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表达血小板膜糖蛋白GPIb-Ⅸ复合物的中国仓鼠卵巢细胞株研究模型的建立
1
作者
廖翊
张卫林
+5 位作者
元艳宏
史权威
李素萍
闫荣
王志成
戴克胜
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
2009年第6期1560-1563,共4页
本研究旨在建立表达重组野生型和突变型血小板膜糖蛋白GPIb-Ⅸ复合物的中国仓鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary,CHO)细胞研究模型,为进行GPIb-Ⅸ生理功能的相关研究奠定基础。从表达野生型或缺失突变型GPIbα的大肠杆菌宿主菌中抽提质粒并...
本研究旨在建立表达重组野生型和突变型血小板膜糖蛋白GPIb-Ⅸ复合物的中国仓鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary,CHO)细胞研究模型,为进行GPIb-Ⅸ生理功能的相关研究奠定基础。从表达野生型或缺失突变型GPIbα的大肠杆菌宿主菌中抽提质粒并用EcoRI酶切鉴定,然后将分别表达GPIbα、GPIbβ和GPIX3种基因的质粒共转染到中国仓鼠卵巢细胞中,通过免疫共沉淀、Western blot和流式细胞仪检测其表达效果。结果表明,转染48小时后,CHO细胞裂解物和细胞表面均可检测到GPIb-Ⅸ复合物的表达。结论:成功构建了表达血小板膜糖蛋白GPIb-Ⅸ复合物的CHO细胞研究模型。
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关键词
血小板膜糖蛋白
GPIb—IX复合物
cho细胞株
在线阅读
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职称材料
ICAM-1-GFP的构建及其与Molt-4细胞的结合(英文)
2
作者
陈卫华
达万明
高春记
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
2009年第3期650-655,共6页
本研究构建人细胞间黏附分子1(ICAM-1)全长基因的真核表达载体pEGFP-C1-ICAM-1,转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1)细胞株,并检测其在CHO细胞中的表达及与Molt-4细胞的结合。采用RT-PCR法从健康人外周血中分离单个核细胞,钓取ICAM-1全长基因(...
本研究构建人细胞间黏附分子1(ICAM-1)全长基因的真核表达载体pEGFP-C1-ICAM-1,转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1)细胞株,并检测其在CHO细胞中的表达及与Molt-4细胞的结合。采用RT-PCR法从健康人外周血中分离单个核细胞,钓取ICAM-1全长基因(1622bp),与pMD18-T载体连接做全自动序列测定。将测序正确的克隆质粒pMD18-T-ICAM-1和表达载体pEGFP-C1分别用HindⅢ和Ⅰ进行双酶切,应用基因重组技术构建ICAM-1全长基因真核表达载体pEGFP-C1-ICAM-1,质粒经HindⅢ和SacII双酶切和PCR电泳鉴定后,采用脂质体转染法转染CHO细胞,并进行G418筛选。用RT-PCR、流式细胞术和荧光显微术检测ICAM-1-GFP的表达及亚细胞的定位,用检测ICAM-1-GFP/CHO细胞与Molt-4细胞的结合能力评价ICAM-1-GFP融合蛋白的功能。结果表明:重组质粒经限制性酶切鉴定得到与ICAM-1全长基因长度一致(1622bp)的酶切产物;测序分析证实,PCR产物与GenBank上登录的ICAM-1基因(NM_000201)序列完全一致,表明成功地完成了ICAM-1的扩增和表达载体的构建;荧光显微镜下可见转染的CHO细胞有绿色荧光蛋白的表达,表达的融合蛋白较均匀地分布于整个细胞;FACS检测ICAM-1-GFP的荧光转染率为(13±5.5)%,表明ICAM-1-GFP基因进入到CHO细胞并获得了有效表达,成功构建了ICAM-1-GFP/CHO细胞,并且ICAM-1-GFP/CHO细胞能够结合PMA处理的Molt-4细胞。结论:成功构建了ICAM-1-GFP真核表达载体,构建的ICAM-1-GFP真核表达载体在CHO细胞内稳定表达,ICAM-1-GFP/CHO细胞能与Molt-4细胞结合,这为进一步研究ICAM-1分子的功能打下基础。
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关键词
细胞
间黏附分子-1
增强型绿色荧光蛋白
MOLT-4
细胞
cho细胞株
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职称材料
题名
表达血小板膜糖蛋白GPIb-Ⅸ复合物的中国仓鼠卵巢细胞株研究模型的建立
1
作者
廖翊
张卫林
元艳宏
史权威
李素萍
闫荣
王志成
戴克胜
机构
北京航空航天大学生物与医学工程学院
出处
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
2009年第6期1560-1563,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目,编号:30770795
文摘
本研究旨在建立表达重组野生型和突变型血小板膜糖蛋白GPIb-Ⅸ复合物的中国仓鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary,CHO)细胞研究模型,为进行GPIb-Ⅸ生理功能的相关研究奠定基础。从表达野生型或缺失突变型GPIbα的大肠杆菌宿主菌中抽提质粒并用EcoRI酶切鉴定,然后将分别表达GPIbα、GPIbβ和GPIX3种基因的质粒共转染到中国仓鼠卵巢细胞中,通过免疫共沉淀、Western blot和流式细胞仪检测其表达效果。结果表明,转染48小时后,CHO细胞裂解物和细胞表面均可检测到GPIb-Ⅸ复合物的表达。结论:成功构建了表达血小板膜糖蛋白GPIb-Ⅸ复合物的CHO细胞研究模型。
关键词
血小板膜糖蛋白
GPIb—IX复合物
cho细胞株
Keywords
platelet glycoprotein
GPIb- IX complex
cho
cell line
分类号
R331.143 [医药卫生—人体生理学]
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职称材料
题名
ICAM-1-GFP的构建及其与Molt-4细胞的结合(英文)
2
作者
陈卫华
达万明
高春记
机构
中国人民解放军总医院血液科
出处
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
2009年第3期650-655,共6页
基金
supported by a grant from the National Natural Science Foundation of China (No.30570776)
文摘
本研究构建人细胞间黏附分子1(ICAM-1)全长基因的真核表达载体pEGFP-C1-ICAM-1,转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1)细胞株,并检测其在CHO细胞中的表达及与Molt-4细胞的结合。采用RT-PCR法从健康人外周血中分离单个核细胞,钓取ICAM-1全长基因(1622bp),与pMD18-T载体连接做全自动序列测定。将测序正确的克隆质粒pMD18-T-ICAM-1和表达载体pEGFP-C1分别用HindⅢ和Ⅰ进行双酶切,应用基因重组技术构建ICAM-1全长基因真核表达载体pEGFP-C1-ICAM-1,质粒经HindⅢ和SacII双酶切和PCR电泳鉴定后,采用脂质体转染法转染CHO细胞,并进行G418筛选。用RT-PCR、流式细胞术和荧光显微术检测ICAM-1-GFP的表达及亚细胞的定位,用检测ICAM-1-GFP/CHO细胞与Molt-4细胞的结合能力评价ICAM-1-GFP融合蛋白的功能。结果表明:重组质粒经限制性酶切鉴定得到与ICAM-1全长基因长度一致(1622bp)的酶切产物;测序分析证实,PCR产物与GenBank上登录的ICAM-1基因(NM_000201)序列完全一致,表明成功地完成了ICAM-1的扩增和表达载体的构建;荧光显微镜下可见转染的CHO细胞有绿色荧光蛋白的表达,表达的融合蛋白较均匀地分布于整个细胞;FACS检测ICAM-1-GFP的荧光转染率为(13±5.5)%,表明ICAM-1-GFP基因进入到CHO细胞并获得了有效表达,成功构建了ICAM-1-GFP/CHO细胞,并且ICAM-1-GFP/CHO细胞能够结合PMA处理的Molt-4细胞。结论:成功构建了ICAM-1-GFP真核表达载体,构建的ICAM-1-GFP真核表达载体在CHO细胞内稳定表达,ICAM-1-GFP/CHO细胞能与Molt-4细胞结合,这为进一步研究ICAM-1分子的功能打下基础。
关键词
细胞
间黏附分子-1
增强型绿色荧光蛋白
MOLT-4
细胞
cho细胞株
Keywords
ICAM-1
GFP
Molt-4 cell
cho
cell line
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
R733.7 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
表达血小板膜糖蛋白GPIb-Ⅸ复合物的中国仓鼠卵巢细胞株研究模型的建立
廖翊
张卫林
元艳宏
史权威
李素萍
闫荣
王志成
戴克胜
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
2009
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
ICAM-1-GFP的构建及其与Molt-4细胞的结合(英文)
陈卫华
达万明
高春记
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
2009
0
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