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抗丙型肝炎病毒核心蛋白单链抗体的制备及免疫组织化学研究 被引量:1
1
作者 钟彦伟 成军 +4 位作者 焦成松 张忠东 李强 李莉 陈菊梅 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期8-9,12,共3页
目的 制备丙型肝炎病毒核心蛋白单链抗体并进行免疫组织化学研究。方法 以大肠杆菌表达的重组丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白为固相抗原 ,利用抗原 抗体亲和性结合的原理 ,从半合成的人源可变区噬菌体抗体库中经过 3轮“吸附 洗脱 扩增”... 目的 制备丙型肝炎病毒核心蛋白单链抗体并进行免疫组织化学研究。方法 以大肠杆菌表达的重组丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白为固相抗原 ,利用抗原 抗体亲和性结合的原理 ,从半合成的人源可变区噬菌体抗体库中经过 3轮“吸附 洗脱 扩增”的筛选过程及酶联免疫吸附试验 (ELISA)和DNA序列分析 ,获得HCV核心蛋白的人源单链抗体 ;用该抗体对 772 1转染全长HCVcDNA后筛选的阳性克隆细胞中的HCV核心蛋白抗原进行免疫组化鉴定。结果 ELISA结果表明 ,制备的HCV核心蛋白人源单链抗体能与HCV核心蛋白抗原特异性结合 ;免疫组化结果表明 ,该抗体能够特异性识别HCV核心蛋白抗原 ,与正常肝细胞无交叉反应。结论 此法制备单链抗体方法简便 ,周期短 ,可为HCV核心蛋白病原的检测提供新的检测手段。 展开更多
关键词 c肝炎病毒 病毒核心蛋白质类 单链抗体 免疫组织化
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丙型肝炎病毒感染与HCC相关性的研究 被引量:6
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作者 王克霞 王健 《安徽医科大学学报》 CAS 2001年第1期47-49,共3页
目的 探讨丙型肝炎病毒 (HCV)感染与肝细胞癌发生的关系。方法 用聚合酶链反应 (PCR)对淮南地区 92例肝癌、117例肝硬化和 10 0例肝癌切除的肝组织标本进行HCV RNA检测 ,并以限制性片段长度多态性分析对其中 89例HCV RNA阳性血清进行... 目的 探讨丙型肝炎病毒 (HCV)感染与肝细胞癌发生的关系。方法 用聚合酶链反应 (PCR)对淮南地区 92例肝癌、117例肝硬化和 10 0例肝癌切除的肝组织标本进行HCV RNA检测 ,并以限制性片段长度多态性分析对其中 89例HCV RNA阳性血清进行了HCV基因分型。结果 肝癌组HCV感染率 2 9 3% ,肝硬化组HCV感染率 2 6 5 % ,肝组织标本组HCV感染率 31 0 % ;各组均以HCVⅡ型为主(6 5 2 % ) ,HCVⅢ型次之 (31 5 % )。结论 淮南地区肝癌的诱发与HCV感染密切相关 ,HCVⅡ型在本地区HCV相关性肝癌和肝硬化的发生中可能起主要作用。 展开更多
关键词 肝细胞癌 c肝炎病毒 聚合酶链反应 HcV PcR
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应用噬菌体展示技术筛选丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4A结合蛋白 被引量:4
3
作者 钟彦伟 成军 +6 位作者 张忠东 杨艳杰 李强 董菁 黄燕萍 刘敏 王建军 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期20-22,共3页
目的 筛选丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白NS4A结合蛋白 ,为HCV致病机制的研究探索新的途径。方法 应用噬菌体展示技术 ,以HCV非结构蛋白NS4A作为固相筛选分子 ,对T7噬菌体人肝细胞cDNA文库进行 5轮“吸附 洗脱 扩增”的筛选过程 ,经噬... 目的 筛选丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白NS4A结合蛋白 ,为HCV致病机制的研究探索新的途径。方法 应用噬菌体展示技术 ,以HCV非结构蛋白NS4A作为固相筛选分子 ,对T7噬菌体人肝细胞cDNA文库进行 5轮“吸附 洗脱 扩增”的筛选过程 ,经噬斑的PCR扩增后 ,构建克隆载体 ,最后对所筛选克隆进行DNA序列测定和同源性分析。结果 噬菌体经富集后 ,从随机挑选的 12个克隆中得到 2个阳性克隆 ,成功构建了克隆载体。序列测定后经过序列同源性分析 ,确定了与HCV非结构蛋白NS4A结合的是肝细胞蛋白 丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)激活蛋白激酶 5 (MAPKAPK5 )。结论 用噬菌体人肝cDNA文库筛选得到了HCV非结构蛋白NS4A的结合蛋白 ,为进一步研究HCV的致病机制奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 噬菌体展示技术 c肝炎病毒 病毒非结构蛋白质类 基因文库
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自身免疫现象与慢性丙型肝炎的临床比较研究 被引量:2
4
作者 张悦 朱玉琨 +1 位作者 王惠萱 李雪梅 《实用医学杂志》 CAS 2003年第11期1267-1268,共2页
目的 :探讨慢性丙型肝炎患者血清中自身免疫性抗体的检出与疾病的相关机制。方法 :以间接免疫荧光法检测 5 4例慢性丙型肝炎患者血清中抗核抗体 (ANA) ,免疫斑点法检测血清多肽抗体谱 (ENA谱 ) ,以散射免疫比法检测血清中类风湿因子 (RF... 目的 :探讨慢性丙型肝炎患者血清中自身免疫性抗体的检出与疾病的相关机制。方法 :以间接免疫荧光法检测 5 4例慢性丙型肝炎患者血清中抗核抗体 (ANA) ,免疫斑点法检测血清多肽抗体谱 (ENA谱 ) ,以散射免疫比法检测血清中类风湿因子 (RF)。以 2 0例慢性乙型肝炎为病人对照 ,2 0例体检健康者为正常对照。结果 :慢性丙型肝炎伴ANA、ENA谱、RF(IgM )阳性率均显著高于正常对照组 (P <0 0 1) ,也显著高于慢性乙型肝炎组 (P <0 0 1) ,其中RF的检出阳性率最高 (2 6/5 4) ,ENA谱中以抗SS B或抗SS A阳性为主要反应 (15 /17)。结论 :慢性HCV感染者普遍存在自身免疫现象 。 展开更多
关键词 自身免疫现象 慢性丙肝炎 比较研究 自身免疫疾病 c肝炎病毒
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丙型肝炎病毒核心蛋白人源抗独特型单链抗体在大肠杆菌中的表达 被引量:1
5
作者 钟彦伟 成军 +3 位作者 张忠东 李强 李莉 陈菊梅 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期10-12,共3页
目的 在大肠杆菌中表达丙型肝炎病毒核心蛋白人源抗独特型单链抗体。方法 采用噬菌体表面展示技术 ,将丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白单克隆抗体固相包被于Nunc板。从人源噬菌体单链可变区抗体库中经过 3轮“吸附 洗脱 扩增”的筛选 ,获... 目的 在大肠杆菌中表达丙型肝炎病毒核心蛋白人源抗独特型单链抗体。方法 采用噬菌体表面展示技术 ,将丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白单克隆抗体固相包被于Nunc板。从人源噬菌体单链可变区抗体库中经过 3轮“吸附 洗脱 扩增”的筛选 ,获得结合活性较强的人源HCV核心蛋白抗独特型 (抗 Id)scFv阳性克隆。从阳性克隆中提取质粒 ,经SfiⅠ/NotⅠ酶切鉴定后 ,亚克隆到pCANTAB5E载体 ,转化大肠杆菌XL1 Blue ,应用异丙基硫代 β D 半乳糖苷 (IPTG)诱导表达可溶性的HCV核心蛋白抗独特型单链可变区抗体。酶联免疫吸附法 (ELISA)证实表达的HCV核心蛋白抗 IdscFv具有与HCV核心蛋白单克隆抗体反应的特异性。对转化的大肠杆菌XL1 Blue上清中表达的HCV核心蛋白抗 IdscFv进行硫酸铵沉淀 ,并进行SDS PAGE电泳。结果 筛选得到的HCV核心蛋白抗 IdscFv片段基因由 774bp组成。SDS PAGE电泳表明 ,大肠杆菌XL1 Blue中表达的可溶性HCV核心蛋白抗 IdscFv分子量约 2 8kD。结论 HCV核心蛋白抗 IdscFv与HCV核心蛋白抗 IdscFv单克隆抗体具有较强的结合活性和特异性。HCV核心蛋白抗 IdscFv的筛选和表达成功 ,为今后HCV核心蛋白抗 IdscFv的研究和应用奠定了基础。 展开更多
关键词 c肝炎病毒 病毒核心蛋白质类 抗独特单链可变区抗体 基因表达
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抗HCV不同位点核酶细胞内对病毒基因的抑制作用 被引量:2
6
作者 焦成松 周永兴 +1 位作者 贾战生 冯志华 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第7期471-473,共3页
为探讨核酶细胞内对HCV基因表达的抑制作用 ,笔者设计合成了两个针对HCV 5′NCR2 13位点和C区 498位点的锤头结构核酶 ,并插入真核表达载体 pcDNA3。应用WISH nc转基因细胞模型 ,通过脂质体法转染核酶表达载体 ,经发光检测仪测定荧虫素... 为探讨核酶细胞内对HCV基因表达的抑制作用 ,笔者设计合成了两个针对HCV 5′NCR2 13位点和C区 498位点的锤头结构核酶 ,并插入真核表达载体 pcDNA3。应用WISH nc转基因细胞模型 ,通过脂质体法转染核酶表达载体 ,经发光检测仪测定荧虫素酶报告基因的表达变化以反应病毒基因的抑制率。结果显示 ,核酶2 13和核酶 498均能在细胞内降低荧虫素酶的表达 ,转染后 7日内的抑制率为 42 .94%~ 6 7.81%。提示增加核酶作用位点可防止病毒基因突变后的切割失效 。 展开更多
关键词 c肝炎病毒 核酶 荧虫素酶 肝炎 抗HcV
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12280例非感染科患者HCV抗体检测结果分析
7
作者 魏东 张彦 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2004年第10期1125-1125,1129,共2页
目的了解输血前和手术住院患者肝脏健康状况,避免和预防院内感染及医疗纠纷的发生。方法用酶联免疫法进行乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)和丙肝(HCV)检测。结果在12 280例输血前和手术非感染科住院患者中,HCV感染占1.03 %,HBsAg和HCV同时... 目的了解输血前和手术住院患者肝脏健康状况,避免和预防院内感染及医疗纠纷的发生。方法用酶联免疫法进行乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)和丙肝(HCV)检测。结果在12 280例输血前和手术非感染科住院患者中,HCV感染占1.03 %,HBsAg和HCV同时感染占0.17%。结论非感染科住院患者HCV感染率明显高于自然人群,说明进行HCV检测具有必要性和重要性。 展开更多
关键词 c型肝炎样病毒属/免疫学 肝炎病毒 抗体 病毒/分析
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HCV包膜蛋白E2的表达及其抗原性的检测
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作者 史宣玲 曹凤 +3 位作者 杜勇 侯利华 季阳 王海涛 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期17-19,共3页
为研究丙型肝炎病毒 (HCV)包膜蛋白E2在原核细胞和真核细胞中的表达 ,并对表达蛋白的抗原性进行检测。将HCVE2区N端的一段基因分别克隆入原核表达载体pQE30和真核表达载体pEF1/HisC中进行E2蛋白的表达 ,采用ELISA和WB对表达蛋白的抗原... 为研究丙型肝炎病毒 (HCV)包膜蛋白E2在原核细胞和真核细胞中的表达 ,并对表达蛋白的抗原性进行检测。将HCVE2区N端的一段基因分别克隆入原核表达载体pQE30和真核表达载体pEF1/HisC中进行E2蛋白的表达 ,采用ELISA和WB对表达蛋白的抗原性进行检测。结果在原核细胞和真核细胞中均表达了预期大小的蛋白 ,能同HCV感染者血清发生特异性反应。提示该段E2基因在原核表达系统和真核表达系统均能表达出具有抗原活性的蛋白 ,其中真核细胞表达的蛋白可被糖基化。 展开更多
关键词 c肝炎病毒 病毒包膜蛋白质类 基因表达 HcV 肝炎
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套式PCR法检测慢性丙肝患者PBMC及血清中HCV-RNA的意义
9
作者 王健 蔡茹 +1 位作者 项桂菊 江水清 《安徽医科大学学报》 CAS 2001年第6期417-419,共3页
目的 探讨慢性丙型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞 (PBMC)内HCV RNA与血清中HCV RNA的相互关系及其在慢性丙肝发病机制中的作用。方法 用套式PCR(RT nested PCR)对 12 4例抗 HCV (+)慢性丙肝患者的PBMC及血清中HCV RNA进行检测。结果... 目的 探讨慢性丙型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞 (PBMC)内HCV RNA与血清中HCV RNA的相互关系及其在慢性丙肝发病机制中的作用。方法 用套式PCR(RT nested PCR)对 12 4例抗 HCV (+)慢性丙肝患者的PBMC及血清中HCV RNA进行检测。结果  12 4例抗 HCV(+)慢性丙肝患者中 ,PBMC及血清中HCV RNA阳性率分别为 5 3 2 3% (6 6 / 12 4)和 6 4 5 2 % (80 / 12 4) ,经 χ2 检验 ,两者差异无显著性 (P >0 0 5 )。各慢肝组PBMC与血清HCV RNA阳性率相比 ,差异均无显著性 (P >0 0 5 )。结论 HCV可隐匿于患者PBMC中 ;PBMC中HCV RNA与血清中HCV RNA似有一致性倾向。PBMC中HCV RNA检测不仅是对常规血清检测的重要补充 ,而且是HCV肝外感染的直接证据 。 展开更多
关键词 肝炎 c肝炎病毒 RNA病毒 单核细胞 聚合酶链反应
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