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猪圆环病毒4型Cap蛋白的原核表达及多克隆抗体制备
1
作者 文英会 崔鸿博 +5 位作者 陈曦艋 陈红英 李金磊 赵丽 刘占通 闫志浩 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第10期4904-4911,共8页
【目的】通过原核表达系统表达猪圆环病毒4型(Porcine circovirus type 4,PCV4)衣壳蛋白(Cap),并制备其多克隆抗体,为PCV4的防控提供技术支撑。【方法】基于PCV4开放阅读框2(ORF2)基因的免疫原区域设计1对特异性引物,通过PCR扩增获得PCV... 【目的】通过原核表达系统表达猪圆环病毒4型(Porcine circovirus type 4,PCV4)衣壳蛋白(Cap),并制备其多克隆抗体,为PCV4的防控提供技术支撑。【方法】基于PCV4开放阅读框2(ORF2)基因的免疫原区域设计1对特异性引物,通过PCR扩增获得PCV4 ORF2基因序列,并将其连接至pET-28a(+)载体,构建重组表达质粒pET-28a-ORF2;将经PCR和测序鉴定正确的重组质粒pET-28a-ORF2转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经1 mmol/L IPTG诱导表达重组Cap蛋白,利用SDS-PAGE分析诱导的重组蛋白产物。利用尿素纯化重组Cap蛋白并通过Western blotting鉴定;将纯化的重组Cap蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体并进行Western blotting鉴定,应用间接ELISA法检测兔血清抗体效价。【结果】PCR扩增出大小为414 bp的PCV4 ORF 2基因片段,成功构建重组表达质粒pET-28a-ORF2。SDS-PAGE分析结果显示,诱导表达的重组Cap蛋白大小为16 ku;Western blotting结果表明制备的兔源多克隆抗体具有良好的免疫原性。间接ELISA检测显示,制备的兔血清抗体效价达1∶12800。【结论】本研究利用原核表达系统成功表达了PCV4 Cap蛋白并制备了多克隆抗体,试验结果为PCV4 Cap蛋白的深入研究以及后续开发PCV4基因工程亚单位疫苗、血清学诊断试剂等提供了物质基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒4型(PCV4) cap蛋白 原核表达 多克隆抗体
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吉林省PCV3野毒株遗传进化分析及其Cap蛋白对巨噬细胞自噬的影响
2
作者 闫佳慧 韩建男 +3 位作者 孙浩 李文龙 苗丽娟 刘东旭 《中国动物检疫》 2025年第2期114-119,共6页
为了探究吉林省PCV3野毒株的起源及其衣壳蛋白(Cap蛋白)是否可以引起巨噬细胞自噬,对10株吉林省PCV3野毒株(JL-1~10)全基因组序列进行遗传进化分析,并通过Western blot和qPCR检测Cap蛋白转染巨噬细胞后其自噬相关基因和蛋白表达量的变... 为了探究吉林省PCV3野毒株的起源及其衣壳蛋白(Cap蛋白)是否可以引起巨噬细胞自噬,对10株吉林省PCV3野毒株(JL-1~10)全基因组序列进行遗传进化分析,并通过Western blot和qPCR检测Cap蛋白转染巨噬细胞后其自噬相关基因和蛋白表达量的变化。结果显示:所有PCV3参考毒株与2018年在日本发现的蝙蝠圆环病毒株LC456718均在524~598 nt位置发生重组,但在JL-1~10中并未观察到该重组现象;JL-1~10与其他宿主来源圆环病毒在不同的分支中聚集;ORF1与其他圆环病毒基因组表现出明显的保守性,但ORF2没有表现出明显的保守性;JL-10和JL-5最近的共同祖先株起源时间为1978年,其他8株的共同祖先株起源时间为1979年;Cap蛋白转染巨噬细胞后,LC3-Ⅱ表达量增加,p62表达量减少;Beclin-1和LC3蛋白基因转录水平极显著升高(P<0.01),Atg7的转录水平显著升高(P<0.05)。结果表明:10株吉林省PCV3野毒株大约起源于40年前(依据参考毒株年份推断),与其他宿主来源圆环病毒的起源不同;Cap蛋白可以促进巨噬细胞自噬,引起自噬相关基因转录水平的升高。 展开更多
关键词 PCV3 进化分析 自噬 cap蛋白
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猪圆环病毒3型Cap蛋白重组PRRSV载体疫苗的构建
3
作者 林丽苗 吴雨 +4 位作者 代锐 赵海参 麦凯杰 范泽昌 李群辉 《上海畜牧兽医通讯》 2025年第1期1-6,共6页
自2017年以来,我国多个省市及地区检出猪圆环病毒3型(porcine circovirus 3,PCV3)阳性样品,提示PCV3已对我国养猪业构成潜在威胁。为构建PCV3 Cap蛋白重组猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,... 自2017年以来,我国多个省市及地区检出猪圆环病毒3型(porcine circovirus 3,PCV3)阳性样品,提示PCV3已对我国养猪业构成潜在威胁。为构建PCV3 Cap蛋白重组猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)载体疫苗,将PCV3的Cap基因嵌到PRRSV JXA1毒株基因组的ORF1b与ORF2a之间,经PCR扩增、双酶切、连接、转化、提取等处理,获得嵌合重组质粒JXA1-Cap;利用经JXA1-Cap转染的MARC-145细胞拯救重组病毒质粒;分析JXA1-Cap在MARC-145细胞中的生长特性;开展动物免疫实验。结果显示,PCV3重组PRRSV嵌合质粒(JXA1-Cap)构建成功,JXA1-Cap在MARC-145细胞中表现出良好的复制特性和感染性,JXA1-Cap能够诱导仔猪产生针对PCV3 Cap和PRRSV N蛋白的特异性抗体。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3 cap蛋白 PRRSV 载体疫苗
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压电-光催化作用对CaP在TC4表面ZnO纳米棒阵列上的沉积机制
4
作者 陈天濠 周清 许晓键 《南京航空航天大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第1期139-146,共8页
由于钛合金(TC4)的表面惰性,其作为骨植入材料在生物相容性方面存在局限性。本文采用水热生长法在TC4表面成功构建了具有压电和光催化特性的ZnO纳米棒阵列涂层。在模拟体液中进行的仿生矿化实验中,通过对样品表面施加振动和紫外光照射,... 由于钛合金(TC4)的表面惰性,其作为骨植入材料在生物相容性方面存在局限性。本文采用水热生长法在TC4表面成功构建了具有压电和光催化特性的ZnO纳米棒阵列涂层。在模拟体液中进行的仿生矿化实验中,通过对样品表面施加振动和紫外光照射,探究压电-光催化共同作用下对磷酸钙(CaP)的沉积的影响,提出了一种新的仿生矿化沉积CaP的方法。结果表明:氧化锌的压电-光催化共同作用显著增强了CaP的沉积量,优于单独压电或光催化作用下的沉积量。此外,单独的振动或紫外光照也表现出较未处理样品更高的CaP沉积量。本文在钛合金片表面制备了ZnO纳米棒阵列,并提出了一种利用压电-光共同作用增强CaP沉积的方法,为涂层技术及生物医用材料的进一步开发应用提供了一种新思路。 展开更多
关键词 TC4 氧化锌 压电-光催化 磷酸钙 仿生矿化
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回顾Rep与Cap的结构及其对研究CRESS DNA 病毒的启发
5
作者 王栓群 刘献辉 +2 位作者 王琳 张衡 谢相科 《微生物学杂志》 北大核心 2025年第2期120-129,共10页
编码复制相关蛋白(Replication-associated protein,Rep)的单链环状DNA病毒(Circular Rep Encoding Single-Stranded DNA (CRESS DNA) Viruses)感染真核生物,具有病毒基因组小、宿主范围多样化、流行率高、滚环复制以及亲和性强等特点。... 编码复制相关蛋白(Replication-associated protein,Rep)的单链环状DNA病毒(Circular Rep Encoding Single-Stranded DNA (CRESS DNA) Viruses)感染真核生物,具有病毒基因组小、宿主范围多样化、流行率高、滚环复制以及亲和性强等特点。CRESS DNA病毒广泛感染且潜伏于多种真核生物,包括植物、动物、人类和真菌等,在病毒学领域影响深远且具有重要意义。CRESS DNA病毒是一种小型非囊膜DNA病毒,直径15~25 nm。病毒具有单链环状的基因组,主要编码两种蛋白质包括衣壳相关蛋白(Capsid protein,Cap)以及复制相关蛋白。Cap是组成病毒衣壳的唯一蛋白质组分,且在整个病毒复制周期中起着至关重要的作用,其参与病毒附着、细胞进入、基因组脱壳和成熟病毒粒子的组装。Rep则介导病毒基因组复制起始位点的识别,并利用其核酸内切酶活性使环状DNA断裂以进行滚环复制(Rolling cycle replication,RCR)。CRESS DNA病毒能够利用碱基长度有限的基因组在多种真核生物中进行复制并引起许多重要疾病,是病毒自然进化过程中产生的一种优秀的研究模型,该病毒进行复制的分子机制以及感染宿主的免疫机制值得深入探究。本文回顾了目前对CRESS DNA病毒编码蛋白的结构研究,通过了解蛋白在复制周期中的作用及其相互关系,为进一步阐明CRESS DNA病毒相关疾病的发病机制提供参考。 展开更多
关键词 CRESS DNA病毒 衣壳蛋白 复制酶相关蛋白 蛋白质结构 致病机制
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茶树春梢萌发早晚关联基因CsAL1的CAPS分子标记开发 被引量：4
6
作者 黄梦迪 陈兰 +5 位作者 苏芹 胡锦瑜 刘桂芝 谭月萍 刘硕谦 田娜 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期207-218,共12页
茶树(Camelliasinensis)作为一种叶用型经济植物,春梢萌发时间是关系茶叶经济价值的重要生物学性状。因此,选育茶树早生品种,对提升茶叶品质和经济效益具有重要的现实意义。以铁观音为参考基因组,通过全基因组关联分析,筛选到一个与茶... 茶树(Camelliasinensis)作为一种叶用型经济植物,春梢萌发时间是关系茶叶经济价值的重要生物学性状。因此,选育茶树早生品种,对提升茶叶品质和经济效益具有重要的现实意义。以铁观音为参考基因组,通过全基因组关联分析,筛选到一个与茶树春梢萌发早晚高度相关的基因CsAL1(Auxilin-like 1,TGY040711)。运用SNP calling获得CsAL1各样本的SNPs,将SNPs与其春梢萌发表型进行关联分析,获得与早生性状显著相关的SNP位点。分析各SNPs的酶切位点,选择合适位点开发茶树早生性状相关CAPS分子标记。利用标记对12份茶树材料基因组DNA进行PCR扩增和酶切检测,随后在72份茶树材料中进一步验证,以期借助CAPS分子标记技术为探究CsAL1中单碱基位点突变与茶树早生性状的联系提供参考,为茶树早生品种的选育提供理论支撑。 展开更多
关键词 茶树 SNP capS分子标记 早生 分子标记育种
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CaP结晶体系中离子簇对磷回收效果的影响 被引量：1
7
作者 李祎楠 聂小保 +4 位作者 万俊力 姜恒 王郭起 欧阳帅 王正博 《中国环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第11期6194-6200,共7页
为提高污水磷酸钙(CaP)结晶的磷回收效果,对CaP结晶体系中的离子簇进行了研究,探讨离子簇成簇和团聚对磷回收的影响.结果表明,采用Ca离子选择电极原位监测结晶体系游离态Ca浓度,结合结晶态P含量和产物Ca/P物质的量比的异位分析结果,可... 为提高污水磷酸钙(CaP)结晶的磷回收效果,对CaP结晶体系中的离子簇进行了研究,探讨离子簇成簇和团聚对磷回收的影响.结果表明,采用Ca离子选择电极原位监测结晶体系游离态Ca浓度,结合结晶态P含量和产物Ca/P物质的量比的异位分析结果,可以实现对离子簇的定量分析.该方法操作简单,准确度较高.CaP结晶过程分为初期的离子簇成簇和团聚(0~20s)、中期的离子簇成簇(20~3000s)和后期的离子簇团聚(3000~7200s),3个阶段的磷回收率分别为11.1%、3.9%和28.5%.磷的回收主要是通过离子簇团聚实现.通过投加晶种,调控CaP离子簇的成簇和团聚过程,有望提升污水CaP结晶的磷回收效果. 展开更多
关键词 cap结晶 磷回收 离子簇 成簇 团聚
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抗新型鹅星状病毒Cap蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：1
8
作者 代格 章丽娇 +7 位作者 黄欣梅 杨靖 刘青涛 韩凯凯 刘宇卓 李银 薛峰 赵冬敏 《江苏农业科学》 北大核心 2024年第21期204-208,共5页
制备抗新型鹅星状病毒Cap蛋白的单克隆抗体,为建立基于病毒Cap蛋白的快速诊断方法奠定基础。构建pET-32a-ORF2重组质粒,转化BL21、IPTG诱导,原核表达出新型鹅星状病毒Cap蛋白,并对其分别进行SDS-PAGE和Western Blot鉴定。结果表明,重组... 制备抗新型鹅星状病毒Cap蛋白的单克隆抗体,为建立基于病毒Cap蛋白的快速诊断方法奠定基础。构建pET-32a-ORF2重组质粒,转化BL21、IPTG诱导,原核表达出新型鹅星状病毒Cap蛋白,并对其分别进行SDS-PAGE和Western Blot鉴定。结果表明,重组蛋白主要以包涵体的形式表达且具有一定的免疫学活性。以原核表达的Cap蛋白为免疫原,免疫6~8周龄BALB/c雌性小鼠,对免疫后血清效价为阳性的小鼠取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合。做间接ELISA筛选出阳性克隆,并以有限稀释法连续进行3次亚克隆,成功筛选出1株分泌抗新型鹅星状病毒Cap蛋白抗体的杂交瘤细胞株,命名为1D7,采用腹水法大量制备单克隆抗体,效价可达1∶64 000。鉴定出1D7的亚型为IgM。1D7分别与重组Cap蛋白和接种新型鹅星状病毒的LMH细胞进行Western Blot分析,发现该单抗既能识别重组Cap蛋白又能与新型鹅星状病毒发生特异性反应。 展开更多
关键词 鹅星状病毒 cap蛋白 原核表达 单克隆抗体
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猪圆环病毒3型Cap蛋白单克隆抗体的制备及阻断ELISA检测方法的建立 被引量：3
9
作者 张宝戈 黄雅琴 +2 位作者 蔡金双 朱晨光 李玉峰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1170-1178,共9页
旨在建立检测猪圆环病毒3型(PCV3)抗体的阻断ELISA方法,本研究利用原核表达的PCV3Cap重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备获得了一株分泌阻断效果良好抗体的杂交瘤细胞株2E6。以重组Cap蛋白作为包被抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的2E6单克隆... 旨在建立检测猪圆环病毒3型(PCV3)抗体的阻断ELISA方法,本研究利用原核表达的PCV3Cap重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备获得了一株分泌阻断效果良好抗体的杂交瘤细胞株2E6。以重组Cap蛋白作为包被抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的2E6单克隆抗体作为检测抗体,经条件优化后建立了一种检测PCV3抗体的阻断ELISA方法。用建立的阻断ELISA方法检测50份临床阴性血清,计算阻断率(PI)的临界值,以此来确定该方法的判定标准:当PI≤28.30%时,判定结果为阴性;当PI≥35.05%时,判定结果为阳性;当28.30%<PI<35.05%时,判定为可疑,重复一次试验后如果结果仍为可疑,则判定为阳性。特异性试验表明该方法与猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)以及猪瘟病毒(CSFV)的阳性血清均无交叉反应;敏感性试验表明其检测效价可达到1:128;重复性试验表明批内与批间的变异系数均小于10%;符合性检验表明该方法与PCV检测金标准免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)比对的Kappa值达0.9,具有高度的一致性。综上所述,本研究建立的阻断ELISA方法具有良好的特异性与较高的符合率,可用于后期进行PCV3抗体的检测,为PCV3的流行病学调查与临床诊断提供技术支持。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3型 cap重组蛋白 单克隆抗体 阻断ELISA
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鸽圆环病毒Cap基因SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的建立及应用 被引量：2
10
作者 韩晓语 杨俊杰 +4 位作者 赵洪哲 郭昊 王亚新 温永俊 王凤雪 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第3期95-101,共7页
为建立一种针对鸽圆环病毒(PiCV)的快速诊断方法,试验根据PiCV的Cap保守基因序列,设计合成一对特异性引物,建立了PiCV荧光定量PCR检测方法,对其敏感性、特异性、重复性进行评价并利用该方法对临床样本进行检测。结果表明:在最佳反应条件... 为建立一种针对鸽圆环病毒(PiCV)的快速诊断方法,试验根据PiCV的Cap保守基因序列,设计合成一对特异性引物,建立了PiCV荧光定量PCR检测方法,对其敏感性、特异性、重复性进行评价并利用该方法对临床样本进行检测。结果表明:在最佳反应条件下,所建立的PiCV荧光定量PCR方法在1×10^(2)~1×10^(7) copies/μL标准品范围内具有良好的线性相关性,线性相关系数为0.9846;敏感性试验结果显示,该方法最低可检测到1×10^(2) copies/μL标准品,是常规PCR检测方法的100倍;特异性试验结果显示,该方法与其他常见的鸽病病原不发生交叉反应;重复性评价结果显示,批内与批间的变异系数均小于2%;所建立PiCV荧光定量PCR方法对临床病死鸽肝脏样品检测结果显示,PiCV阳性率达75.7%,高于常规PCR方法的检测阳性率(54.1%),说明该方法具有良好的适用性。可应用于对PiCV的快速检测,为PiCV的及时防控提供有力技术支持。 展开更多
关键词 cap基因 鸽圆环病毒 实时定量PCR
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猪圆环病毒3型四川株Cap蛋白的截短表达及其抗体间接ELISA方法的建立 被引量：1
11
作者 欧云文 潘琴 +5 位作者 汪洋 代军飞 任绍科 张洋 翟佳佳 张杰 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期3056-3066,共11页
【目的】原核截短表达猪圆环病毒3型(Porcine circovirus type 3,PCV3)四川株Cap蛋白(1-197位氨基酸),并建立其抗体间接ELISA检测方法,为PCV3血清学调查提供材料。【方法】以PCV3四川分离株基因组为模板,PCR扩增获得Cap蛋白编码基因片段... 【目的】原核截短表达猪圆环病毒3型(Porcine circovirus type 3,PCV3)四川株Cap蛋白(1-197位氨基酸),并建立其抗体间接ELISA检测方法,为PCV3血清学调查提供材料。【方法】以PCV3四川分离株基因组为模板,PCR扩增获得Cap蛋白编码基因片段,将其克隆至原核表达载体pET-30a(+)中构建重组质粒pET30a-PCV3-Cap。经酶切和测序鉴定后,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,Ni-NTA树脂亲和层析纯化,获得具有良好抗原性的重组Cap蛋白。基于纯化的重组Cap蛋白建立间接ELISA方法,确定最佳抗原包被浓度、待检血清最佳稀释比例、酶标抗体稀释比例和阴阳性临界值,对间接ELISA方法的特异性、敏感性、重复性、相关性和符合率进行分析,并对2018-2022年采自川东北地区猪场的351份临床猪血清进行检测,分析该区域PCV3流行情况。【结果】试验成功构建pET30a-PCV3-Cap重组表达载体,实现重组Cap蛋白(1-197位氨基酸)的原核截短表达,蛋白大小约为26 ku,可与PCV3阳性猪血清发生特异性反应;确定最佳抗原包被浓度为1 ng/μL,待检血清最佳稀释比例为1∶100,酶标抗体稀释比例为1∶60000,阴阳性临界值D_(450 nm)为0.684;建立的间接ELISA方法与猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)和猪细小病毒1型(PPV1)阳性猪血清均不发生交叉反应,敏感度达1∶1600,批内变异系数和批间变异系数均<10%,与病毒中和试验(VNT)结果呈正相关,与Western blotting方法的阳性符合率为95.8%;2018-2022年川东北地区的351份猪血清样品阳性率为7.12%。【结论】本研究成功截短表达了PCV3四川株Cap蛋白(1-197位氨基酸),建立了特异性强、灵敏度高、重复性好和符合率高的PCV3间接ELISA方法,为PCV3的血清学调查和检测试剂盒的开发提供了材料。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3型(PCV3) cap蛋白 截短表达 ELISA
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猪圆环病毒2型Cap蛋白的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的初步建立
12
作者 严杰聪 王帅勇 +11 位作者 王曼茱 王娟 荣新利 邢燕茹 虞凌雪 周艳君 单同领 童武 郑浩 刘长龙 童光志 于海 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第4期79-84,共6页
Cap蛋白作为猪圆环病毒2型(PCV2)的主要结构蛋白,构成病毒的核衣壳,是PCV2的主要免疫保护性抗原,在PCV2血清学诊断中具有重要意义。本研究根据PCV2的ORF2基因序列设计特异性引物,通过PCR方法扩增得到去核定位信号肽的ORF2基因,并通过同... Cap蛋白作为猪圆环病毒2型(PCV2)的主要结构蛋白,构成病毒的核衣壳,是PCV2的主要免疫保护性抗原,在PCV2血清学诊断中具有重要意义。本研究根据PCV2的ORF2基因序列设计特异性引物,通过PCR方法扩增得到去核定位信号肽的ORF2基因,并通过同源重组将其克隆至原核表达载体pCold-Ⅰ中,经测序鉴定成功获得重组质粒pCold-Ⅰ-Cap。将重组质粒转化至感受态细胞BL21中进行表达,通过考马斯亮蓝染色以及免疫印迹试验检测Cap蛋白的表达,同时将纯化后的重组蛋白通过优化反应条件建立检测PCV2血清抗体的间接ELISA方法。结果表明:重组去核定位信号肽Cap蛋白可溶性表达且可以与PCV2阳性血清特异性结合,通过探索不同蛋白包被浓度以及不同一抗孵育浓度初步建立了间接ELISA检测方法,进而为PCV2抗体的有效监测奠定基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 cap蛋白 同源重组 表达纯化 ELISA
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昆虫杆状病毒表达的猪圆环病毒2d型Cap蛋白-VLP对仔猪的免疫保护效果
13
作者 王亚文 张亚楠 +4 位作者 袁晨 任静 苏恺 杨柳 宋勤叶 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期76-84,共9页
猪圆环病毒2d基因型(Porcine circovirus type 2d,PCV2d)为猪场当前流行的PCV2优势基因型,为了研究针对PCV2d基因型的病毒样颗粒(Virus-like particle,VLP)疫苗,提高猪圆环病毒病的防控效果。本研究利用杆状病毒表达系统表达了能够自组... 猪圆环病毒2d基因型(Porcine circovirus type 2d,PCV2d)为猪场当前流行的PCV2优势基因型,为了研究针对PCV2d基因型的病毒样颗粒(Virus-like particle,VLP)疫苗,提高猪圆环病毒病的防控效果。本研究利用杆状病毒表达系统表达了能够自组装为VLP的PCV2d-Cap蛋白,然后将9头21日龄健康仔猪随机分为VLP组、攻毒对照组和空白对照组(n=3)。VLP组的每头仔猪经颈部肌肉注射400μg Cap蛋白-佐剂复合物(PCV2d-VLP),攻毒组注射等体积的PBS与佐剂混合物,空白组注射等体积的PBS。共接种2次,每次间隔14 d。于第2次免疫后21 d,VLP组和攻毒对照组的仔猪通过鼻腔感染PCV2 HBDX-2018株(106TCID50/头),评价PCV2d-VLP诱导的免疫效果。结果表明PCV2d-VLP能够诱导仔猪产生高水平的特异性IgG抗体和中和抗体,刺激IFN-γ水平升高,引起外周血淋巴细胞增殖能力增强,降低病毒经鼻腔和直肠的排毒率及病毒血症阳性率,减轻腹股沟淋巴结和脾脏的病理损伤,降低组织中的病毒载量。上述研究表明,应用杆状病毒表达的PCV2d-Cap蛋白能自组装为VLP,并能诱导仔猪产生良好的免疫保护效应,具有进一步开发为PCV2d-VLP疫苗的潜力。 展开更多
关键词 PCV2d cap蛋白 病毒样颗粒 杆状病毒 免疫效果
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周期性张应变调控的CAPZA1在内皮祖细胞归巢中的机制研究
14
作者 邹敏文 霍云龙 +1 位作者 齐颖新 韩悦 《医用生物力学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第S01期364-364,共1页
目的内皮祖细胞(EPCs)在损伤和缺血组织的修复中起重要作用。前期研究表明,黏附在损伤区域的EPCs会受到生理性周期性张应变的作用,通过上调长链酯酰辅酶A合成酶1(Acsl1)促进线粒体脂肪酸代谢,进而促进EPCs的归巢能力。然而,Acsl1如何感... 目的内皮祖细胞(EPCs)在损伤和缺血组织的修复中起重要作用。前期研究表明,黏附在损伤区域的EPCs会受到生理性周期性张应变的作用,通过上调长链酯酰辅酶A合成酶1(Acsl1)促进线粒体脂肪酸代谢,进而促进EPCs的归巢能力。然而,Acsl1如何感受力学作用促进EPCs归巢的机制尚不明确。方法应用Flexcell张应变加载系统,对EPCs施加10%幅度,1.25 Hz频率的生理性周期性张应变24 h。应用原子力显微镜检测静止组和牵拉组的细胞硬度,利用高内涵细胞成像分析系统和结构照明显微镜检测F-actin的变化,再通过Co IP-MS/MS寻找Acsl1的关键互作蛋白并验证。结果与静态组相比,张应变组EPCs的硬度显著上升。100倍油镜下张应变组EPCs的F-actin微丝更致密且变长,提示张应变促进了EPCs的骨架重塑。过表达Acsl1后,Co IP-MS/MS检测到潜在的互作蛋白,将其中与细胞骨架相关的蛋白分别与Acsl1进行分子对接,预测结果提示,F-actin的加帽蛋白CAPZA1与Acsl1互作的可能性最大,且Co IP验证二者确实存在互作。结论CAPZA1主要抑制F-actin的聚合,周期性张应变可能通过上调Acsl1水平,从而竞争性结合与F-actin互作的CAPZA1,进而促进F-actin的聚合,导致细胞骨架重塑,最终促进EPCs的归巢。 展开更多
关键词 周期性张应变 油镜 内皮祖细胞 显微镜检测 归巢 脂肪酸代谢 力学作用 cap
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CAP1000型蒸汽发生器内部构件关键安装工艺与清洁控制 被引量：3
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作者 路扬 庄思明 《压力容器》 北大核心 2024年第6期83-88,共6页
针对CAP1000型蒸汽发生器内部构件关键安装工艺及清洁控制等问题,分析了初级分离器及给水环等内部构件在有限空间精确位置的调节和临时固定等难点,研究了内套筒在下壳体内同轴安装以及换热管U形端在壳体最终对接焊接时所面临的污染和磕... 针对CAP1000型蒸汽发生器内部构件关键安装工艺及清洁控制等问题,分析了初级分离器及给水环等内部构件在有限空间精确位置的调节和临时固定等难点,研究了内套筒在下壳体内同轴安装以及换热管U形端在壳体最终对接焊接时所面临的污染和磕碰问题。基于该设备各部分内部构件结构特征提出清洁安装工艺方案,通过设计和应用多种防护用具和机械支撑调节装置,取代常规焊接固定方式,更加精准控制各项安装尺寸,避免了焊接和打磨带来的内部污染。实践表明,采用该安装工艺和方法可有效提高CAP1000型蒸汽发生器内部构件的制造精度、清洁度和产品总体质量。 展开更多
关键词 cap1000型蒸汽发生器 内部构件 机械支撑 安装工艺
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血凝试验和反向间接血凝试验定量检测PCV2 Cap抗原的研究 被引量：2
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作者 李晶梅 谢红玲 +8 位作者 薛霜 李文静 黄涛 王焕君 刘项羽 张飞雁 朱薇 李婷婷 石宝兰 《中国兽药杂志》 2024年第1期1-5,共5页
为研究能否用血凝和反向间接血凝方法定量检测重组杆状病毒表达的PCV2 Cap抗原,分别使用不同稀释液和不同的动物红细胞测定PCV2Cap抗原的凝集效价,同时使用PCV2Cap单抗致敏绵羊红细胞,检测PCV2Cap抗原、空杆状病毒、CSFV等的反向间接血... 为研究能否用血凝和反向间接血凝方法定量检测重组杆状病毒表达的PCV2 Cap抗原,分别使用不同稀释液和不同的动物红细胞测定PCV2Cap抗原的凝集效价,同时使用PCV2Cap单抗致敏绵羊红细胞,检测PCV2Cap抗原、空杆状病毒、CSFV等的反向间接血凝效价(RIHA效价)。结果显示,用猪、鸡、绵羊红细胞在不同稀释液条件下测得的同一批次PCV2Cap抗原凝集效价为3log2~9log2,说明PCV2Cap抗原可凝集猪、鸡、绵羊红细胞,但红细胞不同、稀释液不同,测得的PCV2Cap抗原凝集效价也不同。使用PCV2Cap单抗致敏绵羊红细胞,测得的PCV2Cap抗原RIHA效价为14log2,且纯化后和未纯化的PCV2Cap抗原的RIHA效价均与ELISA定量检测结果有平行关系;空杆状病毒、CSFV、PRRSV、PRV、PEDV、TCEV的RIHA效价均小于1log2。说明反向间接血凝方法可定量检测重组杆状病毒表达的PCV2Cap抗原,该方法敏感、特异,适用于疫苗生产中的PCV2Cap抗原的定量检测。 展开更多
关键词 PCV2 cap抗原 反向间接血凝 血凝 红细胞
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猪圆环病毒3型Cap蛋白的原核表达与鉴定
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作者 朱钰英 高翠翠 +6 位作者 唐青海 刘婷 赵婷芳 曾沛暄 赵铖 胡意 李小申 《湖南畜牧兽医》 2024年第2期35-38,共4页
[目的]研究旨在扩增PCV3病毒的Cap基因,体外表达PCV3 Cap蛋白。[方法]试验分别建立重组原核表达载体p ET28a-PCV3-Cap和p Cold-PCV3-Cap,转化Rosetta(DE3)表达菌株,在不同温度条件下诱导表达蛋白,采用SDS-PAGE和Western blotting进行蛋... [目的]研究旨在扩增PCV3病毒的Cap基因,体外表达PCV3 Cap蛋白。[方法]试验分别建立重组原核表达载体p ET28a-PCV3-Cap和p Cold-PCV3-Cap,转化Rosetta(DE3)表达菌株,在不同温度条件下诱导表达蛋白,采用SDS-PAGE和Western blotting进行蛋白鉴定。[结果]PCV3 Cap蛋白在p ET28a原核表达系统中无表达;Rosetta-p Cold-PCV3-Cap在诱导温度为15℃、IPTG浓度为1.0 mmo L/L、诱导4 h的条件下,能够表达分子量约为25 k Da的Cap蛋白,且为可溶性表达。[结论]试验成功制备了PCV3 Cap蛋白,为制备PCV3疫苗及其诊断方法的研究提供了基础材料。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3型(PCV3) cap蛋白 原核表达 鉴定
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广西地区鸽圆环病毒Cap和Rep基因的克隆及遗传进化分析 被引量：1
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作者 黄运福 颜国庆 +5 位作者 唐林生 韦建兴 银慧慧 赵武 姜源明 刘伟 《现代畜牧兽医》 2024年第4期1-5,共5页
研究旨在了解广西某肉鸽场鸽圆环病毒(PiCV) Cap和Rep基因的遗传变异情况,通过PCR技术对感染PiCV的鸽组织样品克隆Cap和Rep基因并进行测序及序列分析。结果显示,克隆的Cap和Rep基因大小分别为816 bp和954 bp。核苷酸序列同源性比对分析... 研究旨在了解广西某肉鸽场鸽圆环病毒(PiCV) Cap和Rep基因的遗传变异情况,通过PCR技术对感染PiCV的鸽组织样品克隆Cap和Rep基因并进行测序及序列分析。结果显示,克隆的Cap和Rep基因大小分别为816 bp和954 bp。核苷酸序列同源性比对分析结果显示,克隆的Cap和Rep基因与XJ1毒株核苷酸同源性最高,分别为95.5%和97.6%。遗传进化分析结果显示,Cap和Rep基因与XJ1毒株亲缘关系较近。研究表明,广西鸽群中存在PiCV流行,其Cap和Rep基因与XJ1毒株核苷酸同源性最高,亲缘关系较近,这为广西地区PiCV的诊断及防控提供了重要参考。 展开更多
关键词 鸽圆环病毒 cap基因 Rep基因 遗传进化分析
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改良的RIHA方法定量检测PCV2 Cap抗原的研究
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作者 谢红玲 李晶梅 +8 位作者 冯钊 雷环城 杨思谊 黄泳芳 刘项羽 程敏华 秦红刚 田丽娜 孙文 《中国兽药杂志》 2024年第10期1-7,共7页
为提高反向间接血凝试验(reverse indirect hemagglutination assay,RIHA)定量检测PCV2 Cap抗原的稳定性和精准性,将RIHA方法改良为:1)将被检样品稀释为几个适宜稀释度,分别做RIHA检测;2)检测孔100%、75%、50%、25%、0%凝集分别记录为4... 为提高反向间接血凝试验(reverse indirect hemagglutination assay,RIHA)定量检测PCV2 Cap抗原的稳定性和精准性,将RIHA方法改良为:1)将被检样品稀释为几个适宜稀释度,分别做RIHA检测;2)检测孔100%、75%、50%、25%、0%凝集分别记录为4、3、2、1、0分,将几个稀释度的被检样品全部检测孔的分数加和;3)同法检测参照品并将参照品分数加和;4)被检样品与参照品总分数对比计算,获得被检样品抗原含量。改良的RIHA方法进行稳定性评价并与ELISA方法做比较。结果显示,改良RIHA方法的批内差异为6.8%~19.4%、批间差异为11.4%~23.6%、检测同一个样品差异系数为8.5%,均优于常规RIHA方法。改良RIHA方法检测纯化前和纯化后的PCV2 Cap抗原共30份,与ELISA方法检测结果比较相关系数为0.9568。研究结果表明,改良的PCV2 Cap抗原RIHA定量检测方法稳定性良好,且与ELISA方法检测结果有相关性,可在PCV2 Cap抗原生产中做定量检测,也可在毒种筛选、生产工艺优化中快速定量检测PCV2 Cap抗原含量。 展开更多
关键词 PCV2 cap抗原 改良 反向间接血凝试验(RIHA) ELISA 定量检测
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1株猪圆环病毒4型的Cap基因生物信息学分析
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作者 徐国 何小莉 +2 位作者 郑秋燕 张珏 何江 《养殖与饲料》 2024年第12期68-73,共6页
[目的]贵州省某养殖场仔猪疑似感染PCV4,为了解该毒株的分子生物学特征。[方法]从疑似仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的病料中提取核酸,应用PCR方法进行PCV4 Cap基因全长扩增和测序。同时,运用生物信息学软件进行Cap基因和对其编码的氨基... [目的]贵州省某养殖场仔猪疑似感染PCV4,为了解该毒株的分子生物学特征。[方法]从疑似仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的病料中提取核酸,应用PCR方法进行PCV4 Cap基因全长扩增和测序。同时,运用生物信息学软件进行Cap基因和对其编码的氨基进行分析。[结果]所获得的PCV4 Cap核苷酸序列全长为687 bp,通过预测,在转录过程中,其起始密码子和终止密码子对应的DNA序列分别为ATG和TAA;核苷酸与参考毒株的同源性均在96.2%~99.1%,所编码氨基酸的相似性为89.5%~96.1%;ORF2编码的氨基酸变异位点共23个,且变异位点主要集中于115位之后;本试验所收集的19株PCV4 Cap基因系统进化树未呈现出空间和时间上的规律。[结论]在贵州省某养殖场发生断奶疑似仔猪多系统衰竭综合征的病料中检测到PCV4,该毒株的Cap基因与中国江西的JXYC-2021遗传距离较近,且从系统进化树上发现PCV4在全世界的分布无地域性。 展开更多
关键词 猪圆环病毒4型 ORF2 cap基因 序列分析
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