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题名多房棘球绦虫TSP5单克隆抗体的制备与鉴定
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作者
罗琦
程永康
陈思思
常岭迪
李子华
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机构
宁夏医科大学总医院
宁夏医科大学基础医学院
武警青海省总队机动第二支队卫生队
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出处
《中兽医医药杂志》
2025年第5期35-40,共6页
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基金
宁夏回族自治区重点研发计划项目(2022BSB03092)。
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文摘
制备并鉴定针对多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis)Tetraspanin 5(TSP5)蛋白的单克隆抗体,评估其在包虫病诊断与免疫治疗中的应用潜力。通过基因合成构建pET-28a-TSP5原核表达载体,诱导表达并纯化重组TSP5蛋白;以该蛋白免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术筛选阳性杂交瘤细胞株,经有限稀释法进行亚克隆筛选;通过间接ELISA检测抗体效价,采用免疫荧光法分析抗体与天然组织中TSP5蛋白的结合特性,并对抗体可变区序列进行测序与分析。结果显示,本试验成功构建pET-28a-TSP5表达载体,表达并纯化出大小约为8.6 kDa的重组TSP5蛋白(对应其膜外结构域)。经细胞融合与亚克隆筛选,获得一株稳定分泌抗TSP5单克隆抗体的杂交瘤细胞株3B7G12。间接ELISA检测显示该抗体效价达1∶243000,免疫荧光检测结果表明该抗体可特异性识别多房棘球蚴组织中原头蚴与囊壁表面的TSP5蛋白。抗体可变区测序结果显示该抗体重链与轻链CDR区序列明确,具备高亲和力结合潜力。本研究成功制备了高效价、高特异性的抗TSP5单克隆抗体,该抗体能够精准结合多房棘球绦虫组织中的TSP5蛋白,为泡型包虫病的分子诊断提供了新型工具,并为后续CAR-T疗法及抗体药物开发提供了重要依据。
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关键词
多房棘球绦虫
Tetraspanin
5
单克隆抗体
包虫病
car-t免疫治疗
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Keywords
Echinococcus multilocularis
Tetraspanin 5
monoclonal antibody
echinococcosis
car-t immunotherapy
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分类号
S855.9
[农业科学—临床兽医学]
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