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白桦BplMYB46转录因子的原核表达和重组蛋白的纯化
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作者 国会艳 刘志华 +4 位作者 胡萍 贾园园 张春蕊 杨传平 王玉成 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1-5,共5页
从白桦的转录组中发现一个MYB类转录因子Bpl MYB46,将其与拟南芥的MYB类转录因子进行氨基酸序列比对分析,并将其构建到原核表达载体p GEX-4T-2上,获得重组表达载体p GEX-4T-2-Bpl MYB46,然后导入原核表达菌株BL21中,利用异丙基-β-D-硫... 从白桦的转录组中发现一个MYB类转录因子Bpl MYB46,将其与拟南芥的MYB类转录因子进行氨基酸序列比对分析,并将其构建到原核表达载体p GEX-4T-2上,获得重组表达载体p GEX-4T-2-Bpl MYB46,然后导入原核表达菌株BL21中,利用异丙基-β-D-硫代半乳糖(IPTG)诱导重组蛋白的表达。结果显示:Bpl MYB46属于R2R3-MYB类转录因子;在IPTG终浓度为0.4 mmol/L,30℃条件下诱导4 h后p GEX-4T-2-Bpl MYB46原核蛋白表达量最高,主要为包涵体形式;利用尿素梯度透析法和电洗脱法纯化蛋白,发现电洗脱法成功获得浓度和纯度较高的重组蛋白。 展开更多
关键词 白桦 bplmyb46转录因子 原核蛋白 蛋白纯化
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白桦E-box元件的载体构建及与BplMYB46转录因子的互作分析 被引量:3
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作者 王博 王莲萍 +2 位作者 杨春雨 国会艳 魏继承 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期110-115,共6页
MYB转录因子是植物中最大的转录因子家族成员之一,主要参与植物次生代谢调控、激素和环境因子的应答,在植物的生长发育中起着至关重要的作用。已有研究发现,E-box的核心序列为CANNTG(N:A/G/C/T),是一类与光响应和苯丙氨酸生物合成途径... MYB转录因子是植物中最大的转录因子家族成员之一,主要参与植物次生代谢调控、激素和环境因子的应答,在植物的生长发育中起着至关重要的作用。已有研究发现,E-box的核心序列为CANNTG(N:A/G/C/T),是一类与光响应和苯丙氨酸生物合成途径相关的元件。在前期研究中,先构建顺式作用元件库,然后以转录因子为中心的酵母单杂交技术筛选发现,白桦的BplMYB46转录因子能够与核心序列为CAAATG的E-box顺式作用元件结合。但是,是否能与E-box的其他核心序列结合还不清楚。本研究将每一种E-box顺式作用元件的核心序列分别进行双链DNA的复性并连接到pHIS2载体上,然后通过酵母单杂交技术筛选与BplMYB46转录因子能够特异结合的E-box顺式作用元件。结果显示,当E-box的核心序列第3个碱基为A/T/C、第四个碱基为A/G/C时,酵母单菌落能在三缺培养基TDO/3AT上生长,表明与BplMYB46转录因子结合的E-box顺式作用元件的特异性序列为CA(A/T/C)(A/G/C)TG。为后续通过BplMYB46转录因子与E-box顺式作用元件的结合来分析BplMYB46转录因子对下游基因的调控,以及为筛选优良下游基因改良白桦的遗传性状奠定数据基础。 展开更多
关键词 bplmyb46转录因子 E-box顺式作用元件 酵母单杂交技术
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大豆转录因子GmMYB46调控植物耐旱性的功能研究
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作者 张斌 《干旱地区农业研究》 北大核心 2025年第3期45-51,70,共8页
为解析大豆转录因子MYB家族成员GmMYB46基因在干旱胁迫应答中的调节机制,通过荧光定量PCR检测其在PEG模拟干旱处理的大豆中的表达水平。克隆GmMYB46基因编码序列构建过表达载体,利用农杆菌介导转化野生型拟南芥,在正常培养和干旱处理条... 为解析大豆转录因子MYB家族成员GmMYB46基因在干旱胁迫应答中的调节机制,通过荧光定量PCR检测其在PEG模拟干旱处理的大豆中的表达水平。克隆GmMYB46基因编码序列构建过表达载体,利用农杆菌介导转化野生型拟南芥,在正常培养和干旱处理条件下观察转基因和野生型(WT)拟南芥植株的生长情况,测定叶片电导率、可溶性糖和脯氨酸含量以及抗氧化酶活性,观察对比叶片气孔开度。结果表明:GmMYB46受干旱胁迫诱导在根和叶中的表达量显著上调,最高达8.9倍和16.3倍。成功获得GmMYB46基因过表达的拟南芥植株OE,在培养基和营养土培养模式下OE植株耐旱性均明显增强,其长势优于WT植株。干旱处理后,OE植株电导率较WT降低46.1%;可溶性糖和脯氨酸含量均显著高于WT植株,分别增加54.9%和225.0%;超氧化物歧化酶、过氧化物酶和过氧化氢酶活性也明显上升,在根中分别增加8.8%、14.6%和47.0%,叶中则分别增加11.2%、69.2%和21.2%。说明大豆GmMYB46基因可能与细胞渗透调节、抗氧化酶活性以及气孔开度等生理过程的调节相关。 展开更多
关键词 大豆 转录因子 GmMYB46基因 耐旱性
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山楂中木质素合成调控转录因子MYB46的克隆及功能鉴定 被引量:2
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作者 陈可钦 雷莹莹 +3 位作者 郭运娜 宋梦如 刘丽馥 代红艳 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期395-401,共7页
模式植物拟南芥AtMYB46在次生壁形成过程中充当纤维素、木质素和木聚糖生物合成基因的转录调节因子,其表达受植物特异性转录因子NAC家族成员的调控。然而,果树次生壁生物合成的调节机制在很大程度上尚不清楚。从山楂(Crataegus pinnatif... 模式植物拟南芥AtMYB46在次生壁形成过程中充当纤维素、木质素和木聚糖生物合成基因的转录调节因子,其表达受植物特异性转录因子NAC家族成员的调控。然而,果树次生壁生物合成的调节机制在很大程度上尚不清楚。从山楂(Crataegus pinnatifida)中分离克隆得到与拟南芥和苹果中MYB46具有高度保守R2R3 MYB DNA结合结构域的MYB46编码基因,并将其命名为CpMYB46。通过农杆菌介导的转化方法分别在拟南芥、烟草和苹果中异位表达CpMYB46基因。异位表达CpMYB46基因的拟南芥和烟草的次生壁过量沉积而导致生长受到限制,表现出株型矮小和叶片上卷的表型。定量RT-PCR数据表明,CpMYB46基因可以调控转基因植株次生细胞壁生物合成中下游基因的表达,茎切片观察表明异位表达CpMYB46明显增加了转基因拟南芥、烟草和苹果木质部中次生壁厚度。EMSA实验结果表明其上游NAC家族成员CpSND1可以直接结合CpMYB46基因的启动子。研究揭示了CpMYB46在DNA结合结构域与拟南芥和苹果中的MYB46具有高度保守性,而且在植物次生壁合成调控中也存在功能保守性。研究为揭示山楂内种皮中木质素的合成提供了分子依据,也为山楂的分子育种奠定了基础。 展开更多
关键词 木质素 山楂 转录因子 MYB46 SND1 转录调控 次生细胞壁
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