敲低CCAAT/增强子结合蛋白β促进肝癌细胞的增殖和迁移

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作者 陈利荣 刘玉玲 +2 位作者 贾艳梅 梁紫微 李佳佳 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期797-806,共10页

近年来已有研究表明,C/EBPβ在肝癌的发生发展中发挥重要的作用,但其具体分子调控机制尚不清楚。本研究通过分析GEO数据库和Kaplan-Meier Plotter数据库发现,C/EBPβmRNA在肝癌中低表达(P<0.05),且其低表达与肝癌患者预后密切相关。... 近年来已有研究表明,C/EBPβ在肝癌的发生发展中发挥重要的作用,但其具体分子调控机制尚不清楚。本研究通过分析GEO数据库和Kaplan-Meier Plotter数据库发现,C/EBPβmRNA在肝癌中低表达(P<0.05),且其低表达与肝癌患者预后密切相关。进一步,通过功能富集分析和TIMER数据库分析显示,C/EBPβ主要参与细胞周期、DNA转录等生物学过程,且C/EBPβ表达水平与CD4^(+)T细胞和巨噬细胞的免疫浸润具有较强的相关性(P<0.05)。为了进一步研究C/EBPβ对肝癌细胞增殖和迁移的影响。在肝癌细胞中瞬时转染C/EBPβsiRNA,将其分为si-NC组和siC/EBPβ组。通过qRT-PCR、Western印迹检测肝癌细胞中C/EBPβ在mRNA和蛋白质水平均显著降低(P<0.05);通过MTT检测、平板克隆形成实验和5-乙炔基-2-脱氧尿嘧啶核苷(Edu)实验证实,敲低C/EBPβ促进肝癌细胞的增殖(P<0.05);Transwell和划痕实验证实,敲低C/EBPβ促进肝癌细胞的迁移;Western印迹法检测敲低C/EBPβ对肝癌细胞内迁移相关蛋白质(E-cadherin、N-cadherin)以及Wnt/β-catenin信号通路蛋白质表达的影响,结果表明,敲低C/EBPβ促进肝癌细胞EMT上皮间质转化,并能激活Wnt/β-catenin信号通路的基因表达(P<0.05)。综上所述,C/EBPβ在肝癌组织中低表达且与患者生存预后成正相关。敲低C/EBPβ可能通过激活Wnt/β-catenin信号通络促进肝癌细胞的增殖、迁移和上皮间质转化,为C/EBPβ在肝癌的发生发展中的作用提供了依据,可能是一个肝癌诊治过程中的潜在靶点。 展开更多

关键词 肝癌 细胞增殖 细胞迁移 ccaat/增强子结合蛋白β

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转录因子CCAAT增强子结合蛋白β(C/EBPβ)的研究进展 被引量：7

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作者 高运臻 潘玉春 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期198-206,共9页

CCAAT增强子结合蛋白β(CCAAT enhancer binding protein,C/EBPβ)是CCAAT增强子结合蛋白家族的一员。该家族是碱性亮氨酸拉链大家族的一个亚家族,在细胞分化、能量代谢、生长发育等多个进程中发挥作用。文章就C/EBPβ的结构、表达调控... CCAAT增强子结合蛋白β(CCAAT enhancer binding protein,C/EBPβ)是CCAAT增强子结合蛋白家族的一员。该家族是碱性亮氨酸拉链大家族的一个亚家族,在细胞分化、能量代谢、生长发育等多个进程中发挥作用。文章就C/EBPβ的结构、表达调控和生物学功能做一综述,并对研究应用进行了展望。 展开更多

关键词 ccaat增强子结合蛋白 结构 表达调控 生物学功能

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幽门螺杆菌对CCAAT增强子结合蛋白α和Cx43表达的影响及其在胃癌发生中的作用 被引量：5

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作者 周莉 徐灿霞 +4 位作者 胡婷姿 刘晓明 肖静 罗玲 蒋小霞 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期700-706,共7页

目的:探讨CCAAT增强子结合蛋白α(CCAAT enhancer binding proteinα,C/EBPα)和间隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)表达改变在H.pylori致胃癌中的作用。方法:扩大培养不同胃黏膜上皮细胞株(GES-1细胞、AGS细胞、SGC-7901细胞);胃镜下采集... 目的:探讨CCAAT增强子结合蛋白α(CCAAT enhancer binding proteinα,C/EBPα)和间隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)表达改变在H.pylori致胃癌中的作用。方法:扩大培养不同胃黏膜上皮细胞株(GES-1细胞、AGS细胞、SGC-7901细胞);胃镜下采集H.pylori感染慢性非萎缩性胃炎患者6例、胃癌前病变和胃癌患者各12例胃黏膜组织;采用realtime PCR法检测上述细胞和组织中C/EBPα和Cx43 mRNA的表达;同时将东亚型Cag A+H.pylori与GES-1细胞共培养24和48 h为实验组,以不加H.pylori的GES-1细胞株为对照组,培养24和48 h;采用real-time PCR法和Western印迹检测C/EBPα和Cx43 m RNA和蛋白的表达。结果:C/EBPα和Cx43 m RNA在AGS细胞、SGC-7901细胞中的表达均显著低于GES-1细胞(均P<0.05),且两者在SGC-7901细胞中的表达量较AGS细胞更低(均P<0.05);C/EBPα和Cx43 m RNA在胃癌胃黏膜组织中的表达明显低于慢性非萎缩性胃炎(均P<0.05)和胃癌前病变(均P<0.05),C/EBPα与Cx43表达呈正相关(胃癌前病变:r=0.679;胃癌:r=0.792,均P<0.05);实验组24,48 h的C/EBPα和CX43表达量在转录及蛋白水平均低于对照组(均P<0.05),且48 h表达量均低于24 h(均P<0.05)。结论:H.pylori感染可下调胃黏膜上皮细胞C/EBPα和CX43的表达,这可能与胃癌发生有关。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 ccaat增强子结合蛋白n 间隙连接蛋白43 胃癌

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鲤CCAAT增强子结合蛋白α基因的克隆与时空表达特征 被引量：1

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作者 孙志鹏 吕伟华 +4 位作者 党红阳 曹顶臣 匡友谊 鲁翠云 郑先虎 《水产学杂志》 CAS 北大核心 2020年第6期22-27,共6页

CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)是脂肪细胞分化中起重要调控作用的转录因子。本研究利用逆转录PCR和RACE技术获得了体质量200~250 g鲤Cyprinus carpio C/EBPα基因全长cDNA序列为1463 bp,开放阅读框861 bp,编码286个氨基酸。C/EBPα蛋... CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)是脂肪细胞分化中起重要调控作用的转录因子。本研究利用逆转录PCR和RACE技术获得了体质量200~250 g鲤Cyprinus carpio C/EBPα基因全长cDNA序列为1463 bp,开放阅读框861 bp,编码286个氨基酸。C/EBPα蛋白质相对分子量32.5 KD,理论等电点(PI)为7.02。氨基酸同源性分析结果显示,鲤C/EBPα基因与斑马鱼Danio rerio同源性最高为93.36%,与小鼠同源性仅为52.47%。系统进化树结果显示,鲤C/EBPα氨基酸序列与鲫Carassius auratus聚为一支,同源性最高。实时荧光定量PCR检测表明,C/EBPα基因在成体鲤腹腔脂肪组织中表达量最高,肠组织次之,腹部肌肉中表达量最低;胚胎发育期,C/EBPα基因在心跳期表达量最高,七体节期次之,八细胞期最低。鲤C/EBPα基因序列的获得及表达特征研究为进一步深入研究鲤脂肪细胞分化及脂肪发育分子调控机制奠定了基础。 展开更多

关键词 鲤 ccaat增强子结合蛋白α 序列分析

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CCAAT/增强子结合蛋白α抑制人肝癌细胞内的肝刺激因子表达 被引量：1

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作者 吴媛 董凌月 安威 《首都医科大学学报》 CAS 2014年第5期634-639,共6页

目的探讨CCAAT/增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer binding proteinα,C/EBPα)对人肝癌细胞内肝刺激因子(hepatic stimulator substance,HSS)表达的影响及其在表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)抑制HSS表达过程中的作用。方法... 目的探讨CCAAT/增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer binding proteinα,C/EBPα)对人肝癌细胞内肝刺激因子(hepatic stimulator substance,HSS)表达的影响及其在表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)抑制HSS表达过程中的作用。方法采用凝胶迁移电泳实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)研究C/EBPα与HSS启动子的体外相互作用,real-time PCR和Western blotting的方法测定hHSS mRNA和蛋白质表达情况。结果 EMSA实验证实C/EBPα可以与hHSS启动子-343/-330区域内的C/EBPα结合位点结合,对hHSS表达具有负性调节作用,C/EBPαsiRNA转染入HepG2细胞后,hHSS mRNA和蛋白质表达均升高。但C/EBPα表达下降并不影响EGF对hHSS表达,而EGF不改变C/EBPα的活性和表达。结论 C/EBPα可通过C/EBP位点抑制hHSS的表达,但不参与EGF对hHSS的转录调节过程。 展开更多

关键词 肝刺激因子 表皮生长因子 ccaat/增强子结合蛋白α

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肺泡Ⅱ型上皮细胞CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)的161位赖氨酸存在小泛素化修饰

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作者 郝晓波 卢红艳 +2 位作者 朱玥 万峰云 万雪晴 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期158-161,共4页

目的明确人肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)中CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)能否发生小泛素相关修饰物(SUMO)修饰,并进一步鉴定其修饰位点。方法采用免疫荧光双标法检测C/EBPα和SUMO1在人AECⅡ中的表达情况。免疫共沉淀(Co-IP)检测C/EBPα和... 目的明确人肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)中CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)能否发生小泛素相关修饰物(SUMO)修饰,并进一步鉴定其修饰位点。方法采用免疫荧光双标法检测C/EBPα和SUMO1在人AECⅡ中的表达情况。免疫共沉淀(Co-IP)检测C/EBPα和SUMO1在AECⅡ中的相互作用,明确人AECⅡ中C/EBPα能否发生SUMO化修饰。利用SUMOsp软件预测人C/EBPα的SUMO化修饰位点为C/EBPα上第161位赖氨酸(即K161),构建野生型GFP-C/EBPα质粒和突变型GFP-K161R质粒并转染AECⅡ,采用Co-IP鉴定C/EBPα的SUMO化位点。结果免疫荧光双标发现AECⅡ中SUMO1和C/EBPα存在共定位现象,且主要定位于细胞核中; C/EBPα和SUMO1的Co-IP结果出现C/EBPα-SUMO条带,提示C/EBPα能与SUMO1相互作用。野生型GFP-C/EBPα转染的AECⅡ中,可检测到C/EBPα-SUMO特异性条带,而突变型GFP-C/EBPα转染的AECⅡ中,不能检测到C/EBPα-SUMO特异性条带,提示C/EBPα的SUMO化修饰位点为C/EBPα第161位赖氨酸。结论人AECⅡ中C/EBPα能发生SUMO化修饰且其修饰位点为C/EBPα第161位赖氨酸。 展开更多

关键词 ccaat增强子结合蛋白α SUMO 蛋白相互作用 肺泡Ⅱ型上皮细胞

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内质网应激相关因子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白在蛛网膜下腔出血后早期脑损伤中的作用 被引量：2

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作者 黄啸元 赵冬 +5 位作者 刘祺 许晖 戴晶 代林志 徐伟华 王业忠 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第24期2911-2916,2921,共7页

目的探讨内质网应激相关因子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的表达及其在蛛网膜下腔出血(SAH)后早期脑损伤(EBI)中的作用。方法选取健康雄性SD大鼠78只,采用随机数字表法将其分为空白对照组(6只)、假手术组(36只)与SAH组(36只)。... 目的探讨内质网应激相关因子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的表达及其在蛛网膜下腔出血(SAH)后早期脑损伤(EBI)中的作用。方法选取健康雄性SD大鼠78只,采用随机数字表法将其分为空白对照组(6只)、假手术组(36只)与SAH组(36只)。将假手术组和SAH组分别于1、6、12、24、48、72 h,采用简单随机抽样法选取6只大鼠处死。比较各组不同时间点光镜及电镜下大鼠海马神经元形态改变、CHOP相对表达水平、海马神经元凋亡细胞水平及神经行为学评分。结果 3组大鼠6、12、24、48 h时CHOP相对表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其中SAH组大鼠6、12、24、48 h时CHOP相对表达水平均高于空白对照组和假手术组(P<0.05)。空白对照组和假手术组大鼠不同时间点CHOP相对表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。空白对照组与假手术组仅有极少数海马神经元凋亡细胞;SAH组1 h海马神经元未见明显凋亡改变;SAH组6、12 h海马神经元凋亡细胞较前增多,部分散在的海马神经元凋亡细胞的细胞核呈棕褐色;SAH组24 h海马神经元凋亡细胞明显增多;SAH组48 h海马神经元凋亡细胞逐渐减少,72 h可见少量海马神经元凋亡细胞。3组大鼠6、12、24、48 h时海马神经元凋亡细胞水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其中SAH组大鼠6、12、24、48 h时海马神经元凋亡细胞水平均高于空白对照组和假手术组(P<0.01)。空白对照组和假手术组大鼠不同时间点海马神经元凋亡细胞水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。空白对照组、假手术组及SAH组大鼠实验前神经行为学评分比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3组大鼠6、12、24、48 h时神经行为学评分比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其中SAH组大鼠6、12、24、48 h时神经行为学评分均低于空白对照组和假手术组(P<0.01)。空白对照组和假手术组大鼠不同时间点神经行为学评分比较,差异无统计学意义(P>0.05)。SAH组CHOP相对表达水平与海马神经元凋亡细胞水平呈正相关(r=0.933,P<0.01)。结论 SAH后早期CHOP表达增高,海马神经元凋亡细胞增多,神经行为学评分降低,提示CHOP在SAH后内质网应激诱导的细胞凋亡中发挥重要作用。 展开更多

关键词 蛛网膜下腔出血 脑损伤 内质网应激 ccaat增强子结合蛋白类 血管痉挛 颅内 细胞凋亡

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转录因子CCAAT增强子结合蛋白α的研究进展 被引量：7

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作者 应霁 王伟铭 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期262-267,共6页

CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)是CCAAT增强子结合蛋白家族的一员。该家族属于碱性区亮氨酸拉链(b ZIP)蛋白家族,在细胞增殖分化、细胞周期调控、免疫应答、炎症反应、能量代谢、肿瘤发生及凋亡等过程中发挥作用。文章就C/EBPα的结构... CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)是CCAAT增强子结合蛋白家族的一员。该家族属于碱性区亮氨酸拉链(b ZIP)蛋白家族,在细胞增殖分化、细胞周期调控、免疫应答、炎症反应、能量代谢、肿瘤发生及凋亡等过程中发挥作用。文章就C/EBPα的结构、表达调控、生物学功能作一综述。 展开更多

关键词 ccaat增强子结合蛋白α 结构 表达调控 生物学功能

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CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白与钙联蛋白在内侧颞叶癫痫模型小鼠海马中的表达 被引量：1

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作者 沙志强 沙龙泽 许琪 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期265-270,共6页

目的观察CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)及钙联蛋白(CNX)在内侧颞叶癫痫小鼠海马区域中表达的时间和空间分布。方法采用海人酸(KA)诱导内侧颞叶癫痫小鼠模型,免疫印迹和免疫荧光技术检测CHOP和CNX在急性期(12、24 h)小鼠海马CA3区... 目的观察CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)及钙联蛋白(CNX)在内侧颞叶癫痫小鼠海马区域中表达的时间和空间分布。方法采用海人酸(KA)诱导内侧颞叶癫痫小鼠模型,免疫印迹和免疫荧光技术检测CHOP和CNX在急性期(12、24 h)小鼠海马CA3区的表达量及分布差异,并与注射PBS的正常小鼠进行对照。结果免疫印迹检测结果显示,KA注射后12 h小鼠海马中的CHOP(F=1.136,P=0.4069)和CNX表达量(F=2.378,P=0.2087)与对照组差异没有统计学意义,KA注射后24 h注射侧海马中的CHOP(F=8.510,P=0.0362)和CNX表达量(F=6.968,P=0.0497)明显高于对照组。免疫荧光结果显示,KA注射后12 h CHOP的表达主要集中于CA3区,注射后24 h在CA1和CA3区表达水平均升高;KA注射后24 h CHOP蛋白(F=24.480,P=0.0057)和CNX蛋白(F=7.149,P=0.0478)的表达量显著高于对照组。结论伴随着癫痫发作的产生,CHOP蛋白表达量上升,提示神经元内质网应激水平不断增加,可能需要更多CNX作为分子伴侣帮助更多未折叠蛋白完成折叠过程。 展开更多

关键词 内侧颞叶癫痫 内质网应激 ccaat/增强子结合蛋白同源蛋白 钙联蛋白

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CCAAT增强子结合蛋白α与急性髓细胞白血病的发生 被引量：3

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作者 史庭 叶琇锦 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期552-557,共6页

CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)在髓系造血过程中起着重要的调控作用,其基因表达失调是急性髓细胞白血病(AML)发生的重要机制。C/EBPα基因表达失控的结局是p30过表达和p42不完全丧失,两者均促使AML的发生。因此,恢复C/EBPα表达比例,... CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)在髓系造血过程中起着重要的调控作用,其基因表达失调是急性髓细胞白血病(AML)发生的重要机制。C/EBPα基因表达失控的结局是p30过表达和p42不完全丧失,两者均促使AML的发生。因此,恢复C/EBPα表达比例,过表达p42或阻断p30致癌通路是治疗此类原因所致AML的重要途径。本文回顾了近年来关于C/EBPα表达失调及其两种蛋白体在AML发病机制中的研究进展。 展开更多

关键词 ccaat增强子结合蛋白α 白血病 髓样 急性 基因表达 突变 综述

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慢性间歇低氧大鼠肺泡上皮细胞CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)表达增强 被引量：3

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作者 张嘉宾 张盼盼 +5 位作者 寇育乐 王红阳 王玲 张敏 禹江涛 王亚囡 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期79-80,83,共3页

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（obstructive sleep apnea hypopnea syndrome,OSAHS）是呼吸科的一种常见慢性病,其对人体的多个系统都可能造成损害,如认知功能障碍、心脑血管疾病、糖尿病等,其特点为睡眠时反复发生的上气道部分或全... 阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（obstructive sleep apnea hypopnea syndrome,OSAHS）是呼吸科的一种常见慢性病,其对人体的多个系统都可能造成损害,如认知功能障碍、心脑血管疾病、糖尿病等,其特点为睡眠时反复发生的上气道部分或全部塌陷,导致呼吸暂停和（或）气流受限[1-4],使人体处于慢性间歇低氧（chronic intermittent hypoxia,CIH）状态。 展开更多

关键词 阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征 慢性间歇低氧 ccaat/增强子结合蛋白同源蛋白(cHOP) 肺组织

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C/EBPα通过结合鸡神经调节蛋白4基因外显子2正调控其表达

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作者 罗昊玉 黄佳新 +3 位作者 高帆 闫晓红 牟芳 王宁 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期1608-1617,共10页

神经调节蛋白4(NRG4)是一个新发现的脂肪细胞因子,它在机体能量平衡、糖脂代谢等许多生理过程中发挥重要调控作用。目前,NRG 4基因的转录调控机制尚不清楚。我们前期的5′RACE分析显示,鸡NRG 4基因转录起始位点(TSS)弥散分布于一段约200... 神经调节蛋白4(NRG4)是一个新发现的脂肪细胞因子,它在机体能量平衡、糖脂代谢等许多生理过程中发挥重要调控作用。目前,NRG 4基因的转录调控机制尚不清楚。我们前期的5′RACE分析显示,鸡NRG 4基因转录起始位点(TSS)弥散分布于一段约200 bp的区域,提示鸡NRG 4基因的启动子为分散型启动子(dispersed promoter)。本研究开展了鸡NRG 4基因近端外显子和内含子的启动子活性分析,报告基因分析显示,包含NRG 4基因外显子1、内含子1和外显子2的基因组片段(-122/+452)具有很强的双向启动子活性。生物信息学分析显示,鸡NRG 4基因外显子2上存在1个转录因子CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)的潜在结合位点;报告基因分析发现,删除或突变C/EBPα结合位点会导致C/EBPα丧失对NRG 4基因片段(-122/+452)启动子活性的调控作用。基因表达相关性分析显示,鸡脂肪组织中C/EBPα和NRG 4基因的mRNA表达存在显著正相关(P<0.01)。进一步的脂肪组织ChIP-qPCR分析显示,C/EBPα直接结合鸡NRG 4基因的外显子2。本研究发现,鸡NRG 4基因的近端外显子和内含子具有双向启动子活性,C/EBPα通过直接结合外显子2调控鸡脂肪组织NRG 4基因的表达。 展开更多

关键词 神经调节蛋白4 近端外显子和内含子 启动子活性 转录调控 ccaat增强子结合蛋白α(c/ebpα)

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补阳还五汤提高血管性痴呆大鼠海马CREB、C/EBP的DNA结合活性 被引量：11

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作者 张泓波 高维娟 +2 位作者 钱涛 唐敬龙 李君 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1166-1170,共5页

目的观察补阳还五汤对血管性痴呆大鼠海马CREB(cAMP反应元件结合蛋白)、C/EBP(CCAAT/增强子结合蛋白)DNA结合活性的影响。方法实验分为假手术组、模型组、补阳还五汤组和尼莫地平组。采用改良的4血管法制备血管性痴呆模型,分别给予生理... 目的观察补阳还五汤对血管性痴呆大鼠海马CREB(cAMP反应元件结合蛋白)、C/EBP(CCAAT/增强子结合蛋白)DNA结合活性的影响。方法实验分为假手术组、模型组、补阳还五汤组和尼莫地平组。采用改良的4血管法制备血管性痴呆模型,分别给予生理盐水、补阳还五汤、尼莫地平灌胃干预,用凝胶电泳迁移率改变分析法(EMSA)测定各组大鼠CREB和C/EBP的DNA结合活性。结果与假手术组比较,模型组大鼠海马组织CREB的DNA结合活性明显降低(P<0.01);与模型组比较,尼莫地平组与补阳还五汤组明显升高(P<0.01);尼莫地平组与补阳还五汤组之间差异无显著性(P>0.05)。结论补阳还五汤可提高VD大鼠海马组织CREB、C/EBP与DNA的结合活性。 展开更多

关键词 补阳还五汤 血管性痴呆 海马组织 cAMP反应元件结合蛋白 ccaat/增强子结合蛋白 DNA结合活性

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C／EBPα不同截短功能域GST融合蛋白表达载体的构建及表达的研究

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作者 王桂玲 陈薇 +1 位作者 姜佩佳 王孝会 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期484-486,共3页

目的构建GST-C/EBPα融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(E.coli)中诱导表达。方法以质粒pcDNA3.1-C/EBPα为模板,用PCR法扩增C/EBPα全长及各个截短片段,通过EcoRI和XhoI酶切位点将C/EBPα全长及各个截短突变体定向插入pGEX-5X-1中,构建... 目的构建GST-C/EBPα融合蛋白表达载体,并在大肠埃希菌(E.coli)中诱导表达。方法以质粒pcDNA3.1-C/EBPα为模板,用PCR法扩增C/EBPα全长及各个截短片段,通过EcoRI和XhoI酶切位点将C/EBPα全长及各个截短突变体定向插入pGEX-5X-1中,构建原核表达质粒pGEX-5X-1-C/EBPα及其截短突变体,并转化E.coli DH5α,筛选阳性重组子,限制性内切酶酶切鉴定和DNA序列测定正确后,转入E.coli BL21中,异丙基硫代β-D半乳糖苷诱导表达,SDS-PAGE和SDS-PAGE鉴定。结果酶切及测序结果证明,成功构建了原核表达质粒pGEX-5X-1-C/EBPα及其截短突变体,并用SDS-PAGE方法证实了GST-C/EBPα全长及各个截短突变体融合蛋白的表达。结论成功构建了C/EBPα原核表达载体及其截短突变体,并证实了融合蛋白的表达,为进一步纯化C/EBPα蛋白和研究C/EBPα的生物学功能奠定了基础。 展开更多

关键词 ccaat增强子结合蛋白α 截短突变体 质粒 原核表达

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大鼠IL-6基因启动子荧光素酶报告质粒的构建及其与C/EBP β结合位点的鉴定 被引量：1

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作者 庞蓉蓉 李妍 +5 位作者 张婧 单锴 邱文 何风霞 赵聃 王迎伟 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期722-727,共6页

目的 :构建大鼠IL-6基因启动子(全长和截短)荧光素酶报告质粒并予鉴定,观察人胚肾细胞(HEK293)中过表达CCAAT/增强子结合蛋白β(CCAAT/enhancer binding proteinβ,C/EBPβ)对该质粒基因启动子活性的影响。同时,筛选C/EBPβ与IL-6基因... 目的 :构建大鼠IL-6基因启动子(全长和截短)荧光素酶报告质粒并予鉴定,观察人胚肾细胞(HEK293)中过表达CCAAT/增强子结合蛋白β(CCAAT/enhancer binding proteinβ,C/EBPβ)对该质粒基因启动子活性的影响。同时,筛选C/EBPβ与IL-6基因启动子区的结合位点。方法:采用PCR技术,扩增出大鼠IL-6基因启动子全长序列(-1 791～+30 nt),将IL-6基因启动子插入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中。将IL-6基因启动子全长荧光素酶报告质粒(pGL3-IL-6-1)和大鼠野生型C/EBPβ表达质粒(pIRES2-EGFP-C/EBPβ)共转染HEK293细胞,检测其荧光素酶活性,确定C/EBPβ对IL-6基因的启动作用。另用生物信息学软件预测IL-6基因启动子上C/EBPβ潜在的结合位点,并构建IL-6基因启动子截短的荧光素酶报告质粒(即pGL3-IL-6-2～5)。将上述IL-6基因启动子全长和各截短的荧光素酶报告质粒和C/EBPβ过表达质粒共转染HEK293细胞,再行荧光素酶活性测定,筛选出C/EBPβ的结合位点。结果:菌液PCR及核酸测序证实,上述荧光素酶报告质粒均构建成功。将pGL3-IL-6-1和pIRES2-EGFP-C/EBPβ共转染HEK293细胞发现,IL-6基因启动子活性显著增加。另将pGL3-IL-6-1、pGL3-IL-6-2～5和pIRES2-EGFP-C/EBPβ共转染HEK293细胞后发现,pGL3-IL-6-5的启动活性显著低于其他组。提示C/EBPβ可能结合在IL-6基因启动子的-618 bp～-126 bp区域。结论:成功构建了大鼠IL-6基因启动子全长及截短荧光素酶报告质粒,并初步筛查出了C/EBPβ在IL-6基因启动子上的结合部位。 展开更多

关键词 IL-6 ccaat 增强子结合蛋白β(c ebpβ) 荧光素酶报告质粒 启动子活性

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C/EBPε增强U937细胞中PI3Kγ基因的表达

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作者 蔡蓉 戴冰冰 +2 位作者 梅文瀚 李珂 卢健 《上海第二医科大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第6期562-564,571,共4页

目的研究过量表达转录因子CCAAT-增强子结合蛋白ε(CCAAT/enhancerbindingproteins,C/EBPε)对磷脂酰肌醇-3激酶γ(phosphoinositide3kinase,PI3Kγ)基因的影响。方法将C/EBPε基因的真核表达载体pcDNA3.1C/EBPε电穿孔转染U937细胞,G41... 目的研究过量表达转录因子CCAAT-增强子结合蛋白ε(CCAAT/enhancerbindingproteins,C/EBPε)对磷脂酰肌醇-3激酶γ(phosphoinositide3kinase,PI3Kγ)基因的影响。方法将C/EBPε基因的真核表达载体pcDNA3.1C/EBPε电穿孔转染U937细胞,G418筛选出稳定转染的混合细胞克隆后,用RTPCR与Westernblot的方法,分别检测转染细胞与对照细胞中C/EBPε与PI3Kγ基因的表达水平。结果过量表达转录因子C/EBPε后,可以显著提高U937细胞中PI3Kγ基因的表达水平。结论核内转录因子C/EBPε可能参与了PI3Kγ基因的转录调控。 展开更多

关键词 c/ebpε U937细胞 PI3K Γ基因 磷脂酰肌醇-3激酶 增强子结合蛋白 Western PcDNA3 真核表达载体 RT-PcR 核内转录因子 过量表达 电穿孔转染 细胞克隆 稳定转染 blot 转染细胞 转录调控 水平

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C/EBPβ在氧化低密度脂蛋白诱导的白介素1β成熟过程中的作用

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作者 马骏 余三九 +2 位作者 康华丽 邓梦杨 黄岚 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期429-433,共5页

目的探讨CCAAT/增强子结合蛋白β(C/EBPβ)在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的小鼠巨噬细胞白介素1β(IL-1β)成熟过程中的作用。方法分别用0、25、50、100μg/ml ox-LDL对小鼠巨噬细胞株RAW264.7处理12、24、48h,以不同时间点的0μg/ml ... 目的探讨CCAAT/增强子结合蛋白β(C/EBPβ)在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的小鼠巨噬细胞白介素1β(IL-1β)成熟过程中的作用。方法分别用0、25、50、100μg/ml ox-LDL对小鼠巨噬细胞株RAW264.7处理12、24、48h,以不同时间点的0μg/ml ox-LDL为对照组,筛选出50μg/ml ox-LDL处理24h进行后续实验。定量PCR观察C/EBPβ基因表达变化,Western blotting检测C/EBPβ、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(caspase-1)、IL-1β前体及成熟体表达的变化。采用小干扰RNA敲减C/EBPβ及caspase-1,采用ELISA法检测IL-1β分泌的变化,Western blottin检测相关蛋白表达的变化。结果 Ox-LDL呈时间剂量依赖性增加C/EBPβ的表达。其中50μg/ml ox-LDL处理24h后,C/EBPβ蛋白表达开始明显上调,平均上调幅度为57%(P<0.01)。同时ox-LDL可明显增加caspase-1、IL-1β前体、IL-1β成熟体的表达(P<0.05)。敲减C/EBPβ能抑制ox-LDL诱导的caspase-1、IL-1β前体、IL-1β成熟体的表达及IL-1β的分泌,平均抑制幅度分别为34%、36%、54%及53%(P<0.05);而敲减caspase-1仅可抑制IL-1β成熟体的表达及IL-1β的分泌(P<0.05)。结论C/EBPβ是ox-LDL诱导巨噬细胞产生IL-1β的关键性蛋白,并通过调控caspase-1促进IL-1β前体成熟。 展开更多

关键词 ccaat/增强子结合蛋白β 动脉粥样硬化 白细胞介素1Β 氧化低密度脂蛋白

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丹蒌片对同型半胱氨酸诱导的兔主动脉内皮细胞CHOP、BIP蛋白表达和凋亡的影响 被引量：5

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作者 张妍 史占江 +1 位作者 牛春玲 沈晓君 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2016年第4期463-466,共4页

目的:观察丹蒌片对同型半胱氨酸(HCY)诱导的兔主动脉内皮细胞凋亡及内质网应激相关蛋白C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)、免疫球蛋白重链结合蛋白(BIP)表达的影响。方法:以HCY诱导建立兔主动脉内皮细胞损伤模型,分... 目的:观察丹蒌片对同型半胱氨酸(HCY)诱导的兔主动脉内皮细胞凋亡及内质网应激相关蛋白C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)、免疫球蛋白重链结合蛋白(BIP)表达的影响。方法:以HCY诱导建立兔主动脉内皮细胞损伤模型,分别用瑞舒伐他汀(他汀)、丹蒌片含药血清或二者联合共同培养48 h后,Annexin V-PI法检测细胞凋亡率,Western blot法检测CHOP、BIP蛋白表达情况。以未诱导细胞作空白对照。结果:模型细胞凋亡率及BIP、CHOP蛋白表达水平均高于空白对照(P<0.05)。丹蒌片和他汀可明显降低模型细胞的凋亡率,二者具有协同作用(F丹蒌片=475.288,F他汀=235.248,F交互=121.377,P<0.05);丹蒌片可显著下调模型细胞BIP、CHOP蛋白的表达水平,与他汀无协同作用(F丹蒌片=7.017,8.147,P均<0.05;F交互=0.590,1.406,P均>0.05)。结论:丹蒌片可通过下调CHOP、BIP的表达抑制血管内皮细胞凋亡。 展开更多

关键词 丹蒌片 c/ebp环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白 免疫球蛋白重链结合蛋白 血管内皮细胞 凋亡 兔

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初治急性髓系白血病患者CEBPA基因突变检测及其临床意义 被引量：1

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作者 胡瑞萍 崔久嵬 +7 位作者 李薇 张福明 韩薇 杜忠华 韩秀丽 刘晓玲 李红兵 续薇 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期389-394,共6页

目的:探讨急性髓系白血病(AML)患者CCAAT/增强子结合蛋白-α(CEBPA)基因突变的情况,阐明其临床意义。方法:无菌采集279例AML患者和40名对照者骨髓或外周血样本,瑞士染色分析细胞形态学及骨髓幼稚细胞(BM Blast)比例;采用PCR联合序列分... 目的:探讨急性髓系白血病(AML)患者CCAAT/增强子结合蛋白-α(CEBPA)基因突变的情况,阐明其临床意义。方法:无菌采集279例AML患者和40名对照者骨髓或外周血样本,瑞士染色分析细胞形态学及骨髓幼稚细胞(BM Blast)比例;采用PCR联合序列分析法检测CEBPA、FLT3-ITD、NPM1和C-KIT基因突变情况;G显带技术进行染色体核型分析。结果:279例初治AML患者中35例检测到CEBPA基因突变,总检出率为12.5%,其在M2型患者中的检出率显著高于其他亚型(P<0.05)。35例突变患者中31例为双突变,其余4例为单突变,对照者CEBPA突变均为阴性。CEBPA基因突变常见于正常核型患者。与CEBPA野生型患者比较,CEBPA双突变患者的白细胞(WBC)计数、红细胞(RBC)计数及血红蛋白(HGB)水平升高(P<0.05),年龄、血小板(PLT)计数降低(P<0.05),而性别、BM blast比例及FLT3-ITD、NPM1、C-KIT基因突变发生率组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。在治疗方面,CEBPA双突变型与野生型患者首疗程诱导缓解率分别为84.0%和80.5%(P>0.05)。结论:CEBPA基因突变主要见于M2亚型的AML患者,常见突变形式为双等位基因突变,CEBPA双突变型与野生型患者有不同临床特征,表现为WBC、RBC计数和HGB水平较高,年龄和PLT计数较低。 展开更多

关键词 白血病 急性髓系 ccaat 增强子结合蛋白-α 基因突变 序列分析

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补阳还五汤对VD大鼠海马CREB和C/EBP的影响

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作者 张泓波 高维娟 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第A10期2042-2042,共1页

关键词 cREB 大鼠海马 补阳还五汤 c/ebp VD 模型组 血管性痴呆 增强子结合蛋白 反应元件 ccaat

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