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大鼠CREB结合蛋白RNA干扰重组慢病毒载体的构建与鉴定
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作者 杨简 江洪 +3 位作者 陈思思 陈静 徐盛开 王继春 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2010年第4期348-350,共3页
目盼构建大鼠CREB结合蛋白(CREB binding protein,CBP)基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,并观察该载体对大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)CBP表达的沉默效应。方法设计合成4条CBP基因的siRNA序列,将筛选... 目盼构建大鼠CREB结合蛋白(CREB binding protein,CBP)基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,并观察该载体对大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)CBP表达的沉默效应。方法设计合成4条CBP基因的siRNA序列,将筛选确定的CBP RNAi有效靶序列与pFU—GW—iRNA载体连接产生CBPshRNA慢病毒表达载体,转化、PCR筛选阳性克隆及测序鉴定。脂质体2000将CBP shRNA慢病毒载体和慢病毒包装质粒共转染293T细胞,完成慢病毒颗粒包装及滴度测定。包装产生的重组慢病毒感染大鼠VSMCs,实时定量RT-PCR检测CBP mRNA的表达,并与未转染及转染阴性对照shRNA慢病毒的细胞进行比较。结果PCR扩增和测序结果证实,成功构建大鼠CBP shRNA慢病毒载体。经包装产生的慢病毒滴度为2×10^9TU/ml,与未转染慢病毒及转染阴性对照shRNA慢病毒的细胞比较,CBP shRNA慢病毒转染可使VsMcs的CBP mRNA分别下降88.5%和92.7%。结论成功构建CBP基因RNAi慢病毒表达载体.对VsMcs的CBP表达具有良好沉默作用,为后期基因治疗血管增殖性疾病奠定基础。 展开更多
关键词 creb结合蛋白质 RNA干扰 转染 基因疗法
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微波辐射对大鼠睾丸组织pCREB、CREM及CBP蛋白表达的影响 被引量:7
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作者 陈浩宇 王水明 +6 位作者 彭瑞云 董霁 左红艳 王丽峰 高亚兵 徐新萍 苏镇涛 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期379-382,共4页
目的探讨微波辐射对睾丸组织磷酸化环磷酸腺苷(cAMP)-反应元件结合蛋白(pCREB)、cAMP反应元件调节因子(CREM)及CREB结合蛋白(CBP)表达的影响及其意义。方法将30只雄性Wistar大鼠随机分为对照组(n=5)和辐射组(n=25)。辐射组接受30mW/cm2... 目的探讨微波辐射对睾丸组织磷酸化环磷酸腺苷(cAMP)-反应元件结合蛋白(pCREB)、cAMP反应元件调节因子(CREM)及CREB结合蛋白(CBP)表达的影响及其意义。方法将30只雄性Wistar大鼠随机分为对照组(n=5)和辐射组(n=25)。辐射组接受30mW/cm2微波辐射5min,分别于辐射后6h,1、3、7、14d处死5只大鼠。对照组不接受辐射,于1d时活杀。采用免疫组织化学及Western blotting检测睾丸组织pCREB、CREM及CBP蛋白表达的变化。结果 pCREB、CREM和CBP均主要表达于睾丸生精小管精子细胞核。微波辐射后6h^14d(pCREB在1d时除外),pCREB和CBP蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01),辐射后6h^7d CREM表达亦明显下调(P<0.05或P<0.01)。结论 pCREB、CREM及CBP表达下调在微波辐射致生精细胞损伤中可能发挥重要作用。 展开更多
关键词 微波 辐射损伤 实验性 CAMP反应元件结合蛋白质 cAMP应答元件调节器 creb结合蛋白质 睾丸 大鼠
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丁苯酞对大鼠海马神经元磷酸化环磷酸腺苷反应原件结合蛋白和Bcl-2表达的影响
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作者 李国辉 李琛 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2013年第10期1081-1083,共3页
目的探讨丁苯酞对氧糖剥夺/复氧的原代大鼠海马神经元磷酸化环磷酸腺苷反应原件结合蛋白(CREB)和Bcl-2表达的影响。方法以原代大鼠海马神经元设立对照组、模型组、丁苯酞组。丁苯酞组复氧8h后应用终浓度为0.1、1、10μmol/L的丁苯酞干预... 目的探讨丁苯酞对氧糖剥夺/复氧的原代大鼠海马神经元磷酸化环磷酸腺苷反应原件结合蛋白(CREB)和Bcl-2表达的影响。方法以原代大鼠海马神经元设立对照组、模型组、丁苯酞组。丁苯酞组复氧8h后应用终浓度为0.1、1、10μmol/L的丁苯酞干预,通过Western blot法检测磷酸化CREB蛋白、RT-PCR法测定Bcl-2mRNA的表达。结果与对照组比较,模型组和不同浓度丁苯酞组大鼠海马神经元磷酸CREB蛋白、Bcl-2mRNA表达明显降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,不同浓度丁苯酞组磷酸化CREB蛋白、Bcl-2mRNA表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论在实验剂量范围内,丁苯酞呈剂量依赖性地抑制海马神经元的凋亡,其作用机制可能是通过上调磷酸化CREB表达,提高Bcl-2活性,抑制海马神经元凋亡。 展开更多
关键词 海马 神经元 creb结合蛋白质 RNA 信使 再灌注损伤
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