目前,对急性白血病细胞表面特异性分子标记物所知甚少,因而白血病的诊断尚缺乏白血病细胞的特异性方法。为此,本研究采用细胞-指数富集配体系统进化(cell-systematic evolution of ligands by exponentialenrichment,cSELEX)技术,筛选...目前,对急性白血病细胞表面特异性分子标记物所知甚少,因而白血病的诊断尚缺乏白血病细胞的特异性方法。为此,本研究采用细胞-指数富集配体系统进化(cell-systematic evolution of ligands by exponentialenrichment,cSELEX)技术,筛选与急性髓系白血病(acute myeloblastic leukemia,AML)M2型(AML-M2)患者CD33+/CD34+细胞结合的核酸适配体(aptamer),为寻找AML-M2白血病细胞表面特异性分子标记物提供基础。首先,通过免疫磁珠方法分选出AML-M2患者骨髓CD33+/CD34+细胞并将其作为靶细胞,正常人CD33+/CD34+细胞为反筛选细胞,采用cSELEX技术,从单链DNA(single strand deoxyribonucleic acid,ssDNA)文库中筛选与AML-M2CD33+/CD34+细胞结合的适配体。随后,通过克隆和测序分析各适配体的结构。结果显示,经过13轮次的反复筛选,ssDNA文库的适配体与AML-M2患者CD33+/CD34+细胞的富集度从0.7%增加到52.9%,至第13轮时趋于稳定。对所获得的30个适配体序列分析表明,大多数适配体含有CCCCT、CTCTC和CTCAC保守序列中的一种。二级结构分析显示,30个适配体中含有3种不同类型的模拟二级结构。结论 :本研究成功筛选到AML-M2型白血病CD33+/CD34+细胞的适配体,这为进一步寻找AML-M2白血病细胞表面特异性分子标记物以及AML-M2型白血病的分子诊断创造了基础。展开更多
目的:分析急性髓系白血病(AML)中三基序蛋白58(tripartite-motif protein 58,TRIM58)基因启动子甲基化水平与其mRNA表达的关系,探讨TRIM58基因在AML中的表达调控。方法:分别用亚硫酸氢盐修饰后PCR、实时荧光定量PCR技术检测原代CD34^(+)...目的:分析急性髓系白血病(AML)中三基序蛋白58(tripartite-motif protein 58,TRIM58)基因启动子甲基化水平与其mRNA表达的关系,探讨TRIM58基因在AML中的表达调控。方法:分别用亚硫酸氢盐修饰后PCR、实时荧光定量PCR技术检测原代CD34^(+)和CD34^(-)AML细胞以及白血病细胞株KG1a、K562中TRIM58基因启动子甲基化状态和TRIM58mRNA表达情况。结果:AML患者CD34^(+)细胞TRIM58基因mRNA表达下调10例,CD34^(-)细胞TRIM58基因mRNA表达下调12例,TRIM58基因启动子甲基化水平与正常对照比较存在统计学差异(P<0.05);KG1a及K562细胞株中TRIM58mRNA表达下调,经地西他滨处理后TRIM58mRNA表达上调。结论:AML细胞中TRIM58mRNA表达下调,可能与其启动子甲基化状态具有相关性。展开更多
文摘目的:分析急性髓系白血病(AML)中三基序蛋白58(tripartite-motif protein 58,TRIM58)基因启动子甲基化水平与其mRNA表达的关系,探讨TRIM58基因在AML中的表达调控。方法:分别用亚硫酸氢盐修饰后PCR、实时荧光定量PCR技术检测原代CD34^(+)和CD34^(-)AML细胞以及白血病细胞株KG1a、K562中TRIM58基因启动子甲基化状态和TRIM58mRNA表达情况。结果:AML患者CD34^(+)细胞TRIM58基因mRNA表达下调10例,CD34^(-)细胞TRIM58基因mRNA表达下调12例,TRIM58基因启动子甲基化水平与正常对照比较存在统计学差异(P<0.05);KG1a及K562细胞株中TRIM58mRNA表达下调,经地西他滨处理后TRIM58mRNA表达上调。结论:AML细胞中TRIM58mRNA表达下调,可能与其启动子甲基化状态具有相关性。
