-1124,共8页; CRISPR/Cas9核酸酶作为一种新的基因组靶向编辑技术,已成功应用于多种动植物基因组修饰研究.CRISPR/Cas9作用后的阳性细胞筛选和富集是该技术的关键之一.本研究以鸡EAVHP(endogenous avian retrovirus-HP)基因和MSTN(myostatin)基因为例... 展开更多; 关键词 CRISPR/cas9核酸酶基因组靶向编辑报告载体活性验证; 在线阅读下载PDF 职称材料

运用CRISPR/Cas9技术构建敲除体轴抑制蛋白1(AXIN1)基因的ACT-1人未分化甲状腺癌细胞系被引量：2: 2; 作者文丹黄蓉 +2 位作者谢建平温琥玲林师宇《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期419-424,共6页; 目的构建体轴抑制蛋白1(AXIN1)基因敲除的ACT-1人未分化甲状腺癌单克隆细胞系。方法用分子克隆技术及成簇的规律间隔的短回文重复序列/Cas9核酸酶(CRISPR/Cas9)基因编辑技术构建AXIN1基因敲除的单克隆细胞系;采用实时荧光定量PCR检测AC... 展开更多; 关键词成簇的规律间隔的短回文重复序列/cas9核酸酶(CRISPR/cas9) 未分化甲状腺癌体轴抑制蛋白1(AXIN1); 在线阅读下载PDF 职称材料

CRISPR/Cas9技术敲除RAW264.7细胞的GPR43基因抑制其对肺炎克雷伯菌的吞噬功能被引量：1: 3; 作者徐方明苏丛 +5 位作者伍婷陈昊然张鹏飞刘艳艳兰燕虎李家斌《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期481-486,共6页; 目的利用成簇的规律间隔的短回文重复序列/Cas9核酸酶(CRISPR/Cas9)技术构建稳定敲除G蛋白偶联受体43(GPR43)基因的RAW264.7细胞系,探究GPR43基因在肺炎克雷伯菌感染过程中的作用机制。方法设计3对针对GPR43基因的小导向RNA(sgRNA),将sg... 展开更多; 关键词 RAW264.7细胞成簇的规律间隔的短回文重复序列/cas9核酸酶(CRISPR/cas9) G蛋白偶联受体43(GPR43) 肺炎克雷伯; 在线阅读下载PDF 职称材料

CRISPR/Cas9基因编辑在三维基因组研究中的应用被引量：8: 4; 作者刘沛峰吴强《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期18-31,共14页; CRISPR/Cas9系统在基因编辑方面具有巨大优势,能够低成本、可编程、方便快捷地用于动物、植物以及微生物的基因组靶向编辑和功能改造。三维基因组学是近年来兴起的一门研究染色质高级结构动态调控及基因组生物学功能的交叉学科。在三维... 展开更多; 关键词 CRISPR/cas9系统三维基因组 DNA片段编辑染色质重排 cas9核酸酶内切机制; 在线阅读下载PDF 职称材料

CRISPR/Cas系统作用机制及其在寄生虫学研究中的应用被引量：5: 5; 作者宋海洋吴杰 +1 位作者邹丰才刘洋《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第1期208-213,共6页; CRISPR/Cas系统是一种存在于细菌和古细菌的免疫系统,该系统包括能靶向入侵宿主的病毒或外源DNA核酸片段的RNA和切割该片段的Cas9核酸酶。与其他基因编辑技术相比,该系统更易操作,效率更高,成本更低,被广泛应用于各种基因工程领域。作... 展开更多; 关键词 CRISPR/cas系统 cas9核酸酶基因编辑; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名快速构建CRISPR/Cas9基因组靶向编辑系统被引量：7: 1; 作者王令张涛路宏朝尹亚军; 机构陕西理工学院生物科学与工程学院; 出处《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1117-1124,共8页; 基金国家自然科学基金项目(No.31402071) 陕西省教育厅专项科研计划项目(No.15JK1145)资助~~; 文摘 CRISPR/Cas9核酸酶作为一种新的基因组靶向编辑技术,已成功应用于多种动植物基因组修饰研究.CRISPR/Cas9作用后的阳性细胞筛选和富集是该技术的关键之一.本研究以鸡EAVHP(endogenous avian retrovirus-HP)基因和MSTN(myostatin)基因为例,从靶位点的选择、表达载体构建、双基因报告载体构建和核酸酶活性验证4个方面,系统研究了CRISPR/Cas9核酸酶技术平台.结果表明,利用寡聚核苷酸直接退火方法,构建表达载体和报告载体的阳性率分别高达100%和89.5%.报告载体的PuroR(puromycin resistant gene)和e GFP(enhanced green fluorescent protein)基因的成功表达表明,构建的CRISPR/Cas9系统能有效切割靶序列,并用于后续阳性克隆的筛选和富集.本方法摒弃了传统分子克隆的PCR扩增和酶切处理目标基因的方法,而是利用寡聚核苷酸直接退火获得含有黏性末端的目标DNA,简化了载体构建过程,低成本且快速获得CRISPR/Cas9基因组靶向编辑系统.; 关键词 CRISPR/cas9核酸酶基因组靶向编辑报告载体活性验证; Keywords CRISPR/cas9 nuclease target genomic editing reporter vector activity validation; 分类号 Q783.1 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名运用CRISPR/Cas9技术构建敲除体轴抑制蛋白1(AXIN1)基因的ACT-1人未分化甲状腺癌细胞系被引量：2: 2; 作者文丹黄蓉谢建平温琥玲林师宇; 机构川北医学院附属医院核医学科川北医学院药学院; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期419-424,共6页; 基金市校科技战略合作专项(NSMC 20170435) 川北医学院附属医院院级科研课题(2020JC004)。; 文摘目的构建体轴抑制蛋白1(AXIN1)基因敲除的ACT-1人未分化甲状腺癌单克隆细胞系。方法用分子克隆技术及成簇的规律间隔的短回文重复序列/Cas9核酸酶(CRISPR/Cas9)基因编辑技术构建AXIN1基因敲除的单克隆细胞系;采用实时荧光定量PCR检测ACT-1细胞的AXIN1 mRNA水平,Western blot法检测AXIN1蛋白水平。结果通过T7检测成功获得有效的两个单链导向RNA(sgRNA)Cr3及Cr5;通过酶切鉴定及测序成功构建携带绿色荧光蛋白(GFP)的靶向AXIN1的sgRNA病毒载体;成功获得包括阴性对照在内的4个单克隆ACT-1未分化甲状腺癌细胞系;敲除组细胞AXIN1 mRNA及蛋白水平均明显降低。结论采用CRISPR-Cas9技术成功建立了敲除AXIN1基因的ACT-1未分化甲状腺癌细胞系。; 关键词成簇的规律间隔的短回文重复序列/cas9核酸酶(CRISPR/cas9) 未分化甲状腺癌体轴抑制蛋白1(AXIN1); Keywords CRISPR/cas9 undifferentiated thyroid cancer axis inhibition protein 1(AXIN1); 分类号 R392.11 [医药卫生—免疫学] R736.1 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名CRISPR/Cas9技术敲除RAW264.7细胞的GPR43基因抑制其对肺炎克雷伯菌的吞噬功能被引量：1: 3; 作者徐方明苏丛伍婷陈昊然张鹏飞刘艳艳兰燕虎李家斌; 机构安徽医科大学第一附属医院感染病科安徽医科大学附属巢湖医院感染病科安徽省细菌耐药性监控中心安徽医科大学细菌耐药研究所; 出处《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期481-486,共6页; 基金国家自然科学基金(81673242,81973983)。; 文摘目的利用成簇的规律间隔的短回文重复序列/Cas9核酸酶(CRISPR/Cas9)技术构建稳定敲除G蛋白偶联受体43(GPR43)基因的RAW264.7细胞系,探究GPR43基因在肺炎克雷伯菌感染过程中的作用机制。方法设计3对针对GPR43基因的小导向RNA(sgRNA),将sgRNA插入pLenticrisprV2质粒中,利用慢病毒包装系统包装含有sgRNA的重组质粒pLenticrisprV2;将病毒感染RAW264.7细胞,嘌呤霉素筛选单克隆细胞;将扩增的单克隆细胞提取基因组DNA,测序GPR43基因相关序列并与野生型GPR43基因进行比对,确认敲除成功的细胞株(GPR43^-/-RAW264.7细胞),Western blot法检测GPR43蛋白水平。肺炎克雷伯菌感染GPR43^-/-RAW264.7细胞,实时定量PCR法检测细菌感染后细胞内白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达水平的变化,并观察敲除GPR43后,RAW264.7细胞吞噬能力的变化。结果挑选的单克隆细胞经Western blot验证GPR43蛋白不表达,并且DNA测序结果显示在sgRNA插入位置缺失34个碱基,证明成功敲除GPR43基因。GPR43^-/-RAW264.7细胞感染肺炎克雷伯菌后,细胞中的IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平均低于对照组,且GPR43^-/-RAW264.7细胞对肺炎克雷伯菌的吞噬能力降低。结论CRISPR/Cas9技术敲除GPR43基因,抑制其对肺炎克雷伯菌的吞噬功能及炎性细胞因子的产生。; 关键词 RAW264.7细胞成簇的规律间隔的短回文重复序列/cas9核酸酶(CRISPR/cas9) G蛋白偶联受体43(GPR43) 肺炎克雷伯; Keywords RAW264.7 cells CRISPR/cas9 GPR43 Klebsiella pneumoniae; 分类号 R392.12 [医药卫生—免疫学] R392-33 [医药卫生—免疫学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名CRISPR/Cas9基因编辑在三维基因组研究中的应用被引量：8: 4; 作者刘沛峰吴强; 机构上海交通大学系统生物医学研究院比较生物医学研究中心系统生物医学教育部重点实验室; 出处《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期18-31,共14页; 基金国家自然科学基金项目(编号：31630039,91640118) 国家重点研发计划课题项目(编号：2017YFA0504203,2018YFC1004504) 上海市科学技术委员会项目(编号：19JC1412500)资助~~; 文摘 CRISPR/Cas9系统在基因编辑方面具有巨大优势,能够低成本、可编程、方便快捷地用于动物、植物以及微生物的基因组靶向编辑和功能改造。三维基因组学是近年来兴起的一门研究染色质高级结构动态调控及基因组生物学功能的交叉学科。在三维基因组研究中,通常采用对DNA片段进行基因编辑以模拟基因组结构性变异,标记特定DNA片段,进而研究调控元件对于基因调控、细胞分化、组织发生、器官形成、个体发育的影响,最终阐明三维基因组的组装调控机制和生物学功能。因此,CRISPR及其衍生技术为研究三维基因组提供了极好的遗传学工具。本文主要综述了CRISPR片段编辑及其衍生技术在三维基因组调控与功能研究中的应用,以期为后续研究工作提供理论参考以及新的研究思路。; 关键词 CRISPR/cas9系统三维基因组 DNA片段编辑染色质重排 cas9核酸酶内切机制; Keywords CRISPR/cas9 system 3D genome DNA fragment editing chromosome rearrangement cas9 endonuclease cleavage mechanism; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名CRISPR/Cas系统作用机制及其在寄生虫学研究中的应用被引量：5: 5; 作者宋海洋吴杰邹丰才刘洋; 机构云南农业大学动物科学技术学院云南省高校兽医公共卫生重点实验室昆明医科大学第二附属医院妇科; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第1期208-213,共6页; 基金国家自然科学基金项目(31360607) 云南省应用基础研究计划重点项目(2013FA037); 文摘 CRISPR/Cas系统是一种存在于细菌和古细菌的免疫系统,该系统包括能靶向入侵宿主的病毒或外源DNA核酸片段的RNA和切割该片段的Cas9核酸酶。与其他基因编辑技术相比,该系统更易操作,效率更高,成本更低,被广泛应用于各种基因工程领域。作者综述了CRISPR/Cas系统的作用机制及其在寄生虫方面的应用。; 关键词 CRISPR/cas系统 cas9核酸酶基因编辑; Keywords CRISPR/cas system cas9 nuclease gene editing; 分类号 Q789 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	快速构建CRISPR/Cas9基因组靶向编辑系统	王令张涛路宏朝尹亚军	《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心	2015	7	在线阅读下载PDF 职称材料
2	运用CRISPR/Cas9技术构建敲除体轴抑制蛋白1(AXIN1)基因的ACT-1人未分化甲状腺癌细胞系	文丹黄蓉谢建平温琥玲林师宇	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2020	2	在线阅读下载PDF 职称材料
3	CRISPR/Cas9技术敲除RAW264.7细胞的GPR43基因抑制其对肺炎克雷伯菌的吞噬功能	徐方明苏丛伍婷陈昊然张鹏飞刘艳艳兰燕虎李家斌	《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2020	1	在线阅读下载PDF 职称材料
4	CRISPR/Cas9基因编辑在三维基因组研究中的应用	刘沛峰吴强	《遗传》 CAS CSCD 北大核心	2020	8	在线阅读下载PDF 职称材料
5	CRISPR/Cas系统作用机制及其在寄生虫学研究中的应用	宋海洋吴杰邹丰才刘洋	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2017	5	在线阅读下载PDF 职称材料