LAMP在检测转基因抗草甘膦大豆cp4-epsps基因上的应用 被引量：21

1

作者 兰青阔 王永 +2 位作者 赵新 朱珠 程奕 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第24期10377-10378,10390,共3页

以转基因抗草甘膦大豆为主要研究对象,利用环介导等温扩增技术(Loop-Mediated Isothermal Amplification,LAMP),针对cp4-epsps合成酶基因(5-enolpyruvlshimimate-3-phosphate synthase)的6个区域设计4条特异性引物,利用一种链置换DNA聚... 以转基因抗草甘膦大豆为主要研究对象,利用环介导等温扩增技术(Loop-Mediated Isothermal Amplification,LAMP),针对cp4-epsps合成酶基因(5-enolpyruvlshimimate-3-phosphate synthase)的6个区域设计4条特异性引物,利用一种链置换DNA聚合酶(BstDNA polymerase),在65℃保温30 min,通过荧光显色即可完成对转基因的检测工作。结果显示,该LAMP方法能够特异性检测cp4-epsps基因,其检测灵敏度是常规定性PCR方法的10倍。建立了针对转基因大豆cp4-epsps基因的LAMP检测方法,其具有高度的特异性及稳定性,结果可靠,适合转基因抗草甘膦大豆的快速检测。 展开更多

关键词 转基因抗草甘膦大豆 cp4-epsps IAMP 检测

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含抗草甘膦 CP4-EPSPS 基因和耐逆 Trihelix 类转录因子GmGT-2 A基因的植物表达载体构建及转化验证 被引量：2

2

作者 李雁杰 朱丹华 +3 位作者 冯小锋 高莎 杨清华 董德坤 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第2期133-140,共8页

高效易用的植物表达载体在基因功能相关研究中起着重要的作用。以植物表达载体p BA002为基础载体,使用抗草甘膦CP4-EPSPS基因替换原载体的Bar筛选标记基因,获得新的植物表达载体p ES002。将大豆耐逆相关Trihelix类转录因子Gm GT-2A连接... 高效易用的植物表达载体在基因功能相关研究中起着重要的作用。以植物表达载体p BA002为基础载体,使用抗草甘膦CP4-EPSPS基因替换原载体的Bar筛选标记基因,获得新的植物表达载体p ES002。将大豆耐逆相关Trihelix类转录因子Gm GT-2A连接到p ES002,构建了同时含耐逆相关基因和抗除草剂标记基因的植物表达载体p ES002-Gm GT-2A。利用农杆菌介导的花序浸润法转化拟南芥,并对转基因植株进行抗草甘膦和耐盐性鉴定。结果表明,转基因植株在抗草甘膦和耐盐性上均显著强于对照,表明该载体可以用于转基因相关的基因功能研究。 展开更多

关键词 草甘膦 转录因子 表达载体

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转基因大豆CP4-EPSPS蛋白的降解规律研究 被引量：1

3

作者 李允静 万丹凤 +9 位作者 刘标 肖芳 李晓飞 武玉花 李俊 高鸿飞 沈文静 李均 朱莉 吴刚 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期124-130,共7页

随着转基因技术发展和应用,转基因外源基因表达蛋白在环境中富集和降解情况成为公众关注的问题,外源蛋白在环境中的检测和监测成为转基因研究和监管的一个方向。本研究利用模拟自然降解和蛋白酶K两种方式,处理转基因大豆种子(5%GTS 40-3... 随着转基因技术发展和应用,转基因外源基因表达蛋白在环境中富集和降解情况成为公众关注的问题,外源蛋白在环境中的检测和监测成为转基因研究和监管的一个方向。本研究利用模拟自然降解和蛋白酶K两种方式,处理转基因大豆种子(5%GTS 40-3-2),采用Western blot、双抗夹心快速检测试纸条和酶联免疫吸附测定(ELISA)等手段检测CP4-EPSPS蛋白降解情况,结果发现在模拟自然降解条件下,CP4-EPSPS蛋白呈现逐渐被降解的趋势,且在17周被彻底降解;蛋白酶K处理大豆匀浆情况下,9小时CP4-EPSPS蛋白被快速降解。该研究探索了CP4-EPSPS蛋白在自然环境下的降解规律,为寻求一种快速、安全、有效降解转基因CP4-EPSPS蛋白研究提供参考。 展开更多

关键词 转基因大豆 cp4-epsps 蛋白质 降解

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激光诱导荧光结合磁分离检测CP4-EPSPS基因 被引量：1

4

作者 庞月红 王逸盈 +2 位作者 孙梦梦 沈晓芳 张毅 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第16期218-223,共6页

建立一种激光诱导荧光结合磁分离的检测技术,用于在线检测CP4-5-烯醇丙酮酸酯-3-磷酸合酶基因(CP4-5-enol acetate-3-phosphate synthase gene,CP4-EPSPS)。以氨基磁纳米粒子(magnetic nanoparticles,MNPs)为载体修饰cDNA,构建捕获基因... 建立一种激光诱导荧光结合磁分离的检测技术,用于在线检测CP4-5-烯醇丙酮酸酯-3-磷酸合酶基因(CP4-5-enol acetate-3-phosphate synthase gene,CP4-EPSPS)。以氨基磁纳米粒子(magnetic nanoparticles,MNPs)为载体修饰cDNA,构建捕获基因探针,并设计FAM荧光标记的信号基因探针(sDNA)。在目的基因CP4-EPSPS(tDNA)存在的情况下,cDNA和sDNA通过碱基互补配对原则与tDNA结合形成双链结构。该结构通过毛细管时被磁场富集分离,然后在激光诱导荧光检测器的作用下在线检测其荧光信号。通过对MNPs质量浓度、捕获探针浓度、牛血清白蛋白质量浓度进行考察,在优化的实验条件下,在1.0×10^(-11)~2.0×10^(-7)mol/L范围内,CP4-EPSPS基因浓度与荧光峰面积呈良好线性关系,检出限为4.0×10^(-12)mol/L(RSN=3),该方法成功应用于转基因大豆的聚合酶链式反应扩增产物的检测。 展开更多

关键词 激光诱导荧光 cp4-epsps基因 转基因大豆

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抗草甘膦转基因大豆Cp4-epsps基因快速简便的LAMP检测方法 被引量：7

5

作者 朱琳峰 彭焕 +3 位作者 黄文坤 张东升 孔令安 彭德良 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期86-92,共7页

针对抗草甘膦转基因大豆的外源基因Cp4-epsps,建立了一种基于环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术的抗草甘膦转基因大豆的检测体系,其扩增产物既可利用常规琼脂糖凝胶电泳检测,还可通过SYBR Green I染色... 针对抗草甘膦转基因大豆的外源基因Cp4-epsps,建立了一种基于环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术的抗草甘膦转基因大豆的检测体系,其扩增产物既可利用常规琼脂糖凝胶电泳检测,还可通过SYBR Green I染色进行快速检测。LAMP检测体系中dNTPs浓度为0.8 mmol/L、Mg2+浓度为3mmol/L、反应时间为45min时扩增效果最佳,其检测灵敏度为5μg/L,比常规PCR灵敏100倍。田间实际检测结果表明,LAMP检测结果和PCR检测结果完全一致,准确率为100%。本研究所建立的抗草甘膦转基因大豆LAMP检测方法具有简便快速、特异性强、灵敏度高等特征,是一种能够用于抗草甘膦转基因大豆检测、田间基因漂移监测和环境安全研究的有力工具。 展开更多

关键词 抗草甘膦转基因大豆 cp4-epsps LAMP 快速检测

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一种新的钙依赖性的蛋白激酶基因CP4的克隆及其表达研究

6

作者 王世峰 罗松 +5 位作者 林海燕 赵晖 梁华 齐建国 王跃 王永潮 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2002年第10期39-44,共6页

在利用人ACA (Anti Centromere/KinetochoreAutoantibody)血清研究拟南芥ACA相关蛋白的过程中克隆了钙依赖性的蛋白激酶基因家族的一个不典型基因 ,称为CP4 ,GenBank注册号为AF130 2 5 2。Southern杂交结果表明 ,拟南芥基因组中至少存... 在利用人ACA (Anti Centromere/KinetochoreAutoantibody)血清研究拟南芥ACA相关蛋白的过程中克隆了钙依赖性的蛋白激酶基因家族的一个不典型基因 ,称为CP4 ,GenBank注册号为AF130 2 5 2。Southern杂交结果表明 ,拟南芥基因组中至少存在两种以上等位形式的CP4。原位杂交结果表明 ,CP4mRNA在拟南芥的花和根中高表达 ,在果实和叶片中没有表达。此外还构建了CP4的高效表达载体 ,为进一步研究CP4的功能打下了基础。 展开更多

关键词 cp4 CDPK 拟南芥基因组 蛋白激酶基因 钙依赖性 血清 研究 克隆

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农杆菌介导遗传转化获得转CP4基因籼稻的研究 被引量：1

7

作者 胡欢 李媛 +3 位作者 丁筠 曹含章 吕尊富 李飞飞 《浙江农林大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期420-425,共6页

【目的】建立籼稻‘中恢161’Oryza sativa subsp.indica‘Zhonghui 161’农杆菌Agrobacterium tumefaciens介导的转化体系。【方法】以籼稻‘中恢161’的成熟胚为材料,设置了5个草甘膦质量浓度(100、200、300、400和500 mg·L^(-1)... 【目的】建立籼稻‘中恢161’Oryza sativa subsp.indica‘Zhonghui 161’农杆菌Agrobacterium tumefaciens介导的转化体系。【方法】以籼稻‘中恢161’的成熟胚为材料,设置了5个草甘膦质量浓度(100、200、300、400和500 mg·L^(-1))进行胚性愈伤组织的草甘膦敏感性试验。利用农杆菌介导法,将草甘膦抗性基因CP4-EPSPS导入‘中恢161’的胚性愈伤组织中,转化后的胚性愈伤组织分别在含有300、350和400 mg·L^(-1)草甘膦的选择培养基上进行抗性筛选。抗性愈伤组织进一步分化、成苗。【结果】草甘膦质量浓度为300~400 mg·L^(-1)时,愈伤组织褐化率约50%,具有很好的选择效果。经统计,300、350和400 mg·L^(-1)草甘膦抗性筛选后,愈伤组织阳性率分别为40.16%、61.72%和84.04%,抗性愈伤组织的分化率为46.43%,成苗率为32.84%。共获得67株再生小苗,经PCR检测,43株成功转入CP4基因,再生植株阳性率为64.18%。【结论】建立了‘中恢161’农杆菌介导的转化体系。 展开更多

关键词 籼稻‘中恢161’ 胚性愈伤组织 农杆菌介导 cp4基因 草甘膦

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热处理对转基因秸秆中重组蛋白和重组DNA的降解作用

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作者 颜晶莹 倪亮 +1 位作者 沈星宇 李玉 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第9期2079-2088,共10页

随着转基因作物种植面积的不断扩大,如何高效处理转基因秸秆成为了一个重要的科学问题。未经处理的转基因秸秆中的重组蛋白和重组DNA可以在土壤中存在很长时间,并对土壤生物多样性产生潜在负面影响。因此寻找一个既节约成本又对环境无... 随着转基因作物种植面积的不断扩大,如何高效处理转基因秸秆成为了一个重要的科学问题。未经处理的转基因秸秆中的重组蛋白和重组DNA可以在土壤中存在很长时间,并对土壤生物多样性产生潜在负面影响。因此寻找一个既节约成本又对环境无害的秸秆处理方法非常重要。高温处理是降解转基因秸秆重组蛋白和重组DNA的有效手段,但目前对处理温度和处理时间的选择还缺乏系统的研究。本研究通过试纸条、聚合酶链反应(PCR)等方法检测不同温度和时间处理的转基因作物秸秆中重组蛋白和重组DNA的水平。结果表明,转基因大豆、棉花、玉米、水稻的秸秆在50℃处理3 h后,其体内的抗除草剂蛋白草胺膦乙酰转移酶(phosphinothricin acetyltransferase, PAT)等重组蛋白基本降解;但相同温度下,重组DNA的降解则需要4 d时间;提高处理温度可以在一定程度上缩短重组蛋白和重组DNA降解所需的时间。50℃处理4 d的条件在实际生产中通过堆肥就能实现。本研究从分子生物学的角度为转基因秸秆处理提供了依据。 展开更多

关键词 转基因秸秆 重组蛋白 重组DNA 草胺膦乙酰转移酶(PAT) 5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合酶基因(cp4-epsps) BT基因

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转基因大豆种植对根际土壤酶活性和养分的影响 被引量：13

9

作者 章秋艳 李刚 +5 位作者 杨志国 王丽娟 王慧 常泓 杨殿林 赵建宁 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期409-413,共5页

采用盆栽试验,以耐草甘膦大豆M88、抗虫耐草甘膦大豆ZB及常规大豆中黄13为研究对象,比较分析转基因大豆对根际土壤酶活性和养分含量的影响。结果表明,在大豆成熟期时,与常规大豆中黄13相比,M88、ZB根际土壤碱性磷酸酶活性、过氧化氢酶... 采用盆栽试验,以耐草甘膦大豆M88、抗虫耐草甘膦大豆ZB及常规大豆中黄13为研究对象,比较分析转基因大豆对根际土壤酶活性和养分含量的影响。结果表明,在大豆成熟期时,与常规大豆中黄13相比,M88、ZB根际土壤碱性磷酸酶活性、过氧化氢酶活性、速效磷含量无显著差异,硝态氮含量显著下降。根际土壤脲酶活性、铵态氮含量则表现不同,其变化随大豆品种的不同而不同。相较于常规大豆中黄13,M88根际土壤脲酶活性和铵态氮含量无显著差异;ZB根际土壤脲酶活性显著下降,而铵态氮含量则显著上升。 展开更多

关键词 转基因大豆 cp4 epsps耐草甘膦基因 Bt cry1Ab抗虫基因 酶活性 氮含量

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9种大豆制品中转基因成分定性PCR检测 被引量：6

10

作者 孙红炜 路兴波 +3 位作者 杨崇良 尚佑芬 赵玖华 王升吉 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第2期234-237,共4页

本研究从豆粕、豆粉、豆腐等9种大豆产品中提取到高质量的DNA,在对内标准基因Lectin进行扩增的基础上,设计相应的特异性引物,建立了稳定的定性PCR反应体系,对35S启动子基因、外源目的基因Cp4-epsps基因进行了扩增,发现豆粕、豆奶粉、豆... 本研究从豆粕、豆粉、豆腐等9种大豆产品中提取到高质量的DNA,在对内标准基因Lectin进行扩增的基础上,设计相应的特异性引物,建立了稳定的定性PCR反应体系,对35S启动子基因、外源目的基因Cp4-epsps基因进行了扩增,发现豆粕、豆奶粉、豆腐、豆皮、豆豉中含有转基因成分,而其它产品中未发现转基因成分存在。 展开更多

关键词 大豆制品 转基因成分定性检测 Lectin基因 CaMV35S基因 cp4-epsps基因

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微波、超高压处理对转基因大豆外源基因降解的影响 被引量：5

11

作者 王卫国 朱占齐 吴兴泉 《中国粮油学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第2期20-25,共6页

为了考查不同微波和超高压处理条件对转基因大豆外源基因CP4-EPSPS降解的影响。试验对转基因大豆样品分别微波处理1、2、3、4、5 min或分别用100、200、300、400、500 MPa超高压处理10 min,采用PCR检测技术,分析了受处理样品和未处理样... 为了考查不同微波和超高压处理条件对转基因大豆外源基因CP4-EPSPS降解的影响。试验对转基因大豆样品分别微波处理1、2、3、4、5 min或分别用100、200、300、400、500 MPa超高压处理10 min,采用PCR检测技术,分析了受处理样品和未处理样品中大豆外源基因的降解结果。结果表明:在微波处理条件下,抗草甘膦转基因大豆的基因组质量浓度随微波处理时间的增加而降低,当处理时间超过3 min和5 min后,其质量浓度降至9 ng/μL和0 ng/μL,PCR检测结果显示,外源基因已被降解到100 bp以下;超高压处理条件下,抗草甘膦转基因大豆基因组质量浓度随着压力的增加而降低,当压力为500 MPa时,基因组的质量浓度降至40 ng/μL,但仍能检测到1 512 bp长度的外源基因片段。与超高压处理相比,微波处理对大豆外源基因的降解更有效。 展开更多

关键词 转基因大豆 cp4-epsps 微波 超高压 降解

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挤压膨化参数对转基因大豆外源基因降解的影响 被引量：3

12

作者 王卫国 朱占齐 吴兴泉 《中国粮油学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第1期22-26,共5页

采用定性PCR检测技术,分析了不同挤压腔温度、物料水分和螺杆、喂料器转速的组合工艺条件下,挤压膨化对转基因大豆外源基因CP4-EPSPS的影响。研究结果表明,挤压膨化加工是降解转基因大豆外源基因CP4-EPSPS的有效手段。挤压膨化参数中,... 采用定性PCR检测技术,分析了不同挤压腔温度、物料水分和螺杆、喂料器转速的组合工艺条件下,挤压膨化对转基因大豆外源基因CP4-EPSPS的影响。研究结果表明,挤压膨化加工是降解转基因大豆外源基因CP4-EPSPS的有效手段。挤压膨化参数中,对外源基因降解作用由强到弱的顺序为:挤压腔温度>物料水分>螺杆转速或喂料器转速。本试验条件下的最佳挤压膨化参数组合为:挤压腔温度130℃,物料水分20%,螺杆转速72 r/min,喂料器转速88 r/min。在此条件下,大豆外源基因片段可降至206 bp以下而未能检出。 展开更多

关键词 转基因大豆 cp4-epsps 挤压膨化 降解

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食用精炼大豆油DNA提取及单管巢式PCR检测 被引量：10

13

作者 姚芹 宋浩 陈枫 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2013年第21期183-186,共4页

设计了针对转基因Roundup Ready大豆外源基因扩增的内外2对引物,分别位于CaMV35s启动子,CTP基因,CP4EPSPS基因区域,并成功对精炼大豆油中的外源基因进行单管巢式PCR检测。结果表明,用改良试剂盒法和冷冻干燥法提取大豆油中的DNA均可以... 设计了针对转基因Roundup Ready大豆外源基因扩增的内外2对引物,分别位于CaMV35s启动子,CTP基因,CP4EPSPS基因区域,并成功对精炼大豆油中的外源基因进行单管巢式PCR检测。结果表明,用改良试剂盒法和冷冻干燥法提取大豆油中的DNA均可以满足单管巢式PCR检测要求;单管巢式PCR扩增对内外引物的Tm值有特殊要求,外引物的退火温度高于内引物。本实验建立的精炼大豆油转基因成分的单管巢式PCR检测方法特异性强,灵敏度高且快速方便。 展开更多

关键词 精炼大豆油 DNA提取 cp4epsps基因 单管巢式PCR

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草甘膦为筛选标记的水稻高效遗传转化体系的建立 被引量：2

14

作者 袁冰 丁筠 +2 位作者 曹含章 吕尊富 李飞飞 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期559-565,共7页

【目的】建立以日本晴愈伤组织为受体、草甘膦抗性基因CP4为选择标记基因的高效水稻遗传转化体系。【方法】以粳稻日本晴的成熟胚为试验材料,通过农杆菌介导法,将含有草甘膦抗性基因CP4的P1300载体转化日本晴的愈伤组织,分别用质量浓度... 【目的】建立以日本晴愈伤组织为受体、草甘膦抗性基因CP4为选择标记基因的高效水稻遗传转化体系。【方法】以粳稻日本晴的成熟胚为试验材料,通过农杆菌介导法,将含有草甘膦抗性基因CP4的P1300载体转化日本晴的愈伤组织,分别用质量浓度为10、20和40 mg/L的草甘膦进行3轮抗性筛选,诱导分化和再生成苗;利用1000 mg/L草甘膦对移栽成活的阳性苗进行抗性鉴定。【结果】获得145株转基因幼苗,PCR检测阳性株为128株,阳性率达88.27%;经过3轮抗性筛选后,转基因幼苗的阳性率提高;移栽成活的99株阳性苗中,65株表现为抗性,抗性率为65.66%。【结论】成功建立了以草甘膦为筛选标记的水稻转基因体系,该体系为水稻育种提供了材料,并对以抗草甘膦基因作为筛选标记的水稻转基因和一些基因功能验证提供了技术支持。 展开更多

关键词 日本晴愈伤组织 草甘膦抗性基因cp4 农杆菌介导法 高效遗传转化体系

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