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5HRE联合P_(CEA)调节TSST-1/CD80TM重组基因表达的逆转录病毒载体的构建
被引量：
5
1
作者
孙学军
卢乐
+2 位作者
禄韶英
周培华
王炜
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第10期863-865,共3页
目的:构建5个拷贝的缺氧反应元件(5HRE)增强子和癌胚抗原启动子(PCEA)联合调控超抗原-中毒性休克综合症基因(TSST-1)与CD80分子跨膜序列(CD80TM)融合基因的逆转录病毒表达载体。方法:设计引物应用PCR法分别从人直肠癌基因组克隆PCEA,从...
目的:构建5个拷贝的缺氧反应元件(5HRE)增强子和癌胚抗原启动子(PCEA)联合调控超抗原-中毒性休克综合症基因(TSST-1)与CD80分子跨膜序列(CD80TM)融合基因的逆转录病毒表达载体。方法:设计引物应用PCR法分别从人直肠癌基因组克隆PCEA,从野生株金黄色葡萄球菌基因组克隆TSST-1全长基因。利用重叠PCR法从pCMV-SPOR-T6-CD80载体克隆融合有中性linker的CD80TM基因片段。选择pLEGFP-N1为原始逆转录病毒表达载体,选取合适的酶切位点SphⅠ和BglⅡ,联合双酶切和PCR方法去除原始载体中巨细胞病毒即刻早期启动子(PCMVIE)。将上述基因片段与去除了PCMVIE的pLEGFP-N1重组,构建携带5HRE、PCEA、TSST-1、linker-CD80TM基因的逆转录病毒表达载体。结果:成功克隆PCEA和TSST-1基因。构建了融合中性linker的CD80TM,测序与预期相符。将上述片段重组到载体pLEGFP-N1上,酶切鉴定和DNA序列分析无误。结论:成功构建了逆转录病毒表达载体pLEFGP-N1-5HRE-PCEA-TSST-1-linker-CD80TM,为下一步的体外实验奠定了基础。
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关键词
缺氧反应元件
癌胚抗原
超抗原
cea-阳性肿瘤
免疫基因治疗
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题名
5HRE联合P_(CEA)调节TSST-1/CD80TM重组基因表达的逆转录病毒载体的构建
被引量：
5
1
作者
孙学军
卢乐
禄韶英
周培华
王炜
机构
西安交通大学医学院第一附属医院普外科
西安交通大学医学院第二附属医院普外科
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第10期863-865,共3页
基金
国家自然科学基金资助项目(30672070
30400430)
文摘
目的:构建5个拷贝的缺氧反应元件(5HRE)增强子和癌胚抗原启动子(PCEA)联合调控超抗原-中毒性休克综合症基因(TSST-1)与CD80分子跨膜序列(CD80TM)融合基因的逆转录病毒表达载体。方法:设计引物应用PCR法分别从人直肠癌基因组克隆PCEA,从野生株金黄色葡萄球菌基因组克隆TSST-1全长基因。利用重叠PCR法从pCMV-SPOR-T6-CD80载体克隆融合有中性linker的CD80TM基因片段。选择pLEGFP-N1为原始逆转录病毒表达载体,选取合适的酶切位点SphⅠ和BglⅡ,联合双酶切和PCR方法去除原始载体中巨细胞病毒即刻早期启动子(PCMVIE)。将上述基因片段与去除了PCMVIE的pLEGFP-N1重组,构建携带5HRE、PCEA、TSST-1、linker-CD80TM基因的逆转录病毒表达载体。结果:成功克隆PCEA和TSST-1基因。构建了融合中性linker的CD80TM,测序与预期相符。将上述片段重组到载体pLEGFP-N1上,酶切鉴定和DNA序列分析无误。结论:成功构建了逆转录病毒表达载体pLEFGP-N1-5HRE-PCEA-TSST-1-linker-CD80TM,为下一步的体外实验奠定了基础。
关键词
缺氧反应元件
癌胚抗原
超抗原
cea-阳性肿瘤
免疫基因治疗
分类号
R656.9 [医药卫生—外科学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
5HRE联合P_(CEA)调节TSST-1/CD80TM重组基因表达的逆转录病毒载体的构建
孙学军
卢乐
禄韶英
周培华
王炜
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009
5
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