黄牛、牦牛和犏牛睾丸组织中Cdc2、Cdc25A基因mRNA表达水平 被引量：18

1

作者 董丽艳 李齐发 +4 位作者 屈旭光 李隐侠 李新福 徐洪涛 谢庄 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期495-499,共5页

黄牛和牦牛远缘杂交后代犏牛雄性不育是牦牛杂交改良中的一大难题。Cdc2和Cdc25A是减数分裂的两个关键基因,其表达水平的下降将使精子发生不能正常进行,导致雄性不育。为了探讨Cdc2、Cdc25A基因mRNA表达水平与犏牛雄性不育的关系,文章... 黄牛和牦牛远缘杂交后代犏牛雄性不育是牦牛杂交改良中的一大难题。Cdc2和Cdc25A是减数分裂的两个关键基因,其表达水平的下降将使精子发生不能正常进行,导致雄性不育。为了探讨Cdc2、Cdc25A基因mRNA表达水平与犏牛雄性不育的关系,文章采用荧光定量PCR技术对Cdc2和Cdc25A基因的组织表达特征以及在黄牛、牦牛和犏牛睾丸组织中的表达水平进行了分析。结果表明:Cdc2和Cdc25A基因在牦牛各种组织中广泛表达,说明Cdc2和Cdc25A基因在各种组织细胞分裂和细胞周期运行中均发挥作用;黄牛和牦牛睾丸组织中Cdc2、Cdc25A基因表达水平均显著高于犏牛(P<0.05),说明睾丸组织中Cdc2和Cdc25A基因的低表达可能与犏牛雄性不育相关。 展开更多

关键词 cdc2 cdc25A 犏牛 雄性不育

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小鼠受精卵早期发育过程中PKC对cdc2和cdc25C活性的影响 被引量：1

2

作者 师秀艳 付伟 +4 位作者 赵咏梅 刘莹 刘奕 宗志红 于秉治 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期746-749,共4页

为研究小鼠受精卵细胞早期发育过程中PKC对cdc2和cdc2 5C活性的影响 ,采用免疫印迹和电泳迁移率差异分析的方法 ,观察PKC的激活剂TPA及其抑制剂星形孢子素对小鼠受精卵一细胞期cdc2和cdc2 5C活性的影响 .10nmol L的TPA作用 10min后 ,小... 为研究小鼠受精卵细胞早期发育过程中PKC对cdc2和cdc2 5C活性的影响 ,采用免疫印迹和电泳迁移率差异分析的方法 ,观察PKC的激活剂TPA及其抑制剂星形孢子素对小鼠受精卵一细胞期cdc2和cdc2 5C活性的影响 .10nmol L的TPA作用 10min后 ,小鼠受精卵一细胞期卵裂率明显大于对照组 (P <0 0 5 ) ,而星形孢子素作用后卵裂率显著下降 (P <0 0 1) .TPA处理后 ,受精卵中呈去磷酸化状态的活性cdc2明显增加 ,没有活性呈磷酸化状态的cdc2 5C明显减少 ;而星形孢子素处理的受精卵中没有活性的cdc2明显增加 ,有活性的cdc2 5C明显减少 .结果表明 ,TPA短时间作用可以促进小鼠一细胞期受精卵分裂 ,星形孢子素抑制受精卵的分裂 ;TPA可以促进cdc2的去磷酸化以及cdc2 5C的磷酸化 ,从而促进G2 M转换 ,星形孢子素则抑制cdc2和cdc2 5C的活性 ,阻止受精卵由G2 展开更多

关键词 小鼠 受精卵 早期发育过程 PKC cdc2 cdc25C 活性 蛋白激酶

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组织芯片/免疫组化检测CDC2/CyclinB1在胶质瘤中的联合表达及意义 被引量：7

3

作者 翟德忠 黄强 +3 位作者 朱卿 董军 霍红梅 兰青 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期604-607,共4页

目的:探讨CDC2/CyclinB1在胶质瘤组织芯片中的表达及意义。方法:构建布有各级别人脑胶质瘤、人脑胶质瘤体外细胞系球体及其移植瘤组织、脑肿瘤干细胞、神经干细胞和相应的对照标本共118例的组织芯片,进行CDC2、CyclinB1的EnVision法免... 目的:探讨CDC2/CyclinB1在胶质瘤组织芯片中的表达及意义。方法:构建布有各级别人脑胶质瘤、人脑胶质瘤体外细胞系球体及其移植瘤组织、脑肿瘤干细胞、神经干细胞和相应的对照标本共118例的组织芯片,进行CDC2、CyclinB1的EnVision法免疫组化染色,分析其表达率、表达强度及联合表达情况。结果:CDC2、CyclinB1表达阳性率在71例人脑胶质瘤组织中分别为54.9%和52.1%。11例正常成人脑组织中分别为18.2%和9.0%,两者比较P<0.05。CDC2和CyclinB1的联合表达率为89.7%,两者表达呈正相关(r=0.90,P<0.01)。CDC2、CyclinB1的表达在不同级别人脑胶质瘤中也有差异(P<0.05),与病理级别分别呈正相关(r=0.982,P=0.018;r=0.959,P=0.041)。在体外培养的胶质瘤细胞球体、裸鼠皮下移植瘤、人胚胎脑和裸小鼠骨髓中均高表达,而脑肿瘤干细胞和神经干细胞球体未见表达。结论:CDC2和CyclinB1,随着脑胶质瘤恶性度增高而表达量增加;在神经干细胞、脑肿瘤干细胞低表达,而在SHG44和GBM细胞球体中高表达,表明其在肿瘤细胞分化抑制中起作用。这对进一步研究胶质瘤分子病因有重要价值。 展开更多

关键词 脑胶质瘤 分子病因 组织芯片 cdc2 CYCLINB1

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涎腺腺样囊性癌组织中HPV感染及p53、p16、EGFR、Cdc2蛋白表达与预后的关系 被引量：7

4

作者 孙玉满 吴蒙 +3 位作者 韩凤艳 刘宏侠 杨俊泉 汪宏斌 《临床与实验病理学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第4期393-398,共6页

目的初步探讨HPV感染及p53、p16、EGFR及Cdc2表达与涎腺腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)预后的关系。方法收集76例涎腺ACC手术标本,分别采用PCR-DNA反向点杂交及免疫组化SP法检测肿瘤组织中HPV-DNA及p53、p16、EGFR及Cdc2表达... 目的初步探讨HPV感染及p53、p16、EGFR及Cdc2表达与涎腺腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)预后的关系。方法收集76例涎腺ACC手术标本,分别采用PCR-DNA反向点杂交及免疫组化SP法检测肿瘤组织中HPV-DNA及p53、p16、EGFR及Cdc2表达,收集临床资料并随访。Kaplan-Meier模型分析患者生存情况,Log-rank检验比较生存曲线,多因素Cox回归模型进行预后分析。结果涎腺ACC组织中HPV感染率为0(0/76)。p53、p16、EGFR及Cdc2蛋白在肿瘤组织中的阳性率分别为76.3%(58/76)、57.9%(44/76)、60.5%(46/76)及64.5%(49/76)。p53、p16、EGFR及Cdc2蛋白表达与患者性别、年龄、肿瘤部位、TNM分期及病理类型无关(P均>0.05)。EGFR阳性患者中位总生存期(overall survival,OS)低于阴性患者(χ~2=19.111,P<0.01)。EGFR阳性患者中位无进展生存期(progression-free survival,PFS)低于阴性患者(χ~2=6.621,P<0.01)。Cdc2阳性患者中位OS短于阴性患者(χ~2=3.870,P<0.05)。Cdc2阳性患者中位PFS低于阴性患者(χ~2=6.755,P<0.01)。多因素Cox回归模型分析显示EGFR、Cdc2蛋白表达(RR=13.417、13.075,P均<0.001)是涎腺ACC患者预后的独立危险因素。结论涎腺ACC组织中未检测出HPV感染。p53、p16、EGFR及Cdc2蛋白在涎腺ACC组织中呈不同程度表达,p16不能作为涎腺ACC患者HPV感染状态的替代指标。EGFR及Cdc2阳性表达是涎腺ACC患者预后的独立危险因素,临床对EGFR及Cdc2蛋白表达患者应密切随访。 展开更多

关键词 涎腺肿瘤 腺样囊性癌 HPV EGFR cdc2 预后

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不同倍性鱼cdc2基因cDNA部分序列的克隆及其在卵巢中的表达分析 被引量：3

5

作者 曾琛 陶敏 +1 位作者 刘少军 刘季芳 《湖南师范大学自然科学学报》 EI CAS 北大核心 2006年第3期73-76,共4页

利用3-’RACE的方法分别从异源四倍体鲫鲤、三倍体湘云鲫、二倍体红鲫的卵巢中克隆了cdc2基因cDNA的部分序列.选取这3种鱼cdc2 cDNA中一段长为157 bp的保守片段设计特异引物,通过Real-time PCR检测cdc2 mRNA在这3种不同倍性鱼卵巢中的... 利用3-’RACE的方法分别从异源四倍体鲫鲤、三倍体湘云鲫、二倍体红鲫的卵巢中克隆了cdc2基因cDNA的部分序列.选取这3种鱼cdc2 cDNA中一段长为157 bp的保守片段设计特异引物,通过Real-time PCR检测cdc2 mRNA在这3种不同倍性鱼卵巢中的表达水平,结果表明cdc2转录量随着倍性的递增而相应升高. 展开更多

关键词 异源四倍体鲫鲤 三倍体湘云鲫 红鲫 cdc2 Real-time PCR

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细胞周期依赖性蛋白激酶1(Cdk1/p34cdc2)对喉癌术后局部复发的预测价值 被引量：7

6

作者 孙玉满 刘宏侠 +1 位作者 杨俊泉 吴蒙 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期293-298,共6页

目的检测喉鳞状细胞癌及癌旁切缘组织中p53、p21和Cdk1/p34cdc2蛋白表达及其与患者预后的关系。方法应用免疫组化SP法检测85例喉鳞状细胞癌及癌旁切缘组织中p53、p21和Cdk1/p34cdc2蛋白的表达,并收集临床病理资料进行随访。结果在随访2... 目的检测喉鳞状细胞癌及癌旁切缘组织中p53、p21和Cdk1/p34cdc2蛋白表达及其与患者预后的关系。方法应用免疫组化SP法检测85例喉鳞状细胞癌及癌旁切缘组织中p53、p21和Cdk1/p34cdc2蛋白的表达,并收集临床病理资料进行随访。结果在随访2年以上的喉鳞状细胞癌中14例出现局部复发(复发组),71例未复发(未复发组)。在喉鳞状细胞癌和癌切缘组织中p53蛋白阳性率分别为60.0%和36.5%;p21蛋白阳性率分别为38.8%和21.2%;Cdk1/p34cdc2蛋白阳性率分别为70.6%和29.4%。喉鳞状细胞癌复发组和未复发组的切缘组织中p53蛋白阳性率分别为71.4%和29.6%(P=0.003),切缘组织中p21蛋白阳性率分别为50.0%和15.5%(P=0.004),切缘组织中Cdk1/p34cdc2蛋白阳性率分别为57.1%和23.9%(P=0.013)。癌旁切缘组织中p53与p21及Cdk1/p34cdc2蛋白表达之间无相关性(P均>0.05)。结论 p53、p21和Cdk1/p34cdc2蛋白在喉鳞状细胞癌的发生、发展中可能起重要作用;癌旁切缘组织中p53、p21和Cdk1/p34cdc2过表达与喉鳞状细胞癌局部复发密切相关。 展开更多

关键词 喉肿瘤 鳞状细胞癌 p53 P21 Cdk1/p34cdc2 局部复发

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裂殖壶菌EST文库cdc2基因的筛选与分析 被引量：4

7

作者 夏晓峰 黄云鹏 +3 位作者 江贤章 田宝玉 舒正玉 黄建忠 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2008年第3期7-14,共8页

利用已建立的裂殖壹菌(Schizochytrium sp FJU-512)EST文库,通过序列比对分析发现p34cdc2相似基因的3′端序列,分离含该EST序列的质粒ROCHA2004,以T7引物进行反向测序,获得p34cdc2相似基因的全长序列,结合NCBI的ORF finder以及Blastx程... 利用已建立的裂殖壹菌(Schizochytrium sp FJU-512)EST文库,通过序列比对分析发现p34cdc2相似基因的3′端序列,分离含该EST序列的质粒ROCHA2004,以T7引物进行反向测序,获得p34cdc2相似基因的全长序列,结合NCBI的ORF finder以及Blastx程序获得p34cdc2蛋白的氨基酸序列;利用同源模建方法构建了该蛋白的三维空间结构,并预测其功能结构域;对该蛋白进行系统发育分析,构建进化树,结果显示该蛋白同小麦(Triticum aestivum)的p34cdc2序列亲缘关系最近。 展开更多

关键词 细胞周期 cdc2 蛋白质结构 进化树

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p34^(cdc2)在非小细胞肺癌中的表达及意义 被引量：7

8

作者 李国生 张道荣 +3 位作者 刘冬 王恩华 邱雪杉 张丽红 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期88-89,92,共3页

目的 :研究非小细胞肺癌组织中p34cdc2 的表达 ,探讨其表达与非小细胞肺癌临床病理特征的关系。方法 :随机收集非小细胞肺癌 (含癌旁组织和正常肺组织 )标本 10 0例 ,采用免疫组织化学S P法显示p34cdc2 的表达并结合肺癌的临床病理特征... 目的 :研究非小细胞肺癌组织中p34cdc2 的表达 ,探讨其表达与非小细胞肺癌临床病理特征的关系。方法 :随机收集非小细胞肺癌 (含癌旁组织和正常肺组织 )标本 10 0例 ,采用免疫组织化学S P法显示p34cdc2 的表达并结合肺癌的临床病理特征进行分析。结果 :p34cdc2 的表达在非小细胞肺癌组织与癌旁细小支气管上皮增生组织细胞中定位于细胞质中 ,在癌组织中有过表达 ,在癌旁组织中有增强表达 ,与正常组织间p34cdc2 表达差异有显著性 (P<0 .0 1)。组织类型、分化程度和淋巴结转移与p34cdc2 的表达均无统计学意义。不同临床分期的非小细胞肺癌 ,其p34cdc2 的阳性表达差异有显著性 (P<0 .0 5 )。结论 :p34cdc2 在非小细胞肺癌中有过表达现象 ,过表达的p34cdc2 可作为反映非小细胞肺癌细胞分裂增殖能力和临床分期的参考指标之一。 展开更多

关键词 非小细胞肺癌 细胞周期调控 P34^cdc2

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舌鳞癌中p34cdc2与cyclin B1的表达及相关研究 被引量：2

9

作者 陈新 周健 +2 位作者 王元银 何家才 王银龙 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2008年第6期620-623,共4页

目的研究舌鳞癌组织中p34cdc2与cyclin B1蛋白的表达,探讨它们阳性表达的相关性及其与舌鳞癌临床病理特征的关系。方法随机收集舌鳞癌标本60例,对照上皮包括正常舌组织11例、癌旁组织49例。采用免疫组织化学SP法显示p34cdc2与cyclin B1... 目的研究舌鳞癌组织中p34cdc2与cyclin B1蛋白的表达,探讨它们阳性表达的相关性及其与舌鳞癌临床病理特征的关系。方法随机收集舌鳞癌标本60例,对照上皮包括正常舌组织11例、癌旁组织49例。采用免疫组织化学SP法显示p34cdc2与cyclin B1蛋白的表达,并结合舌鳞癌的临床病理特征进行分析。结果舌癌组织中可见p34cdc2与cyclin B1蛋白表达并显棕色/黄色,主要定位于细胞浆中。两种蛋白在癌组织中存在增多表达,与正常组织和(或)癌旁组织中的表达差异有显著性(P<0.01)。p34cdc2蛋白的表达在舌鳞癌不同临床分期、组织分级和有无淋巴结转移组间差异有显著性(P<0.05),而与年龄、性别无统计学意义;同时cyclin B1蛋白的表达也在舌鳞癌不同临床分期、组织分级中差异有显著性(P<0.05),而在不同年龄、性别及有无淋巴结转移组间差异无显著性。结论p34cdc2及cyclin B1蛋白在舌鳞癌中有表达增多现象,或许可反映舌鳞癌细胞分裂增殖能力;增多表达的p34cdc2及cyclin B1蛋白可作为评价舌鳞癌临床分期和组织分级等临床病理特征的参考指标之一。 展开更多

关键词 舌肿瘤 癌 鳞状细胞 cdc2蛋白激酶 细胞周期蛋白B 免疫组织化学 细胞增殖

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小鼠神经细胞cdc2类蛋白激酶调节亚基p35^(Nck5a)基因的克隆和鉴定 被引量：2

10

作者 周常文 戴旭明 +1 位作者 薛红 傅继梁 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第10期716-719,共4页

目的： 获取小鼠神经细胞ｃｄｃ２ 类激酶（Ｎｃｌｋ）调节亚基ｐ３５Ｎｃｋ５ａ基因组ＤＮＡ，用于构建基因重复性打靶载体。方法： 用噬斑原位杂交法从λＰＳ基因文库中克隆小鼠ｐ３５Ｎｃｋ５ａ基因；用限制性内切酶酶切图谱分析和... 目的： 获取小鼠神经细胞ｃｄｃ２ 类激酶（Ｎｃｌｋ）调节亚基ｐ３５Ｎｃｋ５ａ基因组ＤＮＡ，用于构建基因重复性打靶载体。方法： 用噬斑原位杂交法从λＰＳ基因文库中克隆小鼠ｐ３５Ｎｃｋ５ａ基因；用限制性内切酶酶切图谱分析和序列测定进行基因组结构分析。结果： 获得较完整的ｐ３５Ｎｃｋ５ａ基因组ＤＮＡ酶切图谱；该基因由一个外显子组成，长９２４ ｂｐ，编码３０７ 个氨基酸的蛋白质，内含子长２０８ ｂｐ，位于５′端侧翼序列中。测定的序列（－ １ ０８０ 至＋ ９２４ ｂｐ 和＋ ３ ７２１至＋ ４ ２２２ ｂｐ）与已报道的序列基本一致，仅在－ １３５和－ ２９５位各插入一个碱基Ｇ。结论： 得到的ｐ３５Ｎｃｋ５ａ基因组ＤＮＡ 片段长约１１ ｋｂ， 其５′端侧翼序列含有一些已知的调控序列，３′端含有ｐｏｌｙ Ａ 的信号序列。 展开更多

关键词 P35^Nck5a基因 克隆 序列分析 cdc2类激酶 小鼠

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三氧化二砷抑制cdc2基因表达诱导K562白血病细胞G_2/M周期停滞 被引量：1

11

作者 陈智超 李秋柏 +5 位作者 吕建 邵菁 游泳 仲照东 黎纬明 邹萍 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期348-351,358,共5页

目的检测三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)诱导慢性髓系白血病急变细胞K562周期停滞中细胞周期相关调节基因的转录、蛋白表达及其磷酸化改变,以期阐明As2O3诱导其周期停滞的分子生物学机制,为克服K562细胞的As2O3抵抗性提供实验基础... 目的检测三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)诱导慢性髓系白血病急变细胞K562周期停滞中细胞周期相关调节基因的转录、蛋白表达及其磷酸化改变,以期阐明As2O3诱导其周期停滞的分子生物学机制,为克服K562细胞的As2O3抵抗性提供实验基础。方法体外培养K562细胞,采用PI染色、流式细胞仪检测As2O3作用后细胞周期分布的改变;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测细胞周期相关调节基因mRNA表达变化;Westernblot检测相关蛋白及磷酸化改变。结果As2O3作用K562细胞24h后,G2/M期细胞比例明显增加,浓度为0、2、5、10μmol/L时G2/M期细胞比例分别为(22.6±3.4)%、(27.2±2.3)%、(43.8±4.5)%、(36.7±4.1)%;K562细胞在As2O3处理前有Sur-vivin、cdc2、chk1基因表达,As2O3处理后Survivin、chk1的表达无明显变化,但cdc2表达呈浓度依赖性下调;As2O3作用前可见Survivin、cdc2、cdc2-p、chk1等4种蛋白的表达,作用24h后,Survivin的表达条带增强,cdc2蛋白表达水平呈浓度依赖性下调,cdc2-p水平在2～5μmol/L时无明显变化,在10μmol/L时受抑明显,chk1蛋白表达水平在As2O3作用前后无明显改变。结论As2O3显著诱导K562白血病细胞G2/M周期停滞,其机制与抑制cdc2转录水平,下调活性化cdc2蛋白表达有关。不能有效抑制抗凋亡蛋白Survivin的表达可能是K562白血病细胞对As2O3诱导凋亡抵抗的一个重要机制。 展开更多

关键词 三氧化二砷 K562细胞 细胞周期停滞 cdc2蛋白激酶 SURVIVIN

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栗酒裂殖酵母CDC2基因克隆及淡水舟形藻表达载体构建 被引量：1

12

作者 刘玉 朱万鹏 +4 位作者 王莹莹 姬妍茹 张洪升 邓军 刘宇峰 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期108-112,共5页

利用试剂盒提取栗酒裂殖酵母的总DNA,以其为模板进行PCR克隆CDC2基因,再将pBI121载体质粒和CDC2基因进行BamH I和SmaI双酶切,电泳分离和检测,最后连接目的片段构建重组载体pBI121-CDC2。克隆得到长度约为1.2 kb的CDC2基因片段与NCBI网... 利用试剂盒提取栗酒裂殖酵母的总DNA,以其为模板进行PCR克隆CDC2基因,再将pBI121载体质粒和CDC2基因进行BamH I和SmaI双酶切,电泳分离和检测,最后连接目的片段构建重组载体pBI121-CDC2。克隆得到长度约为1.2 kb的CDC2基因片段与NCBI网站所公开的CDC2基因序列最大同源性达98%,所构建载体经酶切和PCR验证构建成功,并且在淡水舟形藻中得到表达,表明成功构建栗酒裂殖酵母CDC2基因的淡水舟形藻表达载体。 展开更多

关键词 栗酒裂殖酵母 cdc2基因 克隆 淡水舟形藻 表达载体 构建

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Cdc2/cdk1和survivin特异性siRNA真核表达载体的设计、构建和鉴定 被引量：1

13

作者 朱俊 袁玉林 +3 位作者 彭涛 陈树 黄铄 李双 《海南医学院学报》 CAS 2015年第3期291-295,共5页

目的：构建表达靶向cdc2/cdk mRNA和survivin mRNA的siRNA真核表达质粒。方法：从GenBank中搜索Cdc2/cdk1和survivin基因组标准序列,根椐siRNA设计原理构建siRNA真核表达质粒phU6-cdc2/cdk1-shRNA1、phU6-cdc2/cdk1-shRNA2、phU6-surviv... 目的：构建表达靶向cdc2/cdk mRNA和survivin mRNA的siRNA真核表达质粒。方法：从GenBank中搜索Cdc2/cdk1和survivin基因组标准序列,根椐siRNA设计原理构建siRNA真核表达质粒phU6-cdc2/cdk1-shRNA1、phU6-cdc2/cdk1-shRNA2、phU6-survivin-shRNA1和phU6-survivinshRNA。phU6-survivin-shRNA1、phU6-survivin-shRNA2、pU6-HK-shRNA质粒均含有增强绿色荧光基因作为报告基因和酶切位点,而phU6-cdc2/cdk1-shRNA1、phU6-cdc2/cdk1-shRNA2均含有红色荧光基因作为报告基因和酶切位点。质粒酶切、电泳、测序鉴定;用脂质体转染鼻咽癌CNE2细胞,荧光显微镜下观察、摄片、计数阳性细胞,计算转染效率,激光共聚焦显微镜检测质粒载体绿色和红色荧光蛋白的表达,免疫印迹法检测真核表达质粒对相应蛋白的抑制率。结果：荧光显微镜下计算转染效率显示在转染鼻咽癌细胞CNE2 48h转染率高达45.00%-57.45%;质粒phU6-cdc2/cdk1-shRNA1、phU6-cdc2/cdk1-shRNA2、phU6-survivin-shRNA1、phU6-survivin-shRNA2和pU6-HK-shRNA酶切后均可见400bp条带,与预期插入的目的基因大小一致,基因测序证实碱基序列与模板序列相符;在共聚焦显微镜下观察均见大量的细胞表达相应荧光;免疫印迹检测phU6-cdc2/cdk1-shRNA1、phU6-cdc2/cdk1-shRNA2、phU6-survivin-shRNA1和phU6-survivin-shRNA2对鼻咽癌CNE2细胞相应蛋白抑制率分别是33.00±1.41、38.31±1.01（survivin）、36.33±1.21和43.26±1.02（cdk1）。结论：本实验构建了靶向Cdc2/cdk1mRNA和survivin mRNA的真核表达质粒。重组质粒能有效转染人鼻咽癌细胞,phU6-cdc2/cdk1-shRNA2和phU6-survivin-shRNA2与phU6-cdc2/cdk1-shRNA1和phU6-survivin-shRNA1相比,转染CNE2 48h后其对相应蛋白的干扰率相对较高。 展开更多

关键词 鼻咽癌细胞株CNE2 RNA干扰 cdc2/cdk1 SURVIVIN

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X射线全身照射对小鼠胸腺细胞CyclinB_1和p34^(cdc2)蛋白表达的影响 被引量：4

14

作者 叶飞 刘树铮 《辐射防护》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期365-368,共4页

本文采用免疫组织化学法研究了低、高剂量 X射线全身照射后不同时间小鼠胸腺细胞 CyclinB1和 p34cdc2 蛋白表达的变化。结果表明 ,与假照组相比 ,75 m Gy X射线全身照射后 8h小鼠胸腺细胞Cyclin B1蛋白表达开始升高 ,12 h达高峰 ,4 8h... 本文采用免疫组织化学法研究了低、高剂量 X射线全身照射后不同时间小鼠胸腺细胞 CyclinB1和 p34cdc2 蛋白表达的变化。结果表明 ,与假照组相比 ,75 m Gy X射线全身照射后 8h小鼠胸腺细胞Cyclin B1蛋白表达开始升高 ,12 h达高峰 ,4 8h恢复至正常水平 ;而 2 Gy照射后 4 h小鼠胸腺细胞Cyclin B1蛋白表达开始降低 ,12 h降至最低 ,2 4 h有回升趋势 ,4 8h恢复至假照水平。p34cdc2 蛋白的表达 ,与假照组相比 ,75 m Gy照射后 4～ 4 8h未见明显变化 ;而 2 Gy照射后的时程变化与相同剂量照射后 Cyclin B1蛋白表达的变化基本一致。提示 :低剂量 X射线全身照射可诱导小鼠胸腺细胞 Cyclin B1蛋白表达增强 ,从而促进细胞周期进程 ,但对 p34cdc2 表达无影响 ;相反 ,较高剂量照射导致 Cyclin B1和p34cdc2蛋白表达均下降 ,最终发生 G2 阻滞。 展开更多

关键词 X射线 胸腺细胞 CYCLINB1 P34^cdc2 低剂量辐射 生物效应 免疫组织化学法 电离辐射 蛋白表达

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不同日龄犊牛睾丸中细胞周期调控基因CyclinB1和p34^(cdc2)表达的差异 被引量：1

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作者 姚晓磊 宋瑞高 +10 位作者 吕丽华 李鹏飞 刘强 黄洋 陈建伟 姜晓龙 曹霞 赵妙妙 张贵花 王永新 石磊 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期245-250,共6页

旨在探究不同日龄犊牛睾丸中细胞周期调控基因CyclinB1和p34cdc2的表达情况。本试验选取发育正常、体重相似的5~6d荷斯坦哺乳公犊18头,随机分为3组,每组6头,饲喂相同的基础日粮,分别在30(断奶)、60和90d时从各组分别随机抽取2头,采集其... 旨在探究不同日龄犊牛睾丸中细胞周期调控基因CyclinB1和p34cdc2的表达情况。本试验选取发育正常、体重相似的5~6d荷斯坦哺乳公犊18头,随机分为3组,每组6头,饲喂相同的基础日粮,分别在30(断奶)、60和90d时从各组分别随机抽取2头,采集其睾丸备用;通过qRT-PCR技术检测不同日龄犊牛睾丸中细胞周期调控基因CyclinB1和p34cdc2 mRNA表达规律,免疫组化技术对睾丸CyclinB1和p34cdc2进行定位分析。结果表明:90d时CyclinB1和p34cdc2 mRNA表达量显著高于30与60d(P<0.05),但30与60d两种基因mRNA表达量均差异不显著(P>0.05);p34cdc2蛋白在不同日龄犊牛表达差异显著(P<0.05);CyclinB1蛋白在60、90d的表达量显著高于30d(P<0.05),但60和90d差异不显著(P>0.05)。综上表明,CyclinB1和p34cdc2 mRNA和蛋白在睾丸的表达量随着犊牛日龄的增加而增加,且不同的日龄CyclinB1和p34cdc2 mRNA和蛋白表达量存在一定的差异。 展开更多

关键词 睾丸 细胞周期调控 CYCLINB1 p34cdc2

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细胞周期调控蛋白P34cdc2与cyclin B1在头颈部鳞癌中的预测价值 被引量：4

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作者 陈新 周健 《国外医学（口腔医学分册）》 2005年第6期428-430,共3页

头颈部鳞癌是一种较常见的恶性肿瘤。p34cdc2及cyclinB1是调控G2/M期的重要蛋白,可以促进G2/M期转换而加速细胞周期进程。关于p34cdc2及cyclinB1与头颈部鳞癌的发生发展及预后的研究目前已相当普遍。本文就它们在头颈部鳞癌中的预测价... 头颈部鳞癌是一种较常见的恶性肿瘤。p34cdc2及cyclinB1是调控G2/M期的重要蛋白,可以促进G2/M期转换而加速细胞周期进程。关于p34cdc2及cyclinB1与头颈部鳞癌的发生发展及预后的研究目前已相当普遍。本文就它们在头颈部鳞癌中的预测价值进行综述。 展开更多

关键词 p34cdc2 CYCLIN B1 头颈部鳞癌 细胞周期调控

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高血脂兔髂-股动脉成形术后平滑肌细胞中c-myc和cdc2基因的表达

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作者 关战军 张传森 金由辛 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期401-403,共3页

目的 :探讨 c- myc和 cdc2基因在高血脂兔髂 -股动脉成形术后平滑肌细胞中的表达。方法 :2 4只新西兰白兔均饲以高脂饲料 ,于高脂饲喂 2周时用球囊导管扩张髂 -股动脉 ,造成动脉内膜损伤 ,6～ 8周行血管造影检查 ,对狭窄 >5 0 %的动... 目的 :探讨 c- myc和 cdc2基因在高血脂兔髂 -股动脉成形术后平滑肌细胞中的表达。方法 :2 4只新西兰白兔均饲以高脂饲料 ,于高脂饲喂 2周时用球囊导管扩张髂 -股动脉 ,造成动脉内膜损伤 ,6～ 8周行血管造影检查 ,对狭窄 >5 0 %的动脉段行球囊扩张术 ,术后 2 4 h和 2周分别用 RT- PCR和免疫金银法检测 c- myc、cdc2 m RNA和相应蛋白质的表达。结果 :c- myc和 cdc2 m RNA在球囊扩张术后 2 4 h表达增加 ,其相应蛋白质在扩张术后 2周时表达增加 ,阳性颗粒主要位于新内膜层平滑肌细胞的胞核 ,少量位于胞质。结论 :动脉损伤后可致 c- myc、cdc2 m RNA和相应蛋白质表达增加 ,提示 c- myc和 展开更多

关键词 高血脂 髂-动脉成形术 平滑肌细胞 C-MYC cdc2 基因 表达

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Cdc2相关蛋白激酶PFTK1单克隆抗体的制备

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作者 曹雪 张顺亮 +3 位作者 姜鹭 葛克山 丛艳君 任发政 《中国奶牛》 2010年第2期9-11,共3页

本试验以Cdc2相关蛋白激酶PFTK1的120～141位多肽段与载体蛋白KLH偶联制备人工抗原,免疫Balb/c小鼠,取高免疫效价的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0在PEG4000作用下进行融合,通过有限稀释法最终得到了2株分泌抗PFTK1抗体的杂交瘤细胞,分别... 本试验以Cdc2相关蛋白激酶PFTK1的120～141位多肽段与载体蛋白KLH偶联制备人工抗原,免疫Balb/c小鼠,取高免疫效价的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0在PEG4000作用下进行融合,通过有限稀释法最终得到了2株分泌抗PFTK1抗体的杂交瘤细胞,分别命名为4E7和2E3,经鉴定2株抗体均为IgM亚型,轻链均为κ型。经过Western blotting鉴定该抗体能够与PFTK1(1～139肽段)特异性结合。此抗体经过优球蛋白沉淀法纯化后,其纯度达到86.8%。该抗体的制备为研究蛋白激酶PFTK1功能奠定了基础。 展开更多

关键词 cdc2相关蛋白激酶 单克隆抗体 制备

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G2期和MⅡ期小鼠卵母细胞中p34^(cdc2)电泳迁移率的差异

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作者 师秀艳 于秉治 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期343-344,347,共3页

目的:探讨小鼠卵母细胞不同细胞周期时相中,由于p34cdc2不同磷酸化状态所引起的电泳迁移率变化。方法:用免疫印迹(W estern b lot)技术观察G2期和MⅡ期小鼠卵母细胞中p34cdc2电泳迁移率的变化。结果:p34cdc2在G2期只表现两条带即上、中... 目的:探讨小鼠卵母细胞不同细胞周期时相中,由于p34cdc2不同磷酸化状态所引起的电泳迁移率变化。方法:用免疫印迹(W estern b lot)技术观察G2期和MⅡ期小鼠卵母细胞中p34cdc2电泳迁移率的变化。结果:p34cdc2在G2期只表现两条带即上、中带;而MⅡ期表现为中、下带。结论:可以用电泳迁移率的变化作为观察p34cdc2磷酸化状态的一种方法。 展开更多

关键词 WESTERN印迹 P34^cdc2 卵母细胞

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基于RNAi和蛋白质组学研究胶孢炭疽菌CgCDC2基因的功能 被引量：2

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作者 夏杨 苏初连 +3 位作者 叶子 刘晓妹 蒲金基 张贺 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1483-1493,共11页

【目的】CDC2是调控细胞周期的主要因子之一,对植物病原菌的生长发育有着重要作用,但目前还未有胶孢炭疽菌CDC2蛋白生物学功能方面的研究。本试验的目的是获得胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)CgCDC2的RNAi突变体菌株,并分析... 【目的】CDC2是调控细胞周期的主要因子之一,对植物病原菌的生长发育有着重要作用,但目前还未有胶孢炭疽菌CDC2蛋白生物学功能方面的研究。本试验的目的是获得胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)CgCDC2的RNAi突变体菌株,并分析CgCDC2基因的功能。【方法】利用RNAi技术和PEG介导法获得CgCDC2的RNAi突变体菌株,通过表型分析、TMT蛋白质组学分析和酶活性测定来确定该基因的生物学功能。【结果】通过PCR扩增获得CgCDC2基因,编码一个326个氨基酸的蛋白,其RNAi突变体菌株与野生型相比,生长速率减缓、分生孢子产量显著下降、对H2O2敏感性增强,PG、PL蛋白质含量、基因相对表达量和酶活性均显著降低,致病力减弱。【结论】CgCDC2参与调控胶孢炭疽菌的生长,分生孢子产量,氧化应激反应以及PG、PL的酶活性,从而降低病原菌的致病力。 展开更多

关键词 杧果 胶孢炭疽菌 cdc2 RNAI TMT蛋白质组学 致病力

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