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番茄calnexin基因的克隆及胁迫表达分析 被引量:3
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作者 李明辉 孙颖 +3 位作者 赵春梅 孙爱清 胡小然 刘箭 《武汉植物学研究》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期100-105,共6页
Calnexin是内质网中重要的类凝集素分子伴侣,其主要作用是辅助糖基化蛋白的折叠和装配,调节内质网中的Ca2+稳态平衡和Ca2+信号传导过程。从番茄(Lycopersicon esculentum)的cDNA文库中克隆到calnexincDNA全序列,将其命名为Lecnx61.0,并... Calnexin是内质网中重要的类凝集素分子伴侣,其主要作用是辅助糖基化蛋白的折叠和装配,调节内质网中的Ca2+稳态平衡和Ca2+信号传导过程。从番茄(Lycopersicon esculentum)的cDNA文库中克隆到calnexincDNA全序列,将其命名为Lecnx61.0,并以其3’端DNA片段为探针对番茄基因组进行Southern分析,结果表明Lecnx61.0在该基因组中仅有一个拷贝;Northern和W estern分析表明,Lecnx61.0的表达还受热激、冷害、盐害和内质网应激诱导剂衣霉素的诱导,但对干旱胁迫没有明显的反应。LeCNX 61.0蛋白对Ca2+亏缺胁迫的响应呈现组织特异性,但高浓度Ca2+并不影响各组织中LeCNX 61.0蛋白的含量,实验结果表明LeCNX 61.0蛋白可能在植物抵抗特定的环境胁迫中发挥作用。 展开更多
关键词 calnexin 分子伴侣 Ca^2+胁迫 环境胁迫
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通过对免疫共沉淀技术的优化验证蛋白质弱相互作用 被引量:3
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作者 冯晓琴 徐峰 +1 位作者 王嵬 刘利新 《中国科学院研究生院学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期18-23,共6页
采用单因子法对影响免疫共沉淀结果的各因素进行优化.以hCLP46(humanCAP10-like protein46)蛋白和内质网分子伴侣calnexin为例,对相互作用开展研究.通过对细胞裂解液各组分浓度、抗体用量、hCLP46的蛋白量和交联剂DSP因素的优化,验证了h... 采用单因子法对影响免疫共沉淀结果的各因素进行优化.以hCLP46(humanCAP10-like protein46)蛋白和内质网分子伴侣calnexin为例,对相互作用开展研究.通过对细胞裂解液各组分浓度、抗体用量、hCLP46的蛋白量和交联剂DSP因素的优化,验证了hCLP46(human CAP10-like protein46)蛋白和内质网分子伴侣calnexin间的弱相互作用.研究结果为探讨蛋白质之间弱相互作用提供一定的参考价值. 展开更多
关键词 免疫共沉淀 hCLP46 calnexin 影响因素 蛋白质相互作用
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缺氧对脑脊液-视神经屏障中脑膜上皮细胞内质网和线粒体膜电位的影响 被引量:3
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作者 辛晓蓉 巩天祥 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2014年第11期1009-1012,共4页
目的探讨脑膜上皮细胞(meningothelial cells,MECs)参与视神经疾病的发病机理,研究缺氧对MECs功能变化的影响。方法将培养的MECs分别在体积分数21%O2(对照组)和体积分数1%O2(缺氧组)环境下孵育1 d和2 d,采用酶联免疫吸附实验测定和比较M... 目的探讨脑膜上皮细胞(meningothelial cells,MECs)参与视神经疾病的发病机理,研究缺氧对MECs功能变化的影响。方法将培养的MECs分别在体积分数21%O2(对照组)和体积分数1%O2(缺氧组)环境下孵育1 d和2 d,采用酶联免疫吸附实验测定和比较MECs的总抗氧化能力(total anti-oxidative capacity,T-AOC);采用MitoTracker Red检测和比较MECs在正常氧和缺氧环境下作用2 d的线粒体膜电位的变化;通过测定钙联蛋白的荧光染色,以评价MECs暴露于氧化应激环境后对内质网功能的影响。结果与对照组相比,缺氧组的氧化应激能力降低,结果显示T-AOC下降。对照组和缺氧组细胞分别培养1 d后,细胞中T-AOC分别为(0.012 4+0.001 1)U·L-1和(0.011 9+0.009 0)U·L-1,差异无统计学意义(t=0.915、P=0.382)。分别培养2 d后,缺氧组细胞中T-AOC(0.010 7+0.008 3)U·L-1低于对照组(0.012 9+0.008 7)U·L-1,差异有统计学意义(t=4.616、P=0.001)。不同氧环境作用于细胞2 d后,采用共焦显微镜荧光探针方法分析作用于对照组和缺氧组的MECs线粒体膜电位的变化,结果发现缺氧组细胞荧光强度与对照组相比明显减低;同时通过荧光显微镜观察发现,缺氧组MECs钙联蛋白绿色荧光强度较对照组明显增强。结论缺氧通过影响MECs内质网及线粒体功能而影响其氧化应激能力。 展开更多
关键词 缺氧 脑膜上皮细胞 内质网 线粒体膜电位 钙联蛋白 脑脊液-视神经屏障
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Functional structure analysis and genome‑wide identification of CNX gene family in cotton
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作者 XU Nan ZHANG Hong +14 位作者 ZHANG Yuexin FAN Yapeng WANG Jing MALIK Waqar Afzal RUI Cun HAN Mingge LU Xuke CHEN Xiugui WANG Junjuan WANG Delong WANG Shuai CHEN Chao GUO Lixue ZHAO Lanjie YE Wuwei 《Journal of Cotton Research》 CAS 2022年第3期285-301,共17页
Background:Under abiotic stress conditions,cotton growth is inhibited and yield losses are severe.Identification of calnexin family members and function analysis under abiotic stress laid the foundation for the screen... Background:Under abiotic stress conditions,cotton growth is inhibited and yield losses are severe.Identification of calnexin family members and function analysis under abiotic stress laid the foundation for the screening of stressrelated candidate genes.Results:A total of 60 CNX family members have been identified in Gossypium hirsutum,G.barbadense,G.arboreum,and G.raimondii,and they were divided into two categories:CNX and CRT genes.Through the construction of a phylogenetic tree,they were subdivided into three classes.Further analysis of chromosome localization,conserved promoters,gene structure and selection under pressure showed that the family members were highly conserved in the evolution process.Analysis of cis-acting elements in the promoter regions showed that CNX family genes contain regulatory elements for growth and development,anaerobic,drought,defense and stress response,and plant hormones.Using RNA-seq data to study the expression pattern of GhCNX genes under cold,hot,salt stress and Polyethylene glycol,it was observed that the gene expression levels changed by different degrees under different stress conditions,indicating that GhCNX members were involved in the regulation of multiple biological stresses.Conclusion:This study provides an insight into the members of cotton CNX genes.The results of this study suggested that CNX family members play a role in defense against adversity and provide a foundation for the discovery of stress-related genes. 展开更多
关键词 calnexin GhCNX Conserved motifs Selection pressure COLLINEARITY Differential expression
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水分胁迫下枣裂果的全长转录组分析 被引量:4
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作者 魏薇 贾彦丽 +1 位作者 吴硕 智福军 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2020年第S01期63-71,共9页
为了从转录本水平阐明水分胁迫下的枣裂果的分子机制,以5 a生金丝新4号品种为试验材料进行50 h的喷淋,模拟水分胁迫,处理结束后对喷淋前后的样品在ONT平台进行3代全长转录组测序。6个样品共获得13368条转录本序列,APA事件中鉴定到9178个... 为了从转录本水平阐明水分胁迫下的枣裂果的分子机制,以5 a生金丝新4号品种为试验材料进行50 h的喷淋,模拟水分胁迫,处理结束后对喷淋前后的样品在ONT平台进行3代全长转录组测序。6个样品共获得13368条转录本序列,APA事件中鉴定到9178个PolyA位点,并找到78个显著富集的PolyA信号(PAS)motif,预测到7321个SSR和114个lncRNA;对照组和处理组分别鉴定到239,189个可变剪接事件;差异分析共得到248个差异转录本,参与的主要转录本包括钙网蛋白、钙联蛋白、热激蛋白、微管蛋白、果糖激酶等。GO富集显示,差异转录本主要参与了翻译、有丝分裂、冷适应等生物学过程,相应地细胞组分为细胞质和核糖体,富集的分子功能为核糖体成分、木葡糖基转移酶活性等;通过KEGG富集分析发现,上调表达的转录本主要参与了内质网蛋白加工、吞噬体、氨基糖与核糖代谢以及淀粉和蔗糖代谢通路;下调转录本主要参与了内质网蛋白加工、氮代谢和光合作用-天线蛋白通路等过程。差异转录本编码的蛋白之间存在复杂的互作网络。水分胁迫下的裂果机制可能包括可变剪接事件的减少、钙网蛋白和钙调蛋白对钙离子的调节、持续喷淋后冷应激造成热激蛋白上调及细胞壁组分合成相关基因的上调等。 展开更多
关键词 裂果 水分胁迫 全长转录组 钙网蛋白 热激蛋白
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Exendin-4对人脐静脉内皮细胞内质网应激损伤的拮抗作用 被引量:1
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作者 胡小春 刘浩宇 +2 位作者 覃数 张冬颖 刘剑 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第17期1827-1830,共4页
目的研究exendin-4(Ex-4)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)内质网应激相关凋亡的拮抗作用。方法 RPMI1640培养基培养HUVECs,待细胞长到培养瓶底部80%左右后,分4组干预细胞,每组8瓶,共32瓶。实验分组... 目的研究exendin-4(Ex-4)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)内质网应激相关凋亡的拮抗作用。方法 RPMI1640培养基培养HUVECs,待细胞长到培养瓶底部80%左右后,分4组干预细胞,每组8瓶,共32瓶。实验分组:①正常对照组(n=8):不做任何处理;②Ex-4组(n=8):(Ex-4,8μg/mL,45 min);③EPBS组(n=8):(EPBS,100μL/mL,30 min);④双药组(n=8):Ex-4预处理(8μg/mL,45 min),后加EPBS(100μL/mL,30 min)。免疫荧光法检测确认HUVECs上存在胰高血糖素样肽-1受体(glucagon-like peptide-1 receptor,GLP-1R);内源性过氧化氢酶抑制物(endogenous peroxidase blocking solution;EPBS)诱导HUVECs的凋亡,流式细胞仪检测细胞凋亡率变化;加入Ex-4预处理后,观察EPBS诱导HUVECs凋亡率的变化。Western blot检测细胞Calnexin、(C/EBP homologous protein,CHOP)和Bax表达情况,探讨内质网应激相关凋亡的机制。结果①HUVECs上有GLP-1受体表达;②与正常对照组相比,EPBS组HUVECs的凋亡率显著增加[(52.27±3.66)%vs(7.25±0.62)%,P<0.01)];与EPBS组比较,Ex-4的预处理可明显降低EPBS诱导的HUVECs凋亡[(37.77±2.86)%vs(52.27±3.66)%,P<0.01)]。与正常对照组相比,EPBS能增加Calnexin[(1.76±0.16)vs(1.00±0.05),P<0.01]、CHOP[(4.58±0.32)vs(1.00±0.12),P<0.01]和Bax[(2.25±0.10)vs(1.00±0.06),P<0.01]的表达;与EPBS组比较,Ex-4的预处理可显著降低Calnexin[(0.42±0.05)vs(1.76±0.16),P<0.01]、CHOP[(0.64±0.10)vs(1.65±0.12),P<0.01]和Bax[(1.48±0.08)vs(2.25±0.10),P<0.01)]的表达。结论 Ex-4对EPBS诱导的HUVECs凋亡有明显抑制作用,其抑制作用可能与EX-4减少内质网应激相关蛋白Calnexin、CHOP和Bax相关。 展开更多
关键词 人脐静脉内皮细胞 内质网应激 钙联蛋白 艾塞那肽 细胞凋亡
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CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白与钙联蛋白在内侧颞叶癫痫模型小鼠海马中的表达 被引量:1
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作者 沙志强 沙龙泽 许琪 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期265-270,共6页
目的观察CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)及钙联蛋白(CNX)在内侧颞叶癫痫小鼠海马区域中表达的时间和空间分布。方法采用海人酸(KA)诱导内侧颞叶癫痫小鼠模型,免疫印迹和免疫荧光技术检测CHOP和CNX在急性期(12、24 h)小鼠海马CA3区... 目的观察CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)及钙联蛋白(CNX)在内侧颞叶癫痫小鼠海马区域中表达的时间和空间分布。方法采用海人酸(KA)诱导内侧颞叶癫痫小鼠模型,免疫印迹和免疫荧光技术检测CHOP和CNX在急性期(12、24 h)小鼠海马CA3区的表达量及分布差异,并与注射PBS的正常小鼠进行对照。结果免疫印迹检测结果显示,KA注射后12 h小鼠海马中的CHOP(F=1.136,P=0.4069)和CNX表达量(F=2.378,P=0.2087)与对照组差异没有统计学意义,KA注射后24 h注射侧海马中的CHOP(F=8.510,P=0.0362)和CNX表达量(F=6.968,P=0.0497)明显高于对照组。免疫荧光结果显示,KA注射后12 h CHOP的表达主要集中于CA3区,注射后24 h在CA1和CA3区表达水平均升高;KA注射后24 h CHOP蛋白(F=24.480,P=0.0057)和CNX蛋白(F=7.149,P=0.0478)的表达量显著高于对照组。结论伴随着癫痫发作的产生,CHOP蛋白表达量上升,提示神经元内质网应激水平不断增加,可能需要更多CNX作为分子伴侣帮助更多未折叠蛋白完成折叠过程。 展开更多
关键词 内侧颞叶癫痫 内质网应激 CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白 钙联蛋白
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钙连蛋白(CNX)通过促进MHC Ⅰ表达增强CD8^(+)T细胞对结直肠癌细胞的杀伤作用 被引量:3
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作者 杨婷 郑锦秀 +5 位作者 高书华 成敏蓉 薛宇彤 邵莹 李逸涵 杨涛 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期97-102,共6页
目的分析钙连蛋白(CNX)在结直肠癌(CRC)的异常表达对免疫细胞杀伤作用的影响及分子机制。方法免疫组织化学染色检测组织芯片102对CRC及癌旁组织的CNX的表达;在人HCT-15细胞过表达CNX,在人SW480细胞采用小干扰RNA敲低CNX表达,Western blo... 目的分析钙连蛋白(CNX)在结直肠癌(CRC)的异常表达对免疫细胞杀伤作用的影响及分子机制。方法免疫组织化学染色检测组织芯片102对CRC及癌旁组织的CNX的表达;在人HCT-15细胞过表达CNX,在人SW480细胞采用小干扰RNA敲低CNX表达,Western blot法检测主要组织相容性复合体Ⅰ(MHCⅠ)蛋白表达;将过表达CNX的慢病毒感染CT-26小鼠结肠癌细胞,并与脾脏分离的CD8^(+)T细胞共培养,利用细胞毒性试剂盒检测CD8^(+)T细胞对CT-26细胞的杀伤作用,ELISA检测γ干扰素(IFN-γ)与肿瘤坏死因子α(TNF-α)分泌的变化。结果CNX在结直肠癌组织的表达低于癌旁组织;HCT-15细胞过表达CNX后,MHCⅠ的蛋白水平升高:敲低SW480细胞CNX,MHCⅠ表达水平下降。过表达CNX可增强CD8T细胞对CT-26细胞的杀伤能力,且培养液上清中IFN-γ与TNF-α的含量增加。结论CNX可通过促进结直肠癌细胞MHCⅠ表达,增强CD8^(+)T细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。 展开更多
关键词 钙连蛋白(CNX) MHCⅠ CD8^(+)T细胞 结直肠癌 免疫逃逸
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