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Bax/Bak在抑制人颗粒细胞凋亡中的作用 被引量:8
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作者 李红 曾卫森 +1 位作者 罗琛 邢福祺 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期2367-2370,共4页
目的探讨Bax、Bak等凋亡分子的小分子干扰RNA(siRNA)可否抑制人颗粒细胞凋亡。方法(1)用Western blotting检测Bax-siRNA、Bak-siRNA;(2)将Bax-siRNA、Bak-siRNA分别或同时转染入人颗粒细胞,观察基本形态,用流式细胞仪检测颗粒细胞的凋... 目的探讨Bax、Bak等凋亡分子的小分子干扰RNA(siRNA)可否抑制人颗粒细胞凋亡。方法(1)用Western blotting检测Bax-siRNA、Bak-siRNA;(2)将Bax-siRNA、Bak-siRNA分别或同时转染入人颗粒细胞,观察基本形态,用流式细胞仪检测颗粒细胞的凋亡。结果(1)转染了Bax-siRNA和Bak-siRNA后的条带减弱,说明细胞内Bax、Bak含量降低。(2)空白对照组、Bak干扰组、Bak+Bax干扰组细胞形态正常;Bax干扰组细胞形态基本正常,胞质中有少数黑点;阳性对照组、阴性对照组细胞变圆,收缩,细胞间距大,胞质中有较多黑点。(3)流式细胞仪检测结果:Bak干扰组凋亡指数为3.44%,Bax+Bak联合干扰组凋亡指数为3.97%,明显低于阴性对照;Bax干扰组凋亡指数为19.98%,与阴性对照组相似。结论(1)干扰Bak等凋亡分子的表达,可以抑制颗粒细胞的凋亡。(2)Bak干扰组及Bax+Bak联合干扰组抗颗粒凋亡效果显著。(3)Bax干扰组抑制颗粒细胞凋亡的作用不明显。 展开更多
关键词 颗粒细胞 凋亡 bax bak 小分子干扰RNA
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促凋亡蛋白Bax和Bak通过Nrf2/GPX4信号通路调控铁死亡 被引量:7
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作者 韩靖 赵国平 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期6-10,共5页
为探究促凋亡蛋白Bak/Bax对erastin诱导铁死亡的调控机制,以野生型(WT)、Bak/Bax双敲除(Bak/Bax-DKO)、Bax敲除(Bax-KO)和Bak敲除(Bak-KO)的小鼠成纤维细胞(MEFs)为实验对象,利用CCK-8和流式细胞术检测细胞存活率和活性氧(ROS)的生成量... 为探究促凋亡蛋白Bak/Bax对erastin诱导铁死亡的调控机制,以野生型(WT)、Bak/Bax双敲除(Bak/Bax-DKO)、Bax敲除(Bax-KO)和Bak敲除(Bak-KO)的小鼠成纤维细胞(MEFs)为实验对象,利用CCK-8和流式细胞术检测细胞存活率和活性氧(ROS)的生成量,利用试剂盒测定GSH/GSSG水平,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹(Western Blot)检测相关基因和蛋白的表达水平。结果显示:与野生型细胞相比,敲除Bak和Bax显著抑制erastin诱导的铁死亡,RT-qPCR和Western Blot检测发现,相比WT细胞,Bak/Bax-DKO细胞中核因子NF-E2相关因子2(Nrf2)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)蛋白、GPX4 mRNA表达水平明显升高。进一步研究发现:与Bak/Bax双敲除类似,敲除Bax也显著抑制erastin诱导的铁死亡,促进GPX4的蛋白表达水平;而敲除Bak对erastin诱导的铁死亡及GPX4的蛋白表达水平无明显影响。结果表明,促凋亡蛋白Bax和Bak通过Nrf2/GPX4信号通路抑制erastin诱导的铁死亡,且Bax在其中起主导作用。 展开更多
关键词 bak/bax 铁死亡 活性氧 谷胱甘肽过氧化物酶4 核因子NF-E2相关因子2
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丁型肝炎病人肝组织HDAg与bcl-2、bax、bak表达关系
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作者 顾小红 冯爱娟 +2 位作者 张云东 李奇芬 王宇明 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第18期1677-1679,共3页
目的 探讨bcl 2、bax、bak在丁型肝炎发病机制中的作用。方法 采用免疫组化单、双标记染色技术等 ,检测77例各型丁肝病人肝组织中HDAg、bcl 2、bax和bak表达。以HDV阴性的 67例乙型肝炎作对照。结果 bcl 2、bax和bak均以肝细胞浆表... 目的 探讨bcl 2、bax、bak在丁型肝炎发病机制中的作用。方法 采用免疫组化单、双标记染色技术等 ,检测77例各型丁肝病人肝组织中HDAg、bcl 2、bax和bak表达。以HDV阴性的 67例乙型肝炎作对照。结果 bcl 2、bax和bak均以肝细胞浆表达为主。HDAg以肝细胞核表达为主。HDAg与bax和bak表达及分布有相关性 ,四成分在各型肝炎中的表达强度有显著性差别 (P <0 .0 5 )。结论 HDAg、bax、bak表达强度和阳性细胞分布均与肝组织炎症活动及病理损害程度相关 ,HDV感染可诱导肝细胞表达bax和bak ,增强肝细胞凋亡 。 展开更多
关键词 丁型肝炎 丁型肝炎病毒抗原 bcl—2 bax bak
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Bax过表达对培养人视网膜色素上皮细胞bak和bcl-xl表达的影响
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作者 杜红俊 惠延年 +2 位作者 王雨生 韩泉洪 马吉献 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2005年第3期235-237,共3页
目的观察bak和bclxl在正常培养和经bax转染后的人视网膜色素上皮(RPE)细胞中的表达。方法采用脂质体对正常培养人RPE细胞进行bax基因的转染,筛选阳性转染的细胞。实验分为正常细胞组,空载体组和基因转染组。运用抗bak和bclxl的多克隆抗... 目的观察bak和bclxl在正常培养和经bax转染后的人视网膜色素上皮(RPE)细胞中的表达。方法采用脂质体对正常培养人RPE细胞进行bax基因的转染,筛选阳性转染的细胞。实验分为正常细胞组,空载体组和基因转染组。运用抗bak和bclxl的多克隆抗体进行免疫细胞化学染色,观察两种基因在RPE细胞中的表达的变化。结果bak和bclxl各组细胞中都存在阳性表达。bak在三组细胞中的染色光密度分别为56.4±5.7,52.3±5.1和75.4±7.5,其中转基因组的染色强度高于正常和空载体组(P<0.05)。bclxl在三组细胞中的染色光密度分别为32.4±4.7,29.5±4.2和28.7±4.3,染色强度在三组之间没有明显差别(P>0.05)。结论bak和bclxl在正常人RPE细胞中存在表达。bax转染可以促进细胞bak的表达,这可能是其诱导RPE细胞凋亡的机制之一。 展开更多
关键词 bax基因 基因转染 视网膜色素上皮 bak BCL-XL 凋亡
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Bak在细胞凋亡期间对线粒体形态学的影响 被引量:5
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作者 冯乐平 乔伟 +1 位作者 Craig Brooks Zeng Dong 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期773-777,F0002,共6页
目的:探讨Bak基因在细胞凋亡线粒体信号传导中的作用以及与Bax基因之间的相互关系。方法:应用Bax/Bak双重基因敲除的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)和Hela细胞进行基因重构,细胞按不同基因型(野生型、Bax敲除和Bak敲除、双重基因敲除)分组,并... 目的:探讨Bak基因在细胞凋亡线粒体信号传导中的作用以及与Bax基因之间的相互关系。方法:应用Bax/Bak双重基因敲除的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)和Hela细胞进行基因重构,细胞按不同基因型(野生型、Bax敲除和Bak敲除、双重基因敲除)分组,并通过共转染方式导入目的基因。细胞凋亡的处理条件:细胞在无葡萄糖缓冲液的培养基中,在含10mmol.L-1叠氮钠或1μmol.L-1十字孢碱(STS)或20μmol.L-1顺铂条件下培养,并诱导细胞凋亡。应用共聚焦显微镜和免疫荧光及免疫印记技术分析细胞凋亡、线粒体碎裂和细胞色素C释放情况,综合评价Bak基因在细胞凋亡和线粒体碎裂中的作用。结果:Hela细胞内线粒体碎裂和细胞色素C释放百分率分别与细胞凋亡有关联(P<0.01);MEF细胞在Bak基因缺失(Bak-/-)时,应用化学诱导剂导致的细胞凋亡率(17.9%)明显低于野生型MEF细胞(71.3%)(P<0.01);且Bax和Bak基因两者协同作用可以增强细胞凋亡发生率;当pEGFP-Bak重新导入Bax-/-/Bak-/-MEF细胞,线粒体破碎百分率从43.7%增加到76.4%,pEGFP-Bak组细胞凋亡率明显高于pEGFP-Bax组(P<0.05);应用不同的化学诱导剂均可以得到同样的结果;且Bcl-2不能够明显阻止Bak诱导的细胞凋亡。结论:Bak基因明确诱导线粒体碎裂和细胞色素C释放,导致细胞凋亡,其诱导细胞凋亡的效果明显大于Bax基因,并且其作用独立于Bax基因功能之外。 展开更多
关键词 细胞凋亡 细胞色素C 线粒体 bax基因 bak基因
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幽门螺杆菌对胃上皮细胞的凋亡作用 被引量:10
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作者 李志芳 林庚金 +1 位作者 唐峰 许祖德 《上海医科大学学报》 CSCD 2000年第2期98-101,共4页
目的 研究幽门螺杆菌 (Hp)对胃黏膜上皮细胞的凋亡作用。 方法  10例Hp阴性的非溃疡性消化不良(NUD)患者 ,2 5例Hp相关性胃炎患者 ,以TUNEL法进行细胞凋亡的检测 ,免疫组织化学法检测凋亡调控蛋白Bcl 2 ,Bax ,Bak等的表达。结果 与H... 目的 研究幽门螺杆菌 (Hp)对胃黏膜上皮细胞的凋亡作用。 方法  10例Hp阴性的非溃疡性消化不良(NUD)患者 ,2 5例Hp相关性胃炎患者 ,以TUNEL法进行细胞凋亡的检测 ,免疫组织化学法检测凋亡调控蛋白Bcl 2 ,Bax ,Bak等的表达。结果 与Hp阴性的NUD患者相比 ,Hp相关性胃炎患者胃黏膜上皮细胞的凋亡指数 (AI)明显增加 (19.6 6 %vs 3.0 3% ,P <0 .0 1) ,其促凋亡蛋白Bak ,Bax蛋白的表达明显增加 (47.0 7%vs 16 .6 3%&42 .6 %vs 13.8% ,P <0 .0 1)。Bcl 2蛋白表达也与促凋亡蛋白呈现一致的变化 (2 5 .1%vs 8.0 7% ,P <0 .0 1)。AI与炎症积分无明显相关性 (P >0 .0 5 )。AI、Bak、Bax及Bcl 2蛋白之间具有显著相关性 (P <0 .0 1)。结论 Hp诱导胃上皮细胞凋亡伴随着Bak蛋白表达增加 ,提示Bak蛋白在Hp诱导的胃上皮细胞凋亡中起了作用。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 胃上皮细胞 细胞凋亡
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缺氧和营养缺乏对软骨终板干细胞凋亡的影响及相关机制 被引量:5
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作者 浦路桥 刘杰 +2 位作者 袁超 贾敏 王建 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期449-455,共7页
目的 :观察缺氧和营养缺乏对软骨终板干细胞(cartilage endplate-derived stem cells,CESCs)凋亡的影响,探讨B细胞淋巴瘤/白血病-2/腺病毒E1B 19-k Da结合蛋白3(Bcl-2/adenovirus E1B 19-k Da-interacting protein 3,BNIP3)信号通路在... 目的 :观察缺氧和营养缺乏对软骨终板干细胞(cartilage endplate-derived stem cells,CESCs)凋亡的影响,探讨B细胞淋巴瘤/白血病-2/腺病毒E1B 19-k Da结合蛋白3(Bcl-2/adenovirus E1B 19-k Da-interacting protein 3,BNIP3)信号通路在其中的作用。方法 :从临床获取退变椎间盘软骨终板标本,分离培养软骨终板细胞,使用琼脂糖筛选获得CESCs并进行干细胞标志物鉴定,将第三代细胞分别在常氧/完全培养基(对照组)与缺氧和营养缺乏(实验组)条件下培养48h,通过流式细胞术检测细胞凋亡率,CCK-8法检测细胞活性,Western Blot检测BNIP3、Bcl-2关联x蛋白(Bax)、Bcl-2关联k蛋白(Bak)和低氧诱导因子1α(HIF-1α)蛋白表达水平。使用BNIP3小干扰RNA(siRNA)干扰CESCs中BNIP3基因,同时设置阴性干扰对照组(Scramble siRNA),同前分组处理后再次检测细胞凋亡率、细胞活性及BNIP3、Bax、Bak蛋白的表达水平。结果:对5例标本获得的CESCs进行了干细胞标志物鉴定,其中细胞表面粘附分子44(CD44)、CD73、CD90和CD105为阳性,CD34、CD45、CD11b、CD19和HLA-DR为阴性,提示CESCs具有干细胞特性。实验组细胞凋亡率为(29.12±0.65)%显著高于对照组的(14.87±2.03)%(P<0.05);实验组的细胞增殖活性明显降低,为对照组的56.18%(P<0.05)。与对照组相比,实验组BNIP3、Bax、Bak蛋白的表达均显著上调(P<0.05)。使用BNIP3 siRNA干扰后,缺氧和营养缺乏引起的细胞凋亡增加和细胞增殖活力下降均被明显抑制;同时,缺氧和营养缺乏导致CESCs中BNIP3、Bax和Bak的蛋白表达升高也被显著逆转(P<0.05)。结论:缺氧和营养缺乏能够诱导CESCs发生凋亡,此过程可能是通过上调BNIP3、Bax和Bak蛋白表达而发挥作用的。 展开更多
关键词 软骨终板干细胞 缺氧和营养缺乏 凋亡 B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)腺病毒E1B 19-kDa结合蛋白 Bcl-2关联x蛋白 Bcl-2关联k蛋白
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线粒体通透性增高过程中新的参与者 被引量:1
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作者 邵海军 李敬远 +1 位作者 吴长毅 曾因明 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期249-255,共7页
应激时,线粒体通透性增高可导致位于线粒体膜间的致凋亡因子释放入细胞质,胱天蛋白酶(caspase)激活,以及细胞死亡.但线粒体通透性增高的确切机制尚不清楚.许多研究表明,线粒体通透性增高过程需要Bcl-2家族蛋白中促凋亡Bax亚家族蛋白,主... 应激时,线粒体通透性增高可导致位于线粒体膜间的致凋亡因子释放入细胞质,胱天蛋白酶(caspase)激活,以及细胞死亡.但线粒体通透性增高的确切机制尚不清楚.许多研究表明,线粒体通透性增高过程需要Bcl-2家族蛋白中促凋亡Bax亚家族蛋白,主要是Bax和Bak的激活;该家族中其它蛋白可对Bax和Bak进行调节.但最近的研究表明,其它非Bcl-2家庭蛋白的蛋白质包括抑制因子和激活因子,也可对线粒体通透性增高过程进行调节.此外,应激时线粒体脂质重新分布,对于线粒体膜通透性增高过程也起重要作用. 展开更多
关键词 线粒体通透性 BCL-2 bax bak 脂质
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