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新疆无苞芥类钙调素蛋白基因OpCML13的克隆与分析 被引量:9
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作者 赵云霞 魏艳玲 黄先忠 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期431-437,共7页
通过对无苞芥幼苗cDNA文库的随机克隆测序分析,获得1条与拟南芥编码类钙调素13(calmodulin-likel3,CMLl3)高度相似的EST(GenBank登录号为JZl52285)。利用RT-PCR技术从无苞芥cDNA中克隆了该基因,命名为OpCMLl3,该基因开放阅读框... 通过对无苞芥幼苗cDNA文库的随机克隆测序分析,获得1条与拟南芥编码类钙调素13(calmodulin-likel3,CMLl3)高度相似的EST(GenBank登录号为JZl52285)。利用RT-PCR技术从无苞芥cDNA中克隆了该基因,命名为OpCMLl3,该基因开放阅读框(ORF)为447bp,编码148个氨基酸。生物信息学分析表明,OpCMLl3蛋白的二级结构含有4个ca^2+结合基序(EF-hands)结构,是一个亲水蛋白,无信号肽,无跨膜区域,为非跨膜蛋白;同源建模发现该蛋白包含8个α-螺旋结构和10个β-转角。系统进化树分析表明,OpCMLl3编码产物与拟南芥AtCMLl3和AtCMI。14进化关系较近,属于同一进化分支。半定量RTPCR结果显示,OpCMLl3基因在无苞芥的不同组织中都有表达,在根中表达量最高;高盐胁迫处理6~24h,OpCMLl3基因的表达明显增强,随后逐渐恢复正常表达水平;低温、干旱和ABA处理6h后基因表达明显上调,并且一直保持较高的表达水平。研究表明,OpCMLl3基因在无苞芥逆境胁迫中可能起着重要作用。 展开更多
关键词 无苞芥 类钙调素蛋白13 基因表达 抗逆
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花生MAPK13基因的克隆及表达分析研究 被引量:6
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作者 梁丹 张朝昕 +8 位作者 王冕 吴正锋 陈娜 潘丽娟 王通 陈明娜 杨珍 禹山林 迟晓元 《花生学报》 北大核心 2019年第2期10-18,共9页
为了挖掘花生抗果腐病相关基因,本研究以花生品种花育20号为试验材料,从花生果腐病转录组文库中筛选出促丝裂原活化蛋白激酶13(MAPK13)基因编码区序列设计引物,通过RACE-PCR克隆得到AhMAPK 13基因°结果表明AhMAPK 13基因序列全长18... 为了挖掘花生抗果腐病相关基因,本研究以花生品种花育20号为试验材料,从花生果腐病转录组文库中筛选出促丝裂原活化蛋白激酶13(MAPK13)基因编码区序列设计引物,通过RACE-PCR克隆得到AhMAPK 13基因°结果表明AhMAPK 13基因序列全长1818 bp,含有/非编码区593 bp,5非编码区122 bp,开放阅读框全长1104 bp,编码1条含有368个氨基酸的蛋白序列。预测其分子量为42. 5kDa,含有MAPK家族典型的11个结构域,属于MAPK基因家族B组成员。亚细胞定位显示AhMAPK13定位于细胞质和细胞核中° RT-qPCR分析发现AhMAPK 13基因在茎中表达量高于其他组织,说明该基因具有组织表达特异性;AhMAPK 13基因受干旱、低温、NaCl(ABA诱导时表达量上升,说明该基因可能广泛参与植物非生物胁迫响应过程;AhMAPK 13基因受JA、GA、ET、SA诱导时表达量上调,说明该基因可能参与到这些激素介导的抗逆信号转导途径。本研究结果为花生抗果腐病育种研究提供了新的基因资源。 展开更多
关键词 花生 促丝裂原蛋白活化激酶基因13 基因克隆 表达分析 亚细胞定位
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hIL-13融合表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达 被引量:1
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作者 王文 田志刚 +3 位作者 刘钟滨 王郡甫 刘杰 张建华 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第5期322-325,共4页
通过RTPCR技术直接从激活的健康人外周血单个核细胞(HPBMC)中扩增出约03kb的hIL13基因片段,经DNA重组技术,插入到融合蛋白表达载体pGEX4T2中,转化入感受态的大肠杆菌TG1中,成功地构建... 通过RTPCR技术直接从激活的健康人外周血单个核细胞(HPBMC)中扩增出约03kb的hIL13基因片段,经DNA重组技术,插入到融合蛋白表达载体pGEX4T2中,转化入感受态的大肠杆菌TG1中,成功地构建了hIL13的基因工程表达菌株hIL13pGEX4T2/TG1。经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后表达的GSTIL13融合蛋白经SDSPAGE证明分子量约36kD,表达量约占菌体蛋白总量的10%~30%。复性后IL13融合蛋白的生物学活性可达80~120U/ml。复性后的融合蛋白经凝血酶作用后,可被切割成26kD的GST与10kD的hIL13。 展开更多
关键词 hIL-13 RT-PCR 融合蛋白 大肠杆菌 基因表达
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丝裂原活化蛋白激酶对佛波酯诱导滋养细胞MMP-9基因表达的影响 被引量:5
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作者 张曦倩 黄莉萍 +3 位作者 赵晓山 李红 陈士岭 邢福祺 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2004年第3期282-285,共4页
目的探讨佛波酯(PMA)诱导细胞滋养层细胞(CTB)MMP-9基因表达的调控机制。方法用细胞ELISA法测定CTB细胞的蛋白激酶活性变化;用反转录聚合酶链反应检测CTB中MMP-9的基因表达。结果100 nmol/L PMA能迅速激活CTB中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK... 目的探讨佛波酯(PMA)诱导细胞滋养层细胞(CTB)MMP-9基因表达的调控机制。方法用细胞ELISA法测定CTB细胞的蛋白激酶活性变化;用反转录聚合酶链反应检测CTB中MMP-9的基因表达。结果100 nmol/L PMA能迅速激活CTB中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族中细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、c-jun氨基末端激酶(JNK)以及p38 MAPK激酶的活性。100 nmol/L PMA刺激CTB引起MMP-9 mRNA表达显著增加,能被ERK或p38 MAPK的特异性抑制剂所抑制。结论ERK和p38 MAPK可能是PMA诱导CTB中MMP-9基因表达增加的重要调节物质。 展开更多
关键词 丝裂原活化蛋白激酶 佛波酯 诱导 滋养细胞 MMP-9 基因表达
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