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微小隐孢子虫CP15-P23-CP15/60基因的融合表达及抗血清的制备
1
作者
秦培兰
米荣升
+6 位作者
黄燕
周鹏
张国恩
苏庆美
呼高伟
曹薇
陈兆国
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2012年第7期54-59,共6页
以微小隐孢子虫基因组DNA为模板,PCR扩增获得子孢子表面抗原CP15、P23和CP15/60基因。利用重叠延伸PCR(SOE PCR)将该3段基因片段串联在一起,各基因片段之间引入柔性氨基酸接头(GGGGS)编码基因。将串联基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)...
以微小隐孢子虫基因组DNA为模板,PCR扩增获得子孢子表面抗原CP15、P23和CP15/60基因。利用重叠延伸PCR(SOE PCR)将该3段基因片段串联在一起,各基因片段之间引入柔性氨基酸接头(GGGGS)编码基因。将串联基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)上,构建重组表达载体,转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中进行诱导表达,将纯化的重组蛋白免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体。结果表明,获得了CP15-P23-CP15/60融合基因,并在大肠埃希菌中高效表达,Western blot显示重组蛋白能被牛抗微小隐孢子虫阳性血清识别,制备的多克隆抗体能被重组蛋白特异性识别,表明获得的重组蛋白具有较好的抗原性。
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关键词
微小隐孢子虫
cp15-p23-cp15/60融合基因
原核表达
重叠延伸PCR
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题名
微小隐孢子虫CP15-P23-CP15/60基因的融合表达及抗血清的制备
1
作者
秦培兰
米荣升
黄燕
周鹏
张国恩
苏庆美
呼高伟
曹薇
陈兆国
机构
中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室中国农业科学院动物源性食品安全研究中心
出处
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2012年第7期54-59,共6页
基金
国家科技重大专项项目(2012ZX10004220-008)
中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目(2012JB16)
+1 种基金
国家“十一五”科技支撑计划项目(2007BAD40B05)
上海市科技兴农重点攻关项目[沪农科攻字(2005)第3-4号]
文摘
以微小隐孢子虫基因组DNA为模板,PCR扩增获得子孢子表面抗原CP15、P23和CP15/60基因。利用重叠延伸PCR(SOE PCR)将该3段基因片段串联在一起,各基因片段之间引入柔性氨基酸接头(GGGGS)编码基因。将串联基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)上,构建重组表达载体,转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中进行诱导表达,将纯化的重组蛋白免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体。结果表明,获得了CP15-P23-CP15/60融合基因,并在大肠埃希菌中高效表达,Western blot显示重组蛋白能被牛抗微小隐孢子虫阳性血清识别,制备的多克隆抗体能被重组蛋白特异性识别,表明获得的重组蛋白具有较好的抗原性。
关键词
微小隐孢子虫
cp15-p23-cp15/60融合基因
原核表达
重叠延伸PCR
Keywords
Cryptosporidium parvum
cp
15
-p
23
-cp
15/
60
fusion gene
prokaryotic expression
overlapextension PCR
分类号
S852.42 [农业科学—基础兽医学]
Q786 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
微小隐孢子虫CP15-P23-CP15/60基因的融合表达及抗血清的制备
秦培兰
米荣升
黄燕
周鹏
张国恩
苏庆美
呼高伟
曹薇
陈兆国
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2012
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