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猪流行性腹泻病毒COE蛋白在TP309水稻细胞中的表达及纯化
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作者 陈金炫 史倩倩 +6 位作者 潘世源 陈恒耀 寇少康 楚红燕 张磊 张二芹 张改平 《动物医学进展》 北大核心 2025年第4期1-5,共5页
为获得TP309水稻细胞表达的猪流行性腹泻病毒(PEDV)COE蛋白,根据水稻密码子偏爱性优化并合成COE基因,构建植物重组质粒pCAMBIA1300-COE,通过根癌农杆菌EHA105介导法将pCAMBIA1300-COE转入水稻愈伤组织。经过暗培养和潮霉素B筛选新愈伤;... 为获得TP309水稻细胞表达的猪流行性腹泻病毒(PEDV)COE蛋白,根据水稻密码子偏爱性优化并合成COE基因,构建植物重组质粒pCAMBIA1300-COE,通过根癌农杆菌EHA105介导法将pCAMBIA1300-COE转入水稻愈伤组织。经过暗培养和潮霉素B筛选新愈伤;PCR鉴定阳性愈伤;阳性愈伤研磨后制成细胞并进行培养,阳性细胞经无糖诱导培养10 d后,Western blot鉴定表达COE蛋白;并利用Q阴离子层析和MMC阳离子层析纯化COE蛋白。结果显示,经潮霉素筛选获得73个新愈伤,PCR检测有50个阳性愈伤,阳性率约为68.49%,Western blot检测有15个水稻细胞株表达COE蛋白,COE蛋白经Q和MMC纯化后,其纯度达到50%左右。这些研究结果对制备猪流行性腹泻亚单位疫苗具有重要意义。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻 coe蛋白 水稻愈伤 水稻植株 纯化
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表达猪流行性腹泻病毒COE基因的重组乳酸菌的构建与鉴定 被引量:25
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作者 董丽娜 高凤山 +2 位作者 许崇波 胡桂学 姜海龙 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1743-1747,共5页
用疑似患猪流行性腹泻病(PED)的病猪肠病料,根据猪流行性腹泻病毒(PEDV)S糖蛋白基因设计引物进行RT-PCR扩增,获得531 bp的PEDV部分保护性抗原基因,将其克隆入pMD18-T载体后测序,核苷酸序列与PEDV CV777株相应序列的同源性为99.4%。根据... 用疑似患猪流行性腹泻病(PED)的病猪肠病料,根据猪流行性腹泻病毒(PEDV)S糖蛋白基因设计引物进行RT-PCR扩增,获得531 bp的PEDV部分保护性抗原基因,将其克隆入pMD18-T载体后测序,核苷酸序列与PEDV CV777株相应序列的同源性为99.4%。根据测序结果和表达载体特点,设计一对引物,扩增PEDV部分保护性抗原基因(COE基因)501 bp片段。将COE基因与乳酸乳球菌表面表达载体pNZ8149进行连接,电击转化入食品级乳酸乳球菌NZ3900细胞。重组菌以1 ng/mL乳链菌肽(Nisin)诱导,通过SDS-PAGE和Western blot分析,PEDV部分S蛋白成功表达,并具有反应原性。间接免疫荧光试验表明,重组菌表达蛋白定位于菌体细胞表面。 展开更多
关键词 PEDV coe基因 克隆 乳酸乳球菌 表达
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基于广义CoES方法的金融业与房地产业风险溢出研究 被引量:13
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作者 曹洁 雷良海 《运筹与管理》 CSSCI CSCD 北大核心 2021年第4期200-205,共6页
为了克服广义CoVaR只能衡量单一尾部概率下条件风险的局限性,本文提出一种新的风险溢出测度——广义CoES方法,并基于Archimedean Copula函数给出了广义CoES的计算公式。利用该方法对我国金融业与房地产业风险溢出研究的实证结果表明:广... 为了克服广义CoVaR只能衡量单一尾部概率下条件风险的局限性,本文提出一种新的风险溢出测度——广义CoES方法,并基于Archimedean Copula函数给出了广义CoES的计算公式。利用该方法对我国金融业与房地产业风险溢出研究的实证结果表明:广义CoVaR相比于广义CoES低估了金融业与房地产业自身的条件风险;两个行业之间存在动态的、非对称的双向风险溢出,房地产业对金融业的平均风险溢出强度为69.71%,而金融业对房地产业的平均风险溢出强度为65.38%;房地产业对金融业的净风险溢出呈现出顺周期性,即当房地产价格低迷时净风险溢出程度较弱,而当房地产价格走高时净风险溢出程度也随之增强。 展开更多
关键词 广义coeS 广义CoVaR 风险溢出 Archimedean Copula
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猪流行性腹泻病毒COE基因在毕赤酵母中的表达及生物活性分析 被引量:3
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作者 胡青松 李吕木 +4 位作者 张小飞 许发芝 丁小玲 徐延伟 丁维民 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1342-1347,共6页
旨在利用毕赤酵母表达系统表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)COE蛋白,及研究COE蛋白免疫小鼠后产生抗体的中和病毒的能力。根据PEDV S糖蛋白基因设计引物,取患猪流行性腹泻病(PED)的仔猪肠道组织,抽提PEDV的总mRNA,进行RT-PCR扩增,获得PEDV部... 旨在利用毕赤酵母表达系统表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)COE蛋白,及研究COE蛋白免疫小鼠后产生抗体的中和病毒的能力。根据PEDV S糖蛋白基因设计引物,取患猪流行性腹泻病(PED)的仔猪肠道组织,抽提PEDV的总mRNA,进行RT-PCR扩增,获得PEDV部分保护性抗原基因(COE基因)片段。进一步将COE基因导入毕赤酵母表达载体,构建毕赤酵母表达质粒pPIC9K—COE重组质粒,并电转化入酵母感受态细胞GS1 15中,筛选高拷贝阳性重组菌进行诱导表达。利用SDS-PAGE和Western blot分析重组蛋白及其免疫原性,病毒中和试验评价重组蛋白免疫小鼠后血清抗体的病毒中和能力。RT-PCR扩增获得大小为530 bp的PEDV COE基因,该基因在毕赤酵母表达载体中能够正确表达,SDS—PAGE结果显示毕赤酵母表达的COE蛋白大小在27 ku左右,分泌表达量约30 mg·L^(-1)。Western blot表明PEDV COE重组蛋白具有反应原性。中和试验结果表明,PEDV COE重组蛋白免疫小鼠后血清中特异性抗体具有中和活性,中和效价为1:36,而对照则小于1:2。PEDV COE基因可在毕赤酵母中获得分泌表达,且表达的蛋白具有很好的生物学活性。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 coe基因 毕赤酵母表达 中和活性
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猪流行性腹泻病毒COE抗原表位的原核表达及鉴定 被引量:2
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作者 宁昆 杨德全 +6 位作者 葛菲菲 张维谊 齐新永 沈莉萍 徐锋 王建 周锦萍 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第11期25-28,共4页
为更好地了解近年来仔猪流行性腹泻疫情,收集上海地区猪流行性腹泻病猪的临床样品,扩增猪流行性腹泻病毒保护性抗原基因(COE基因),构建原核表达载体pColdⅡ-COE,转化至大肠埃希菌pGTf2/BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE结果显示,表达的COE蛋... 为更好地了解近年来仔猪流行性腹泻疫情,收集上海地区猪流行性腹泻病猪的临床样品,扩增猪流行性腹泻病毒保护性抗原基因(COE基因),构建原核表达载体pColdⅡ-COE,转化至大肠埃希菌pGTf2/BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE结果显示,表达的COE蛋白大小为16ku,Western blot分析表明,该蛋白与临床上猪流行性腹泻病毒阳性猪的血清有特异性反应,说明所表达的COE蛋白具有反应原性,为进一步研制猪流行性腹泻疫苗和ELISA检测方法奠定了基础。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 coe蛋白 表达 反应原性
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饲喂CYP6CM1和Coe1 RNAi双价转基因烟草对Q型烟粉虱抗药性的影响 被引量:3
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作者 常蕾 胡雪虹 +6 位作者 杨郁文 陈天子 邓惠清 姜利农 刘正銮 张保龙 王荣富 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第6期1297-1303,共7页
细胞色素P450酶系和羧酸酯酶在昆虫代谢抗药性中起重要作用,通过RNAi沉默昆虫这两种酶的基因,研究其对Q型烟粉虱抗药性的影响.根据Q型烟粉虱的一个P450基因(CYP6CM1)和一个羧酸酯酶基因(Coe1)的特异区域构建双价RNAi载体,农杆菌介... 细胞色素P450酶系和羧酸酯酶在昆虫代谢抗药性中起重要作用,通过RNAi沉默昆虫这两种酶的基因,研究其对Q型烟粉虱抗药性的影响.根据Q型烟粉虱的一个P450基因(CYP6CM1)和一个羧酸酯酶基因(Coe1)的特异区域构建双价RNAi载体,农杆菌介导转化烟草,PCR检测获得5个单独的To代转基因株系.饲喂烟粉虱T1代转基因烟草,荧光定量PCR检测发现取食转基因烟草的烟粉虱体内CYP6CM1基因和Coe1基因表达量仅为取食非转基因烟草烟粉虱的18% ~24%和17%~33%;通过琼脂保湿浸叶法和单株活体法研究取食T1代转基因烟草的烟粉虱对杀虫剂的效应,结果发现在接触1 g/L阿维·吡虫啉72 h后,2种方法中取食转基因烟草的烟粉虱死亡率分别比取食非转基因烟草的烟粉虱死亡率升高14.77%~16.46%和16.01%~18.51%;同样,接触稀释1 000倍的40%辛硫磷(体积比)72 h后,2种方法中烟粉虱死亡率升高22.94% ~ 23.58%和17.4%~18.76%.以上结果表明,转CYP6CM1-Coe1 RNAi基因烟草可以显著降低烟粉虱CYP6CM1基因和Coe1基因的表达,降低烟粉虱对烟碱类杀虫剂阿维·吡虫啉和有机磷类杀虫剂辛硫磷的抗药性,显著提高杀虫剂的防治效果. 展开更多
关键词 烟粉虱 烟草 CYP6CM1 coe1 RNAI 抗药性
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日本“全球COE计划”研究 被引量:6
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作者 赵俊芳 周天琪 《外国教育研究》 CSSCI 北大核心 2016年第9期107-118,共12页
"全球COE计划"是日本政府继"COE基地计划"、"21世纪COE计划"后实施的又一项高等教育振兴工程,试图通过卓越教育科研基地建设,培养具有创新性、国际化、年轻顶尖的科研人才,建设世界一流大学进而促进本国... "全球COE计划"是日本政府继"COE基地计划"、"21世纪COE计划"后实施的又一项高等教育振兴工程,试图通过卓越教育科研基地建设,培养具有创新性、国际化、年轻顶尖的科研人才,建设世界一流大学进而促进本国经济社会快速发展。在"全球COE计划"实施过程中呈现国家主导推进、确立接续和"内生"发展战略、重视协同合作等实践特点及经验,但也存在行政色彩重、国立大学多、学科差异大等问题,值得关注总结,以为我国世界一流大学建设提供借鉴。 展开更多
关键词 日本 “全球coe计划” 一流大学 国际人才
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猪流行性腹泻病毒流行毒株COE基因的原核表达及免疫原性分析 被引量:4
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作者 霍军 宋予震 董青 《江苏农业科学》 北大核心 2014年第9期34-36,共3页
应用RT-PCR方法从PEDV流行毒株中扩增COE基因,并将其克隆至原核表达载体pET-32a,构建pET-32a-COE重组质粒。将重组质粒转化至宿主菌BL21(DE3)中,加入IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE分析结果显示,该重组蛋白获得了表达,主要以包涵体形式存在... 应用RT-PCR方法从PEDV流行毒株中扩增COE基因,并将其克隆至原核表达载体pET-32a,构建pET-32a-COE重组质粒。将重组质粒转化至宿主菌BL21(DE3)中,加入IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE分析结果显示,该重组蛋白获得了表达,主要以包涵体形式存在,分子量约为35.5 ku;Western-blot分析结果显示,所表达的重组蛋白能与抗PEDV小鼠血清反应。应用纯化的重组蛋白加入弗氏佐剂免疫6周龄BALB/C小鼠并采集血清,ELISA检测抗体效价达1∶3 200以上,说明所表达的蛋白具有良好的免疫原性。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 coe基因 原核表达 免疫原性 诊断抗原 PED基因工程疫苗
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日本COE计划对我国研究型教育发展的启示 被引量:5
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作者 熊国经 熊剑琴 罗丽萍 《科技进步与对策》 CSSCI 北大核心 2005年第11期23-24,共2页
结合日本的第二个科技基本计划的实施,对COE计划的起因和内涵进行分析,探讨日本高等教育为大力培养研究型人才、跟踪或领先世界科技前沿,大力改革教育体制的具体措施和动向。从21世纪科技发展的要求和趋势及日本成功经验出发,给出对我... 结合日本的第二个科技基本计划的实施,对COE计划的起因和内涵进行分析,探讨日本高等教育为大力培养研究型人才、跟踪或领先世界科技前沿,大力改革教育体制的具体措施和动向。从21世纪科技发展的要求和趋势及日本成功经验出发,给出对我国研究型教育发展的启示。 展开更多
关键词 日本 coe计划 诺贝尔奖 科技立国 教育体制
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DII COE研究与分析 被引量:5
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作者 郜宪林 《计算机工程与应用》 CSCD 北大核心 2001年第19期114-116,共3页
研究和分析了美国国防信息基础设施公共操作环境(DIICOE),详细描述了其产生的背景、发展状况、概念、结构、内容和意义。
关键词 国家信息基础设施 DⅡcoe 体系结构 国防建设
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日本“21世纪COE项目”评审委员会构成分析 被引量:1
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作者 刘牧 林芸 《高教发展与评估》 CSSCI 北大核心 2017年第6期43-52,共10页
21世纪COE项目是日本政府为了创建世界一流大学,针对若干高校优势学科进行重点财政资助的一项政策,项目遴选引入了第三方评审机制。通过对21世纪COE项目评审委员会成员构成的实证研究发现,其成员结构虽然力求多样化,但从最终学历出身和... 21世纪COE项目是日本政府为了创建世界一流大学,针对若干高校优势学科进行重点财政资助的一项政策,项目遴选引入了第三方评审机制。通过对21世纪COE项目评审委员会成员构成的实证研究发现,其成员结构虽然力求多样化,但从最终学历出身和职业经历来看,日本国立大学特别是七所旧帝国大学占据了绝对优势地位,项目评审委员会成员存在性别、学历、职历高度集中现象,评审过程中相互庇护和内部利益输送行为的发生概率增加,影响评审的客观、公平与公正。 展开更多
关键词 日本21世纪coe项目 学科评价 学科建设 第三方评审 评审委员会构成
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日本高校COE建设述评 被引量:3
12
作者 聂长顺 《外国教育研究》 CSSCI 北大核心 1998年第4期44-48,共5页
自1995年起,日本开始了高校COE建设的进程。这一进程集中体现了当今日本高校科研发展的基本趋向,即:注重创造性和卓越性,追求高度化和国际化。本文主要对COE的概念、COE建设的动议、动态、动因等问题作一分析和介绍。
关键词 日本 高校 coe
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进口贸易研发知识二次溢出的空间测度——基于Coe-Helpman-Durbin模型的检验 被引量:8
13
作者 刘舜佳 《南方经济》 CSSCI 2013年第8期57-68,共12页
基于知识物化型资本品进口贸易检验国际研发知识溢出效应的Coe-Helpman模型无法测度非物化型隐性知识的溢出效应,本文在考虑到C-H模型所遗漏掉的隐性知识变量具有空间相关性的基础上,将其在空间维度扩展为Coe-Helpman-Durbin模型,以囊... 基于知识物化型资本品进口贸易检验国际研发知识溢出效应的Coe-Helpman模型无法测度非物化型隐性知识的溢出效应,本文在考虑到C-H模型所遗漏掉的隐性知识变量具有空间相关性的基础上,将其在空间维度扩展为Coe-Helpman-Durbin模型,以囊括国际研发知识对进口贸易所在地的首次溢出效应及其对进口贸易所在地以外其他地区的二次溢出效应。中国31省1996-2010年面板数据的检验结果显示:不仅国际研发知识首次溢出提升了进口贸易所在地全要素生产率,而且二次溢出还提升了其他地区全要素生产率,二次溢出效应高于首次溢出效应。提示中国全要素生产率进步主要源自进口贸易带来的非物化型知识在各省间形成的二次扩散,而非直接进口的知识物化型资本品。 展开更多
关键词 coe-Helpman-Durbin模型 知识物化型资本品 非物化型隐性知识 二次溢出
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服务贸易非物化型知识溢出的空间测度——基于修正的Coe-Helpman模型 被引量:1
14
作者 刘舜佳 生延超 《南方经济》 CSSCI 2014年第11期43-66,共24页
有别于有形货物贸易溢出的物化型知识,本文基于无形服务贸易溢出的非物化型知识所具有的空间属性,将货物贸易知识溢出研究的标准线性范式Coe-Helpman模型在空间维度扩展成为非线性Coe-Helpman-Durbin模型,除了保留对贸易进口地首次溢出... 有别于有形货物贸易溢出的物化型知识,本文基于无形服务贸易溢出的非物化型知识所具有的空间属性,将货物贸易知识溢出研究的标准线性范式Coe-Helpman模型在空间维度扩展成为非线性Coe-Helpman-Durbin模型,除了保留对贸易进口地首次溢出效应的检验,还增加了对贸易进口地以外毗邻地区二次溢出效应的检验。基于中国31省1992-2011年面板数据的检验结果表明服务贸易非物化型知识在服务进口地及其毗邻地区表现出截然相反的溢出效应,首次溢出没有提升服务进口地的全要素生产率及技术进步率、技术效率,二次溢出却显著提升了进口地以外毗邻地区的全要素生产率及技术进步率、技术效率。 展开更多
关键词 服务贸易 物化型知识 非物化型知识 coe-Helpman模型 空间溢出效应
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数字化COE模式的研究及在航空发动机叶片中的应用 被引量:2
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作者 杨海 宁诺拉 白代敏 《航空制造技术》 北大核心 2014年第23期36-39,共4页
通过发动机叶片数字化COE模式的应用实践,验证了航空发动机零件加工COE模型的数字化解决方案,对航空发动机装配、修理等业务模型的COE具有一定的借鉴意义。
关键词 航空发动机叶片 coe 数字化 应用 发动机装配 零件加工 业务模型 E模型
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DII COE的一致性等级及度量方法
16
作者 郜宪林 《计算机工程与应用》 CSCD 北大核心 2002年第5期79-82,共4页
基于对DIICOE的深入研究,该文介绍了DIICOE的一致性等级及度量方法,并介绍了DIICOE的互操作性等级及其与一致性等级的关系。
关键词 DIIcoe 一致性 互操作性 度量 信息系统 国防 美国
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东亚幼儿保育和教育动向——21世纪COE工程日本福祉大学2004年度研讨会纪实
17
作者 唐淑 《学前教育研究》 北大核心 2005年第6期60-60,共1页
2004年10月8日至11日,在日本名古屋市召开了“2l世纪COE工程日本福祉大学2004年度研讨会”。来自中国、韩国、日本的数百名专家学者出席了此次会议,对三国育儿支援活动的方针政策进行了深入考察和探讨。
关键词 2004年度 研讨会 coe 日本 21世纪 幼儿保育 大学 工程 2004年10月 纪实 东亚 专家学者 方针政策 会议 活动
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COE MNI——我国IT技术应用发展的两大技术策略
18
作者 屈延文 《信息网络安全》 2001年第4期20-23,共4页
IT技术发展现状 从IT垄断厂商技术发展政策来看IT技术发展 Microsoft.NET计划是微软公司一项新的发展规划,而提出"注意力"集中、"操作力"强劲、"主动力"显著的.NET计划,为互联网络提供新的信息应用平台,... IT技术发展现状 从IT垄断厂商技术发展政策来看IT技术发展 Microsoft.NET计划是微软公司一项新的发展规划,而提出"注意力"集中、"操作力"强劲、"主动力"显著的.NET计划,为互联网络提供新的信息应用平台,企图在网络信息平台领域继续垄断,是Microsoft公司的COE(公共操作环境的网络信息平台)计划.各计算机国际大厂商主要把自己定位在ASP,在互联网上开放某项技术而成立会员制机构,IT厂商要实施网络下载软件销售是必然的趋势,形成网上行会,建立企业电子商务的公共操作环境网络信息平台,在网络上"跑马圈地". 展开更多
关键词 计算机操作系统 coe MNI 多网融合 美国国防部 监控网络系统 网络线 IT 区域集团化 网络信息平台 宽带网络
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猪流行性腹泻病毒coe基因的克隆表达及卵黄抗体的制备 被引量:5
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作者 朱文姣 常琛 +4 位作者 朱玉虎 周国丽 尹志安 杨国庆 刘慧敏 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期560-565,共6页
通过RT-PCR技术扩增猪流行性腹泻病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV)coe基因,将其克隆至原核表达载体p ET32a中,构建重组表达质粒p ET32a-coe,鉴定正确后进行诱导表达。结果表明,重组菌可表达相对分子量约为33 k D的融合蛋白;W... 通过RT-PCR技术扩增猪流行性腹泻病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV)coe基因,将其克隆至原核表达载体p ET32a中,构建重组表达质粒p ET32a-coe,鉴定正确后进行诱导表达。结果表明,重组菌可表达相对分子量约为33 k D的融合蛋白;Western-Blotting结果显示,COE蛋白能与抗PEDV的阳性血清发生特异性结合反应,表明研究的COE蛋白具有良好的反应原性。纯化后的COE蛋白与弗氏佐剂按比率混合作为免疫抗原,免疫产蛋鸡,获得特异性抗猪流性腹泻病毒COE蛋白的卵黄抗体(Ig Y)。氯仿抽提法提取卵黄抗体,通过SDSPAGE、Western-Blotting对提取的卵黄抗体进行鉴定并用间接酶联免疫吸附实验(ELISA)对其进行效价检测。结果显示,纯化后的卵黄抗体Ig Y具有高度的特异性,其抗体效价可达1∶1 000。研究结果表明,表达的COE蛋白具有良好的免疫原性,作为免疫抗原制备的卵黄抗体具有较高的抗体效价。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻 coe蛋白 卵黄抗体
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基于HAC-广义多维CoES模型的股票市场风险溢出研究 被引量:4
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作者 曹洁 雷良海 《统计研究》 CSSCI 北大核心 2022年第3期142-153,共12页
为了精确测度多重金融风险溢出效应,本文在多维CoVaR方法的基础上提出能够度量整个尾部预期损失的广义多维CoES方法,并基于分层阿基米德Copula(HAC)给出了广义多维CoES的计算公式.基于HAC-广义多维CoES模型对中国、美国、中国香港股票... 为了精确测度多重金融风险溢出效应,本文在多维CoVaR方法的基础上提出能够度量整个尾部预期损失的广义多维CoES方法,并基于分层阿基米德Copula(HAC)给出了广义多维CoES的计算公式.基于HAC-广义多维CoES模型对中国、美国、中国香港股票市场间风险溢出效应的实证研究表明:美国与中国香港的股票市场对中国股票市场的风险溢出存在显著的叠加效应,失败率检验结果显示广义多维CoES相对于多维CoVaR具有更高的准确性;广义多维CoES的动态走势显示中国股票市场受到美国股市与中国香港股市的多重风险溢出效应,呈现顺周期性;稳健性检验结果显示,基于HAC模型度量广义多维CoES的计算方法具有较好的稳健性.HAC-广义多维CoES模型为监管者和投资者识别多个金融市场之间可能存在的风险溢出叠加效应提供了有效的实践应用工具. 展开更多
关键词 广义多维coeS 多维CoVaR 分层阿基米德Copula 风险溢出 股票市场
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