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耐高温β-半乳糖苷酶的分离纯化与酶学性质分析
被引量:
8
1
作者
高兆建
侯进慧
+1 位作者
孙会刚
刁进进
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2010年第23期151-156,共6页
为从嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)XG24发酵液中纯化到β-半乳糖苷酶,并对酶学性质进行研究,利用硫酸铵分级盐析、DEAE-SepharoseFastFlow阴离子交换层析和SephadexG-75分子筛凝胶过滤层析等方法进行分离纯化。结果表...
为从嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)XG24发酵液中纯化到β-半乳糖苷酶,并对酶学性质进行研究,利用硫酸铵分级盐析、DEAE-SepharoseFastFlow阴离子交换层析和SephadexG-75分子筛凝胶过滤层析等方法进行分离纯化。结果表明:经过系列步骤纯化后,酶纯度提高了54.5倍,回收率20.4%,酶比活力达32.7U/mg。以邻-硝基酚-D-半乳糖吡喃糖苷(ONPG)为底物,研究β-半乳糖苷酶的酶学性质。最适pH6.5,最适作用温度65℃。此菌株产β-半乳糖苷酶在70℃以下和pH4.0~8.0范围内具有较好的稳定性;Mg2+、Mn2+、Fe2+和Co2+对此酶有明显激活作用,而Cu2+、Ag+、Hg2+几乎完全抑制酶活性。以ONPG为底物酶的Km值为4.32mmol/L。SDS-PAGE和凝胶过滤层析测得酶蛋白为单肽链蛋白,表观分子质量64kD。因此,嗜热脂肪芽孢杆菌XG24β-半乳糖苷酶在乳制品工业中具有潜在的应用价值。
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关键词
嗜热脂肪芽孢杆菌
Β
-
半乳糖苷酶
分离纯化
性质
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职称材料
耐热β-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达
被引量:
9
2
作者
葛佳佳
陈卫
张灏
《无锡轻工大学学报(食品与生物技术)》
CSCD
北大核心
2002年第3期296-298,共3页
将来自嗜热脂肪芽孢杆菌IAM 110 0 1的高温乳糖酶基因bgaB亚克隆到具强启动子的大肠杆菌载体 pKK 2 2 3 3中 ,经IPTG诱导后 ,表达出的重组蛋白质仍具有耐高温活性 ,其相对分子质量与天然蛋白质相似 ,表达量为 1.5U/mg ,比出发菌株高
关键词
耐热β
-
半乳糖苷酶基因
大肠杆菌
表达
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职称材料
嗜热脂肪芽孢杆菌产β-半乳糖苷酶发酵条件优化
被引量:
3
3
作者
潘琳琳
赵新淮
《食品工业科技》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第7期187-189,193,共4页
研究了嗜热脂肪芽孢杆菌C953产β-半乳糖苷酶的发酵条件。研究得出C953产酶适宜培养基为:牛肉膏、大豆蛋白胨、NaCl、K2HPO4、KH2PO4;产酶的适宜发酵条件为:培养温度50℃,接种量10%,1000mL三角瓶的装液量200mL,初始pH7.0,摇床转速220r/m...
研究了嗜热脂肪芽孢杆菌C953产β-半乳糖苷酶的发酵条件。研究得出C953产酶适宜培养基为:牛肉膏、大豆蛋白胨、NaCl、K2HPO4、KH2PO4;产酶的适宜发酵条件为:培养温度50℃,接种量10%,1000mL三角瓶的装液量200mL,初始pH7.0,摇床转速220r/min,培养时间24h。发酵液中β-半乳糖苷酶酶活力可达4.39NLU/mL。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定表明,β-半乳糖苷酶由分子质量为104.9kDa和114.3kDa的亚基组成。
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关键词
嗜热脂肪芽孢杆菌
Β
-
半乳糖苷酶
发酵条件
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职称材料
半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中过量表达及IPTG诱导条件
被引量:
22
4
作者
陈卫
葛佳佳
+1 位作者
张灏
丁霄霖
《无锡轻工大学学报(食品与生物技术)》
CSCD
北大核心
2002年第5期492-495,共4页
从嗜热脂肪芽孢杆菌 (IAM 110 0 1)中克隆出编码热稳定的半乳糖苷酶蛋白基因bgaB ,构建具T7强启动子的pET 2 0 (b) bgaB质粒 ,并在大肠杆菌BL2 1(DE3)中进行表达 .经IPTG诱导后 ,重组菌周质中乳糖酶酶活达到 0 .12U /mL ,胞内酶活为 1...
从嗜热脂肪芽孢杆菌 (IAM 110 0 1)中克隆出编码热稳定的半乳糖苷酶蛋白基因bgaB ,构建具T7强启动子的pET 2 0 (b) bgaB质粒 ,并在大肠杆菌BL2 1(DE3)中进行表达 .经IPTG诱导后 ,重组菌周质中乳糖酶酶活达到 0 .12U /mL ,胞内酶活为 1.35U /mL ,比酶活为 6 .6 6U/mg蛋白 ,比酶源菌产生的酶活提高 5 0倍 .通过对IPTG诱导时机、诱导浓度和诱导时间的优化研究 ,重组菌产生的比酶活进一步提高至酶源菌的 90倍 .
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关键词
半乳糖苷酶基因
大肠杆菌
基因克隆
T7表达系统
诱导条件
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职称材料
题名
耐高温β-半乳糖苷酶的分离纯化与酶学性质分析
被引量:
8
1
作者
高兆建
侯进慧
孙会刚
刁进进
机构
徐州工程学院食品(生物)工程学院
出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2010年第23期151-156,共6页
基金
徐州市博士科研启动基金资助项目
文摘
为从嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)XG24发酵液中纯化到β-半乳糖苷酶,并对酶学性质进行研究,利用硫酸铵分级盐析、DEAE-SepharoseFastFlow阴离子交换层析和SephadexG-75分子筛凝胶过滤层析等方法进行分离纯化。结果表明:经过系列步骤纯化后,酶纯度提高了54.5倍,回收率20.4%,酶比活力达32.7U/mg。以邻-硝基酚-D-半乳糖吡喃糖苷(ONPG)为底物,研究β-半乳糖苷酶的酶学性质。最适pH6.5,最适作用温度65℃。此菌株产β-半乳糖苷酶在70℃以下和pH4.0~8.0范围内具有较好的稳定性;Mg2+、Mn2+、Fe2+和Co2+对此酶有明显激活作用,而Cu2+、Ag+、Hg2+几乎完全抑制酶活性。以ONPG为底物酶的Km值为4.32mmol/L。SDS-PAGE和凝胶过滤层析测得酶蛋白为单肽链蛋白,表观分子质量64kD。因此,嗜热脂肪芽孢杆菌XG24β-半乳糖苷酶在乳制品工业中具有潜在的应用价值。
关键词
嗜热脂肪芽孢杆菌
Β
-
半乳糖苷酶
分离纯化
性质
Keywords
bacillus
stearothermophilus
β-
galactosidase
purification
characterization
分类号
Q939.97 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
耐热β-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达
被引量:
9
2
作者
葛佳佳
陈卫
张灏
机构
江南大学食品学院
出处
《无锡轻工大学学报(食品与生物技术)》
CSCD
北大核心
2002年第3期296-298,共3页
文摘
将来自嗜热脂肪芽孢杆菌IAM 110 0 1的高温乳糖酶基因bgaB亚克隆到具强启动子的大肠杆菌载体 pKK 2 2 3 3中 ,经IPTG诱导后 ,表达出的重组蛋白质仍具有耐高温活性 ,其相对分子质量与天然蛋白质相似 ,表达量为 1.5U/mg ,比出发菌株高
关键词
耐热β
-
半乳糖苷酶基因
大肠杆菌
表达
Keywords
bacillus
stearothermophilus
β
galactosidase
expression
E.coli
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
嗜热脂肪芽孢杆菌产β-半乳糖苷酶发酵条件优化
被引量:
3
3
作者
潘琳琳
赵新淮
机构
东北农业大学乳品科学教育部重点实验室
出处
《食品工业科技》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第7期187-189,193,共4页
文摘
研究了嗜热脂肪芽孢杆菌C953产β-半乳糖苷酶的发酵条件。研究得出C953产酶适宜培养基为:牛肉膏、大豆蛋白胨、NaCl、K2HPO4、KH2PO4;产酶的适宜发酵条件为:培养温度50℃,接种量10%,1000mL三角瓶的装液量200mL,初始pH7.0,摇床转速220r/min,培养时间24h。发酵液中β-半乳糖苷酶酶活力可达4.39NLU/mL。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定表明,β-半乳糖苷酶由分子质量为104.9kDa和114.3kDa的亚基组成。
关键词
嗜热脂肪芽孢杆菌
Β
-
半乳糖苷酶
发酵条件
Keywords
bacillus stearothermophilus β- galactosidase
fermentation condition
分类号
TS201.3 [轻工技术与工程—食品科学]
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职称材料
题名
半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中过量表达及IPTG诱导条件
被引量:
22
4
作者
陈卫
葛佳佳
张灏
丁霄霖
机构
江南大学食品学院
出处
《无锡轻工大学学报(食品与生物技术)》
CSCD
北大核心
2002年第5期492-495,共4页
文摘
从嗜热脂肪芽孢杆菌 (IAM 110 0 1)中克隆出编码热稳定的半乳糖苷酶蛋白基因bgaB ,构建具T7强启动子的pET 2 0 (b) bgaB质粒 ,并在大肠杆菌BL2 1(DE3)中进行表达 .经IPTG诱导后 ,重组菌周质中乳糖酶酶活达到 0 .12U /mL ,胞内酶活为 1.35U /mL ,比酶活为 6 .6 6U/mg蛋白 ,比酶源菌产生的酶活提高 5 0倍 .通过对IPTG诱导时机、诱导浓度和诱导时间的优化研究 ,重组菌产生的比酶活进一步提高至酶源菌的 90倍 .
关键词
半乳糖苷酶基因
大肠杆菌
基因克隆
T7表达系统
诱导条件
Keywords
bacillus
stearothermophilus
β
galactosidase
gene cloning
T7 expression vector
Escherichia coli
induction conditions
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
耐高温β-半乳糖苷酶的分离纯化与酶学性质分析
高兆建
侯进慧
孙会刚
刁进进
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2010
8
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
耐热β-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达
葛佳佳
陈卫
张灏
《无锡轻工大学学报(食品与生物技术)》
CSCD
北大核心
2002
9
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
嗜热脂肪芽孢杆菌产β-半乳糖苷酶发酵条件优化
潘琳琳
赵新淮
《食品工业科技》
CAS
CSCD
北大核心
2009
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
4
半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中过量表达及IPTG诱导条件
陈卫
葛佳佳
张灏
丁霄霖
《无锡轻工大学学报(食品与生物技术)》
CSCD
北大核心
2002
22
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职称材料
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