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用天冬酰胺代替谷氨酰胺培养产尿激酶原CHO工程细胞
1
作者
陈昭烈
刘红
+2 位作者
吴本传
李世崇
林福玉
《生物技术通报》
CAS
CSCD
2001年第2期25-27,共3页
以产尿激酶原CHO工程细胞CL - 11G的细胞生长和目的产物的表达为观察指标 ,对用天冬酰胺替代培养基中谷氨酰胺的可行性进行研究。结果表明 ,溶液中游离态的天冬酰胺的自发分解速度明显低于谷氨酰胺 ,用天冬酰胺替代培基中的谷氨酰胺培养...
以产尿激酶原CHO工程细胞CL - 11G的细胞生长和目的产物的表达为观察指标 ,对用天冬酰胺替代培养基中谷氨酰胺的可行性进行研究。结果表明 ,溶液中游离态的天冬酰胺的自发分解速度明显低于谷氨酰胺 ,用天冬酰胺替代培基中的谷氨酰胺培养 11G细胞不影响细胞的生长和目的产物的表达 。
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关键词
细胞
培养
cho工程细胞
尿激酶原
氨
培养基
天冬酰胺
谷氨酰胺
替代品
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职称材料
应用荧光原位杂交技术检测康柏西普基因在CHO细胞染色体上的整合状态
被引量：
2
2
作者
师明磊
赖维莉
+2 位作者
易天红
柯潇
赵志虎
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第4期326-332,共7页
CHO细胞是常用的哺乳动物表达工程细胞。外源基因整合至CHO细胞染色体后,在大规模蛋白质生产过程中,由于相关压力撤除,外源基因存在丢失的可能,因此有必要对其整合稳定性进行检测。康柏西普(conbercept)是一个能够特异性结合VEGF-A的各...
CHO细胞是常用的哺乳动物表达工程细胞。外源基因整合至CHO细胞染色体后,在大规模蛋白质生产过程中,由于相关压力撤除,外源基因存在丢失的可能,因此有必要对其整合稳定性进行检测。康柏西普(conbercept)是一个能够特异性结合VEGF-A的各种异构体、VEGF-B以及PlGF,从而发挥抗血管生成活性的融合蛋白。康柏西普目前已在美国进入Ⅲ期临床试验。本文运用荧光原位杂交对康柏西普基因在CHO细胞的整合状态进行了检测,发现经过4和19次传代后,康柏西普基因依然能稳定整合在基因组上,并且呈现出3个特点:(1)分布在一条染色体上,而不是多条染色体上;(2)分布在较长的染色体上;(3)在同一染色体上有较多拷贝数。同时,荧光定量PCR结果证明基因拷贝数无明显改变,ELISA检测证明蛋白表达水平亦无明显改变。上述实验证明在经过19次传代以后,康柏西普基因仍然稳定整合在基因组中,并可活跃表达,为康柏西普大规模生产及产品质控提供了有力依据。
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关键词
荧光原位杂交
康柏西普
cho工程细胞
基因组整合
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职称材料
HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid真核表达载体的构建及其稳定表达细胞株的建立
被引量：
4
3
作者
白文栋
席文锦
+5 位作者
王芳
王丽娟
杨韬
彭红艳
孟艳玲
杨安钢
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第1期94-96,共3页
目的:构建HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid真核表达载体,并运用Flp-InTM定点整合表达系统建立稳定表达该细胞的CHO工程细胞株。方法:应用PCR技术以pcMV-e23sFv-Fdt-tBid为模板扩增e23sFv-Fdt-tBid片段,并将其克隆入pcDNA5/FRT载...
目的:构建HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid真核表达载体,并运用Flp-InTM定点整合表达系统建立稳定表达该细胞的CHO工程细胞株。方法:应用PCR技术以pcMV-e23sFv-Fdt-tBid为模板扩增e23sFv-Fdt-tBid片段,并将其克隆入pcDNA5/FRT载体中;通过Flp-InTM定点整合表达系统将e23sFv-Fdt-tBid整合入Flp-lnTM CHO细胞的基因组中一个单拷贝位点上,以适当的潮霉素B筛选定点整合e23sFv-Fdt-tBid cDNA的细胞克隆;通过基因组PCR技术和Westernblot技术检测e23sFv-Fdt-tBid基因的整合及该蛋白表达。结果:成功构建了pcDNA5/FRT-e23sFv-Fdt-tBid表达载体;成功通过Flp-InTM定点整合表达系统建立稳定表达e23sFv-Fdt-tBid蛋白的CHO工程细胞株;成功通过基因组PCR技术及基因组PCR技术和Western blot技术检测了e23sFv-Fdt-tBid基因的整合及该蛋白表达。结论:成功地构建了HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid真核表达载体并建立了稳定表达该蛋白的CHO工程细胞株,为该蛋白的应用研究奠定了重要基础。
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关键词
免疫促凋亡蛋白
HER2
真核表达
定点整合
cho工程细胞
株
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职称材料
题名
用天冬酰胺代替谷氨酰胺培养产尿激酶原CHO工程细胞
1
作者
陈昭烈
刘红
吴本传
李世崇
林福玉
机构
军事医学科学院生物工程研究所
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
2001年第2期25-27,共3页
文摘
以产尿激酶原CHO工程细胞CL - 11G的细胞生长和目的产物的表达为观察指标 ,对用天冬酰胺替代培养基中谷氨酰胺的可行性进行研究。结果表明 ,溶液中游离态的天冬酰胺的自发分解速度明显低于谷氨酰胺 ,用天冬酰胺替代培基中的谷氨酰胺培养 11G细胞不影响细胞的生长和目的产物的表达 。
关键词
细胞
培养
cho工程细胞
尿激酶原
氨
培养基
天冬酰胺
谷氨酰胺
替代品
Keywords
cell culture
recombinant
cho
cells
prourokinase
ammonia
分类号
Q816 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
应用荧光原位杂交技术检测康柏西普基因在CHO细胞染色体上的整合状态
被引量：
2
2
作者
师明磊
赖维莉
易天红
柯潇
赵志虎
机构
军事医学科学院生物工程研究所
成都康弘生物科技有限公司
出处
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第4期326-332,共7页
文摘
CHO细胞是常用的哺乳动物表达工程细胞。外源基因整合至CHO细胞染色体后,在大规模蛋白质生产过程中,由于相关压力撤除,外源基因存在丢失的可能,因此有必要对其整合稳定性进行检测。康柏西普(conbercept)是一个能够特异性结合VEGF-A的各种异构体、VEGF-B以及PlGF,从而发挥抗血管生成活性的融合蛋白。康柏西普目前已在美国进入Ⅲ期临床试验。本文运用荧光原位杂交对康柏西普基因在CHO细胞的整合状态进行了检测,发现经过4和19次传代后,康柏西普基因依然能稳定整合在基因组上,并且呈现出3个特点:(1)分布在一条染色体上,而不是多条染色体上;(2)分布在较长的染色体上;(3)在同一染色体上有较多拷贝数。同时,荧光定量PCR结果证明基因拷贝数无明显改变,ELISA检测证明蛋白表达水平亦无明显改变。上述实验证明在经过19次传代以后,康柏西普基因仍然稳定整合在基因组中,并可活跃表达,为康柏西普大规模生产及产品质控提供了有力依据。
关键词
荧光原位杂交
康柏西普
cho工程细胞
基因组整合
Keywords
fluorescence in situ hybridization（FISH）
conbercept
cho
cell
chromosome integration
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
在线阅读
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职称材料
题名
HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid真核表达载体的构建及其稳定表达细胞株的建立
被引量：
4
3
作者
白文栋
席文锦
王芳
王丽娟
杨韬
彭红艳
孟艳玲
杨安钢
机构
第四军医大学国家肿瘤生物学重点实验室
第四军医大学免疫学教研室
第四军医大学微生物学教研室
西安交通大学医学院第一附属医院
第四军医大学西京医院内分泌科
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第1期94-96,共3页
基金
国家自然科学基金资助项目(81001015/H1611)
文摘
目的:构建HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid真核表达载体,并运用Flp-InTM定点整合表达系统建立稳定表达该细胞的CHO工程细胞株。方法:应用PCR技术以pcMV-e23sFv-Fdt-tBid为模板扩增e23sFv-Fdt-tBid片段,并将其克隆入pcDNA5/FRT载体中;通过Flp-InTM定点整合表达系统将e23sFv-Fdt-tBid整合入Flp-lnTM CHO细胞的基因组中一个单拷贝位点上,以适当的潮霉素B筛选定点整合e23sFv-Fdt-tBid cDNA的细胞克隆;通过基因组PCR技术和Westernblot技术检测e23sFv-Fdt-tBid基因的整合及该蛋白表达。结果:成功构建了pcDNA5/FRT-e23sFv-Fdt-tBid表达载体;成功通过Flp-InTM定点整合表达系统建立稳定表达e23sFv-Fdt-tBid蛋白的CHO工程细胞株;成功通过基因组PCR技术及基因组PCR技术和Western blot技术检测了e23sFv-Fdt-tBid基因的整合及该蛋白表达。结论:成功地构建了HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid真核表达载体并建立了稳定表达该蛋白的CHO工程细胞株,为该蛋白的应用研究奠定了重要基础。
关键词
免疫促凋亡蛋白
HER2
真核表达
定点整合
cho工程细胞
株
分类号
R392.9 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
用天冬酰胺代替谷氨酰胺培养产尿激酶原CHO工程细胞
陈昭烈
刘红
吴本传
李世崇
林福玉
《生物技术通报》
CAS
CSCD
2001
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
应用荧光原位杂交技术检测康柏西普基因在CHO细胞染色体上的整合状态
师明磊
赖维莉
易天红
柯潇
赵志虎
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2017
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid真核表达载体的构建及其稳定表达细胞株的建立
白文栋
席文锦
王芳
王丽娟
杨韬
彭红艳
孟艳玲
杨安钢
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
4
在线阅读
下载PDF
职称材料
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