驼源天然噬菌体纳米抗体文库的构建及抗CD22纳米抗体的筛选 被引量：1

1

作者 何婉钧 崔愷 +2 位作者 张西倩 蒋丹 徐广贤 《细胞与分子免疫学杂志》 北大核心 2025年第3期254-261,共8页

目的筛选出抗CD22特异性纳米抗体,为其作为免疫治疗制剂提供基础。方法构建天然噬菌体纳米抗体展示文库,分析其多样性。以生物素化CD22抗原为靶点,进行3轮生物素链霉亲和素液相筛选法,初步通过ELISA和基因测序鉴定抗CD22纳米抗体序列。... 目的筛选出抗CD22特异性纳米抗体,为其作为免疫治疗制剂提供基础。方法构建天然噬菌体纳米抗体展示文库,分析其多样性。以生物素化CD22抗原为靶点,进行3轮生物素链霉亲和素液相筛选法,初步通过ELISA和基因测序鉴定抗CD22纳米抗体序列。结果经测定,构建的噬菌体纳米抗体展示文库容量为3.89×10~9 CFU/mL,插入有效片段高于85%。基于此文库,初步筛选出7条抗CD22纳米抗体,其氨基酸序列比对结果显示,整体相似性为70.34%,均为亲水性蛋白。蛋白-蛋白复合物对接预测结果表明,5条纳米抗体序列的模拟蛋白都可以配对连接到CD22,主要作用力为疏水相互作用和氢键。结论本研究为靶向CD22的嵌合抗原受体T细胞的研究提供基础,成功构建天然噬菌体纳米抗体展示文库,获得5条抗CD22特异性的纳米抗体。 展开更多

关键词 cd22 纳米抗体 噬菌体展示文库

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重组嵌合抗人CD22四价基因工程抗体在毕赤酵母中的表达及活性检测 被引量：2

2

作者 石胜 钟华 +4 位作者 马玲 农江 白安斌 陈凤莲 吴健敏 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期629-632,共4页

目的:采用酵母多拷贝分泌表达载体pPIC9K表达重组嵌合抗人CD22四价基因工程抗体cRFB4FC和cRFB4CH3,并进行活性检测。方法:采用基因克隆技术获得两抗体的基因,然后将其克隆入表达载体pPIC9K中,构建重组质粒pPIC9K/cRFB4FC和pPIC9K/cRFB4C... 目的:采用酵母多拷贝分泌表达载体pPIC9K表达重组嵌合抗人CD22四价基因工程抗体cRFB4FC和cRFB4CH3,并进行活性检测。方法:采用基因克隆技术获得两抗体的基因,然后将其克隆入表达载体pPIC9K中,构建重组质粒pPIC9K/cRFB4FC和pPIC9K/cRFB4CH3,经测序鉴定正确,电转化入毕赤酵母SMD1163中,将经G418抗性筛选出的重组酵母菌株进行PCR鉴定,经甲醇诱导,表达产物经SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,经ELISA检测生物学活性。采用正交试验优化重组酵母菌株的表达条件以提高抗体的表达量。结果:获得重组表达质粒pPIC9K/cRFB4FC和pPIC9K/cRFB4CH3,经G418筛选及PCR鉴定得到高拷贝整合的重组酵母菌株,经甲醇诱导表达出cRFB4FC和cRFB4CH3蛋白。它们在SDS-PAGE上分别表现为相对分子质量(Mr)约326 000和295 000的蛋白区带,在Western blot分析中均可被山羊抗人IgG Fc单克隆抗体(mAb)识别,经ELISA分析它们都具有较高的生物学活性。优化表达条件后,抗体的表达量分别提高了196.4%和151.7%。结论:抗体cRFB4FC和cRFB4CH3在酵母菌SMD1163中成功获得高效分泌表达,并有免疫学活性。 展开更多

关键词 cd22 人cd22抗体 B细胞淋巴瘤 毕赤酵母

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抗CD22抗体治疗非霍奇金淋巴瘤的研究进展 被引量：2

3

作者 路萍萍 孟志云 +2 位作者 周明霞 王敏伟 窦桂芳 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第6期1258-1261,共4页

CD22抗原既是跨膜糖蛋白也是免疫球蛋白超家族的一员,限制性表达于成熟B细胞和大多数B细胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)的表面,与B细胞的发展、分化和功能有着密切的关系。抗CD22抗原单克隆抗体被开发为NHL诊断和免疫治疗药物,其特点为减弱免疫... CD22抗原既是跨膜糖蛋白也是免疫球蛋白超家族的一员,限制性表达于成熟B细胞和大多数B细胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)的表面,与B细胞的发展、分化和功能有着密切的关系。抗CD22抗原单克隆抗体被开发为NHL诊断和免疫治疗药物,其特点为减弱免疫源性和加强效应因子的相互作用。不同形式的抗CD22抗体作为单药或联合用药治疗NHL的Ⅰ/Ⅱ期临床试验显示,不同形式的抗CD22抗体对放疗化疗无效或复发的NHL病人临床效果良好,药代动力学呈剂量依赖线性关系,半衰期长,高效低毒,人体耐受良好,而且抗CD22抗体联合其他抗体治疗也取得令人鼓舞的结果。本文就CD22抗原的生理功能和作为NHL导向治疗靶分子的特点、抗CD22抗体在治疗中的类型及其与其他抗体的联合应用作了综述。 展开更多

关键词 抗cd22抗体 EPRATUZUMAB 美罗华 非霍奇金淋巴瘤

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CD19和CD22双靶点CAR-T细胞对肿瘤细胞的杀伤作用 被引量：1

4

作者 李薇 曾伟杰 +8 位作者 彭浩 刘灿 刘广花 肖非笛 曾桂芳 梁晓 蔡车国 胡隽源 周明 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期623-630,共8页

目的:设计并制备一种分别靶向B细胞表面抗原CD19和CD22的CAR-T细胞,检测其对肿瘤细胞的体内外杀伤效果。方法:将含有人源化CD19 Sc Fv的二代CAR分子和带有CD3ε链作为共刺激结构域的CD22 Sc Fv CAR分子以P2A自剪切肽连接,序列连接于慢... 目的:设计并制备一种分别靶向B细胞表面抗原CD19和CD22的CAR-T细胞,检测其对肿瘤细胞的体内外杀伤效果。方法:将含有人源化CD19 Sc Fv的二代CAR分子和带有CD3ε链作为共刺激结构域的CD22 Sc Fv CAR分子以P2A自剪切肽连接,序列连接于慢病毒载体p LTR-CMV-MCS中,以HEK-293T细胞包装相应的慢病毒载体,感染健康志愿者提供的T细胞制备CAR-19-22-T细胞,同时以相同二代结构分别构建单靶向CAR-T细胞作为参照。构建表达荧光素酶、CD19和/或CD22的前列腺癌3M细胞(靶细胞)。将各种CAR-T细胞与靶细胞共同培养,采用荧光素酶化学发光法和ELISA法检测其对靶细胞的杀伤能力和细胞因子的分泌水平。通过尾静脉注射Raji-Luc细胞构建NOD-SCID免疫缺陷小鼠白血病模型,分别注射各组CAR-T细胞进行治疗并评估其疗效。结果:培养7 d的CAR-19-22-T细胞的CAR-19表达率为13.7%,CAR-22表达率为14.3%。CAR-19-22-T细胞在10∶1效靶比时,对3M-CD19-Luc、3M-CD22-Luc和3M-CD19-CD22-Luc细胞的杀伤率均显著高于T细胞[(78.1±14.4)%vs(11.1±4.3)%(、46.7±10.7)%vs(12.4±2.7)%(、90.5±4.3)%vs(14.3±3.7)%,均P<0.01];与3M-CD19-Luc、3M-CD22-Luc、3M-CD19-CD22-Luc靶细胞共培养后,CAR-19-22-T细胞IFN-γ、TNF-α和IL-2水平均显著低于CAR-19-T和CAR-22-T细胞(P<0.05或P<0.01)。CAR-19-22-T细胞对移植Raji-Luc细胞模型小鼠治疗效果明显,其生存期显著长于T细胞组(P<0.01),与CAR-19-T组和CAR-22-T组荷瘤小鼠比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论:成功设计并制备了一种双靶点CAR-19-22-T细胞,其能够有效杀伤表达CD19和/或CD22抗原的肿瘤细胞,对Raji-Luc细胞的白血病模型小鼠有显著的治疗效果。 展开更多

关键词 CD19 cd22 双靶点CAR-T细胞 淋巴细胞白血病 靶向治疗

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B细胞非霍奇金淋巴瘤肿瘤组织CD22抗原表达检测及临床意义

5

作者 张东生 丁娅 +5 位作者 李苏 黄慧强 夏忠军 李志铭 林旭滨 姜文奇 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期706-709,共4页

【目的】检测CD22抗原在非霍奇金淋巴瘤肿瘤组织中的表达,初步探讨CD22抗原在非霍奇金淋巴瘤肿瘤组织的表达和临床病理特征的关系。【方法】采用免疫组化方法检测B细胞非霍奇金淋巴瘤肿瘤组织CD22抗原的表达,分析肿瘤组织CD22抗原表达... 【目的】检测CD22抗原在非霍奇金淋巴瘤肿瘤组织中的表达,初步探讨CD22抗原在非霍奇金淋巴瘤肿瘤组织的表达和临床病理特征的关系。【方法】采用免疫组化方法检测B细胞非霍奇金淋巴瘤肿瘤组织CD22抗原的表达,分析肿瘤组织CD22抗原表达和临床病理特征等的关系。【结果】CD22抗原在B细胞非霍奇金淋巴瘤肿瘤组织阳性表达主要见于细胞浆和细胞膜。全组21例,阳性率100.00%(21/21),强阳性(+++)率14.29%(3/21),中等阳性(++)率33.33%(7/21),弱阳性率(+)52.38%(11/21)。CD22表达与病理亚型、性别、年龄以及其它临床病理特征等无明显相关性。【结论】CD22抗原在B细胞非霍奇金淋巴瘤中广泛表达,可以采用免疫组化的方法检测出,该方法简单易行,有一定临床应用前景;B细胞非霍奇金淋巴瘤组织CD22表达和临床病理特征的关系需进一步研究。 展开更多

关键词 非霍奇金淋巴瘤 cd22抗原 免疫组化

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CD3/CD22双特异性单克隆抗体的研制

6

作者 佘鸣 沈德诚 +9 位作者 孙同哲 李洪钊 白金芬 黄丽华 陈晓钎 周立 山芝芳 张金香 郭桂庆 廖晓龙 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期289-289,共1页

关键词 双特异性单克隆抗体 CD3/cd22 双功能抗体 回源杂交瘤

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CD68、CD3、CD15和CD22在难愈合性溃疡创面组织中的表达

7

作者 岳晓莉 李萍 +1 位作者 王芳 蒋玉凤 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第11期1572-1572,共1页

关键词 CD68 CD3 CD15 cd22 难愈合性溃疡 创面组织 基因表达

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七彩神仙鱼免疫球蛋白超家族成员jam-a和cd22基因克隆及表达分析 被引量：2

8

作者 刘鑫 温彬 +3 位作者 马腾飞 缪琳 高建忠 陈再忠 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2022年第6期58-66,共9页

七彩神仙鱼(Symphysodon aequifasciatus)具独特亲代抚育行为,前期研究发现两种免疫球蛋白超家族成员在育幼亲本皮肤高表达,但表达模式不同。为探究二者潜在免疫功能的差异性,运用RT-PCR法克隆获得了免疫球蛋白超家族基因sajam-a和sacd... 七彩神仙鱼(Symphysodon aequifasciatus)具独特亲代抚育行为,前期研究发现两种免疫球蛋白超家族成员在育幼亲本皮肤高表达,但表达模式不同。为探究二者潜在免疫功能的差异性,运用RT-PCR法克隆获得了免疫球蛋白超家族基因sajam-a和sacd22,并采用qRT-PCR法分析了其在不同组织以及嗜水气单胞菌感染中的表达模式。结果显示,sajam-a和sacd22开放阅读框为903 bp和1032 bp,分别编码300个和343个氨基酸(aa)。二者氨基酸序列均包含1个信号肽和1个跨膜结构域,sajam-a还含有1个Ig和1个Ig C2结构域,sacd22含有2个Ig和1个Ig C2结构域。sajam-a和sacd22的氨基酸序列均与尼加拉瓜湖始丽鱼(Archocentrus centrarchus)对应基因的序列相似度最高。组织表达结果显示,sajam-a和sacd22在七彩神仙鱼各组织中均有表达,sajam-a在鳃和肝脏中表达较高,而sacd22在脾脏和头肾中表达较高。嗜水气单胞菌感染后,肠道、头肾、皮肤和脾脏中sajam-a和sacd22的表达均呈显著时序性,但二者的表达模式不同,sajam-a在4个组织中6 h均开始显著上调;而sacd22在肠道和头肾中6 h开始显著上调,在皮肤中12 h开始上调,在脾脏中48 h开始上调。这些结果表明,二者可能在七彩神仙鱼免疫防御中发挥不同的作用。 展开更多

关键词 七彩神仙鱼(Symphysodon aequifasciatus) jam-a cd22 克隆 表达

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CD22表达、功能及调控的研究进展 被引量：2

9

作者 武晓静 邵宗鸿 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期573-577,共5页

CD22是主要在成熟B淋巴细胞表达的I型跨膜蛋白,在B细胞信号传导中起重要作用。CD22作为B细胞受体(BCR)的一个共受体,通过抗原引起CD22与BCR交联,触发CD22磷酸化,主要使下游信号蛋白去磷酸化和失活,抑制BCR信号传导。CD22表达或功能受损... CD22是主要在成熟B淋巴细胞表达的I型跨膜蛋白,在B细胞信号传导中起重要作用。CD22作为B细胞受体(BCR)的一个共受体,通过抗原引起CD22与BCR交联,触发CD22磷酸化,主要使下游信号蛋白去磷酸化和失活,抑制BCR信号传导。CD22表达或功能受损均能影响BCR信号传导,从而影响B细胞数量和功能,最终导致自身免疫性疾病的发生。对CD22功能及调控的研究,有助于更深入的理解自身免疫性疾病的发病机制,并为该类疾病的靶向治疗提供理论基础。本文就CD22的结构和表达、CD22配体、BCR和跨膜信号的调控、CD22对B细胞的作用及CD22与自身免疫性疾病进行综述。 展开更多

关键词 cd22 B细胞 信号传导 自身免疫 BCR

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中华鲟免疫分子CD22的克隆及生物信息学挖掘

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作者 来璇 金钰婷 +1 位作者 金语嫣 廖志勇 《现代农业科技》 2019年第9期204-206,210,共4页

为研究中华鲟免疫分子CD22的结构及其可能对应的功能,克隆中华鲟CD22 cDNA(CsCD22),进行生物信息学分析,根据结构推测功能。结果表明,成功克隆中华鲟CD22 cDNA序列,该序列全长1 748 bp,包含1个1 170 bp的开放阅读框,共编码389个氨基酸,... 为研究中华鲟免疫分子CD22的结构及其可能对应的功能,克隆中华鲟CD22 cDNA(CsCD22),进行生物信息学分析,根据结构推测功能。结果表明,成功克隆中华鲟CD22 cDNA序列,该序列全长1 748 bp,包含1个1 170 bp的开放阅读框,共编码389个氨基酸,包含3个Ig超家族结构域和3个潜在的N-糖基化位点。综上所述,中华鲟CD22分子具有高度保守的结构特征,推测其具有与其他动物CD22分子相似的免疫学功能。 展开更多

关键词 中华鲟 cd22 序列分析 功能预测

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成人急性淋巴细胞白血病4种特异性靶抗原的特征研究 被引量：2

11

作者 林忠琨 张闰 +6 位作者 葛峥 刘娟 吴雨洁 郭星 乔纯 仇海荣 李建勇 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期289-295,共7页

本研究针对成人急性淋巴细胞白血病(ALL)抗体免疫治疗的主要4种特异性靶抗原(CD19、CD20、CD22和CD33),深入探究其临床和预后特征,探讨针对这些靶抗原的新型靶向药物应用于成人ALL治疗的临床依据和价值。对220例成人ALL患者采用四色流... 本研究针对成人急性淋巴细胞白血病(ALL)抗体免疫治疗的主要4种特异性靶抗原(CD19、CD20、CD22和CD33),深入探究其临床和预后特征,探讨针对这些靶抗原的新型靶向药物应用于成人ALL治疗的临床依据和价值。对220例成人ALL患者采用四色流式细胞仪进行免疫表型分析,采用常规细胞遗传学、荧光原位杂交、实时定量PCR和巢式PCR扩增及DNA测序等技术进行细胞学和分子遗传学、分子生物学指标检测。结果显示,CD19阳性(CD19+)组女性和60岁以上老年患者比例高于CD19阴性(CD19-)组(46.4%vs 23.4%,P=0.006)(14.4%vs.2.1%,P=0.022),CD19+伴CD33表达增高(47.8%vs.12.0%,P<0.01),遗传学高危组患者比例显著增高(55.8%vs.20.8%,P<0.01),Philadelphia染色体阳性(Ph+)发生率高(35.3%vs.7.9%)(P<0.01);CD20+组伴CD13+低于CD20-组(31.6%vs.67.1%,P<0.01),CD20+无显著预后意义;在B-ALL患者中,CD22+比CD22-组12月复发率增高(93.9%vs.57.1%,P<0.05);CD33+组Ph+率显著增高(43.5%vs.19.4%,P<0.01),CD33+与Ph+之间有显著相关性(相关系数=0.261,P<0.01)。结论:本研究对CD19、CD20、CD22和CD33这些特异性靶抗原特征的深入分析,有助于指导临床正确把握抗体免疫治疗的适应症和应用时机,使患者最大程度获益。 展开更多

关键词 成人 急性淋巴细胞白血病 CD19 CD20 cd22 CD33

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胞浆CD79a和其它B系相关抗原在急性白血病细胞表达的比较研究(英文) 被引量：1

12

作者 张敬宇 吕涛 +6 位作者 杨敬慈 潘崚 罗建民 杨琳 姚丽 董作仁 徐世荣 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2005年第6期954-958,共5页

为了比较胞浆CD79a(CyCD79a)与包括胞浆CD22(CyCD22)、CD19、CD20和CD10等其它4种常用B系相关抗原在各种急性白血病细胞上的表达情况并寻找针对急性前体B淋巴细胞白血病(pBALL)的最敏感和特异的免疫学标志,对采用流式细胞术方法检测的22... 为了比较胞浆CD79a(CyCD79a)与包括胞浆CD22(CyCD22)、CD19、CD20和CD10等其它4种常用B系相关抗原在各种急性白血病细胞上的表达情况并寻找针对急性前体B淋巴细胞白血病(pBALL)的最敏感和特异的免疫学标志,对采用流式细胞术方法检测的221例成人和儿童急性白血病的免疫表型资料及常规细胞形态学和酶细胞化学染色资料进行了回顾性分析。另外,还对其中的45例急性早幼粒细胞白血病和13例怀疑存在AML1/ETO和CBFβ/MYH11等融合基因的急性髓细胞白血病(AML)进行了细胞遗传学和/或分子生物学检测。结果发现,对于pBALL来说,在这5种常用的B系抗原中,CyCD79a的敏感性最高,而CyCD22的特异性最好。CyCD79a在全部58例pBALL中的表达率为100%,而CyCD22在全部147例AML和15例急性前体T淋巴细胞白血病(pTALL)中则无1例表达,即在非pBALL的急性白血病中的表达率为0%。结论:联合检测CyCD79a和CyCD22是诊断pBALL的最合适的免疫学指标,能够准确地将pBALL与AML和pTALL相鉴别。 展开更多

关键词 胞浆CD79a 胞浆cd22 CD19 CD20 CD10 急性白血病

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基于生物信息学探索肺腺癌预后相关基因及免疫浸润分析 被引量：4

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作者 黄宏玉 巫艳彬 覃寿明 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1358-1365,共8页

目的:筛选出肺腺癌(LUAD)的预后相关因子,并分析LUAD中免疫细胞浸润情况。方法:从癌症基因组图谱(TCGA)数据库中下载LUAD转录组RNA——Seq数据集,应用反卷积算法(CIBERSORT)和估计算法(ESTIMATE)计算患者肿瘤浸润性免疫细胞(TIC)的比例... 目的:筛选出肺腺癌(LUAD)的预后相关因子,并分析LUAD中免疫细胞浸润情况。方法:从癌症基因组图谱(TCGA)数据库中下载LUAD转录组RNA——Seq数据集,应用反卷积算法(CIBERSORT)和估计算法(ESTIMATE)计算患者肿瘤浸润性免疫细胞(TIC)的比例以及免疫和基质成分的数量。利用R软件鉴定LUAD患者与正常人的差异表达基因(DEGs),并进行功能和通路富集分析。采用单变量Cox回归分析和蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络构建方法对DEGs交叉分析,确定LUAD预后相关因子,并选择其中一个预后因子进行单基因分析,最后利用CIBERSORT分析LUAD中免疫细胞浸润情况。结果:共鉴定出363个DEGs,对DEGs进行Cox回归分析和PPI网络构建后,交叉分析得到7个预后相关基因,分别为CCR2、CD79A、BTK、CD19、CD22、CD28、PTPRC。选定CD22进行单基因分析,发现CD22的表达与LUAD患者的临床病理特征(临床分期、肿瘤浸润)呈负相关,与LUAD患者的生存期呈正相关。基因集富集分析(GSEA)显示,免疫相关活性基因集主要富集于CD22高表达组,而代谢途径基因集主要富集于CD22低表达组。CIBERSORT分析表明其中记忆B细胞、幼稚B细胞、静息肥大细胞、静息的CD4+记忆T细胞、CD8+T细胞、调节T细胞与CD22表达呈正相关,提示CD22可能对TME中的免疫优势存在起重要作用。结论:CCR2、CD79A、BTK、CD19、CD22、CD28和PTPRC表达水平可能有助于预测和解释LUAD患者预后,其中CD22还可以作为区分TME免疫活跃状态和代谢活动状态的指标,为LUAD的治疗提供新思路。免疫细胞浸润分析结果为LUAD的分子机制研究提供新思路。 展开更多

关键词 cd22 肺腺癌 预后因子 免疫细胞浸润 肿瘤免疫微环境

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