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口蹄疫病毒3D蛋白在体外的表达纯化及二级结构分析 被引量:5
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作者 韩雪清 刘湘涛 +4 位作者 林祥梅 尹双辉 尚佑军 刘健 梅林 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2005年第5期6-10,共5页
口蹄疫(FMD)是严重影响全球农业经济的高度传染的毁灭性的疫病.3D蛋白是口蹄疫病毒(FMDV)编码的RNA聚合酶,参与病毒RNA的复制.利用PCR扩增得到了FMDV的3D基因片段,然后将其克隆到原核表达质粒pET-28a(+)上,构建重组表达质粒pETFM3D.转... 口蹄疫(FMD)是严重影响全球农业经济的高度传染的毁灭性的疫病.3D蛋白是口蹄疫病毒(FMDV)编码的RNA聚合酶,参与病毒RNA的复制.利用PCR扩增得到了FMDV的3D基因片段,然后将其克隆到原核表达质粒pET-28a(+)上,构建重组表达质粒pETFM3D.转化宿主菌BL21(DE3)后,利用1 mmol/L的IPTG进行诱导表达.SDS-PAGE和Western boltting分析结果表明,得到了稳定、过量表达的可溶性的3D蛋白质.目的蛋白质经NI亲和层析柱一步纯化就达到95%,再经Q-sepharose柱纯化后达到97%.通过圆二(CD)色谱测定和计算3D蛋白质在不同的pH(2、4、6、8和10)和不同的温度下(25~85℃)的二级结构.上述结果表明,表达的可溶性3D蛋白质具有高表达、易纯化和稳定性好等特点. 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 3D蛋白 表达纯化 cd分析
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食管鳞癌患者血清中可溶性CD44v6和E-钙黏蛋白表达的临床意义 被引量:4
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作者 何赢 张军 +5 位作者 王书奎 黄文斌 陈兴国 何帮顺 赵有财 王劲松 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期305-309,共5页
目的:检测食管鳞癌患者血清中可溶性CD44v6(sCD44v6)和可溶性E-钙黏蛋白(sE-cadherin,sE-cad)的表达,探讨这2种可溶性黏附分子表达与食管鳞癌临床病理特征的关系以及这2种可溶性黏附分子在血清中表达的相关性。方法:采集65例食管鳞癌患... 目的:检测食管鳞癌患者血清中可溶性CD44v6(sCD44v6)和可溶性E-钙黏蛋白(sE-cadherin,sE-cad)的表达,探讨这2种可溶性黏附分子表达与食管鳞癌临床病理特征的关系以及这2种可溶性黏附分子在血清中表达的相关性。方法:采集65例食管鳞癌患者、32例糜烂性食管炎患者和35例正常食管者的血清,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中sCD44v6、sE-cad的表达,并与其临床病理资料对照。结果:血清sCD44v6在食管鳞癌组表达水平明显高于正常食管组及糜烂性食管炎组(P<0.05),正常食管组与糜烂性食管炎组比较无统计学差异(P=0.566);血清sCD44v6水平与食管鳞癌临床病理特征无关。血清sE-cad水平在食管鳞癌组明显高于正常食管组及糜烂性食管炎组(P<0.05),正常食管组与糜烂性食管炎组比较无统计学差异(P=0.708);血清sE-cad水平与食管鳞癌临床病理特征无关。食管鳞癌患者血清中sCD44v6和sE-cad水平无显著相关性(r=-0.057,P=0.651)。结论:血清sCD44v6及sE-cad水平测定有望成为筛查食管鳞癌的血清学指标。 展开更多
关键词 酶联免疫吸附测定 基因表达 钙黏着糖蛋白类/分析 食管肿瘤 肿瘤 鳞状细胞 抗原 cd44/分析
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山羊EDNRA基因编码区克隆与组织表达规律分析
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作者 王梦 周靖宣 +4 位作者 占思远 王林杰 李利 张红平 仲涛 《四川农业大学学报》 CSCD 北大核心 2019年第6期852-859,共8页
【目的】旨在探究EDNRA基因在山羊心脏、肝、脾、肺、肾、大脑、网膜脂肪组织中的表达情况。【方法】采用克隆、测序的方法得到山羊EDNRA基因CDS全长的碱基序列,用生物信息学软件进行序列分析、亲水性/疏水性分析、潜在的信号肽位点分... 【目的】旨在探究EDNRA基因在山羊心脏、肝、脾、肺、肾、大脑、网膜脂肪组织中的表达情况。【方法】采用克隆、测序的方法得到山羊EDNRA基因CDS全长的碱基序列,用生物信息学软件进行序列分析、亲水性/疏水性分析、潜在的信号肽位点分析、亚细胞定位分析、蛋白质的二级结构和三级结构预测及系统进化树分析,最后采用实时荧光定量PCR(qPCR)测定EDNRA基因在山羊心脏、肝、脾、肺、肾、大脑、网膜脂肪组织中mRNA的表达量。【结果】成功克隆了EDNRA的CDS序列,得到山羊EDNRA基因包含一个1 284 bp的最长开放阅读框。该序列编码427个氨基酸,含信号肽序列(第1到第20位氨基酸)以及7型跨膜受体同系物结构域。基因编码产物具有疏水性,属分泌蛋白,有35个磷酸化修饰位点。二级结构主要为α-螺旋。系统进化树分析表明,山羊EDNRA基因和绵羊、牛以及野牛的亲缘关系较近。qPCR结果表明,山羊EDNRA基因在心脏中的表达量最高,在肝、脾、肾、大脑、网膜组织中的表达量较低,而在肺中表达最少。【结论】EDNRA可能在心脏行使功能过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 EDNRA基因 cdS区序列分析 蛋白结构预测 组织表达规律 山羊
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免疫表型分型结合FISH检测自然杀伤细胞淋巴瘤细胞的染色体畸变
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作者 翁立红 周俊 +1 位作者 张颜明 顾文祥 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 1999年第6期253-256,267,共5页
目的:检测自然杀伤(NK)细胞淋巴瘤中含有染色体畸变的肿瘤细胞的免疫表型。方法:采用免疫表型分型结合荧光原位杂交(FISH)技术,在单细胞水平检测了3例NK细胞淋巴瘤中含有染色体畸变的肿瘤细胞的免疫表型。结果:在该3... 目的:检测自然杀伤(NK)细胞淋巴瘤中含有染色体畸变的肿瘤细胞的免疫表型。方法:采用免疫表型分型结合荧光原位杂交(FISH)技术,在单细胞水平检测了3例NK细胞淋巴瘤中含有染色体畸变的肿瘤细胞的免疫表型。结果:在该3例中,克隆性的染色体畸变仅见于CD56+ 细胞,在CD3+ 细胞和CD5+ 细胞中未发现相应染色体畸变。结论:实验表明,NK细胞淋巴瘤中,含有染色体畸变的肿瘤细胞局限于CD56+ 、CD3- 和CD5- 的NK细胞群。 展开更多
关键词 淋巴瘤 非霍奇金氏/病因学 杀伤细胞 天然 免疫表型分型 染色体畸变 原位杂交 荧光 抗原 cd56/分析
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