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基于易错PCR技术定向进化枯草芽孢杆菌β-葡聚糖酶
被引量：
3
1
作者
邵敏
李长福
+1 位作者
葛正龙
周鹤峰
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第12期141-145,共5页
利用易错PCR技术对来自枯草芽孢杆菌的β-葡聚糖酶基因(bgls)进行改造,并对野生酶和突变酶的酶学性质进行研究。以枯草芽孢杆菌基因组DNA为模板,通过易错PCR技术得到突变基因产物,将其重组于表达载体pET32a(+),构建β-葡聚糖酶基因的突...
利用易错PCR技术对来自枯草芽孢杆菌的β-葡聚糖酶基因(bgls)进行改造,并对野生酶和突变酶的酶学性质进行研究。以枯草芽孢杆菌基因组DNA为模板,通过易错PCR技术得到突变基因产物,将其重组于表达载体pET32a(+),构建β-葡聚糖酶基因的突变体文库,通过刚果红平板染色法进行高通量筛选,最终获得两株突变酶,其最适作用温度比野生酶都提高了15℃,最适pH与野生酶基本相同,野生酶酶活力为84.2 U/mL,突变酶酶活力分别为247.3 U/mL和125.1 U/mL,是野生酶酶活的2.9倍和1.5倍。试验获得了具有耐高温高酶活的β-葡聚糖酶,为β-葡聚糖酶的工业化应用奠定基础。
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关键词
枯草芽孢杆菌
Β-葡聚糖酶
易错
pcr
定向进化
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职称材料
豆豉纤溶酶的定向进化
被引量：
4
2
作者
张少平
崔堂兵
+1 位作者
陈亮
郭勇
《华南理工大学学报（自然科学版）》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2010年第9期138-141,146,共5页
为提高豆豉纤溶酶的药用价值,通过易错PCR方法对来源于Bacillus subtilis DC-12的豆豉纤溶酶DFE基因进行突变并构建突变体文库,利用底物H-D-Val-Leu-Lys-pNA对突变体文库进行筛选.通过3轮易错PCR最终获得催化效率提高的突变酶mDFE3.序...
为提高豆豉纤溶酶的药用价值,通过易错PCR方法对来源于Bacillus subtilis DC-12的豆豉纤溶酶DFE基因进行突变并构建突变体文库,利用底物H-D-Val-Leu-Lys-pNA对突变体文库进行筛选.通过3轮易错PCR最终获得催化效率提高的突变酶mDFE3.序列分析表明突变酶mDFE3基因发生了6处碱基突变,其中4处突变发生氨基酸取代,2处为同义突变;通过swiss-model repository模拟突变酶mDFE3的结构,显示3个突变氨基酸位于回环结构上,1个位于α螺旋上;酶动力学测定结果表明突变酶mDFE3的Km值由0.58mmol/L降低至0.45mmol/L,突变酶mDFE3的催化效率(kcat)是野生型的2.57倍.
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关键词
枯草芽孢杆菌
豆豉纤溶酶
易错
pcr
定向进化
筛选
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职称材料
题名
基于易错PCR技术定向进化枯草芽孢杆菌β-葡聚糖酶
被引量：
3
1
作者
邵敏
李长福
葛正龙
周鹤峰
机构
遵义医学院珠海校区生物工程系
遵义医学院生物化学教研室
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第12期141-145,共5页
基金
贵州省科技厅基金项目(黔科合J字LKZ[2010]42号)
文摘
利用易错PCR技术对来自枯草芽孢杆菌的β-葡聚糖酶基因(bgls)进行改造,并对野生酶和突变酶的酶学性质进行研究。以枯草芽孢杆菌基因组DNA为模板,通过易错PCR技术得到突变基因产物,将其重组于表达载体pET32a(+),构建β-葡聚糖酶基因的突变体文库,通过刚果红平板染色法进行高通量筛选,最终获得两株突变酶,其最适作用温度比野生酶都提高了15℃,最适pH与野生酶基本相同,野生酶酶活力为84.2 U/mL,突变酶酶活力分别为247.3 U/mL和125.1 U/mL,是野生酶酶活的2.9倍和1.5倍。试验获得了具有耐高温高酶活的β-葡聚糖酶,为β-葡聚糖酶的工业化应用奠定基础。
关键词
枯草芽孢杆菌
Β-葡聚糖酶
易错
pcr
定向进化
Keywords
bacillus subtilis β-glucanase error-prone pcr directed evolution
分类号
Q93 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
豆豉纤溶酶的定向进化
被引量：
4
2
作者
张少平
崔堂兵
陈亮
郭勇
机构
华南理工大学生物科学与工程学院
出处
《华南理工大学学报（自然科学版）》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2010年第9期138-141,146,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(30970044)
文摘
为提高豆豉纤溶酶的药用价值,通过易错PCR方法对来源于Bacillus subtilis DC-12的豆豉纤溶酶DFE基因进行突变并构建突变体文库,利用底物H-D-Val-Leu-Lys-pNA对突变体文库进行筛选.通过3轮易错PCR最终获得催化效率提高的突变酶mDFE3.序列分析表明突变酶mDFE3基因发生了6处碱基突变,其中4处突变发生氨基酸取代,2处为同义突变;通过swiss-model repository模拟突变酶mDFE3的结构,显示3个突变氨基酸位于回环结构上,1个位于α螺旋上;酶动力学测定结果表明突变酶mDFE3的Km值由0.58mmol/L降低至0.45mmol/L,突变酶mDFE3的催化效率(kcat)是野生型的2.57倍.
关键词
枯草芽孢杆菌
豆豉纤溶酶
易错
pcr
定向进化
筛选
Keywords
bacillus
subtilis
Douchi fibrinolytic enzyme
error-prone
pcr
directed
evolution
screening
分类号
Q319 [生物学—遗传学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
基于易错PCR技术定向进化枯草芽孢杆菌β-葡聚糖酶
邵敏
李长福
葛正龙
周鹤峰
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
豆豉纤溶酶的定向进化
张少平
崔堂兵
陈亮
郭勇
《华南理工大学学报（自然科学版）》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2010
4
在线阅读
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职称材料
已选择
0
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引证文献
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