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实时定量RT-PCR监测造血干细胞移植前后CML28mRNA表达被引量：4: 1; 作者张东华戴敏 +5 位作者周红升汪涯雅张路张丽王斌曹文静《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2005年第5期843-847,共5页; 本研究的目的在于建立检测CML28mRNA的SYBRGreenI实时定量PCR(RQPCR)的方法,并探讨CML28表达水平与异基因造血干细胞移植(AlloHSCT)后白血病复发之间的相关性,为此构建了pcDNA3.1HisACML28质粒作为定量模板,选择14例白血病患者进行研究... 展开更多; 关键词白血病 ALLO-HSCT cml28 实时定量RT-PCR SYBR Green Ⅰ; 在线阅读下载PDF 职称材料

CML28树突状细胞核酸疫苗的构建及其表达研究(英文) 被引量：6: 2; 作者张东华周红升 +3 位作者汪涯雅刘文励黄振倩谭获《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2005年第4期631-636,共6页; 为了构建负载CML28的核酸疫苗,并在树突状细胞中进行表达,用分子克隆的方法,从K562细胞中克隆出CML28的cDNA全长,将其亚克隆至pGEM-T载体,经测序后酶切,克隆至真核表达载体pcDNA3.1HisA,将重组质粒pcDNA3.1HisA-CML28进行酶切分析和测... 展开更多; 关键词 cml28 树突状细胞核酸疫苗; 在线阅读下载PDF 职称材料

GST-CML28融合蛋白的表达和纯化及多克隆抗体制备: 3; 作者毛霞张冰 +2 位作者白雪玲刘龙龙张东华《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期1302-1306,共5页; 本研究探讨GST-CML28融合蛋白的表达及抗体制备。CML28-pGEX-3X重组质粒转化BL21大肠杆菌,提取细菌蛋白后用GSTrap FF纯化柱进行纯化。将纯化后的融合蛋白免疫家兔,制备CML28抗血清;免疫血清用CNBr-activated Sepharose 4B层析柱进行纯... 展开更多; 关键词 cml28 GST-cml28融合蛋白多克隆抗体; 在线阅读下载PDF 职称材料

携带CML28基因的2型重组腺相关病毒的构建及体外转染树突状细胞: 4; 作者解丽华冼韵仪 +1 位作者谢雍谢毅《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期574-580,共7页; 目的构建携带肿瘤抗原CML28基因的2型重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV2/CML28),检测其体外转染人树突状细胞(dendritic cells,DCs)后对DCs的影响和目的基因CML28的表达。方法将CML28基因克隆到2型重组腺相关病... 展开更多; 关键词 2型重组腺相关病毒 cml28基因树突状细胞肿瘤免疫; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名实时定量RT-PCR监测造血干细胞移植前后CML28mRNA表达被引量：4: 1; 作者张东华戴敏周红升汪涯雅张路张丽王斌曹文静; 机构华中科技大学同济医学院附属同济医院血液科华中科技大学同济医学院附属同济医院检验科; 出处《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2005年第5期843-847,共5页; 基金湖北省卫生厅资助项目(编号:JX1B047); 文摘本研究的目的在于建立检测CML28mRNA的SYBRGreenI实时定量PCR(RQPCR)的方法,并探讨CML28表达水平与异基因造血干细胞移植(AlloHSCT)后白血病复发之间的相关性,为此构建了pcDNA3.1HisACML28质粒作为定量模板,选择14例白血病患者进行研究。14例患者包括:10例慢性髓系白血病(CML),3例急性髓系白血病(AML),1例Ph阳性急性淋巴细胞白血病(Ph+ALL)。应用RocheLightCyclerPCR仪动态监测患者移植前后不同时间段的50份骨髓单个核细胞中CML28表达水平。研究结果表明:RQPCR的灵敏度为10-4(0.05ng)水平,标准品日间差及日内差均小于10%,重复性好。初治组中AML和CML加速期(CMLAP)与急变期(CMLBC)患者CML28呈高表达(6.58±2.34)×10-2,预处理前组CML28水平为(2.19±0.32)×10-2,移植后1月组CML28水平为(1.35±1.28)×10-2,移植后3月及以后组(以下简称移植后3月组)CML28水平为(4.57±6.39)×10-3。定期随访表明,3例CMLAP或BC患者与1例CML慢性期(CMLCP)患者,在AlloHSCT3个月后检测仍呈阳性,其中2例CML28mRNA的水平<2×10-2,获无病生存;2例CML28水平>2×10-2者,一年内均出现复发,其中1例死亡,另1例行第2次AlloHSCT后CML28水平虽然迅速下降,但仍>2×10-2,2个月后再次复发。结论:CML28水平与疾病的演变过程存在良好的相关性,对于造血干细胞移植受者,动态监测CML28水平比单一的结果价值更大,实时定量检测移植后CML28水平对预测白血病复发有一定的意义。; 关键词白血病 ALLO-HSCT cml28 实时定量RT-PCR SYBR Green Ⅰ; Keywords Leukemia AIIo-HSCT cml28 Real-time quantitative RT-PCR SYBR Green I; 分类号 R733.72 [医药卫生—肿瘤] R457.7 [医药卫生—治疗学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名CML28树突状细胞核酸疫苗的构建及其表达研究(英文) 被引量：6: 2; 作者张东华周红升汪涯雅刘文励黄振倩谭获; 机构华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所造血干细胞移植研究室广州医学院附属第一医院肿瘤血液中心; 出处《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2005年第4期631-636,共6页; 基金 ThisProjectwassupportedbyCommitteeofScienceandTechnologyofHubeiProvince(No.2002AA304B06)andHealthBureauofHubeiprovince(No.JX1B047); 文摘为了构建负载CML28的核酸疫苗,并在树突状细胞中进行表达,用分子克隆的方法,从K562细胞中克隆出CML28的cDNA全长,将其亚克隆至pGEM-T载体,经测序后酶切,克隆至真核表达载体pcDNA3.1HisA,将重组质粒pcDNA3.1HisA-CML28进行酶切分析和测序鉴定;从正常人外周血中分离外周血单个核细胞(PBMC),在IL-4和GM-CSF条件下诱导分化为树突状细胞(DC),并进行鉴定;用电穿孔的方法将重组质粒pcDNA3.1HisA-CML28导入到DC中,WesternBlot检测His-CML28融合蛋白的表达。结果表明:经酶切分析和测序鉴定,重组质粒pcDNA3.1HisA-CML28含有正确的CML28全长序列;经电穿孔导入DC后,重组质粒能表达His-CML28蛋白。结论:成功构建了CML28树突状细胞核酸疫苗。; 关键词 cml28 树突状细胞核酸疫苗; Keywords cml28 dendritic cell nucleic acid vaccine; 分类号 R392.11 [医药卫生—免疫学] Q789 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名GST-CML28融合蛋白的表达和纯化及多克隆抗体制备: 3; 作者毛霞张冰白雪玲刘龙龙张东华; 机构华中科技大学同济医学院附属同济医院血液内科武警河南总队洛阳市支队卫生队; 出处《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期1302-1306,共5页; 文摘本研究探讨GST-CML28融合蛋白的表达及抗体制备。CML28-pGEX-3X重组质粒转化BL21大肠杆菌,提取细菌蛋白后用GSTrap FF纯化柱进行纯化。将纯化后的融合蛋白免疫家兔,制备CML28抗血清;免疫血清用CNBr-activated Sepharose 4B层析柱进行纯化,获得多克隆抗体。结果表明,获得的抗体能够满足针对CML28的ELISA、Western blot、免疫组织化学和量子点荧光检测的实验要求。结论:成功制备了高特异性,高效价的抗人CML28多克隆抗体,为今后深入研究其生物学功能提供了有用的实验工具。; 关键词 cml28 GST-cml28融合蛋白多克隆抗体; Keywords cml28 GST-cml28 fusion protein polyclonal antibody; 分类号 R733.71 [医药卫生—肿瘤] Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名携带CML28基因的2型重组腺相关病毒的构建及体外转染树突状细胞: 4; 作者解丽华冼韵仪谢雍谢毅; 机构复旦大学附属华山医院血液科香港科技大学生物系; 出处《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期574-580,共7页; 基金教育部归国留学人员科研启动基金项目(2005); 文摘目的构建携带肿瘤抗原CML28基因的2型重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV2/CML28),检测其体外转染人树突状细胞(dendritic cells,DCs)后对DCs的影响和目的基因CML28的表达。方法将CML28基因克隆到2型重组腺相关病毒载体系统(AAV Helper-Free System)中的真核表达质粒pAAV-IRES-hrGFP,将酶切和DNA测序鉴定后的重组表达质粒pAAV-CML28-hrGFP与AAV Helper-FreeSystem中的病毒包装辅助质粒pAAV-RC和pHelper以磷酸钙法共转染AAV-293细胞,制备携带CML28基因的重组腺相关病毒rAAV2/CML28。rAAV2/CML28转染体外培养的DCs,RT-PCR法检测CML28的表达,流式细胞术检测DCs的表面分子和rAAV2/CML28转染DCs的效率。结果流式细胞术证实构建并包装了rAAV2/CML28,该病毒对DCs的转染效率接近30%,病毒转染DCs检测到CML28的表达以及高水平的HLA-DR,CD80,CD83和CD86表达。结论成功构建了携带CML28基因的重组腺相关病毒rAAV2/CML28,该病毒介导目的基因在DCs内表达,DCs的成熟没有因病毒转染受到不良影响,为应用CML28转基因DCs诱导CML28特异性抗肿瘤免疫研究奠定了基础。; 关键词 2型重组腺相关病毒 cml28基因树突状细胞肿瘤免疫; Keywords type 2 recombinant adeno-associated virus cml28 gene dendritic cells cancer immunology; 分类号 R733.72 [医药卫生—肿瘤]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	实时定量RT-PCR监测造血干细胞移植前后CML28mRNA表达	张东华戴敏周红升汪涯雅张路张丽王斌曹文静	《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD	2005	4	在线阅读下载PDF 职称材料
2	CML28树突状细胞核酸疫苗的构建及其表达研究(英文)	张东华周红升汪涯雅刘文励黄振倩谭获	《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD	2005	6	在线阅读下载PDF 职称材料
3	GST-CML28融合蛋白的表达和纯化及多克隆抗体制备	毛霞张冰白雪玲刘龙龙张东华	《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2012	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	携带CML28基因的2型重组腺相关病毒的构建及体外转染树突状细胞	解丽华冼韵仪谢雍谢毅	《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2009	0	在线阅读下载PDF 职称材料