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人参总皂甙协同造血生长因子体外诱导CD34^+造血干/祖细胞扩增与分化的作用 被引量:16
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作者 王建伟 王亚平 +1 位作者 王莎莉 姜蓉 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第5期959-963,共5页
为探讨人参总皂甙(totalsaponins of panaxginseng,TSPG)协同造血生长因子体外诱导CD34+造血干/祖细胞(HSC/HPC)扩增与分化的作用,收集人脐血、骨髓细胞并采用StemsepTM干细胞分选系统分离纯化CD34+HSC/HPC,用不同剂量TSPG加入不同组合... 为探讨人参总皂甙(totalsaponins of panaxginseng,TSPG)协同造血生长因子体外诱导CD34+造血干/祖细胞(HSC/HPC)扩增与分化的作用,收集人脐血、骨髓细胞并采用StemsepTM干细胞分选系统分离纯化CD34+HSC/HPC,用不同剂量TSPG加入不同组合的造血生长因子进行培养,检测细胞总数、CD34+细胞和CD33+细胞比例及集落形成细胞总数(CFC)、粒系祖细胞(CFU-GM)数量变化。结果显示:10-70μg/mlTSPG均可不同程度地提高脐血细胞总数、CFC数和CD34+细胞数,50μg/ml是最佳刺激浓度,可使细胞总数、CFC数和CD34+细胞数分别增至(2470.5±79.96)×103、(53.96±4.29)×100%和(21.86±3.09)×100%;20μg/ml是液体培养诱导骨髓CD34+细胞向粒系分化的最佳浓度,可使细胞总数、CFU-GM和CD33+细胞分别增至(133.2±9.03)×103、(26.78±1.91)×100%和(16.98±1.73)×100%;甲基纤维素半固体培养检测显示,TSPG(10-50μg/ml)均能提高CD34+细胞形成CFU-GM的集落产率,以TSPG20μg/ml效果最为明显。结论:合适剂量的TSPG能够促进CD34+造血干/祖细胞体外扩增与定向诱导分化。 展开更多
关键词 人参总皂甙 ^cd34^+造血干/祖细胞 细胞 细胞分化
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血小板生成素对CD34^+造血祖细胞的协同扩增作用 被引量:11
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作者 裴雪涛 王立生 +3 位作者 徐黎 龙红 冯凯 吴祖泽 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 1997年第3期229-235,共7页
血小板生成素(Tpo)是巨核细胞增殖分化和血小板形成的主要调控因子。为了探讨Tpo对CD34^+造血祖细胞的协同扩增作用,我们利用免疫磁珠分离系统(MACS)分选出90.11%-97.57%纯度的脐带血CD34^+细胞,在周的体外液体培养体系中,观察了Tpo... 血小板生成素(Tpo)是巨核细胞增殖分化和血小板形成的主要调控因子。为了探讨Tpo对CD34^+造血祖细胞的协同扩增作用,我们利用免疫磁珠分离系统(MACS)分选出90.11%-97.57%纯度的脐带血CD34^+细胞,在周的体外液体培养体系中,观察了Tpo与干细胞因子(SCF),IL-3,IL-6,红细胞生成素(Epo),粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)不同组合的扩增效率。结果表明,Tpo具有明显的协同扩增作用,细胞总数、集落形成细胞(CFC)和CD34^+细胞可分别被新增329.50±25.20倍,16.09±3.38倍和11.77±4.78倍,SCF+IL-3+IL-6+Tpo组的扩增作用最强,含Tpo实验组的扩增效率明显高于不含Tpo组;同时,含Tpo的组合还使CFU-MK,CD41a^+细胞,BFU-E和CFU-GM分别扩增了34.67±4.62倍,17.29±2.34倍,14.97±2.89倍和14.46±3.19倍。表明Tpo具有明显的扩增造血细胞的作用和刺激多系造血的活性。 展开更多
关键词 血小板生成素 ^cd34^+细胞 体外
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基质细胞衍生因子-1和血小板第4因子对体外扩增后脐血CD34^+细胞黏附特性和趋化功能的影响 被引量:9
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作者 李桥川 李云涛 +7 位作者 孟恒星 王亚非 万长春 李新 葛薇 李茜 韩俊领 邱录贵 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第1期83-88,共6页
为了研究基质细胞衍生因子-1(SDF-1)和血小板第4因子(PF4)对扩增后脐血CD34+细胞归巢相关功能的影响,将纯化的脐血CD34+细胞接种入无血清培养液中,加入不同组合的细胞因子FST(FL+SCF+TPO)、FST+SDF-1、FST+PF4或FST+SDF-1+PF4,分别于培... 为了研究基质细胞衍生因子-1(SDF-1)和血小板第4因子(PF4)对扩增后脐血CD34+细胞归巢相关功能的影响,将纯化的脐血CD34+细胞接种入无血清培养液中,加入不同组合的细胞因子FST(FL+SCF+TPO)、FST+SDF-1、FST+PF4或FST+SDF-1+PF4,分别于培养第7、10、14天检测CD34+细胞扩增倍数、集落形成能力、细胞的黏附分子表达、总黏附性、趋化功能。结果表明:①加入SDF-1的实验组CD34+细胞及造血祖细胞集落扩增倍数高于对照组;②加入SDF-1明显上调扩增的CD34+细胞CD49e的表达,加入PF4明显上调扩增的CD34+细胞CD49e、CD54的表达,在扩增体系中加入SDF-1或PF4均能够明显提高扩增的CD34+细胞的总黏附性;③在扩增体系中加入SDF-1能够明显提高扩增的CD34+细胞的自发迁移率,但导致CXCR-4的表达和SDF-1诱导迁移率降低;而PF4能够明显提高扩增的CD34+细胞的CXCR-4的表达和SDF-1诱导迁移率;在扩增体系中同时加入SDF-1和PF4能够明显提高扩增的CD34+细胞自发迁移率和SDF-1诱导迁移率。结论:体外扩增体系中加入SDF-1和PF4能够上调部分归巢相关黏附分子的表达,保持扩增的CD34+细胞的黏附和迁移能力,有利于降低体外扩增对造血干/祖细胞(HSPC)归巢相关功能的不利影响,维持扩增的HSPC的归巢潜能。 展开更多
关键词 ^cd34^+细胞 脐带血 基质细胞衍生因子-1 血小板第4因子 体外 黏附特性 趋化功能
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GM-CSF对脐血CD34^+巨核祖细胞体外扩增及分化的影响 被引量:5
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作者 陈舒 朱发明 +3 位作者 何吉 刘晋辉 秦斐 严力行 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2005年第6期1041-1043,共3页
本实验旨在研究GMCSF对脐血CD34+细胞诱导分化为巨核细胞的影响。采用免疫磁珠法分选CD34+细胞,在含有TPO+IL3+SCF并添加了不同浓度(5、20、100ng/ml)的GMCSF的无血清培养基中进行培养。培养6、10、14天后计数单个核细胞(MNC),检测CD41... 本实验旨在研究GMCSF对脐血CD34+细胞诱导分化为巨核细胞的影响。采用免疫磁珠法分选CD34+细胞,在含有TPO+IL3+SCF并添加了不同浓度(5、20、100ng/ml)的GMCSF的无血清培养基中进行培养。培养6、10、14天后计数单个核细胞(MNC),检测CD41+细胞比例和CFUMK。结果表明,培养14天后3种不同浓度GMCSF对MNC均有明显的扩增作用,其中以20和100ng/mlGMCSF的扩增效果较好。3种不同浓度的GMCSF均使CD41+细胞比例增加,20和100ng/ml与5ng/mlGMCSF相比更能提高CD41+细胞的比例。5和20ng/ml的GMCSF能促进CFUMK的形成,但100ng/ml的GMCSF却抑制CFUMK的形成。结论:在TPO+IL3+SCF细胞因子组合中添加GMCSF有利于促进脐血CD34+细胞诱导分化为巨核细胞。 展开更多
关键词 GM-CSF 脐血 ^cd34^+细胞 巨核细胞 体外
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人胎盘源贴壁细胞支持脐血CD34^+细胞体外扩增 被引量:8
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作者 张毅 何津 +4 位作者 江小霞 刘刚 刘元林 唐佩弦 毛宁 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2003年第6期560-564,共5页
从胎盘中分离培养人胎盘源贴壁细胞 (humanplacentaderivedadherentcells,hPDAC) ,研究其对脐血CD34+细胞体外扩增作用。以酶消化法自人胎盘组织中分离培养hPDAC ,并以流式细胞术对其进行鉴定。进一步 ,采用免疫磁珠法分离人脐血CD34+细... 从胎盘中分离培养人胎盘源贴壁细胞 (humanplacentaderivedadherentcells,hPDAC) ,研究其对脐血CD34+细胞体外扩增作用。以酶消化法自人胎盘组织中分离培养hPDAC ,并以流式细胞术对其进行鉴定。进一步 ,采用免疫磁珠法分离人脐血CD34+细胞 ,建立以hPDAC为滋养层的CD34+细胞体外扩增培养体系 ,并与无滋养层的液体培养体系相比 ,观察不同培养体系对有核细胞总数、CFC及CD34+细胞百分率的影响。结果表明 ,人胎盘组织中可分离培养出hPDAC ,并证实其为混合性细胞群体 ,主要含有间充质细胞。以hPDAC为滋养层的共培养体系较无滋养层液体培养体系对有核细胞总数、CFC及CD34+细胞均具有明显的扩增效应 ,其中以SCF +IL 3+IL 6 +FL +hPDAC组扩增效果最强 ,分别扩增了 ( 12 6 .0± 6 .7)倍 ,( 4 9.8± 1.7)倍和 ( 8.3± 1.6 5 )倍。上述结果提示 ,hPDAC具有体外支持造血作用 ,并提供了一与脐血CD34+细胞体外扩增相适应的新滋养层。 展开更多
关键词 人胎盘源贴壁细胞 脐血 ^cd34^+细胞 hPDAC 生物学 细胞因子 抗体
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脐血CD34^+细胞体外扩增时HOXB4基因表达的变化 被引量:6
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作者 唐宇宏 费小明 +3 位作者 沈文怡 缪扣荣 崔毓桂 汪承亚 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第1期89-93,共5页
同源盒基因家族成员HOXB4反映原始造血干/祖细胞(PHSC/PHPC)的自我更新和增殖能力。本研究采用实时定量RT-PCR的方法在mRNA水平上检测HOXB4基因的表达,以观察体外扩增脐血CD34+细胞自我更新的水平。结果显示:随着体外培养时间的延长,虽... 同源盒基因家族成员HOXB4反映原始造血干/祖细胞(PHSC/PHPC)的自我更新和增殖能力。本研究采用实时定量RT-PCR的方法在mRNA水平上检测HOXB4基因的表达,以观察体外扩增脐血CD34+细胞自我更新的水平。结果显示:随着体外培养时间的延长,虽然CD34+细胞数增加,但HOXB4表达下降;周后,HOXB4几乎检测不到,与成熟外周血淋巴细胞表达HOXB4的水平相同;CD34+细胞与骨髓间充质干细胞(BM-MSC)共培养可以减缓CD34+细胞HOXB4表达的下降。结论:脐血CD34+细胞体外扩增过程中自我更新能力逐渐下降。CD34+与BM-MSC共培养有助于减缓体外扩增的CD34+细胞自我更新能力的丧失。 展开更多
关键词 HOXB4 ^脐血cd34^+细胞 体外 骨髓间充质干细胞 实时定量RT—PCR
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人脐血基质细胞对脐血CD34^+细胞体外扩增的作用 被引量:5
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作者 高蕾 陈幸华 +6 位作者 张曦 彭贤贵 刘耀 孔佩艳 刘林 刘红 张怡 《医学研究生学报》 CAS 2005年第6期486-489,共4页
目的:研究人脐血基质细胞(hUCBSCs)对脐血CD34+细胞体外扩增的促进作用。方法:应用MACS磁珠分离系统分离脐血CD34+细胞,按照DEXTER法行脐血基质细胞培养,观察hUCBSCs的生长状态及细胞表面分子的表达情况。建立以hUCBSCs为滋养层的脐血CD... 目的:研究人脐血基质细胞(hUCBSCs)对脐血CD34+细胞体外扩增的促进作用。方法:应用MACS磁珠分离系统分离脐血CD34+细胞,按照DEXTER法行脐血基质细胞培养,观察hUCBSCs的生长状态及细胞表面分子的表达情况。建立以hUCBSCs为滋养层的脐血CD34+细胞体外扩增体系,并对脐血CD34+细胞短期扩增后行集落形成单位(CFU)GM、CFUE和CFUMg半固体培养。结果:脐血基质细胞为混合细胞群,包括CD68(+)、Fn(+)、CD31(+)和CD34(-);以hUCBSCs为滋养层的体外扩增体系对脐血CD34+细胞具有明显的扩增作用,体外液体扩增后的脐血CD34+细胞集落形成能力明显高于对照组,其中细胞因子(SCF+IL3+EPO+TPO+GMCSF)联合hUCBSCs体系的扩增作用最强,hUCBSCs在促进CFUMg集落形成的作用中具有明显优势。结论:hUCBSCs具有体外支持造血作用,与细胞因子联合对促进脐血CD34+细胞扩增作用更加明显。hUCBSCs对促进巨核细胞扩增可能具有特殊的意义。 展开更多
关键词 脐血 基质细胞 ^cd34^+细胞 体外
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裸鼠腹腔输注体外扩增的阵发性睡眠性血红蛋白尿症病人骨髓CD34^+CD59^+细胞的研究 被引量:4
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作者 钟玉萍 武永吉 +2 位作者 沈悌 汪玄 张洁萍 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第1期75-78,共4页
应用BALB/c裸鼠为移植模型,将在体外扩增的阵发性睡眠性血红蛋白尿症(paroxysmal nocturnal hemo-globinuria,PNH)病人的CD34+CD59+细胞进行移植,研究其增殖能力和重建造血的情况,为实现PNH患者进行临床自体骨髓移植(ABMT)或自体外周血... 应用BALB/c裸鼠为移植模型,将在体外扩增的阵发性睡眠性血红蛋白尿症(paroxysmal nocturnal hemo-globinuria,PNH)病人的CD34+CD59+细胞进行移植,研究其增殖能力和重建造血的情况,为实现PNH患者进行临床自体骨髓移植(ABMT)或自体外周血干细胞移植(APBSCT)奠定基础。本研究利用免疫磁珠双阳性分选法,从PNH患者骨髓中分离出足够数量的CD34+CD59+细胞进行体外扩增,并将体外扩增的细胞输注给接受亚致死剂量照射的BALB/c裸鼠。结果显示:移植6周后,用流式细胞术和DNA检测方法均检测到裸鼠骨髓、脾脏和外周血中人的CD45+细胞,而接受PNH病人CD34+CD59+细胞移植后的裸鼠,其血常规指标有一定恢复,但并未完全恢复。结论:PNH病人骨髓CD34+CD59+细胞体外扩增后仍能保持造血祖细胞的生物特性,在照射的裸鼠中能重建造血。 展开更多
关键词 阵发性睡眠性血红蛋白尿症 ^cd34^+cd59^+细胞 细胞 裸鼠
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脐血CD 34^+造血干细胞体外扩增的研究 被引量:3
9
作者 钱文斌 林茂芳 +3 位作者 黄河 严力行 金洁 孟海涛 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 1999年第4期145-147,共3页
目的:探讨在体外液体培养中,多种细胞因子联合应用对脐血 C D34+ 造血细胞的扩增作用。方法:用 Isolex 50 免疫磁珠法分离纯化脐血 C D34+ 细胞,在液体培养中,经不同细胞因子组合的诱导,检测有核细胞和集落形... 目的:探讨在体外液体培养中,多种细胞因子联合应用对脐血 C D34+ 造血细胞的扩增作用。方法:用 Isolex 50 免疫磁珠法分离纯化脐血 C D34+ 细胞,在液体培养中,经不同细胞因子组合的诱导,检测有核细胞和集落形成细胞( C F C)的增殖倍数。结果:干细胞生长因子、白细胞介素 I L3、 I L6、粒细胞集落刺激因子和红细胞生成素5 种细胞因子联合对脐血 C D34+ 细胞扩增效果最好,其增殖高峰在第3~4 周,单个核细胞数和 C F U G E M M 增殖倍数最高分别达3268±1024 倍和85±31 倍。结论:以干细胞生长因子、 I L3、 I L6 为主的不同细胞因子组合,能维持脐血 C D34+ 细胞在体外长期造血达6 周,使 C F Cs 大量扩增。 展开更多
关键词 胎血 造血干细胞 基因 抗原 cd34
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脐血CD34^+细胞体外短期培养扩增研究 被引量:2
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作者 苏力 田丁 +2 位作者 万岁桂 刘聪艳 徐娟 《首都医科大学学报》 CAS 2002年第3期218-221,共4页
为寻找更有效的体外扩增脐血CD34 + 细胞的造血细胞因子组合 ,采集健康产妇脐带血 ,用免疫磁珠法分选CD34 + 细胞。采用SCF、FLT3 L、TPO和IL 34种具有早期作用的细胞因子的不同组合进行脐血CD34 + 细胞短期无血清液体培养 ,观察培养前... 为寻找更有效的体外扩增脐血CD34 + 细胞的造血细胞因子组合 ,采集健康产妇脐带血 ,用免疫磁珠法分选CD34 + 细胞。采用SCF、FLT3 L、TPO和IL 34种具有早期作用的细胞因子的不同组合进行脐血CD34 + 细胞短期无血清液体培养 ,观察培养前后有核细胞、CD34 + 细胞、CD34 + /CD38- 细胞、CFU GEMM、CFU GM和BFU E数量的变化。结果在 3种不同的细胞因子组合中 ,同时应用SCF、FLT3 L、TPO和IL 34种细胞因子培养 7d的扩增效果最好。突出的发现是在这种条件下CD34 + /CD38- 细胞亚群达到平均 1 97.9倍的扩增效果。提示 :SCF、FLT3 L、TPO和IL 34种细胞因子是脐血CD34 + 展开更多
关键词 ^脐血cd34^+细胞 造血生长因子 ^cd34^+细胞体外 ^cd34^+/cd38^+细胞亚群
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人正常骨髓CD34^+造血细胞体外扩增形成红系及混合系造血祖细胞的能力 被引量:2
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作者 奚永志 孔繁华 +4 位作者 张双喜 金荔 陈兴国 唐佩弦 魏文 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第4期253-255,共3页
根据阳性选择策略,采用CIMS-100免疫磁性无菌分离系统富集人正常骨髓CD34+造血细胞,然后将其在含Epo+GM-CSF+IL-3+IL-6+SCF(简EGIS)组合造血生长因子的无基质液培体系中扩增4周,定期进... 根据阳性选择策略,采用CIMS-100免疫磁性无菌分离系统富集人正常骨髓CD34+造血细胞,然后将其在含Epo+GM-CSF+IL-3+IL-6+SCF(简EGIS)组合造血生长因子的无基质液培体系中扩增4周,定期进行单个核细胞计数、BFU-E及CFU-Mix的培养。经FACS鉴定所富集的CD34+造血细胞纯度平均>90%。人正常骨髓CD34+造血细胞在该条件下均可持续产生大量单个核细胞,最高可扩增1770倍。与HPP-CFC和CFU-GM相反,BFU-E和CFU-Mix扩增量较低,最高仅为2.36和2.4倍,且仅在第1周出现,随后迅速减少至停止。 展开更多
关键词 cd34 造血细胞 体外 造血祖细胞
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两步法扩增诱导脐血及动员外周血CD34^+细胞来源树突状细胞的比较 被引量:3
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作者 王亚非 孟恒星 +10 位作者 葛薇 于珍 李云涛 李桥川 万长春 徐燕 李新 李增军 王国蓉 尤胜国 邱录贵 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第6期1163-1167,共5页
为了比较先扩增、后诱导的两步法从脐血(CB)CD34+细胞和动员外周血(MPB)CD34+细胞诱导所得DC的产量及功能,将免疫磁珠分选获得的CB-CD34+细胞和MPB-CD34+细胞用FL、TPO、SCF、GM-CSF等细胞因子先扩增10天,然后加入GM-CSF、IL-4及TNF-α... 为了比较先扩增、后诱导的两步法从脐血(CB)CD34+细胞和动员外周血(MPB)CD34+细胞诱导所得DC的产量及功能,将免疫磁珠分选获得的CB-CD34+细胞和MPB-CD34+细胞用FL、TPO、SCF、GM-CSF等细胞因子先扩增10天,然后加入GM-CSF、IL-4及TNF-α、CD40Ab、PGE2等细胞因子组合诱导获得DC。采用流式细胞仪检测DC表型,混合淋巴细胞培养检测DC刺激异基因T细胞增殖能力,ELISA法检测DC分泌IL-12能力,Transwell板检测DC在次级淋巴组织趋化因子(SLC)介导下的趋化功能。结果表明①扩增10天时CB组、MPB组细胞中CD14+CD1a-细胞含量无显著差异[(40.48±16.85)%vs(28.07±23.19)%,P>0.05]。但由于CB组细胞扩增倍数显著高于MPB组(388.88±84.63倍vs79.67±10.32倍,P<0.01),CB组CD14+CD1a-细胞扩增倍数显著高于MPB组(189.42±25.02倍vs28.74±23.27倍,P<0.01);②TNF-α/CD40Ab/PGE2条件下与TNF-α条件下相比,CB组和MPB组所得DC均表达更高的CD83[分别为(34.52±11.22)%vs(3.70±2.27)%、(36.69±13.36)%vs(7.34±3.364)%,P均<0.01];③CB组与MPB组在TNF-α/CD40Ab/PGE2诱导条件下所得DC均高水平表达CD83、CD86、HLA-DR、CD11c、CD54、CD40,CB组所得CD83+细胞的扩增倍数显著高于MPB组(198.72±117.53倍vs33.95±6.19倍,P<0.01);④CD40Ab/PGE2/TNF-α条件下CB与MPB来源的DC在刺激异基因T细胞增殖、IL-12的分泌[(16.2±4.31)pg/mlvs(13.5±4.1)pg/ml]以及SLC介导的迁移率[(28.09±7.76)%vs(18.5±3·47)%]上均无显著差别(P均>0.05)。结论在两步法培养体系下,CB-CD34+细胞与MPB-CD34+细胞来源的DC具有相同的功能,而前者产量显著高于后者。 展开更多
关键词 树突状细胞 脐血 动员外周血 ^cd34^+细胞 两步法培养法
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脐血CD34^+细胞体外诱导扩增红系细胞的探索 被引量:2
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作者 贾延军 刘江 +13 位作者 张可莹 单小燕 李伟 何晓梅 王立君 刘娜 王琳 崔爽 倪雷 赵博涛 龚志尹 王东玫 高颂明 张志欣 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2009年第3期787-792,共6页
本研究利用脐血CD34+细胞在体外大量扩增红系细胞为解决血源短缺、杜绝输血传染、克服稀有血型患者疑难配血等问题提供一种有益的途径。利用添加SCF、IL-3、EPO等细胞因子的无血清培养液扩增脐血来源的CD34+细胞,并通过间充质干细胞的... 本研究利用脐血CD34+细胞在体外大量扩增红系细胞为解决血源短缺、杜绝输血传染、克服稀有血型患者疑难配血等问题提供一种有益的途径。利用添加SCF、IL-3、EPO等细胞因子的无血清培养液扩增脐血来源的CD34+细胞,并通过间充质干细胞的支持培养来诱导其向红系细胞扩增和分化。结果表明,经过23天培养以后,本方法可以使细胞的扩增倍数达到2.52×105,其中95%以上都是红系细胞,粒单系细胞和巨核细胞所占比例都在1%以内。无间充质干细胞的培养体系在细胞扩增数量及红系细胞所占比例方面都明显逊于有间充质干细胞支持的培养体系。结论:利用细胞因子和间充质干细胞可以在体外大量扩增红系细胞,其中间充质干细胞对红系细胞增殖和分化起重要的促进作用。 展开更多
关键词 造血干细胞 间充质干细胞 cd34+细胞 细胞 体外
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应用SCF+IL-2等细胞因子从脐血CD34^+细胞扩增T细胞 被引量:2
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作者 刘元林 隋拥君 +3 位作者 张双喜 郭子宽 吴英 毛宁 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2000年第1期48-51,共4页
肿瘤和艾滋病 (AIDS)的基因治疗或免疫治疗的研究需要大量的T细胞克隆。尽管T细胞来源于CD34+细胞 ,但由于需要胸腺组织的参与 ,使其在体外扩增大量细胞克隆非常困难。本研究用脐血单个核细胞作为辅助细胞 ,在SCF +IL 2等细胞因子的作... 肿瘤和艾滋病 (AIDS)的基因治疗或免疫治疗的研究需要大量的T细胞克隆。尽管T细胞来源于CD34+细胞 ,但由于需要胸腺组织的参与 ,使其在体外扩增大量细胞克隆非常困难。本研究用脐血单个核细胞作为辅助细胞 ,在SCF +IL 2等细胞因子的作用下 ,人脐血CD34+在此培养条件下 ,不断产生CD4 +或CD8+T细胞至少持续 3周。在培养扩增过程中 ,发现CD4 +和CD8+T细胞的比例有一个不断变化的动态过程 ,培养体系中可以检测到CD4和CD8双阳性细胞的存在 ;RT PCR可检测到负责TCR重排的RAG 2基因的表达 ,说明所获得的T细胞来源于CD34+细胞。本研究为从CD34+细胞获得大量的T细胞克隆提供了一个简便的体外培育体系。 展开更多
关键词 脐血 ^cd34^+细胞 T细胞 IL-2 细胞因子
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阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者骨髓CD34^+CD59^+细胞与正常人CD34^+细胞生存、增殖、扩增性能的比较 被引量:1
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作者 肖娟 武永吉 +3 位作者 张之南 吕照江 陈实平 董红燕 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期495-500,共6页
目的探索阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)患者骨髓CD34CD59细胞体外扩增的方法,并对其与正常人CD34+细胞的生存、增殖及扩增性能进行比较,为PNH患者实现自体骨髓移植(ABMT)或自体外周血干细胞移植(APBSCT)提供重要的实验基础。方法应用... 目的探索阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)患者骨髓CD34CD59细胞体外扩增的方法,并对其与正常人CD34+细胞的生存、增殖及扩增性能进行比较,为PNH患者实现自体骨髓移植(ABMT)或自体外周血干细胞移植(APBSCT)提供重要的实验基础。方法应用免疫磁珠富集纯化CD34+细胞,然后用流式细胞仪分选出PNH患者的CD34+CD59+细胞及正常人CD34+细胞。对两种细胞在不同造血生长因子组合下,进行体外扩增液体培养2周。并对扩增前及扩增不同阶段的细胞进行体外半固体培养。结果(1)PNH患者CD34+CD59+细胞在体外能得到有效的扩增,在细胞因子合理组合作用下,第7天时CD34+CD59+细胞绝对数扩增约23.49倍。2PNH患者CD34+CD59+细胞与正常人CD34+细胞存在部分相同或相似的特性。在体外扩增过程中,对细胞因子的反应有相同的趋势,均为扩增第7天达到扩增高峰,均在SCF+IL-3+IL-6+FL+Tpo+Epo组合条件下达到最大扩增能力。并且扩增后的细胞仍有形成CFU的能力,均能很好地保持CD59抗原,无GPI锚连蛋白的丢失。(3)正常人CD34+细胞在生存、增殖、形成CFU的能力及扩增能力上均明显强于PNH患者的CD34+CD59+细胞。结论(1)PNH患者CD34+CD59+细胞在体外能得到有效的扩增,临床上应用具有一定的可行性,能满足大多数PNH患者ABMT或APBSCT的需要。(2) 展开更多
关键词 阵发性睡眠性血红蛋白尿症 骨髓 ^cd34^+cd59^+细胞 正常人 ^cd34^+细胞 生存 性能 比较
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脐血CD34^+细胞扩增中系特异性分化抗原的变化 被引量:4
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作者 郝思国 孙关林 孙立 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2001年第4期248-252,共5页
目的 :探讨CBCD34 + 细胞扩增的最佳HGF组合及移植时机。方法 :CBCD34 + 细胞培养于无血清培养液中 ,分别加入下列HGF ,A组 :对照组 (无HGF) ;B组 :SCF ,IL 3,IL 6 ;C组 :SCF ,IL 3,IL 6 ,G CSF ,Epo ;D组 :SCF ,IL 3,IL 6 ,TPO ,Flt3 L... 目的 :探讨CBCD34 + 细胞扩增的最佳HGF组合及移植时机。方法 :CBCD34 + 细胞培养于无血清培养液中 ,分别加入下列HGF ,A组 :对照组 (无HGF) ;B组 :SCF ,IL 3,IL 6 ;C组 :SCF ,IL 3,IL 6 ,G CSF ,Epo ;D组 :SCF ,IL 3,IL 6 ,TPO ,Flt3 L ;E组 :SCF ,IL 3,IL 6 ,TPO ,Flt3 L ,G CSF ,Epo。培养 2 2d。对不同培养时间的细胞进行NC数量及系特异性CD动态观察。结果 :同对照组相比 ,扩增组NC和CD34 + 细胞均有不同程度的扩增。NC和CD34 + 细胞扩增高峰分别在第 10天和第6天。E组的扩增效果最佳。CD检测显示 ,各组CD34 + 及CD34 + CD38 细胞的比例逐渐减少 ,但B ,D 2组的CD34 + CD38 细胞的比例在第 6天有一过性回升 ,CD14+ ,CD13+ ,CD6 1+ 及Gly A+ 细胞的比例则逐渐升高 ,D组CD34 + 及CD34 + CD38 细胞的比例明显地高于E组 (P <0 .0 1) ,CD3+ 和CD19+ 细胞的比例在扩增中呈下降趋势。结论 :HSPC分化程度与HGF组合及培养时间有关。就细胞总数而言 ,E组HGF组合最佳 ,但就HSPC含量来说 ,以D组为优。第 1周扩增产物中HSPC含量较高 ,移植时间以扩增的第 6~ 10天为宜。 展开更多
关键词 分化抗原 ^cd34^+细胞 脐带血 体外 HGF 造血干细胞移植
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MIP-1β,TGF-β抗体对人基质细胞支持的脐血CD34^+细胞扩增的作用 被引量:2
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作者 吴英理 张翼军 张林生 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期352-355,共4页
目的 研究MIP 1 β ,TGF β抗体对人基质细胞支持的脐血CD34 + 细胞扩增的作用。方法 免疫磁珠法分选脐血中CD34 + 细胞 ,接种到预先照射的基质层上。分为 4组 :MIP 1 β( 30 0ng/ml)组 ,TGF β抗体 ( 2 0 μg/ml)组 ,MIP 1 β +TGF ... 目的 研究MIP 1 β ,TGF β抗体对人基质细胞支持的脐血CD34 + 细胞扩增的作用。方法 免疫磁珠法分选脐血中CD34 + 细胞 ,接种到预先照射的基质层上。分为 4组 :MIP 1 β( 30 0ng/ml)组 ,TGF β抗体 ( 2 0 μg/ml)组 ,MIP 1 β +TGF β抗体 ( 5 μg/ml)组和对照组 (不加细胞因子 )。第 5天半换液并加入MIP 1 β ,TGF β抗体 ( 2 0 μg/ml)和MIP 1 β +TGF β抗体 ( 5 μg/ml)。第 1 0天结束培养。第 5、1 0天收获细胞分别做细胞计数 ,集落培养法检测造血祖细胞数量 ,流式细胞术检测CD34 + 细胞数。结果 MIP 1 β组第 5、1 0天有核细胞数 ,造血祖细胞数 ,CD34 + 细胞数与对照组相比差异无显著性 (P >0 .0 5 )。TGF β抗体组 ( 2 0 μg/ml)及MIP 1 β +TGF β抗体 ( 5 μg/ml)组第 5天有核细胞数与对照组相比差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,第 1 0天有核细胞数与对照组相比差异显著 (P <0 .0 5 )。第 5、1 0天造血祖细胞数 ,CD34 + 细胞数与对照组相比有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 与对照组相比 ,MIP 1 β对人基质细胞支持的脐血CD34 + 细胞无明显的体外扩增作用。在TGF β抗体 ( 2 0 μg/ml)或MIP 1 β +TGF β抗体 ( 5 μg/ml)作用下 ,人基质细胞支持的脐血CD34 + 细胞可在 1 0d内扩增 1~ 3倍。 展开更多
关键词 脐血 体外 巨噬细胞炎症蛋白-1β ^cd34^+细胞 转化生长因子-β抗体 细胞培养 MIP-1Β TGF-β
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多种细胞因子组合对脐血CD34^+细胞的体外扩增 被引量:1
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作者 郭荣 杜欣 +1 位作者 陈波斌 邹萍 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期607-609,共3页
目的 探讨不同细胞因子组合在无血清、无基质条件下对脐血干 /祖细胞的调控作用。方法 将SCF、Flk2 /Flt3配体 (FL)、TPO、IL 6及IL 6受体的可溶性形式 (sIL 6R)进行不同组合扩增脐血CD3 4 + 细胞。结果 ①SCF +FL + / -TPO组合能有... 目的 探讨不同细胞因子组合在无血清、无基质条件下对脐血干 /祖细胞的调控作用。方法 将SCF、Flk2 /Flt3配体 (FL)、TPO、IL 6及IL 6受体的可溶性形式 (sIL 6R)进行不同组合扩增脐血CD3 4 + 细胞。结果 ①SCF +FL + / -TPO组合能有效快速扩增脐血CD3 4 + 、CD3 4 + Thy 1+ 、CD3 4 + CD3 3 + 及长期培养启始细胞 (LTC IC) ;②该组合同时加入IL 6及sIL 6R后 ,脐血干 /祖细胞显著增殖 ;单独加入IL 6(不含sIL 6R )时 ,早期CD3 4 + 细胞和LTC IC含量无明显增加 ,而且CFU Mix、BFU E的扩增不如CFU GM明显 ;③通过细胞凋亡早期膜变化标记FITC An nexin Ⅴ检测细胞凋亡率 ,加入Flt3L和 /或IL 6+sIL 6R后Annexin Ⅴ阳性细胞由 15 2 %~ 19 1%降至 2 8%~ 3 5%。结论 在SCF +TPO +Flt3L +IL 6+sIL 6R组合的无基质、无血清悬浮体系中 ,脐血既能产生大量定向祖细胞 ,又能保持一定数量的早期造血细胞 。 展开更多
关键词 细胞因子 脐血 ^cd34^+细胞 体外 细胞介素6 IL-6受体 可溶性形式
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脐血CD34^+细胞及红系祖细胞扩增的实验研究 被引量:5
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作者 张洁霞 毛平 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2005年第3期429-433,共5页
脐血是造血祖细胞的丰富来源之一,选择合适的培养条件,体外诱导其定向扩增为红系祖细胞,输入体内产生成熟红细胞。本实验旨在探讨脐血单个核细胞(MNC)体外红系定向扩增的理想因子组合(Flt3配基FL联合TPO、SCF、EPO及FL、SCF、TPO)对CD34... 脐血是造血祖细胞的丰富来源之一,选择合适的培养条件,体外诱导其定向扩增为红系祖细胞,输入体内产生成熟红细胞。本实验旨在探讨脐血单个核细胞(MNC)体外红系定向扩增的理想因子组合(Flt3配基FL联合TPO、SCF、EPO及FL、SCF、TPO)对CD34+细胞扩增的影响。将单个核细胞接种至stemspan无血清培养液中,共分3组:A组为对照组,B组为TPO+SCF+FL+EPO+IGF1组,C组为TPO+SCF+FL组,C组在第6天及以后换液加入EPO和IGF1。于培养0、6、10、14天进行细胞计数,细胞集落测定,流式细胞术测定细胞的CD34、CD34CD71、CD71GPA细胞的比例。结果表明:经10天培养后,B组总细胞数扩增6.89倍,而C组3.06倍;B组CD34+细胞增加4.83,而C组2.47倍;B组集落形成细胞数增加4.3倍,而C组增加2.5倍;B组红系祖细胞BFUE和CFUE数增加5.4倍,而C组3.1倍;B组CD34+CD71+细胞数增加8.72倍,而C组3.37倍;B组CD71+GPA+细胞数增加53.4倍,而C组30.29倍。结论:脐血MNC在无血清培养液中加入FL+SCF+TPO实现了CD34+细胞及集落形成细胞的扩增。脐血MNC在无血清培养液中加入FL+SCF+TPO+EPO+IGF1短期液体培养获得红系祖细胞的扩增,在第0天比6天加入EPO获得更多红祖细胞(P<0.05)。由于TPO+SCF+FL+EPO+IGF1组的集落形成细胞数、CFUE和BFUE数于第10天最多。 展开更多
关键词 脐血 单个核细胞 红系祖细胞 无血清培养 ^cd34^+细胞
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转JAK2基因脐血CD34^+细胞体外扩增与生物学特性研究 被引量:1
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作者 赵声明 顾惜春 +2 位作者 常乃柏 许晓东 裴蕾 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期2460-2464,共5页
目的:探讨转基因JAK2介导的脐血干祖细胞长期扩增调控的可行性和转基因细胞的生物学特征。方法:构建逆转录病毒载体MGI-F2JAK2,内含有JAK2基因的功能催化区和2个与小分子靶向基因合成药物(AP20187)结合的位点蛋白(F36v,F2)。应用MiniMAC... 目的:探讨转基因JAK2介导的脐血干祖细胞长期扩增调控的可行性和转基因细胞的生物学特征。方法:构建逆转录病毒载体MGI-F2JAK2,内含有JAK2基因的功能催化区和2个与小分子靶向基因合成药物(AP20187)结合的位点蛋白(F36v,F2)。应用MiniMACS磁珠分选系统纯化分离脐血CD34+细胞,用含JAK2的逆转录病毒上清转染脐血CD34+细胞。转染后的CD34+细胞在IMDM培养体系中,将细胞分为AP20187组;FL组;TPO组;AP20187+FL+TPO(AFT)组。对扩增后的细胞定期检测基因转移后GFP动态变化、细胞免疫标记、造血祖细胞集落培养、染色体核型分析和裸鼠致瘤实验。结果:分选的CD34+细胞纯度>91%,基因转移率为49.32%±6.21%;只有AP20187+FL+TPO组可以使转基因的脐血CD34+细胞大量增殖,扩增至第8周时细胞数达109,CD34+细胞GFP的阳性率由基线水平逐渐上升并于第8周时达到90%以上;细胞表型为CD33+、CD61+、Gly-A+部分阳性;CD38+、HLA-DR+强阳性;CD2、CD7、CD19接近阴性。扩增的CD34+细胞可分别形成BFU-E、CFU-GM、CFU-Mix并以CFU-GM集落为主。扩增后CD34+细胞检测染色体核型正常,裸鼠实验无致瘤特性。结论:转染JAK2基因的人脐血CD34+细胞协同FL和TPO细胞因子可以体外长期扩增脐血干祖细胞,对今后研究细胞信号转导、造血调控以及开展干细胞和基因治疗都有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 酪氨酸激酶JAK2 基因疗法 ^cd34^+细胞
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