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羊布鲁氏菌(Brucella melitensis)基因组的对比分析
1
作者 张宏兴 王原 +3 位作者 王强 朱万斌 张磊 宋宇轩 《家畜生态学报》 北大核心 2022年第8期26-29,33,共5页
布鲁氏菌是对人畜健康和公共卫生安全能够造成较大威胁的病原,然而其基因组序列有多个版本,不利于检测。该研究为羊布鲁氏菌的PCR精准检测提供基因序列参考,基于对NCBI数据库中布鲁氏菌的基因组数据进行分析,比对不同种属来源的布鲁氏... 布鲁氏菌是对人畜健康和公共卫生安全能够造成较大威胁的病原,然而其基因组序列有多个版本,不利于检测。该研究为羊布鲁氏菌的PCR精准检测提供基因序列参考,基于对NCBI数据库中布鲁氏菌的基因组数据进行分析,比对不同种属来源的布鲁氏菌基因组,筛选羊源布鲁氏菌共有和特有基因序列。结果表明,通过NCBI数据库共获得67株羊布鲁氏菌基因组,共有3699个基因,经过BLAST比对后得到羊布鲁氏菌共有基因2850个,对其进行致病性注释,共筛选到可能的致病序列8个,注释到基因6个,分别为FliM、FliN、ACP、Prp、FlhB和FliP。本研究结果对开发羊布鲁氏菌PCR的精准检测提供一定的理论依据和序列参考。 展开更多
关键词 羊布鲁氏菌 基因组 致病基因序列 PCR检测
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布鲁氏菌与宿主天然免疫信号通路相互作用的研究进展 被引量：3
2
作者 刘爱军 黄晓兵 +1 位作者 张传亮 张红丽 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第4期1561-1574,共14页
布鲁氏菌病(brucellosis)是一种由布鲁氏菌(Brucella)感染引起的全球性人兽共患病。近年来,我国布鲁氏菌病防控形势严峻,对牛羊养殖业和公共卫生安全构成较大威胁。天然免疫是抵御病原微生物感染的第一道防线,对维持机体的稳态至关重要... 布鲁氏菌病(brucellosis)是一种由布鲁氏菌(Brucella)感染引起的全球性人兽共患病。近年来,我国布鲁氏菌病防控形势严峻,对牛羊养殖业和公共卫生安全构成较大威胁。天然免疫是抵御病原微生物感染的第一道防线,对维持机体的稳态至关重要。布鲁氏菌能够通过多种策略调节天然免疫信号通路,从而建立持续性感染,也能引起关节炎、肝炎、脑炎、流产等炎症性疾病。全面深入理解布鲁氏菌与天然免疫信号通路相互作用机制,可以为研发安全高效的疫苗或药物提供新的思路。因此,本文综述了Toll样受体(Toll-like receptors, TLRs)、环鸟苷酸腺苷酸合成酶(cyclic guanosine adenylate synthetase, cGAS)、干扰素基因刺激因子(stimulator of interferon genes, STING)、NOD样受体(NOD-like receptors, NLRs)、AIM2样受体(AIM2-like receptors, ALRs)、C型凝集素受体(C-type lectin receptors, CLRs)和RIG-I样受体(RIG-I-like receptors, RLRs)等天然免疫信号通路在抵御布鲁氏菌感染中的作用及机制,并总结了布鲁氏菌逃逸或劫持这些信号通路的策略。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 免疫逃逸 Toll样受体 环鸟苷酸腺苷酸合成酶 干扰素基因刺激因子 NOD样受体 AIM2样受体 C型凝集素受体 RIG-I样受体
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布鲁氏菌超快速荧光PCR方法建立与临床应用 被引量：1
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作者 徐振娜 吴志鹏 +9 位作者 洪伟彬 管知深 林其明 莫钻兰 叶毅飞 谢海燕 李敏 朱燕秋 李小军 张险朋 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第3期278-283,共6页
目的 建立布鲁氏菌超快速荧光PCR检测方法,应用于临床样品的快速检测。方法 以外源性重组质粒为内参,选取布鲁氏菌重要毒力因子T4SS分泌系统为靶基因设计引物、探针,建立布鲁氏菌超快速荧光PCR检测方法。评价该方法的灵敏度、特异性、... 目的 建立布鲁氏菌超快速荧光PCR检测方法,应用于临床样品的快速检测。方法 以外源性重组质粒为内参,选取布鲁氏菌重要毒力因子T4SS分泌系统为靶基因设计引物、探针,建立布鲁氏菌超快速荧光PCR检测方法。评价该方法的灵敏度、特异性、重复性,绘制标准曲线,与荧光PCR方法检测临床样品比较符合率。结果 该方法检测时间短,10 min即可完成。标准曲线Y=-3.410 7x+38.357,R^(2)=0.998 5,线性关系良好,最低检测限为10 copies/μL。该方法具有良好的特异性,对布鲁氏菌以外的几个临床常见细菌均无特异性扩增。检测3种浓度的阳性质粒,CV值为0.20%~0.91%,说明该方法具有极好的重复性。与荧光PCR方法同时检测140份临床样品,结果完全一致,符合率100%。结论 本研究建立了一种用时短、特异性强、灵敏度高、重复性好布鲁氏菌超快速荧光PCR检测方法,可用于布鲁氏菌临床检测和疫情紧急排查,对布鲁氏菌早期诊断具有重要意义。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 超快速荧光PCR 外源性内参 实时荧光PCR
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新疆巴州地区野鼠及牛羊流产胎儿组织病原学检测及分析
4
作者 唐莉娟 任敏 +1 位作者 韦丽莉 西日艾力·艾尔肯 《现代畜牧科技》 2025年第6期17-19,共3页
为进一步了解野鼠携带布鲁氏菌的病原来源,特对新疆巴州地区野鼠及牛羊流产胎儿组织进行病原检测。采用PCR法对新疆巴州地区20只野鼠进行布鲁氏菌分子检测,并对收集的24份牛羊流产胎儿组织进行5种流产致病病原(胎儿弯曲杆菌、刚地弓形... 为进一步了解野鼠携带布鲁氏菌的病原来源,特对新疆巴州地区野鼠及牛羊流产胎儿组织进行病原检测。采用PCR法对新疆巴州地区20只野鼠进行布鲁氏菌分子检测,并对收集的24份牛羊流产胎儿组织进行5种流产致病病原(胎儿弯曲杆菌、刚地弓形虫、胎儿三毛滴虫、胎儿毛滴虫、布鲁氏菌)的PCR筛查。结果显示,2只野鼠肝、脾中检测到布鲁氏菌,阳性率为10%(2/20),牛羊流产胎儿组织5种病原检测结果只有布鲁氏菌为阳性,阳性率为29.17%(7/24)。此外,对野鼠和牛羊流产胎儿组织中检测出的布鲁氏菌进行遗传进化分析,它们的同源性为98%,这说明存在野生动物通过吞食家畜胎盘等感染布鲁氏菌病以及携带布鲁氏菌的野生动物向家畜传播布鲁氏菌病的可能性。 展开更多
关键词 流产 胎儿 布鲁氏菌 检测
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布鲁氏菌性脊柱炎危险因素分析 被引量：1
5
作者 赵娜娜 张美刚 +2 位作者 陈湘磊 赵利 吴翠萍 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第3期284-289,共6页
目的探讨布鲁氏菌性脊柱炎的危险因素。方法回顾性收集2018年1月至2024年4月潍坊市益都中心医院布鲁氏菌病患者的电子病历数据,包括一般资料、临床特征和实验室检查,根据是否有脊柱受累,将其分为脊柱受累组和无脊柱受累组,通过多因素log... 目的探讨布鲁氏菌性脊柱炎的危险因素。方法回顾性收集2018年1月至2024年4月潍坊市益都中心医院布鲁氏菌病患者的电子病历数据,包括一般资料、临床特征和实验室检查,根据是否有脊柱受累,将其分为脊柱受累组和无脊柱受累组,通过多因素logistic回归模型分析确定布鲁氏菌性脊柱炎的危险因素。结果124例布鲁氏菌病患者中,布鲁氏菌性脊柱炎患者59例,单纯布鲁氏菌病患者65例。脊柱受累组患者年龄≥55岁(χ^(2)=17.71)、从发病到确诊时间≥30 d(χ^(2)=26.17)、腰痛(χ^(2)=52.71)多于无脊柱受累组,差异有统计学意义(P均<0.001);无脊柱受累组头痛患者多于脊柱受累组,差异有统计学意义(χ^(2)=8.34,P<0.05);脊柱受累组中性粒细胞百分比(NEU%)(t=2.94)、血小板计数(PLT)(t=122.00)、血沉(ESR)(Z=-6.74)、C反应蛋白(CRP)(Z=-5.74)、白介素-6(IL-6)(Z=-2.08)均高于无脊柱受累组,且差异均有统计学意义(P均<0.05);脊柱受累组乳酸脱氢酶(LDH)低于无脊柱受累组,差异有统计学意义(t=-2.04,P<0.042)。通过多因素logistic回归分析得到院外症状时间≥30 d(OR=6.265,95%CI 1.181~33.241)、有腰痛症状(OR=14.885,95%CI 3.144~70.472)、PLT升高(OR=1.013,95%CI 1.004~1.023),ESR升高(OR=1.053,95%CI 1.008~1.100)是布鲁氏菌性脊柱炎的危险因素(P均<0.05)。ROC分析的最佳截断值为PLT>278.5×10^(9)/L(灵敏度为89.2%,特异度为59.3%),ESR>16.5 mm/h(灵敏度为69.2%,特异度为86.4%),二者联合诊断时,AUROC为0.891(95%CI 0.831~0.950),灵敏度为86.2%,特异度为84.7%。结论当布鲁氏菌病患者出现腰痛症状、从发病到确诊时间≥30 d并伴ESR、PLT明显升高时,建议完善腰椎磁共振检查排除布鲁氏菌性脊柱炎,尽早诊断,及时治疗,改善患者预后,缩短患者病程,提高患者生活质量。 展开更多
关键词 布鲁氏菌病 布鲁氏菌性脊柱炎 临床特征 独立临床危险因素
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牛种布鲁氏菌MgtC蛋白在抵抗低Mg^(2+)环境中的生物学功能研究 被引量：1
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作者 王恒泰 吕浪 +6 位作者 蒋卉 程君生 刘铭赫 储岳峰 许健 李朋 丁家波 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第1期365-377,共13页
MgtC蛋白在多种胞内寄生菌中是一个重要的毒力因子并表现出抵抗低Mg^(2+)环境的能力。布鲁氏菌是一种重要的胞内寄生菌,但是关于MgtC蛋白在布鲁氏菌中的生物学功能报道较少。为了全面阐述MgtC在布鲁氏菌中的生物学特性,本文研究了牛种... MgtC蛋白在多种胞内寄生菌中是一个重要的毒力因子并表现出抵抗低Mg^(2+)环境的能力。布鲁氏菌是一种重要的胞内寄生菌,但是关于MgtC蛋白在布鲁氏菌中的生物学功能报道较少。为了全面阐述MgtC在布鲁氏菌中的生物学特性,本文研究了牛种布鲁氏菌MgtC蛋白对低Mg^(2+)环境的适应性及其它可能的生物学功能。构建牛种布鲁氏菌(S2308株)的mgtC基因缺失突变株S2308ΔmgtC,同时采用质粒回补方式构建回补株S2308ΔmgtC(pBBR1MCS-mgtC),随后对其开展低/高Mg^(2+)环境中生长曲线测定,ATP含量测定,胞内存活,环境应激,生物被膜检测和小鼠攻毒试验等研究,全面分析MgtC在牛种布鲁氏菌中的生物学功能。结果显示:成功构建缺失株S2308ΔmgtC及其回补株S2308ΔmgtC(pBBR1MCS-mgtC)。牛种布鲁氏菌S2308在低Mg^(2+)环境中,mgtC基因转录水平显著上调(P<0.05),与亲本株和回补菌株相比,缺失株S2308ΔmgtC在低Mg^(2+)环境中的生长曲线(P<0.001)、膜结构完整性(P<0.05)、生物被膜形成能力(P<0.01)均低于与亲本菌株和回补菌株,而菌体内ATP含量均高于亲本菌株和回补菌株(P<0.001)。此外,mgtC基因的缺失不影响牛种布鲁氏菌在巨噬细胞内的存活以及对小鼠的致病能力。在低Mg^(2+)环境下,牛种布鲁氏菌通过MgtC保证细菌ATP正常水解,维持自身正常生理活动和膜结构的完整性,但是MgtC对牛种布鲁氏菌的毒力和致病性无明显影响,本研究为深入了解牛种布鲁氏菌提供了数据支撑。 展开更多
关键词 牛种布鲁氏菌S2308 mgtC 低Mg^(2+)环境 生物学功能
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布鲁氏菌毒力因子与胞内存活机制研究进展 被引量：2
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作者 尤留超 尹号 +3 位作者 陶政宇 黄蓉 付磊 储岳峰 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第4期1575-1593,共19页
布鲁氏菌病是一种重要的呈世界性流行的人兽共患病,给畜牧业造成巨大经济损失的同时,还严重威胁人类健康与公共卫生安全。布鲁氏菌可应用多种策略逃逸免疫系统,不仅可抵抗吞噬细胞的杀菌作用,还可使宿主细胞形成有利于自身存活的微环境... 布鲁氏菌病是一种重要的呈世界性流行的人兽共患病,给畜牧业造成巨大经济损失的同时,还严重威胁人类健康与公共卫生安全。布鲁氏菌可应用多种策略逃逸免疫系统,不仅可抵抗吞噬细胞的杀菌作用,还可使宿主细胞形成有利于自身存活的微环境,最终发展为慢性感染,这些策略给防控布鲁氏菌病带来了不小的挑战,作为进一步理解并防控布鲁氏菌病的前提,布鲁氏菌的毒力过程、胞内存活、免疫逃逸等一直是人们关注的重点,因此,本文从布鲁氏菌主要毒力因子、胞内存活和免疫逃避机制等方面,阐述其毒力因子及胞内存活机制研究进展,以期通过阐释布鲁氏菌致病机制为将来研发新型安全、高效的防控产品提供参考。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 毒力因子 胞内存活 致病机制
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免疫层析技术在布鲁氏菌病检测中的研究现状 被引量：1
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作者 陈明泽 焉鑫 +8 位作者 孙明军 邵卫星 田莉莉 张皓博 樊晓旭 杜秋明 梁晚枫 孙淑芳 南文龙 《中国动物检疫》 2025年第3期59-64,共6页
布鲁氏菌病(以下简称“布病”)是由布鲁氏菌引起的人兽共患病,对人类健康和畜牧业造成重大影响,快速准确诊断是防控该病的关键。免疫层析技术(immunochromatographic assay,ICA)是一种将抗原抗体特异性反应以及色谱原理相结合的快速检... 布鲁氏菌病(以下简称“布病”)是由布鲁氏菌引起的人兽共患病,对人类健康和畜牧业造成重大影响,快速准确诊断是防控该病的关键。免疫层析技术(immunochromatographic assay,ICA)是一种将抗原抗体特异性反应以及色谱原理相结合的快速检测技术,具有操作简便、检测快速、结果直观等优点,适用于布病的临场检测。研发ICA技术时,常选用脂多糖(LPS)、全菌蛋白、外膜蛋白这3类布鲁氏菌抗原。LPS是布鲁氏菌抗体检测技术开发时最常用的抗原,全菌蛋白能够提高检测灵敏度,而外膜蛋白特异性好,可与其他细菌进行有效区分。ICA检测结果易受制备工艺、储存条件、使用方法等条件影响与限制,目前多用于布病初筛,病例确诊时可联合使用ELISA、荧光偏振试验(FPA)等方法。本文从抗体和病原检测两方面综述了该技术在布病检测中的应用,分析了技术特点以及抗原抗体的选择,展望了其与新技术、新型仪器融合发展的趋势,以期为我国布病防控提供技术支持,同时为其他动物疫病的快速检测技术研发提供参考。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 免疫层析 检测技术
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BLOC1S1基因过表达山羊的生产及生物安全评估
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作者 王聪亮 万仕成 +9 位作者 陈文博 李剑南 宋岩峰 杜晓敏 刘王叶 李荣荣 雷安民 屈雷 朱海鲸 华进联 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第9期4328-4340,共13页
旨在制备BLOC1S1基因过表达山羊,并探究其生物安全性,为抗布鲁氏菌病模型建立和转基因动物遗传育种提供研究模型与平台。本研究以5只经产、健康雌性陕北白绒山羊(2~3岁)为供体进行超数排卵,公羊本交后经输卵管冲胚获得原核胚,通过显微... 旨在制备BLOC1S1基因过表达山羊,并探究其生物安全性,为抗布鲁氏菌病模型建立和转基因动物遗传育种提供研究模型与平台。本研究以5只经产、健康雌性陕北白绒山羊(2~3岁)为供体进行超数排卵,公羊本交后经输卵管冲胚获得原核胚,通过显微注射系统将BLOC1S1慢病毒浓缩液注射至原核胚透明带间隙后继续培养待其发育至2细胞,再移植至15只经产陕北白绒山羊受体(2~3岁)输卵管内;产羔后,利用PCR、实时荧光定量PCR和Western blotting技术对F0代羔羊进行BLOC1S1基因过表达山羊鉴定,对BLOC1S1基因过表达与野生型山羊的血液生理生化、体重和体高等生长性状指标监测比较。结果显示,原核胚胎显微注射后移植共获得13只羔羊,经PCR检测鉴定,7只为阳性BLOC1S1基因过表达山羊,阳性率为53.8%;qRT-PCR结果显示,BLOC1S1基因在大脑(P<0.01)、脾脏(P<0.001)和肺脏(P<0.05)组织mRNA表达量均显著上调,脾脏组织蛋白水平表达量显著上调(P<0.001);与野生型山羊相比,BLOC1S1基因过表达山羊WBC、Neu等血液生理指标和TBIL、GLU等血液生化指标均无显著差异(P>0.05);生长发育速度监测分析结果显示,BLOC1S1基因过表达与野生型山羊初生重、1~6月龄体重和3~6月龄生长性状指标相比无显著差异(P>0.05)。本研究成功生产了BLOC1S1基因过表达山羊,且基因过表达山羊的生长发育、血液生理生化指标与野生型山羊相比无显著差异,进一步为抗布鲁氏菌病模型建立和生物安全评价体系提供理论依据。 展开更多
关键词 BLOC1S1 过表达 山羊 布鲁氏菌 生物安全
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布鲁菌WbkC的原核表达及免疫原性研究
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作者 鲁壮壮 连丽燕 +7 位作者 王志豪 林秋 范修齐 孔兰芳 蒋蔚 陈兆国 陈伟 韩先干 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第4期71-78,共8页
wbkC基因编码布鲁菌脂多糖O-链合成必需的甲酰基转移酶,开展其免疫原性研究,可为开发布鲁菌亚单位疫苗及诊断技术提供候选靶标。本研究通过生物信息学分析后扩增wbkC基因,构建其表达质粒,进行蛋白表达,并利用Western blot检测WbkC的免... wbkC基因编码布鲁菌脂多糖O-链合成必需的甲酰基转移酶,开展其免疫原性研究,可为开发布鲁菌亚单位疫苗及诊断技术提供候选靶标。本研究通过生物信息学分析后扩增wbkC基因,构建其表达质粒,进行蛋白表达,并利用Western blot检测WbkC的免疫反应性;通过对BALB/C小鼠免疫WbkC,评价其诱导小鼠抗体及细胞因子产生水平。结果显示:成功构建表达质粒pCold I-wbkC,获得大小约31 kDa的重组蛋白,并与布鲁菌阳性血清具有免疫反应性;在免疫小鼠后的7、21、35、49 d均可产生抗WbkC抗体,且在35 d达到最高水平;利用荧光定量PCR和ELISA分别对小鼠细胞因子的转录和表达水平进行检测,与对照组相比,免疫组IL1-β(P<0.01)、IL-6(P<0.01)、TNF-α(P<0.0001)、IFN-β(P<0.05)转录水平上调,免疫组血清中的IL-6、IFN-β和TNF-α的含量分别升高1.41、3.32和9.32倍,而IL-Iβ的含量没有变化。本研究表明WbkC蛋白具有多个B细胞、T细胞位点,结构复杂,是免疫原性蛋白;该蛋白可产生较高的抗体水平,能显著提升小鼠细胞因子的含量及脾脏细胞中的转录水平,表明其可诱导小鼠体液和细胞免疫应答,为后续以WbkC蛋白为靶标开展布鲁菌亚单位疫苗和诊断方法研究提供参考。 展开更多
关键词 布鲁菌 wbkC基因 免疫原性 细胞因子检测
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不同保藏条件对7株30%甘油-脑心浸液培养基保藏布鲁氏菌存活数的影响研究
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作者 范玉 赵鸿雁 +5 位作者 徐晴晴 李鲲 田国忠 姜海 李兰玉 朴东日 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第9期945-951,共7页
目的比较不同保藏条件对脑心浸液培养基保藏布鲁氏菌存活数的影响,为布鲁氏菌菌种保藏条件的选择提供试验数据支撑。方法使用30%甘油-脑心浸液培养基将7株我国流行的羊种、牛种、猪种布鲁氏菌(编号为A、B、C、D、E、F、G)制成菌液后进... 目的比较不同保藏条件对脑心浸液培养基保藏布鲁氏菌存活数的影响,为布鲁氏菌菌种保藏条件的选择提供试验数据支撑。方法使用30%甘油-脑心浸液培养基将7株我国流行的羊种、牛种、猪种布鲁氏菌(编号为A、B、C、D、E、F、G)制成菌液后进行稳定性试验。加速稳定性试验:将菌液在37℃温箱中连续放置1、2、3、4周,测定各时间节点的布鲁氏菌存活数;冻融稳定性试验:将菌液放在-80℃冰箱中冻存,转移到室温放置4 h融化记为一次冻融,分别测定冻融2次、4次、6次、8次后的布鲁氏菌存活数;长期稳定性试验:将菌液放在-80℃冰箱中保藏,测定保藏第1、3、6、12个月各时间节点的布鲁氏菌存活数。绘制折线图描述3种稳定性试验中各时间节点布鲁氏菌存活数的变化。使用SPSS 22.0软件比较各个时间节点布鲁氏菌存活数与初始布鲁氏菌存活数是否具有统计学意义的差异。结果加速稳定性试验:7个菌株的存活数下降趋势非常明显,1周后布鲁氏菌存活数与初始布鲁氏菌存活数之间就出现了具有统计学意义的差异。冻融稳定性试验:随着冻融次数的增加,7个菌株的布鲁氏菌存活数总体呈下降趋势。C、F两个菌株冻融2次后出现与初始布鲁氏菌存活数具有统计学意义的差异,A、D两个菌株冻融4次后出现与初始布鲁氏菌存活数具有统计学意义的差异,G菌株冻融6次后出现与初始布鲁氏菌存活数具有统计学意义的差异,E菌株冻融8次后出现与初始布鲁氏菌存活数具有统计学意义的差异,B菌株的数据异常。长期稳定性试验:C、F两个菌株保藏1个月后出现与初始布鲁氏菌存活数具有统计学意义的差异,B、E两个菌株保藏1、3、6、12个月后均未出现与初始布鲁氏菌存活数具有统计学意义的差异,A、D、G菌株的数据异常。结论布鲁氏菌使用无菌30%甘油-脑心浸液培养基保藏可以在-80℃的环境中保持菌的存活数,使用时应避免多次冻融。与传统的冷冻干燥法相比,该方法不仅操作简便,还规避了潜在的生物安全隐患,为相关领域的研究人员提供了一种可靠的布鲁氏菌菌种保藏方案。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 脑心浸液培养基 菌种保藏 存活数 稳定性试验
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布鲁氏菌分泌蛋白BPE005缺失株的构建及其对GPR126/ADGRG6蛋白的影响
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作者 吴婷婷 关飞虎 +7 位作者 郭嘉 张璐 朱德馨 孙志华 曹树珠 徐艺玫 张辉 邓兴梅 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第10期5104-5114,共11页
布鲁氏菌T4SS分泌蛋白参与布鲁氏菌引起的母畜流产及胎盘炎症反应,为探究布鲁氏菌分泌蛋白致流产机制,本研究构建布鲁氏菌BPE005缺失株,初步探究分泌蛋白BPE005对胚胎发育关键蛋白GPR126的影响。本试验以Kan基因替换目的基因的同源重组... 布鲁氏菌T4SS分泌蛋白参与布鲁氏菌引起的母畜流产及胎盘炎症反应,为探究布鲁氏菌分泌蛋白致流产机制,本研究构建布鲁氏菌BPE005缺失株,初步探究分泌蛋白BPE005对胚胎发育关键蛋白GPR126的影响。本试验以Kan基因替换目的基因的同源重组方法,构建BPE005缺失株S2308ΔBPE005,连续培养15代,检测其遗传稳定性;同时构建并电转pBBR1MCS-4-BPE005质粒至BPE005缺失株S2308ΔBPE005中,成功构建BPE005回补株S2308▲BPE005。每4 h检测S2308、S2308△BPE005、S2308▲BPE005菌株的OD_(600 nm),并根据时间和OD_(600 nm)绘制各菌株的生长曲线。以感染复数(MOI)100,建立S2308、S2308ΔBPE005、S2308▲BPE005菌株侵染滋养层细胞HTR-8模型,通过平板计数方法检测3株菌株胞内生存情况;分别收集侵染后0、4、8、12 h滋养层细胞中的蛋白样和RNA样,通过荧光定量PCR和蛋白免疫印迹方法检测GPR126蛋白表达量。结果显示:本试验成功构建布鲁氏菌分泌蛋白BPE005缺失株和回补株,并且能稳定遗传15代。生长曲线结果显示,与S2308相比,缺失布鲁氏菌分泌蛋白BPE005菌株在12~44 h生长活力都降低,其中,24~44 h平台期时均显著降低(P<0.001),但回补株与野生株无显著差异(P>0.05);胞内生存试验结果表明,与S2308相比,S2308ΔBPE005在HTR-8细胞内存活数量下降,在侵染后12和24 h时显著下降(P<0.001)。实时荧光定量和蛋白免疫印迹结果表明,与对照组相比,S2308菌株在侵染4 h后,会引起GPR126蛋白表达量的显著升高(P<0.001),随后开始下降;与S2308菌株相比,S2308ΔBPE005菌株在侵染后4 h时,GPR126蛋白表达量显著降低(P<0.001),而8 h时,GPR126蛋白的显著升高(P<0.001),S2308▲BPE005与S2308无显著差异。本试验成功构建稳定遗传的布鲁氏菌分泌蛋白BPE005缺失株和回补株,布鲁氏菌分泌蛋白BPE005能促进布鲁氏菌繁殖,促进布鲁氏菌胞内增殖;BPE005缺失株感染初期抑制GPR126蛋白表达,但中期能促进GPR126的表达。本研究结果为布鲁氏菌分泌蛋白对GPR126蛋白相互作用的影响,以及布鲁氏菌在滋养层细胞中致病机制奠定基础和提供思路。 展开更多
关键词 布鲁氏菌分泌蛋白 GPR126表达 基因缺失
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犬布鲁氏菌多表位候选疫苗设计与免疫模拟预测
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作者 刘大虎 许春梅 +5 位作者 梁瑞英 汤新明 梁琳 赵晓民 丁家波 杨升 《动物医学进展》 北大核心 2025年第7期41-51,共11页
利用免疫表位数据库(IEDB)预测了布鲁氏菌中高度保守且已证明具有良好免疫原性抗原(Omp16、Omp19、VriB10、L7/L12、SOD)的T细胞和B细胞表位,将优势抗原表位(组)串联构建模拟重组多肽。在此基础上,利用SOPMA和TASSER预测模拟重组多肽的... 利用免疫表位数据库(IEDB)预测了布鲁氏菌中高度保守且已证明具有良好免疫原性抗原(Omp16、Omp19、VriB10、L7/L12、SOD)的T细胞和B细胞表位,将优势抗原表位(组)串联构建模拟重组多肽。在此基础上,利用SOPMA和TASSER预测模拟重组多肽的二级和三级结构,使用ExpasyProtparam分析模拟重组多肽的致敏性、抗原性、溶解性等理化特性。进一步利用HawkDock对接重组多肽与Toll样受体3(Toll-like receptor 3,TLR3),以预测它们之间的相互作用,并使用C-ImmSim进行免疫模拟预测。结果显示,重组多肽能有效与TLR3相互作用,有望激活相关的免疫信号通路;预测免疫后能刺激免疫个体产生高水平的抗体和IFN-γ、IL-2,说明重组多肽具有激发宿主产生体液免疫和细胞免疫应答的潜能。研究建立了基于生物信息学技术预测优势抗原表位并进行多肽疫苗设计的理论模型,可为犬布鲁氏菌病多肽疫苗的研发提供参考。 展开更多
关键词 犬布鲁氏菌 多表位疫苗 表位预测 免疫反应
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布鲁氏菌双抗夹心ELISA检测方法的建立与初步验证
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作者 姚梦欣 彭泽宇 +5 位作者 任文浩 徐艺玫 郭伟 陈创夫 马忠臣 王勇 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第3期255-262,共8页
目的 建立灵敏、特异的布鲁氏菌双抗体夹心ELISA检测方法。方法 筛选用于布鲁氏菌检测的单克隆捕获抗体和检测抗体,优化并确定最佳抗体包被时间和浓度,最佳封闭液、封闭时间和阴阳性临界值;通过检验其他易与布鲁氏菌发生交叉反应的细菌... 目的 建立灵敏、特异的布鲁氏菌双抗体夹心ELISA检测方法。方法 筛选用于布鲁氏菌检测的单克隆捕获抗体和检测抗体,优化并确定最佳抗体包被时间和浓度,最佳封闭液、封闭时间和阴阳性临界值;通过检验其他易与布鲁氏菌发生交叉反应的细菌来验证该方法的特异性;通过对灭活布鲁氏菌梯度稀释液的检测,验证该方法的灵敏性;将该夹心ELISA检测结果与试管凝集和qPCR检测结果进行比较。结果 筛选出的捕获抗体为4A12,检测抗体为6C12。试验分析显示,捕获抗体4A12的最佳包被浓度为5μg/mL,检测抗体6C12的最佳稀释比为1∶2 000。该研究的最佳包被条件为4℃过夜、5%脱脂奶粉封闭、封闭时间2 h。该研究建立的双抗体夹心ELISA方法只与布鲁氏菌发生反应,与其他细菌未发生反应;布鲁氏菌灭活菌液浓度稀释到1×10^(5) CFU/mL时仍能检测出。批内、批间变异系数均小于10%。结论 该研究成功建立了布鲁氏菌双抗夹心ELISA检测方法,该方法具有良好的特异性与灵敏性,为布鲁氏菌病的精确诊断和有效防控提供有效途径。 展开更多
关键词 单克隆抗体 布鲁氏菌 双抗夹心ELISA法 诊断
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2型固有淋巴细胞(ILC2)在布鲁氏菌感染中的变化特点研究
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作者 殷郑伟 朱玥洁 +4 位作者 史娟 何月月 丁剑冰 王泉 张峰波 《中国免疫学杂志》 北大核心 2025年第3期655-660,共6页
目的:探究2型固有淋巴细胞(ILC2)及其相关因子在布鲁氏菌急慢性感染中的变化特点和相关性,明确ILC2在布鲁氏菌病慢性化中的免疫作用。方法:将43例急性布鲁氏菌病患者和45例慢性布鲁氏菌病患者与49例健康对照进行比较。流式细胞术检测各... 目的:探究2型固有淋巴细胞(ILC2)及其相关因子在布鲁氏菌急慢性感染中的变化特点和相关性,明确ILC2在布鲁氏菌病慢性化中的免疫作用。方法:将43例急性布鲁氏菌病患者和45例慢性布鲁氏菌病患者与49例健康对照进行比较。流式细胞术检测各组ILC2水平;荧光定量PCR检测PBMC中GATA3 mRNA水平;ELISA检测血清中IL-33、ST2、IL-4和IL-13等细胞因子水平;全自动生化分析仪检测ALT和AST水平。结果:慢性布病组ILC2水平、PBMC中GATA3 mRNA水平、血清IL-33、IL-4和IL-13水平均较健康对照组及急性布病组显著升高(P<0.01)。相关性分析显示,ILC2水平与GATA3 mRNA、IL-33、IL-4和IL-13水平均呈正相关,与ST2水平呈负相关。ROC曲线表明ILC2、GATA3、IL-33和ST2等指标均对布病患者严重程度有较好的预测能力(AUC>0.7)。结论:ILC2及其相关因子水平升高与布鲁氏菌病慢性化密切相关,可能在布鲁氏菌感染致病过程中起重要免疫作用。 展开更多
关键词 布鲁氏菌病 2型固有淋巴细胞 GATA3 IL-33 IL-4 IL-13
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五种非主要致病布鲁氏菌生物型及遗传多样性分析
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作者 王妙 王瑛琦 +3 位作者 刘春芳 杜松楠 刘志国 李振军 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第2期136-141,共6页
目的 分析5种非主要致病布鲁氏菌的生物型及遗传多样性特征,为了解该类菌株的遗传特征及强化病原监测防控提供科学依据。方法 基于国际MLVA数据库中的5种非主要致病布鲁氏菌的生物型(种型、宿主、分离地点、时间)及MLVA-16基因型(MLVA-1... 目的 分析5种非主要致病布鲁氏菌的生物型及遗传多样性特征,为了解该类菌株的遗传特征及强化病原监测防控提供科学依据。方法 基于国际MLVA数据库中的5种非主要致病布鲁氏菌的生物型(种型、宿主、分离地点、时间)及MLVA-16基因型(MLVA-16位点数据、MLVA-11基因型)数据,使用Bionumerics 8.0软件和PHYLOVIZ2.0在线软件对该类菌株的地理来源及遗传多样性特征进行分析。结果 共对227株5种非主要致病布鲁氏菌进行了分析,包括121株鲸型布鲁氏菌、47株鳍型布鲁氏菌、37株绵羊附睾种、11株田鼠种布鲁氏菌和11株沙林鼠种布鲁氏菌。鲸型布鲁氏菌的分离宿主极具多样性,其次是鳍型布鲁氏菌和田鼠种布鲁氏菌。鲸型布鲁氏菌分布在欧洲和南美洲国家,鳍型布鲁氏菌分布在欧洲,田鼠种布鲁氏菌分布在中欧的捷克共和国、奥地利和匈牙利。绵羊附睾种布鲁氏菌分布在非洲、阿根廷、澳大利亚、巴西、希腊、美国、西班牙和法国。不同种型布鲁氏菌MLVA-11基因型有较高的多态性且存在较大差异,提示菌株的地理来源不同。MST分析显示,本研究的菌株被分为4个进化分支(BCⅠ~Ⅳ),其中鲸鱼型布鲁氏菌被分为2个不同的分支(BC-Ⅰ和BC-Ⅱ),其他种型的菌株分别形成不同分支(或亚支),不同种型的菌株存在明显的地域性和优势宿主特征。非主要致病布鲁氏菌与经典布鲁氏菌有明显的遗传、分布地域及宿主谱差异。结论 非主要致病布鲁氏菌呈现出特定的地域分布及宿主趋向性特征,为理解该类布鲁氏菌的生物及遗传多样性提供了基础科学数据。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 鲸型布鲁氏菌 鳍型布鲁氏菌 MLVA基因型 遗传多样性
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安徽省亳州市布鲁氏菌病病原学监测及其分子特征分析
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作者 康晓东 王俊 +6 位作者 钱树生 王祥英 汤云飞 怀雪飞 姜栋栋 刘正祥 柳燕 《安徽医科大学学报》 北大核心 2025年第5期964-970,共7页
目的了解安徽省亳州市布鲁氏菌病患者群的分布及病菌流行的型别和基因特征,为制定本地区布鲁氏菌病预防与控制策略提供依据。方法对采集的698份血液样本进行虎红平板凝集试验(RBPT)和试管凝集试验(TAT),收集被检测者流行病学资料,对检... 目的了解安徽省亳州市布鲁氏菌病患者群的分布及病菌流行的型别和基因特征,为制定本地区布鲁氏菌病预防与控制策略提供依据。方法对采集的698份血液样本进行虎红平板凝集试验(RBPT)和试管凝集试验(TAT),收集被检测者流行病学资料,对检测结果进行统计分析;培养并提取阳性菌株基因组DNA,采用16S rRNA测序方法进行分离菌株的分子鉴定和分型,通过Clustal W和MEGA 7进行序列比对分析,结果与BCSP31-PCR及AMOS-PCR的检测结果进行比较。结果血清学检测共测出阳性样本66份,阳性检出率为9.46%;检出率最高的人群主要从事活羊宰杀工作;培养出的10株阳性菌株16S rRNA基因测序结果显示,均与羊种布鲁氏菌亲缘关系较近,进化树显示在同一分枝上,与BCSP31-PCR、AMOS-PCR鉴定结果一致。结论羊种布鲁氏菌在本地区传播中处于优势地位,从事羊养殖、屠宰、售卖等职业的人群为高风险人群;该研究结果为本地区的患者群体分布及布鲁氏菌病基因分型和溯源研究提供了分子生物学证据,同时也验证了16S rRNA进行分子溯源的有效性。 展开更多
关键词 布鲁氏菌病 病原学监测 BCSP31聚合酶链式反应 AMOS聚合酶链式反应 16S rRNA 羊种布鲁氏菌
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苯并(a)芘降解菌的筛选及其降解特性研究
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作者 刘舒婷 刘佳明 +3 位作者 高兆麒 刘世亮 姜桂英 王贝贝 《生态与农村环境学报》 北大核心 2025年第8期1057-1065,共9页
高分子量多环芳烃(PAHs)特别是苯并(a)芘(BaP)高效降解微生物资源仍十分匮乏。该研究通过富集培养、形貌观察、生理生化和16S rDNA基因序列对比分析等方法,筛选获得4株BaP高效降解菌H1(Brucella anthropi,布鲁氏菌)、H2(Bacillus cereus... 高分子量多环芳烃(PAHs)特别是苯并(a)芘(BaP)高效降解微生物资源仍十分匮乏。该研究通过富集培养、形貌观察、生理生化和16S rDNA基因序列对比分析等方法,筛选获得4株BaP高效降解菌H1(Brucella anthropi,布鲁氏菌)、H2(Bacillus cereus,芽孢杆菌)、M1(Brucella anthropi,布鲁氏菌)和M2(Brucella anthropi,布鲁氏菌),在不同温度、pH值条件下探究4株菌对BaP的降解特性后发现:(1)4株菌可在pH值为5.5~8.5,温度(T)为25~37℃的环境中生存并保持活性,最佳环境条件均为温度T=30℃,pH=7.5;(2)在T=30℃,pH=7.0条件下,降解初始质量浓度为5 mg·L^(-1)的BaP 5 d后,H1、H2、M1和M2对BaP的降解率分别达到66.32%、79.26%、82.14%和61.81%;(3)布鲁氏菌M1在最佳降解条件下对高分子量PAHs BaP具有良好的降解能力,在微生物修复中具有较好的应用潜力。研究结果可为生物修复提供宝贵的生物资源,为BaP污染环境的高效微生物修复提供技术支持。 展开更多
关键词 苯并(A)芘 污染土壤 生物修复 高效降解菌 布鲁氏菌
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一种羊种布鲁氏菌复方新诺明耐药株荧光定量PCR检测方法的建立
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作者 杨晓雯 宁文晴 +3 位作者 周师众 袁雅琴 侯雪新 丁家波 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第3期1465-1472,共8页
近年来,世界范围内已分离获得布鲁氏菌复方新诺明耐药株,快速检测样品中是否含有耐药株有助于指导临床用药。目前国内外尚无布鲁氏菌复方新诺明耐药株的快速检测方法。本研究旨在建立一种羊种布鲁氏菌复方新诺明耐受株的快速检测方法。... 近年来,世界范围内已分离获得布鲁氏菌复方新诺明耐药株,快速检测样品中是否含有耐药株有助于指导临床用药。目前国内外尚无布鲁氏菌复方新诺明耐药株的快速检测方法。本研究旨在建立一种羊种布鲁氏菌复方新诺明耐受株的快速检测方法。基于前期的研究筛选最小抑菌浓度较高的我国羊种布鲁氏菌分离株,利用基因组测序分析全基因组SNPs并筛选SNPs位点,利用MGB探针建立荧光定量检测羊种布鲁氏菌复方新诺明耐药株。研究发现,羊种布鲁氏菌2型标准株可作为耐药株分析的参考株,且64个SNPs和InDels为耐药株特有;12个突变位点可用于建立耐药株快速检测方法;利用染色体1中2014308位点的A/G多态性建立荧光定量检测方法特异性良好,最低能检测2×10^(1)CFU菌量,可用于临床样品是否含有复方新诺明耐药株的检测。本研究建立了一种羊种布鲁氏菌复方新诺明耐药株的荧光定量检测方法,为我国布病耐药株的防控提供科学依据,同时也为临床用药提供参考。 展开更多
关键词 羊种布鲁氏菌 复方新诺明 全基因组SNPs MGB探针
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小鼠模型在布鲁氏菌感染研究中的应用
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作者 焉鑫 李继文 +10 位作者 孙明军 孙翔翔 刘蒙达 张皓博 李嘉琪 靳继惠 黄孟锟 邵卫星 南文龙 樊晓旭 孙淑芳 《中国动物检疫》 2025年第3期65-71,共7页
布鲁氏菌病(简称“布病”)是由布鲁氏菌引起的,我国当前重点防控的人兽共患病。布鲁氏菌毒力和致病机制研究是有效预防和控制布病的基础,而小鼠模型的应用极大促进了上述研究进程。感染途径、感染剂量、小鼠品系、年龄等均是布鲁氏菌小... 布鲁氏菌病(简称“布病”)是由布鲁氏菌引起的,我国当前重点防控的人兽共患病。布鲁氏菌毒力和致病机制研究是有效预防和控制布病的基础,而小鼠模型的应用极大促进了上述研究进程。感染途径、感染剂量、小鼠品系、年龄等均是布鲁氏菌小鼠感染模型建立的影响因素,其中腹腔注射感染途径是小鼠模型测试布鲁氏菌毒力的首选。布鲁氏菌在小鼠模型中的感染分为感染早期、急性感染期、慢性稳定期和慢性衰退期4个阶段,不同感染阶段小鼠的临床症状和病理学免疫学特征均有所差异。另外,在小鼠中很少发生布鲁氏菌水平和垂直传播。根据布鲁氏菌在小鼠感染和免疫方面的研究成果,世界动物卫生组织《陆生动物诊断试验与疫苗手册》明确规定了布病疫苗生产环节在小鼠模型上的残留毒力测试和免疫原性测试质量标准。本文总结了布鲁氏菌在小鼠模型中的感染模式、感染影响因素、水平传播特征、临床症状和病理学免疫学特征以及布病疫苗生产标准要求等,以期为布鲁氏菌的分子致病机制、疫苗等研究提供参考资料。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 小鼠感染模型 感染影响因素 感染模式
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