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重组小鼠干细胞逆转录病毒载体高效基因转染CD41^+、UT7、U937和MDA-MB-435细胞
被引量：
4
1
作者
石小玉
李文林
+3 位作者
梁朝
张际青
赵林
李红
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第2期212-218,共7页
目的 :研究重组小鼠干细胞逆转录病毒载体介导基因转染 ,探索一条高效基因转染的途径 ,为重组小鼠干细胞逆转录病毒载体在基因转染中的应用提供理论依据和奠定实验基础。方法 :①逆转录病毒载体的构建 :EC1- 4 (repeats 1- 4ofcadherin ...
目的 :研究重组小鼠干细胞逆转录病毒载体介导基因转染 ,探索一条高效基因转染的途径 ,为重组小鼠干细胞逆转录病毒载体在基因转染中的应用提供理论依据和奠定实验基础。方法 :①逆转录病毒载体的构建 :EC1- 4 (repeats 1- 4ofcadherin - 5extracellulardomains)基因克隆产物和mutant(Ser2 2 2A)MEK 1基因克隆产物 ,Bg1Ⅱ和EcoRⅠ限制性内切核酸酶切割后 ,克隆进入逆转录病毒表达载体pMSCV。②CD4 1+ 细胞的获取和细胞培养 :从脐带血分离的CD34+ 细胞通过TPO诱导表达CD4 1,FACS分离CD4 1+ 细胞。高糖DMEM培养液培养NIH 3T3和MDA -MB - 4 35细胞 ,U937细胞培养在RPMI- 16 4 0培养液 ,UT7细胞是细胞因子依赖性细胞株 ,Iscove’smodifiedDulbeco’s培养液中加入GM -CSF。③测定病毒滴度 :逆转录病毒载体转入包装细胞 2 93,36h后收集病毒上清液 ,感染NIH3T3细胞 ,流式细胞仪测定病毒滴度。④Westernblot:基因转染CD4 1+ 、UT7、U937和MDA -MB - 4 35细胞 ,Westernblot检测基因产物的表达。结果 :2 93细胞产生高滴度MEK1pMSCV病毒 :3 1× 10 7,高滴度EC1- 4pMSCV病毒 :1 0×10 8。用稀释 8倍的病毒转染基因 ,重组逆转录病毒MEK1pMSCV转染白血病细胞株UT7和U973,GFP阳性细胞 (转染阳性细胞 )分别是 6 0 73%、
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关键词
基因转染
小鼠干
细胞
逆转录病毒
^
cd
41
^+
细胞
UT7
细胞
U937
细胞
MDA-MB-435
细胞
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职称材料
GM-CSF体外促进多倍体巨核细胞的生成
被引量：
3
2
作者
蔡海波
康自珍
+2 位作者
孙淑惠
谭文松
张嗣良
《华东理工大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第4期363-366,共4页
在TPO+IL-3的细胞因子组合中添加不同浓度GM-CSF,从脐血CD34+细胞定向诱导巨核细胞的形成,以此考察GM-CSF对巨核细胞体外扩增和成熟的作用。比较了TPO+IL-3、TPO+IL-3+GM-CSF(5、20、100μg/L)的4种细胞因子组合对巨核细胞扩增及形成多...
在TPO+IL-3的细胞因子组合中添加不同浓度GM-CSF,从脐血CD34+细胞定向诱导巨核细胞的形成,以此考察GM-CSF对巨核细胞体外扩增和成熟的作用。比较了TPO+IL-3、TPO+IL-3+GM-CSF(5、20、100μg/L)的4种细胞因子组合对巨核细胞扩增及形成多倍体的作用。结果发现:在TPO+IL-3的细胞因子组合中添加GM-CSF有利于总细胞的扩增,对巨核细胞的纯度没有显著的影响。体外培养14d后,培养物巨核细胞中多倍体(≥8N)巨核细胞比例明显提高,从中可以看出GM-CSF能促进巨核细胞多倍体的形成。
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关键词
^
cd
34^+
细胞
^
cd
41
^+
细胞
巨核
细胞
多倍体
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职称材料
题名
重组小鼠干细胞逆转录病毒载体高效基因转染CD41^+、UT7、U937和MDA-MB-435细胞
被引量：
4
1
作者
石小玉
李文林
梁朝
张际青
赵林
李红
机构
江西医学院
江西省医学科学研究所
CNRS UMR
出处
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第2期212-218,共7页
基金
江西省卫生厅重点项目 (No 2 0 0 2 0 4 )
江西省自然科学基金项目 (No 0 340 0 70 )
+1 种基金
江西省卫生厅课题(No 2 0 0 2 11)
江西省科技厅课题 (No 2 0 0 318)
文摘
目的 :研究重组小鼠干细胞逆转录病毒载体介导基因转染 ,探索一条高效基因转染的途径 ,为重组小鼠干细胞逆转录病毒载体在基因转染中的应用提供理论依据和奠定实验基础。方法 :①逆转录病毒载体的构建 :EC1- 4 (repeats 1- 4ofcadherin - 5extracellulardomains)基因克隆产物和mutant(Ser2 2 2A)MEK 1基因克隆产物 ,Bg1Ⅱ和EcoRⅠ限制性内切核酸酶切割后 ,克隆进入逆转录病毒表达载体pMSCV。②CD4 1+ 细胞的获取和细胞培养 :从脐带血分离的CD34+ 细胞通过TPO诱导表达CD4 1,FACS分离CD4 1+ 细胞。高糖DMEM培养液培养NIH 3T3和MDA -MB - 4 35细胞 ,U937细胞培养在RPMI- 16 4 0培养液 ,UT7细胞是细胞因子依赖性细胞株 ,Iscove’smodifiedDulbeco’s培养液中加入GM -CSF。③测定病毒滴度 :逆转录病毒载体转入包装细胞 2 93,36h后收集病毒上清液 ,感染NIH3T3细胞 ,流式细胞仪测定病毒滴度。④Westernblot:基因转染CD4 1+ 、UT7、U937和MDA -MB - 4 35细胞 ,Westernblot检测基因产物的表达。结果 :2 93细胞产生高滴度MEK1pMSCV病毒 :3 1× 10 7,高滴度EC1- 4pMSCV病毒 :1 0×10 8。用稀释 8倍的病毒转染基因 ,重组逆转录病毒MEK1pMSCV转染白血病细胞株UT7和U973,GFP阳性细胞 (转染阳性细胞 )分别是 6 0 73%、
关键词
基因转染
小鼠干
细胞
逆转录病毒
^
cd
41
^+
细胞
UT7
细胞
U937
细胞
MDA-MB-435
细胞
Keywords
Gene transfection
Mouse term cell retrovirus
cd
41
+ cells
UT7 cells
U937 cells
MDA-MB-435 cells
分类号
R329.28 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
Q334.13 [生物学—遗传学]
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职称材料
题名
GM-CSF体外促进多倍体巨核细胞的生成
被引量：
3
2
作者
蔡海波
康自珍
孙淑惠
谭文松
张嗣良
机构
华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室
复旦大学医学院
出处
《华东理工大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第4期363-366,共4页
基金
上海市现代生物与医药重大项目
文摘
在TPO+IL-3的细胞因子组合中添加不同浓度GM-CSF,从脐血CD34+细胞定向诱导巨核细胞的形成,以此考察GM-CSF对巨核细胞体外扩增和成熟的作用。比较了TPO+IL-3、TPO+IL-3+GM-CSF(5、20、100μg/L)的4种细胞因子组合对巨核细胞扩增及形成多倍体的作用。结果发现:在TPO+IL-3的细胞因子组合中添加GM-CSF有利于总细胞的扩增,对巨核细胞的纯度没有显著的影响。体外培养14d后,培养物巨核细胞中多倍体(≥8N)巨核细胞比例明显提高,从中可以看出GM-CSF能促进巨核细胞多倍体的形成。
关键词
^
cd
34^+
细胞
^
cd
41
^+
细胞
巨核
细胞
多倍体
Keywords
^
cd
34^+ cell
^
cd
41
^+ cell
megakaryocyte
ploidy
分类号
Q813.1 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组小鼠干细胞逆转录病毒载体高效基因转染CD41^+、UT7、U937和MDA-MB-435细胞
石小玉
李文林
梁朝
张际青
赵林
李红
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004
4
在线阅读
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职称材料
2
GM-CSF体外促进多倍体巨核细胞的生成
蔡海波
康自珍
孙淑惠
谭文松
张嗣良
《华东理工大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2003
3
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职称材料
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