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C2株蓝氏贾第鞭毛虫组蛋白H2B基因的克隆与同源性分析 被引量:3
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作者 余源 李明 +6 位作者 李冀 沈海娥 王洋 李巍伟 赵丽娜 王崇罡 田喜凤 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1168-1171,共4页
目的获取C2株蓝氏贾第鞭毛虫H2B组蛋白基因序列,与WB株蓝氏贾第鞭毛虫及其他物种进行同源分析。方法 PCR扩增获取H2B组蛋白基因,连接pGM-T载体,转化E.coli DH5α感受态宿主细胞,挑选阳性克隆并进行序列分析,与美国WB株蓝氏贾第鞭毛虫及... 目的获取C2株蓝氏贾第鞭毛虫H2B组蛋白基因序列,与WB株蓝氏贾第鞭毛虫及其他物种进行同源分析。方法 PCR扩增获取H2B组蛋白基因,连接pGM-T载体,转化E.coli DH5α感受态宿主细胞,挑选阳性克隆并进行序列分析,与美国WB株蓝氏贾第鞭毛虫及模式生物H2B组蛋白基因和蛋白序列进行同源分析。结果测序C2株蓝氏贾第鞭毛虫H2B组蛋白基因序列,同源比对结果显示其基因序列与美国WB株完全一致,进化树分析表明贾第虫H2B组蛋白基因在进化过程中与其他物种分化较早。结论蓝氏贾第鞭毛虫H2B组蛋白基因同源分析结果显示贾第虫与其他现存真核生物亲缘关系较为疏远,为进一步研究蓝氏贾第鞭毛虫的生物进化地位提供有价值的资料。 展开更多
关键词 c2株蓝氏贾第鞭毛虫 H2B组蛋白 同源分析
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双氢青蒿素对C2株蓝氏贾第鞭毛虫Alpha-7.3giardin基因mRNA表达水平的影响 被引量:1
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作者 余源 陈阳 +7 位作者 葛爽 王洋 李巍伟 赵丽娜 刘阿倩 林志强 高雪 田喜凤 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期669-672,共4页
目的观察双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对C2株蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)Alpha-7.3giardin(α-贾第素)基因mRNA表达水平的影响,探讨其对蓝氏贾第鞭毛虫骨架蛋白的损伤作用。方法用双氢青蒿素浓度为100μg/mL、200μg/mL的改... 目的观察双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对C2株蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)Alpha-7.3giardin(α-贾第素)基因mRNA表达水平的影响,探讨其对蓝氏贾第鞭毛虫骨架蛋白的损伤作用。方法用双氢青蒿素浓度为100μg/mL、200μg/mL的改良TYI-S-33培养基分别培养C2株蓝氏贾第鞭毛虫2h、4h、8h、12h后,以不含药物组为对照,实时荧光定量RT-PCR检测药物作用后Alpha-7.3giardin基因mRNA表达水平的变化。结果双氢青蒿素作用虫体后Alpha-7.3giardin基因mRNA表达水平明显低于对照组,二者有显著性差异。结论双氢青蒿素对C2株蓝氏贾第鞭毛虫Alpha-7.3giardin基因mRNA的表达具有明显的抑制作用,抑制效果与药物浓度和作用时间相关,提示双氢青蒿素对蓝氏贾第鞭毛虫骨架蛋白具有损伤作用。 展开更多
关键词 c2株蓝氏贾第鞭毛虫 双氢青蒿素 Alpha-7.3 giardin 实时荧光定量RT—PcR
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C2株蓝氏贾第鞭毛虫组蛋白H3基因的克隆表达与基因分析(英文)
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作者 余源 葛爽 +3 位作者 李明 刘阿倩 林志强 田喜凤 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期568-574,共7页
目的克隆表达C2株蓝氏贾第鞭毛虫H3组蛋白基因,与WB株蓝氏贾第鞭毛虫进行同源分析,构建C2株蓝氏贾第鞭毛虫H3组蛋白分子进化树。方法 PCR扩增获取H3组蛋白基因,构建pGM-T-H3重组载体,转化E.coli TOP10感受态宿主细胞,挑选阳性克隆并进... 目的克隆表达C2株蓝氏贾第鞭毛虫H3组蛋白基因,与WB株蓝氏贾第鞭毛虫进行同源分析,构建C2株蓝氏贾第鞭毛虫H3组蛋白分子进化树。方法 PCR扩增获取H3组蛋白基因,构建pGM-T-H3重组载体,转化E.coli TOP10感受态宿主细胞,挑选阳性克隆并进行序列分析,利用限制性内切酶NcoⅠ和XhoⅠ构建pET28a(+)-H3重组载体,转化E.coli Rosetta(DE3),IPTG诱导组蛋白H3表达,Western blotting鉴定表达,与美国WB株蓝氏贾第鞭毛虫及模式生物H3组蛋白基因和蛋白序列进行同源分析。结果成功克隆表达C2株蓝氏贾第鞭毛虫H3组蛋白基因,同源比对结果显示C2株蓝氏贾第鞭毛虫基因序列与美国WB株完全一致,但与其他现存真核生物亲缘关系较为疏远。结论 C2株蓝氏贾第鞭毛虫H3组蛋白分子进化树分析表明贾第虫H3组蛋白基因在进化过程中与其他物种分化较早,本研究结果为进一步研究蓝氏贾第鞭毛虫的生物进化地位提供有价值的实验资料。 展开更多
关键词 c2株蓝氏贾第鞭毛虫 克隆 表达 同源性分析 分子进化树
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双氢青蒿素对C2株蓝氏贾第鞭毛虫Delta giardin抑制作用的研究 被引量:2
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作者 刘阿倩 王洋 +3 位作者 林志强 张亚粉 田喜凤 余源 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期522-526,共5页
目的建立实时荧光定量RT-PCR(real-time quantitative,RT-PCR)检测C2株蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)Delta giardin基因mRNA表达量的方法,分析双氢青蒿素(Dihydroartemisinin,DHA)对体外C2株蓝氏贾第鞭毛虫Delta giardin基因mRNA表... 目的建立实时荧光定量RT-PCR(real-time quantitative,RT-PCR)检测C2株蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)Delta giardin基因mRNA表达量的方法,分析双氢青蒿素(Dihydroartemisinin,DHA)对体外C2株蓝氏贾第鞭毛虫Delta giardin基因mRNA表达水平的影响。方法分别采用100μg/mL、200μg/mL的双氢青蒿素改良型TYI-S-33培养基培养C2株蓝氏贾第鞭毛虫,以不含药物组作为阴性对照,分别培养2h、4h、8h、12h,提取总RNA,逆转录合成cDNA,实时荧光定量PCR检测Delta giardin基因mRNA表达情况。结果 100μg/mL双氢青蒿素培养2h、4h、8h、12h后,Delta giardin基因mRNA相对表达量分别为0.44、0.26、0.25、0.02;200μg/mL双氢青蒿素培养2h、4h、8h、12h后,Delta giardin基因mRNA相对表达量分别为0.30,0.26,0.11,0.02。药物对照组中C2株蓝氏贾第鞭毛虫Delta giardin基因mRNA表达量明显低于阴性对照组。结论双氢青蒿素对C2株蓝氏贾第鞭毛虫Delta giardin基因mRNA的表达具有明显的抑制作用,提示双氢青蒿素对蓝氏贾第鞭毛虫具有明显的防治效果。 展开更多
关键词 c2株蓝氏贾第鞭毛虫 双氢青蒿素 实时荧光定量RT-PcR DELTA giardin
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C2株蓝氏贾第鞭毛虫ILP基因的克隆表达及蛋白结构分析
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作者 张亚粉 刘岩 +7 位作者 王皓钰 郝金童 高红丹 林志强 刘阿倩 雷田田 王一同 余源 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期618-622,共5页
目的利用大肠杆菌对C2株蓝氏贾第鞭毛虫ILP蛋白(Impact-like protein)进行克隆表达,运用生物信息学软件进行蛋白结构分析。方法提取C2株蓝氏贾第鞭毛虫基因组DNA,PCR扩增ILP基因,构建pGM-T重组载体,挑选阳性克隆并进行序列分析;将ILP基... 目的利用大肠杆菌对C2株蓝氏贾第鞭毛虫ILP蛋白(Impact-like protein)进行克隆表达,运用生物信息学软件进行蛋白结构分析。方法提取C2株蓝氏贾第鞭毛虫基因组DNA,PCR扩增ILP基因,构建pGM-T重组载体,挑选阳性克隆并进行序列分析;将ILP基因连入原核表达载体pET-28a(+),并转化大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达。运用PSIPRED和SWISS-MODEL进行蛋白结构分析。结果成功构建了原核表达载体pET-28a(+)-ILP,该基因全长831bp。SDS-PAGE结果显示,目的蛋白条带出现在相对分子量约33kD的位置,与预期相符。Western blot结果表明,大肠杆菌成功表达了重组蛋白。结论成功克隆、表达并分析C2株蓝氏贾第鞭毛虫ILP蛋白,为蓝氏贾第鞭毛虫ILP蛋白结构与功能的研究提供了有价值的资料。 展开更多
关键词 c2株蓝氏贾第鞭毛虫 克隆 表达 ILP蛋白
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蓝氏贾第鞭毛虫C2株rRNA基因ITS1-5.8SrDNA-ITS2序列测定与分析 被引量:2
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作者 温少芳 卢思奇 王凤云 《首都医科大学学报》 CAS 2005年第6期769-770,共2页
关键词 蓝氏第鞭毛虫 RRNA基因 ITS1-5.8SrDNA-ITS2 序列测定 内转录间隔区
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蓝氏贾第鞭毛虫类高尔基体的研究 被引量:1
7
作者 朱艳红 雷清华 +2 位作者 彭挺 牛安欧 卢思奇 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期672-674,677,共4页
目的探讨类高尔基体结构在蓝氏贾第鞭毛虫滋养体和成囊不同时段的存在情况及其动态变化机理。方法用可特异性标记真核细胞高尔基体的荧光染料C6-NBD神经酰胺,标记有活性的蓝氏贾第鞭毛虫滋养体及成囊6、12、18h虫体,并用荧光显微镜观察... 目的探讨类高尔基体结构在蓝氏贾第鞭毛虫滋养体和成囊不同时段的存在情况及其动态变化机理。方法用可特异性标记真核细胞高尔基体的荧光染料C6-NBD神经酰胺,标记有活性的蓝氏贾第鞭毛虫滋养体及成囊6、12、18h虫体,并用荧光显微镜观察。同时利用半定量RT-PCR方法检测高尔基体膜结合蛋白golgin245和膜泡融合的调节蛋白Rab1在蓝氏贾第鞭毛虫对数生长期滋养体及成囊6、12、24h的虫体中的表达水平。结果极少数蓝氏贾第鞭毛虫滋养体被C6-NBD神经酰胺标记;多数处于成囊6、12、18h时段的虫体均可见被特异标记成亮绿色的核周围区域。golgin245和Rab1在滋养体及成囊诱导6、12、24h的虫体中的表达水平无显著变化。结论蓝氏贾第鞭毛虫在成囊过程中出现类高尔基体结构,而在对数期滋养体中却没有。在蓝氏贾第鞭毛虫成囊过程中,高尔基体结构成分无大量合成,出现的类高尔基体结构可能是各组分临时组装的结果。 展开更多
关键词 蓝氏第鞭毛虫 类高尔基体 c6-NBD神经酰胺 半定量RT—PcR
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4种蓝氏贾第鞭毛虫体外诱导成囊方法的比较
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作者 朱艳红 牛安欧 卢思奇 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期605-606,共2页
评价 4种不同的体外诱导蓝氏贾第鞭毛虫成囊方法。采用 4种已报道的方法对蓝氏贾第鞭毛虫C2株进行体外诱导成囊 ,并统计包囊数目。结果表明 4种方法都可诱导成囊 ,但成囊数之间存在显著差异。方法 3获得的包囊数最高 ,为 1× 10 5/m... 评价 4种不同的体外诱导蓝氏贾第鞭毛虫成囊方法。采用 4种已报道的方法对蓝氏贾第鞭毛虫C2株进行体外诱导成囊 ,并统计包囊数目。结果表明 4种方法都可诱导成囊 ,但成囊数之间存在显著差异。方法 3获得的包囊数最高 ,为 1× 10 5/mL。方法 3为体外诱导蓝氏贾第鞭毛虫C2株成囊的一种简便且易获得大量包囊的方法。 展开更多
关键词 蓝氏第鞭毛虫c2 体外 诱导成囊 贾第虫病
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