皮质酮对原代培养的海马神经元及其[Ca^(2+)]_i和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ表达的影响 被引量：1

1

作者 孙臣友 戚双双 +2 位作者 陈朝玉 刘能保 张敏海 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期270-274,共5页

目的:探讨皮质酮(CORT)对培养的海马神经元及其[Ca2+]i和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)表达的影响和可能的机制。方法:海马神经元被分为不同终浓度的CORT处理组、CORT+MK-8 0 1或高浓度葡萄糖组。采用MTT法、流式细胞术、荧光标... 目的:探讨皮质酮(CORT)对培养的海马神经元及其[Ca2+]i和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)表达的影响和可能的机制。方法:海马神经元被分为不同终浓度的CORT处理组、CORT+MK-8 0 1或高浓度葡萄糖组。采用MTT法、流式细胞术、荧光标记和免疫细胞化学法,观察海马神经元活力、死亡方式[、Ca2+]i和CaMKⅡ表达的变化规律。结果:1 0-6和1 0-5mol/L CORT组,其海马神经元的活力明显降低,分别以凋亡和坏死为主,并使海马神经元[Ca2+]i显著升高;CaMKⅡ的表达明显减少。MK-8 0 1和高浓度葡萄糖均能拮抗1 0-6mol/L CORT对海马神经元的损伤作用。结论:在CORT的作用下,海马神经元发生凋亡和坏死;[Ca2+]i升高可能既是海马神经元损伤的结果,又是引起其发生凋亡和CaMKⅡ表达下降的原因。 展开更多

关键词 皮质酮 海马 神经元 [ca^2+]I 钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ

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钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ delta磷酸化的RyR2在心衰中扮演重要角色

2

作者 肖雯 《山东医药》 CAS 北大核心 2010年第20期103-103,共1页

关键词 钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ DELTA 磷酸化 心衰 RyR2 心肌肌浆网 收缩能力 钙释放通道

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心力衰竭家兔钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ异常的研究 被引量：1

3

作者 张晓录 姜波 +3 位作者 寇新明 黄葆华 于威娟 曲辅政 《中国心血管病研究》 CAS 2010年第2期141-144,共4页

目的探讨家兔慢性心力衰竭（心衰）时心肌钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）蛋白表达及活性改变的意义。方法14只家兔随机分为2组，假手术组和心衰组各7只，通过超容量负荷联合压力负荷建立家兔心衰模型，于术后7周观察左心室结构、... 目的探讨家兔慢性心力衰竭（心衰）时心肌钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）蛋白表达及活性改变的意义。方法14只家兔随机分为2组，假手术组和心衰组各7只，通过超容量负荷联合压力负荷建立家兔心衰模型，于术后7周观察左心室结构、血流动力学的变化及CaMKⅡ的表达和活性的改变。结果与假手术组比，心衰组左心室重量指数[（1．3±0．1）g／kg比3．6±0．1）g／kg]、左室舒张末径[（13．3±1．8）him比（21．4±2．5）mm]、左室后壁厚度[（2．0±0．2）mm比（2．9±0．8）min]、左心室舒张末压[（01．5±O．5）mm Hg比（23．0±2．4）mmHg]明显升高（P〈0．05），左心室缩短率[（37．8±3．6）％比（17．4±3．1）％]及左室射血分数[（71．9±4．6）％比（38．5±6．1）％]明显降低（P〈O．05）；CaMKII蛋白表达（1．45±0．13）及活性[（3．54±0．17）pmol·min-1·μg-1]显著高于假手术组[（O．89±0．05），（2．18±0．13）pmol·min-1·μg-1]（P〈0．05）。结论心肌CaMKⅡ蛋白表达及活性增加可能是导致心力衰竭的发生因素之一。 展开更多

关键词 心力衰竭 充血性 钙(2+)-钙调蛋白依赖性蛋白激酶

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CaMK Ⅱ活性对H_2O_2所致SK-N-SH细胞氧化应激损伤的影响

4

作者 于剑锋 耿霞 +3 位作者 王钢 陈静 高文洁 黄科昌 《解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第5期535-538,共4页

目的:评价钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)活性对过氧化氢所致人源性神经母细胞瘤细胞氧化应激损伤的影响。方法:SK-N-SH细胞生长至对数期时,接种于96孔培养板或6孔培养板,采用随机数字表法,将其分为4组:正常对照组,培养基中添加H_2O_... 目的:评价钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)活性对过氧化氢所致人源性神经母细胞瘤细胞氧化应激损伤的影响。方法:SK-N-SH细胞生长至对数期时,接种于96孔培养板或6孔培养板,采用随机数字表法,将其分为4组:正常对照组,培养基中添加H_2O_2组(H_2O_2组),培养基中只添加CaMKⅡ活性抑制剂KN93组(KN93组),培养基中同时添加H_2O_2和KN93组(H_2O_2+KN93组),倒置显微镜观察细胞形态学,采用CCK-8法测定细胞活力,采用Fura-2/AM荧光法检测细胞内Ca^(2+)浓度([Ca^(2+)]_i),采用免疫印迹测定CaMKⅡ和磷酸化CaMKⅡ的表达,采用RT-PCR法检测CaMK mRNA表达。结果:与正常对照组比较,H202组细胞体呈圆形的细胞和脱落细胞增加,细胞突起长度缩短,细胞存活率降低,[Ca^(2+)]_i升高,磷酸化CaMKⅡ表达上调,CaMKⅡmRNA表达下调。与H_2O_2组比较,H_2O_2+KN93组脱落细胞明显减少,突起变长,细胞存活率增加,[Ca^(2+)]_i降低,磷酸化CaMKⅡ表达下调,CaMKⅡmRNA表达水平上调。结论:CaMKⅡ增强了H_2O_2诱导的人源性神经母细胞瘤细胞氧化应激损伤。 展开更多

关键词 过氧化氢 氧化应激 钙钙调蛋白依赖性蛋白激酶2型 神经母细胞瘤

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子宫内膜癌血清PDK1、Lin28B、HMGA2变化及意义

5

作者 何建清 杨立芬 +1 位作者 陈莹 宋伟 《山东医药》 CAS 2024年第4期73-76,共4页

目的探讨子宫内膜癌患者血清磷酸肌醇依赖性蛋白激酶-1(PDK1)水平、内膜组织Lin-28同系物B(Lin28B)、高迁移率族蛋白2(HMGA2)变化及意义。方法选取子宫内膜癌患者120例(观察组)和子宫良性病变80例(对照组),采用ELISA试剂盒检测血清PDK1... 目的探讨子宫内膜癌患者血清磷酸肌醇依赖性蛋白激酶-1(PDK1)水平、内膜组织Lin-28同系物B(Lin28B)、高迁移率族蛋白2(HMGA2)变化及意义。方法选取子宫内膜癌患者120例(观察组)和子宫良性病变80例(对照组),采用ELISA试剂盒检测血清PDK1水平,以免疫组织化学法检测子宫内膜癌组织及良性病变子宫内膜组织Lin28B、HMGA2阳性表达。比较两组血清PDK1水平及子宫内膜组织Lin28B、HMGA2阳性表达率,并观察不同临床病理特征子宫内膜癌患者PDK1、Lin28B、HMGA2表达特点,分析血清PDK1水平及子宫内膜组织Lin28B、HMGA2阳性表达对子宫内膜癌的诊断价值。结果与对照组比较,观察组血清PDK1水平及子宫内膜组织Lin28B、HMGA2阳性表达率升高,差异有统计学意义(P均<0.05)。不同病理分期、分化程度、肿瘤直径、有无肌层浸润、淋巴结转移、脉管浸润子宫内膜癌患者血清PDK1水平及内膜组织Lin28B、HMGA2阳性表达比较差异有统计学意义(P均<0.05)。以血清PDK1≥47.88 U/mL、子宫内膜组织Lin28B、HMGA2表达阳性为诊断标准,三项联合检测诊断子宫内膜癌的特异度、阳性预测值分别为93.75%、95.24%,均高于PDK1、Lin28B、HMGA2单项检测(P均<0.05)。结论子宫内膜癌患者血清PDK1水平及子宫内膜癌组织Lin28B、HMGA2的阳性表达率增高,且与肿瘤病理分期、组织分级、肌层浸润、淋巴结转移、脉管浸润、肿瘤直径相关,三者联合检测对子宫内膜癌的诊断价值较高。 展开更多

关键词 子宫内膜肿瘤 磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1 Lin-28同系物B 高迁移率族蛋白2

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非接触共培养体系下抑制ARPE-19中CAMKⅡ表达对HUVECs迁移和侵袭及管腔形成的影响

6

作者 徐卫星 刘华 张岩 《国际眼科杂志》 CAS 2024年第4期508-514,共7页

目的:探讨非接触共培养体系下抑制人视网膜色素上皮细胞(ARPE)中Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CAMKⅡ)表达对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)迁移、侵袭、管腔形成的影响。方法:将过表达CAMKⅡ-δ的ARPE-19样本进行RNA测序,应用生物信息学... 目的:探讨非接触共培养体系下抑制人视网膜色素上皮细胞(ARPE)中Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CAMKⅡ)表达对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)迁移、侵袭、管腔形成的影响。方法:将过表达CAMKⅡ-δ的ARPE-19样本进行RNA测序,应用生物信息学分析差异基因参与的功能。使用transwell小室构建ARPE-19和HUVECs非接触共培养体系,根据实验干预措施分为:空白组:仅接种未共培养的HUVECs,无ARPE-19细胞;对照组:ARPE-19和HUVECs细胞均使用完全培养基进行共培养;AIP组(CAMKⅡ抑制组):ARPE-19使用含有AIP(160 nmol/L)的完全培养基,HUVECs使用完全培养基,进行共培养。检测HUVECs迁移、侵袭和管腔形成能力的变化,并通过Western blotting检测CAMKⅡ/AMPK/mTOR/VEGFA蛋白表达水平。结果:生信分析发现差异基因参与细胞生长与死亡和细胞运动等生物学过程。划痕和transwell迁移实验均表明AIP组的HUVECs相对迁移率均明显低于对照组(均P<0.05)。而侵袭和小管形成实验表明,AIP组的相对侵袭率和相对管腔形成率较对照组无明显改变(均P>0.05)。Western blotting结果表明AIP组CAMKⅡ、P-mTOR、VEGFA蛋白表达较对照组均明显下调,而P-AMPK蛋白表达较明显上调(均P<0.05)。结论:在非接触共培养体系下抑制ARPE-19细胞中CAMKⅡ表达可以显著降低HUVECs迁移能力,但不能改变侵袭和管腔形成能力,这可能是通过AMPK/mTOR/VEGFA信号通路实现的。 展开更多

关键词 ca^(2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(caMKⅡ) 自生肽2相关抑制肽(AIP) 迁移 人视网膜色素上皮细胞(ARPE) 人脐静脉内皮细胞(HUVECs)

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褪黑素对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其机制 被引量：3

7

作者 杨吉平 费琳 +2 位作者 钟钰西 余蕾 苟兴春 《山西医科大学学报》 CAS 2020年第8期761-765,共5页

目的研究褪黑素(MLT)对H9c2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用,并探讨其机制。方法将H9c2心肌细胞随机分为对照组、H/R组、MLT组和受体相互作用蛋白激酶3抑制剂(GSK-872)组。对照组用不含药物的DMEM处理,H/R组对H9c2细胞进行缺氧4 h... 目的研究褪黑素(MLT)对H9c2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用,并探讨其机制。方法将H9c2心肌细胞随机分为对照组、H/R组、MLT组和受体相互作用蛋白激酶3抑制剂(GSK-872)组。对照组用不含药物的DMEM处理,H/R组对H9c2细胞进行缺氧4 h/复氧6 h处理,MLT组和GSK-872组细胞在H/R前2 h分别给予100μmol/L MLT和5μmol/L GSK-872预处理。采用CCK-8法检测细胞活力,试剂盒测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性,碘化丙啶(PI)染色观察细胞坏死情况,Western blot检测RIPK3和磷酸化钙离子/钙调蛋白依赖蛋白激酶(p-CaMK)Ⅱ的表达。结果与对照组比较,H/R组细胞存活率显著下降(P<0.01),培养液中LDH含量明显升高(P<0.01),坏死细胞数量显著增多(P<0.01),RIPK3和p-CaMKⅡ蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与H/R组比较,MLT组和GSK-872组细胞存活率明显提高(P<0.01),LDH含量显著降低(P<0.01),坏死细胞明显减少(P<0.01),RIPK3和p-CaMKⅡ蛋白的表达明显下调(P<0.01)。而MLT组与GSK-872组上述指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论褪黑素可减轻H9c2心肌细胞的H/R损伤,其机制可能与抑制RIPK3/CaMKⅡ信号通路有关。 展开更多

关键词 褪黑素 H9C2心肌细胞 缺氧/复氧损伤 受体相互作用蛋白激酶3 钙离子/钙调蛋白依赖蛋白激酶Ⅱ

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突触后致密物蛋白质95基因沉默及对神经病理性疼痛大鼠疼痛行为的干预 被引量：6

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作者 李旭 申乐 +3 位作者 许力 刘薇 虞雪融 黄宇光 《协和医学杂志》 2011年第4期343-349,共7页

目的评估小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对突触后致密物蛋白质95(postsynaptic density protein95,PSD-95)基因的沉默效率及PSD-95基因沉默对谷氨酸诱导的神经细胞毒性与信号转导的影响,观察用RNA干扰(RNA interference,RNAi)... 目的评估小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对突触后致密物蛋白质95(postsynaptic density protein95,PSD-95)基因的沉默效率及PSD-95基因沉默对谷氨酸诱导的神经细胞毒性与信号转导的影响,观察用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默大鼠脊髓PSD-95基因治疗神经病理性疼痛的效果。方法用神经母细胞瘤/大鼠神经胶质细胞瘤杂交瘤细胞(NG108-15细胞)筛选大鼠PSD-95基因特异的siRNA,并用谷氨酸刺激PSD-95基因沉默的NG108-15细胞,检测细胞生长活力与信号通路蛋白质表达与磷酸化的改变。建立大鼠神经病理性疼痛的坐骨神经慢性压迫(chronic constrictioni njury,CCI)模型,预防性及治疗性鞘内给予PSD-95siRNA,留取脊髓标本,实时定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)分析PSD-95 mRNA表达水平,并测定大鼠后足机械痛阈及热痛阈的变化。结果序列特异性最高的siRNA在最佳转染条件下使PSD-95基因表达水平下降91.5%;PSD-95基因沉默既可增强神经细胞对谷氨酸毒性的耐受能力,又可抑制Ca2+/钙调蛋白依赖的蛋白质激酶IIα(CaMKIIα)异构型磷酸化。正常大鼠鞘内注射PSD-95siRNA可降低大鼠脊髓背角PSD-95mRNA的表达水平38%(P<0.05),但对痛阈无显著影响;CCI模型大鼠鞘内注射PSD-95 siRNA可明显缓解神经病理性疼痛。结论 PSD-95基因在神经病理性疼痛的发生中起重要作用。鞘内注射PSD-95siRNA可以显著缓解CCI模型大鼠机械性和热痛觉过敏,PSD-95 siRNA可能成为有效控制神经病理性疼痛的基因治疗方法。 展开更多

关键词 神经病理性疼痛 突触后致密物蛋白质95 谷氨酸兴奋性中毒 ca2+/钙调蛋白依赖的蛋白质激酶IIα 慢性压迫损伤 小干扰RNA

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结直肠癌组织中PDK1、Bcl-2、survivin表达变化及意义 被引量：1

9

作者 于婧 王凤琴 +1 位作者 姚文娟 张伟强 《山东医药》 CAS 北大核心 2015年第30期34-36,共3页

目的观察结直肠癌组织中3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(PDK1)、Bcl-2、survivin表达变化,并探讨其临床意义。方法采用免疫组化法检测52例份结直肠癌组织(癌症组)及癌旁正常肠黏膜组织(对照组)、38例份腺瘤组织(腺瘤组)中的PDK1、Bcl-2、sur... 目的观察结直肠癌组织中3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(PDK1)、Bcl-2、survivin表达变化,并探讨其临床意义。方法采用免疫组化法检测52例份结直肠癌组织(癌症组)及癌旁正常肠黏膜组织(对照组)、38例份腺瘤组织(腺瘤组)中的PDK1、Bcl-2、survivin蛋白,分析其与结直肠癌临床病理特征的关系及三者表达的相关性。结果癌症组PDK1、Bcl-2、survivin蛋白阳性表达率均明显高于腺瘤组和对照组,P均<0.05。PDK1、Bcl-2、survivin蛋白表达均与结直肠癌T分期、淋巴结转移有关(P均<0.05),而与患者年龄、性别、肿瘤分级等因素无关(P均>0.05)。结直肠癌组织中PDK1、Bcl-2、survivin蛋白表达两两互为正相关(P均<0.05)。结论结直肠癌组织中PDK1、Bcl-2、survivin呈高表达,三者可能在结肠癌的发生发展过程中具有一定的协同作用。 展开更多

关键词 结直肠癌 3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1 B淋巴细胞瘤/白血病2基因 生存素

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转染CDK2-shRNA对黑色素瘤B16-F1细胞达巴卡嗪敏感性的影响及其机制

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作者 晋佳路 朱仁书 +1 位作者 谢育媛 刘红春 《山东医药》 CAS 北大核心 2017年第23期8-11,共4页

目的探讨转染周期素依赖性蛋白激酶2短发夹RNA(CDK2-shRNA)对黑色素瘤B16-F1细胞达巴卡嗪敏感性的影响及其机制。方法将黑色素瘤B16-F1细胞分为观察组、空质粒组和对照组,观察组转染重组慢病毒pUL-CDK2-shRNA质粒,空质粒组转染重组慢病... 目的探讨转染周期素依赖性蛋白激酶2短发夹RNA(CDK2-shRNA)对黑色素瘤B16-F1细胞达巴卡嗪敏感性的影响及其机制。方法将黑色素瘤B16-F1细胞分为观察组、空质粒组和对照组,观察组转染重组慢病毒pUL-CDK2-shRNA质粒,空质粒组转染重组慢病毒pUL-NC-shRNA质粒,对照组不转染。转染12 h后用250μmol/L的达巴卡嗪孵育三组细胞72 h。采用MTT法检测三组细胞吸光度值,采用集落形成实验检测三组细胞集落形成率(CFR),采用Annexin V-FITC/PI双染法检测三组细胞凋亡率,采用Western blotting法检测三组细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白相对表达量,计算Bax/Bcl-2。结果观察组、空质粒组和对照组细胞吸光度值分别为0.221±0.019、0.684±0.049、0.699±0.051。观察组细胞吸光度值与空质粒组和对照组相比,P均<0.05。观察组、空质粒组和对照组细胞CFR分别为33.00%±1.80%、67.50%±7.26%、69.83%±5.25%。观察组细胞CFR与空质粒组和对照组相比,P均<0.05。观察组、空质粒组和对照组细胞凋亡率分别为43.6%±4.1%、17.6%±3.8%、15.1%±4.0%。观察组细胞凋亡率与空质粒组和对照组相比,P均<0.05。观察组、空质粒组和对照组细胞Bax/Bcl-2分别为2.56±0.28、0.84±0.04、0.86±0.11,Caspase-3相对表达量分别为0.92±0.07、0.69±0.08、0.57±0.05。观察组细胞Bax/Bcl-2、Caspase-3相对表达量与空质粒组和对照组相比,P均<0.05。结论转染CDK2-shRNA可以提高黑色素瘤B16-F1细胞对达巴卡嗪的敏感性。其机制是转染CDK2-shRNA可以提高达巴卡嗪共培养的黑色素瘤B16-F1细胞Bax/Bcl-2和Caspase-3表达水平,促进其凋亡。 展开更多

关键词 黑色素瘤 周期素依赖性蛋白激酶2 短发夹RNA 达卡巴嗪 药物疗法 耐药性 细胞凋亡

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鼠尾草酸通过激活AMPK降低游离脂肪酸诱导的HepG2细胞脂肪积累 被引量：4

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作者 程静 刘莹 +4 位作者 刘垚杰 赵江 吉洋琳 刘东 王浩 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第11期171-178,共8页

目的:探究鼠尾草酸对游离脂肪酸(free fatty acids,FFAs)诱导的Hep G2细胞脂肪积累的作用机制。方法:采用FFAs(油酸-棕榈酸浓度比2∶1)诱导建立HepG2细胞高脂模型,使用不同浓度的鼠尾草酸(15、20μmol/L)、FFAs(1mmol/L)、AMP依赖的蛋... 目的:探究鼠尾草酸对游离脂肪酸(free fatty acids,FFAs)诱导的Hep G2细胞脂肪积累的作用机制。方法:采用FFAs(油酸-棕榈酸浓度比2∶1)诱导建立HepG2细胞高脂模型,使用不同浓度的鼠尾草酸(15、20μmol/L)、FFAs(1mmol/L)、AMP依赖的蛋白激酶(adenosine 5’-monophosphate activated protein kinase,AMPK)抑制剂(2μmol/L)处理细胞24h后,通过测定细胞内脂肪含量、细胞活力、总胆固醇(total cholesterol,TC)和甘油三酯(triglyceride,TG)含量,脂肪代谢相关基因的转录表达水平以及磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶的表达水平,研究鼠尾草酸的降脂作用机制。结果:15、20μmol/L的鼠尾草酸,1mmol/L的FFAs单独或共同处理细胞24h对细胞的活力没有显著性影响;与正常组相比FFAs处理细胞24h,油红O染色结果显示,FFAs能显著增加细胞内的脂肪含量;FFAs能增加细胞内TC、TG含量,增加脂肪合成相关基因的表达水平,降低脂肪分解相关基因的表达水平(P<0.05)。油红O染色结果显示,与FFAs处理组相比,鼠尾草酸可以降低细胞内的脂肪含量;鼠尾草酸能显著降低TC、TG含量,显著下调脂肪合成相关基因的表达,且使脂肪氧化相关基因的表达水平呈上升趋势,并显著上调磷酸化AMPK的表达量(P<0.05)。使用AMPK抑制剂共同处理细胞24h,对细胞的活力没有影响,但可明显逆转鼠尾草酸的降脂作用(P<0.05)。结论:鼠尾草酸能通过调控脂肪相关基因的转录水平和AMPK磷酸化激酶的表达来改善FFAs诱导的HepG2细胞的脂肪积累。 展开更多

关键词 鼠尾草酸 游离脂肪酸 HEPG2细胞 AMP依赖的蛋白激酶

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抑制剂KN-93干预二乙酰吗啡致心肌细胞节律异常的蛋白质组学分析

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作者 季敏 苏丽萍 +3 位作者 刘丽 管雅玲 肖锦玲 蒲红伟 《中国医药导报》 CAS 2023年第19期4-9,共6页

目的使用蛋白质组学分析抑制剂KN-93干预二乙酰吗啡致心肌细胞节律异常的作用。方法60只SPF级SD大鼠乳鼠,雌雄不限,提取心肌组织,体外培养SD大鼠乳鼠原代心肌细胞,分为对照组和实验组,对照组使用100μmol/L二乙酰吗啡作用24 h,实验组使... 目的使用蛋白质组学分析抑制剂KN-93干预二乙酰吗啡致心肌细胞节律异常的作用。方法60只SPF级SD大鼠乳鼠,雌雄不限,提取心肌组织,体外培养SD大鼠乳鼠原代心肌细胞,分为对照组和实验组,对照组使用100μmol/L二乙酰吗啡作用24 h,实验组使用100μmol/L二乙酰吗啡+1μmol/L KN-93作用24 h。采用TMT相对定量蛋白质技术筛选出对照组和实验组之间具有显著性表达差异蛋白质,筛选标准:表达倍数上调>1.2倍或下调<0.83倍且P<0.05。通过GO功能富集分析差异表达蛋白质的主要功能、细胞定位和参与的生物学过程,通过KEGG通路富集分析差异表达蛋白质可能参与的代谢或信号通路,通过蛋白质相互作用网络分析蛋白质之间有结合作用或相互作用。结果与对照组比较,实验组Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)磷酸化水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);TMT技术共筛选出346个差异表达蛋白质,主要参与对细胞因子的反应、细胞对细胞因子刺激的反应等过程,影响相同的蛋白质结合、信号受体结合等分子功能和细胞外区域部分、胞外区等细胞组分蛋白,主要富集在癌症途径、PI3K-Akt信号通路、人乳头瘤病毒感染、阿尔茨海默病等信号通路。蛋白互作网络显示,MSH6、NFk B1等可能与CaMKⅡ存在蛋白质互相作用关系。与对照组比较,实验组ADCY7、NFk B1、MSH6、MMP2、MMP9、NQO1、TXNRD1蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论CaMKⅡ可能通过调控NFk B、MSH6等蛋白的改变,通过癌症途径信号通路调节心肌细胞凋亡,参与二乙酰吗啡致心肌细胞节律异常过程。 展开更多

关键词 二乙酰吗啡 心肌细胞 ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ 蛋白质组学

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右美托咪定对七氟醚麻醉的大鼠下丘脑内pCaMKⅡɑ表达的影响

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作者 王丛丛 张巧梅 +2 位作者 沈莉 王海青 马登明 《当代医药论丛》 2021年第23期4-6,共3页

目的:研究右美托咪定对使用七氟醚进行麻醉的大鼠下丘脑内磷酸化Ca^(2+)/CaM-依赖性蛋白激酶Ⅱα(pCaMKⅡα)表达的影响。方法:选择经侧脑室置管的大鼠20只作为研究对象。随机将其分为对照(control,Con)组和右美托咪定(dexmedetomidine,... 目的:研究右美托咪定对使用七氟醚进行麻醉的大鼠下丘脑内磷酸化Ca^(2+)/CaM-依赖性蛋白激酶Ⅱα(pCaMKⅡα)表达的影响。方法:选择经侧脑室置管的大鼠20只作为研究对象。随机将其分为对照(control,Con)组和右美托咪定(dexmedetomidine,Dex)组。经Con组大鼠的侧脑室小管注入无菌生理盐水0.1 mL,经Dex组大鼠的侧脑室小管注入浓度为20μg/mL的右美托咪定0.1 mL。注药30 min后用七氟醚对两组大鼠进行麻醉,在麻醉30 min时取其下丘脑组织,检测其中pCaMKⅡɑ的表达量,并在同一时间点取其脑电波频谱进行分析。结果:与Con组大鼠相比,Dex组大鼠的抑制性脑电波增多(P<0.05),兴奋性脑电波减少(P<0.05)。用七氟烷麻醉30 min时,与Con组大鼠相比,A组(给予右美托咪定30 min时)大鼠下丘脑内pCaMKⅡɑ蛋白的表达量更低(P<0.05)。与Con组大鼠、A组大鼠相比,B组(给予右美托咪定后用七氟醚麻醉30 min时)大鼠下丘脑内pCaMKⅡɑ蛋白的表达量更低(P<0.05)。结论:右美托咪定可对使用七氟醚进行麻醉大鼠的脑电波产生抑制,还可抑制麻醉过程中其下丘脑内pCaMKⅡɑ的表达。 展开更多

关键词 右美托咪定 七氟醚 麻醉 下丘脑 磷酸化 ca^(2+)/caM-依赖性蛋白激酶Ⅱα

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miR-130b对宫颈癌细胞修复TNF-α诱导性基因组双链DNA断裂作用的影响及机制 被引量：5

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作者 杨磊 刘涛 +1 位作者 段继惠 穆红 《山东医药》 CAS 2019年第2期28-31,共4页

目的观察miR-130b对宫颈癌细胞修复基因组双链DNA断裂作用的影响,并探讨其机制。方法将宫颈癌细胞Siha分成6组,分别转染细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制物1A(CDKN1A)基因过表达质粒pc DNA3. 1-CDKN1A(CDKN1A组)、pc DNA3. 1空载质粒(pc ... 目的观察miR-130b对宫颈癌细胞修复基因组双链DNA断裂作用的影响,并探讨其机制。方法将宫颈癌细胞Siha分成6组,分别转染细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制物1A(CDKN1A)基因过表达质粒pc DNA3. 1-CDKN1A(CDKN1A组)、pc DNA3. 1空载质粒(pc DNA3. 1组)、miR-130b mimics (miR-130b组)、miR-130b阴性对照核酸(NC组),共转染pc DNA3. 1-CDKN1A和miR-130b mimics (CDKN1A+miR-130b组)、pc DNA3. 1和miR-130b mimics (pc DNA3. 1+miR-130b组)。TNF-α刺激细胞,用彗星试验测定基因组DNA尾距,流式细胞术测定磷酸化组蛋白2A变异体(γ-H2AX)蛋白; Real-time PCR、Western blotting法检测CDKN1A mRNA及其蛋白。分别将pc DNA3. 1/EGFP、pc DNA3. 1/EGFP-CDKN1A-wtUTR(野生型)、pc DNA3. 1/EGFP-CDKN1A-mutUTR(突变型)与miR-130b mimics或NC共转染Siha细胞,测定报告基因荧光相对活性;以TNF-α和DNA损伤增强剂AZD2461刺激各组细胞,用流式细胞术测定细胞凋亡水平。结果与pc DNA3. 1组比较,CDKN1A组细胞DNA尾距、γ-H2AX蛋白表达水平降低(P均<0. 05);与NC组比较,miR-130b组细胞DNA尾距、γ-H2AX蛋白表达水平、细胞凋亡率升高,CDKN1A mRNA、蛋白表达水平下降(P均<0. 05);与pc DNA3. 1+miR-130b组比较,CDKN1A+miR-130b组细胞DNA尾距、γ-H2AX蛋白表达水平、细胞凋亡率下降(P均<0. 05);与共转染NC细胞相比,共转染miR-130b mimics使野生型细胞荧光相对活性降低(P <0. 05),而未改变突变型细胞荧光相对活性。结论 miR-130b通过直接靶定CDKN1A mRNA抑制其表达干扰宫颈癌细胞修复双链DNA断裂位点,从而促进细胞凋亡。 展开更多

关键词 宫颈癌 微小核糖核酸 DNA修复 细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制物1A 磷酸化组蛋白2A变异体 细胞凋亡

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肾上腺髓质素对于喉癌细胞的增殖作用 被引量：3

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作者 王成元 肖水芳 李学佩 《中国耳鼻咽喉头颈外科》 北大核心 2005年第6期351-353,共3页

目的观察肾上腺髓质素(adrenomedullin,ADM)对于喉癌细胞系Hep-2的促进增殖作用。方法采用氚胸腺嘧啶(H3-thymidine,H3-TDR)掺入方法观察不同药物作用下ADM对于喉癌细胞系Hep-2增殖的影响。结果在ADM浓度为1×10-10、1×10-9、1... 目的观察肾上腺髓质素(adrenomedullin,ADM)对于喉癌细胞系Hep-2的促进增殖作用。方法采用氚胸腺嘧啶(H3-thymidine,H3-TDR)掺入方法观察不同药物作用下ADM对于喉癌细胞系Hep-2增殖的影响。结果在ADM浓度为1×10-10、1×10-9、1×10-8mol/L时均可以显著促进Hep-2细胞增殖(t=-2654.8、P<0.01,t=-1732.3、P<0.01和t=-836.5、P<0.01),三组浓度的ADM促进Hep-2增殖作用差别有显著性(F=18.5,P<0.01),且有剂量依赖性(r=0.9996,P<0.01)。加入ADM受体阻断剂ADM(22-52)Hep-2细胞的H3-TDR掺入量与单纯ADM孵育组掺入量差别有显著(t=2721.5,P>0.05)。Hep-2细胞经ADM孵育后分别加入丝裂素活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(mitogen-acti-vatedproteinkinase/extracellularsignal-regulatedkinase,MAPK/MEK)阻断剂PD098059、蛋白激酶A(proteinkinaseA,PKA)阻断剂H-89、H3-TDR掺入量与单纯ADM刺激组掺入量差别有显著意义(t=2723.8,P<0.01、t=2095.2,P<0.01〉;但加入P38MAPK通路阻断剂SB202190后,H3-TDR掺入量与单纯ADM刺激组差别无显著性。(t=121.83,P>0.05)。结论肾上腺髓质素对于喉癌细胞Hep-2的增殖有促进作用,阻断ADM受体后Hep-2细胞生长受抑制,ADM促进Hep-2细胞生长信号可以通过MEK、PKA通路起作用,未发现p38MAPK参与该作用。 展开更多

关键词 肾上腺髓质素 增殖作用 喉癌细胞系HEP-2 HEP-2细胞 P38MAPK 细胞外信号调节激酶 丝裂素活化蛋白激酶 PD098059 SB202190 protein M受体阻断剂 ADM 细胞生长 mol/L 剂量依赖性 掺入量 胸腺嘧啶 药物作用 细胞增殖 H-89

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EGFP介导的小鼠心肌病模型心脏L-型钙电流的变化

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作者 徐林 李绪勇 《河南医学研究》 CAS 2012年第1期8-11,共4页

目的:本研究拟探讨绿色荧光蛋白转染是否可导致心脏L-型钙电流发生变化。方法:在小鼠心脏上注射表达增强型GFP(EGFP)的腺病毒,一周后分离心肌细胞,用膜片钳记录ICa的大小及通道动力学过程。结果:转染EGFP可显著增大细胞膜电容。与对照... 目的:本研究拟探讨绿色荧光蛋白转染是否可导致心脏L-型钙电流发生变化。方法:在小鼠心脏上注射表达增强型GFP(EGFP)的腺病毒,一周后分离心肌细胞,用膜片钳记录ICa的大小及通道动力学过程。结果:转染EGFP可显著增大细胞膜电容。与对照组相比,EGFP组ICa的电流密度、激/失活动力学参数没有明显变化,但ICa的失活后恢复时间加快。结论:转染EGFP可导致心肌细胞肥大,但对ICa的大小、激/失活动力学过程不产生影响,其加快ICa失活后恢复的作用可能与CaMKII的磷酸化无关。 展开更多

关键词 绿色荧光蛋白 L-型钙电流 钙/钙调素依赖的蛋白激酶2

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运动提高糖尿病大鼠骨骼肌GLUT4基因表达的信号机制

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作者 张红学 《体育学刊》 CAS CSSCI 北大核心 2013年第2期124-129,共6页

为研究运动激活的CaMK II对糖尿病大鼠骨骼肌MEF2和GLUT4结合活性及GLUT4基因表达量的调节作用,以了解运动提高糖尿病大鼠GLUT4基因表达的可能机制。将健康SD大鼠100只,40只作为正常对照,其余60只建立糖尿病大鼠模型,建模成功35只。正... 为研究运动激活的CaMK II对糖尿病大鼠骨骼肌MEF2和GLUT4结合活性及GLUT4基因表达量的调节作用,以了解运动提高糖尿病大鼠GLUT4基因表达的可能机制。将健康SD大鼠100只,40只作为正常对照,其余60只建立糖尿病大鼠模型,建模成功35只。正常对照和糖尿病大鼠再按体重各自随机分为5组:安静对照组、一次性运动组、一次性运动+KN93组、耐力训练组、耐力训练+KN93组,共10组。跑台速度20 m/min,运动时间1 h。一次性运动组大鼠1次运动后3 h取材。耐力训练组采用同样跑台速度和运动时间,训练1周,并于最后1次训练后12 h取材。结果得到,糖尿病大鼠耐力训练组,骨骼肌细胞核内MEF2和GLUT4的结合活性及骨骼肌GLUT4基因表达量虽然均显著低于正常对照大鼠耐力训练组,但与糖尿病大鼠安静对照组相比均显著升高;耐力训练+KN93组,骨骼肌细胞核内MEF2和GLUT4的结合活性与安静对照组相比差异没有显著性,但骨骼肌GLUT4基因表达量与安静对照组相比却显著升高。结果显示:虽然运动通过激活糖尿病大鼠骨骼肌CAMK II而提高其骨骼肌细胞核内MEF2和GLUT4的结合活性,虽然MEF2和GLUT4的结合活性参与调解了正常大鼠骨骼肌GLUT4基因表达,但并不是影响糖尿病大鼠骨骼肌GLUT4基因表达的唯一因素。 展开更多

关键词 运动生物化学 钙 钙调素依赖性蛋白激酶II 肌细胞增强因子2 葡萄糖运载体4 糖尿病大鼠

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长时程增强形成机制的研究进展 被引量：2

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作者 张建梅 祁金顺 乔健天 《山西医科大学学报》 CAS 2004年第1期60-62,共3页

关键词 长时程增强 形成机制 研究进展 钙 蛋白激酶C ca(2+) 钙调蛋白依赖性蛋白激酶 突触传递

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苜蓿MtCDPK1基因序列分析、克隆及表达载体构建 被引量：2

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作者 任丽昀 毛小涛 《安徽农业科学》 CAS 2013年第11期4735-4737,共3页

[目的]克隆苜蓿MtCDPK1基因,对其进行序列分析,并构建其表达载体。[方法]根据MtCDPK1基因的全长序列设计引物来克隆该基因,并用生物信息学方法对该基因表达的蛋白序列进行分析,最后通过酶切、连接、转化构建该基因的表达载体。[结果]试... [目的]克隆苜蓿MtCDPK1基因,对其进行序列分析,并构建其表达载体。[方法]根据MtCDPK1基因的全长序列设计引物来克隆该基因,并用生物信息学方法对该基因表达的蛋白序列进行分析,最后通过酶切、连接、转化构建该基因的表达载体。[结果]试验成功克隆到了MtCDPK1基因,并证明MtCDPK1蛋白属于Ca2+依赖的蛋白激酶,同时成功构建了该基因的表达载体。[结论]该研究为苜蓿的遗传转化提供了良好的基础。 展开更多

关键词 苜蓿 ca2+依赖的蛋白激酶 序列分析 克隆 表达载体构建

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血管性痴呆病因病机与发病机制研究概况 被引量：8

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作者 关姝明 杨晓波 《实用中医内科杂志》 2014年第8期178-181,共4页

血管性痴呆(vascular dementia,VD)属中医学"呆病"、"痴证"等范畴,为肾精亏虚-髓海不足、痰、浊(水湿)-瘀血等蒙蔽(阻)脑窍、玄府郁阻、浊毒内侵、本虚标实、气血亏虚、三焦气化失司、伏邪内生-损害元神、脏腑功能... 血管性痴呆(vascular dementia,VD)属中医学"呆病"、"痴证"等范畴,为肾精亏虚-髓海不足、痰、浊(水湿)-瘀血等蒙蔽(阻)脑窍、玄府郁阻、浊毒内侵、本虚标实、气血亏虚、三焦气化失司、伏邪内生-损害元神、脏腑功能失调、络脉学说;病理机制包括中枢胆碱能、兴奋性氨基酸、氧自由基、神经细胞凋亡、细胞和分子(海马Ca2+、钙调素CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ-CaMPKⅡ,内皮素-1-ET-1降钙素)、炎性反应、遗传机制、危险等。中医虽然对血管性痴呆发病原因论述较多,但机理尚未明确,未能达成共识,亦有待于临床与实验进一步检验,对呆病诊断也需扩展其内涵。认为现代医学虽在科研上取得一些研究成果,但也存在一定问题,未来应统一实验标准、设计严谨科研方案等,指导临床VD治疗,判断治法方药优劣性及稳定性。 展开更多

关键词 血管性痴呆 呆病 痴证 病因病机 中枢胆碱能 兴奋性氨基酸 氧自由基 神经细胞凋亡 海马ca2+、钙调素caM依赖性蛋白激酶Ⅱ(caMPKⅡ) 内皮素-1(ET-1降钙素) 炎性反应 遗传 综述

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