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肿瘤BRCA1亚细胞定位对细胞放射线及PARP抑制剂敏感性的影响 被引量：1
1
作者 姜桔红 刘静 +1 位作者 李智 顾莹莹 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期253-257,共5页
目的探讨肿瘤BRCA1细胞内定位对放射线和PARP抑制剂敏感性的影响。方法采用siRNA干扰抑制乳腺癌细胞株MCF7内源性BRCA1表达,转染BRCA1细胞内定位不同的载体:p CMV-3x Flag-WT-BRCA1、p CMV-3x Flag-NES-BRCA1、p CMV-3x Flag-NLS-BRCA1... 目的探讨肿瘤BRCA1细胞内定位对放射线和PARP抑制剂敏感性的影响。方法采用siRNA干扰抑制乳腺癌细胞株MCF7内源性BRCA1表达,转染BRCA1细胞内定位不同的载体:p CMV-3x Flag-WT-BRCA1、p CMV-3x Flag-NES-BRCA1、p CMV-3x Flag-NLS-BRCA1。采用免疫荧光法检测BRCA1的细胞定位及细胞核γ-H2AX和Rad51核焦点形成,应用流式细胞技术检测细胞凋亡,克隆形成实验检测体外细胞存活。结果转染WT-BRCA1有47%细胞核表达,23%细胞质表达,30%细胞质和细胞核均表达,NES-BRCA1 mutant表达主要定位于细胞核(87%);NLS-BRCA1 mutant定位于细胞质(82%)。WTBRCA1、NES-BRCA1 mutant和NLS-BRCA1 mutant三种载体转染的细胞4 Gy放射处理后2 h,Rad51核焦点阳性细胞数分别为87%、84%及13%;放射后24 h,γ-H2AX核焦点阳性细胞分别为22%、25%及59%。NLS-BRCA1 mutant转染细胞较WTBRCA1和NES-BRCA1 mutant转染细胞ABT-888和放射处理后诱导的凋亡细胞增加,克隆存活减少。结论 BRCA1的细胞内定位影响DNA双链断裂同源重组修复,并可预测肿瘤对放射和PARP抑制剂的敏感性。 展开更多
关键词 brca1亚细胞定位 同源重组修复 放射 PARP抑制剂
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野生蒜芥茄SsRPM1基因的生信分析、亚细胞定位及表达分析
2
作者 胡雨莹 孙茂 +6 位作者 汪骞 黎志彬 鲍锐 桂敏 钟秋月 杜光辉 吴丽艳 《华北农学报》 北大核心 2025年第3期27-33,共7页
为了探究NBS-LRR类基因RPM1在茄属植物抗黄萎病中的作用,以茄属中的野生茄-蒜芥茄为材料,在其转录测序的基础上,克隆RPM1基因同源序列,分析该序列编码蛋白的理化性质、分子结构,构建进化树,以及在烟草中进行亚细胞定位,同时检测蒜芥茄... 为了探究NBS-LRR类基因RPM1在茄属植物抗黄萎病中的作用,以茄属中的野生茄-蒜芥茄为材料,在其转录测序的基础上,克隆RPM1基因同源序列,分析该序列编码蛋白的理化性质、分子结构,构建进化树,以及在烟草中进行亚细胞定位,同时检测蒜芥茄不同部位中RPM1基因的相对表达量,以及在接种大丽轮枝菌(黄萎病病原菌的一种)后4个时间点(0,24,48,72 h)的相对表达量。结果发现,在蒜芥茄中RPM1基因(命名为SsRPM1)序列全长2772 bp,编码924个氨基酸。SsRPM1蛋白总分子质量为105.99 ku,是不存在跨膜结构的碱性亲水蛋白,该蛋白主要由α螺旋和无规卷曲构成,包括LRR、NBC和CC 3种结构域,欧白英RPM1蛋白与其亲缘性关系最近;在烟草中的亚细胞定位发现该蛋白位于细胞膜上;SsRPM1基因在蒜芥茄的不同器官(根、茎、叶)中均有表达,其中茎的相对表达量最高,其次是叶,最后是根。在接种大丽轮枝菌后,总体上看,对照组和接菌处理组的SsRPM1基因表达情况皆呈现先上升后下降的趋势,在24 h最高。与对照组相比,接菌处理组的基因相对表达量较低,暗示蒜芥茄SsRPM1是响应黄萎病胁迫的负调控基因。 展开更多
关键词 野生茄 RPM1基因 黄萎病 生物信息学 亚细胞定位 基因表达
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尾巨桉EuNF-YB1基因克隆、亚细胞定位及表达特异性分析
3
作者 李娟 庄莉 +3 位作者 徐艳利 李光友 徐建民 陆钊华 《中南林业科技大学学报》 北大核心 2025年第5期123-131,共9页
【目的】尾巨桉Eucalyptus urophylla×E.grandis作为重要的用材树种,具有广泛的用途和经济价值。通过克隆、生物信息学分析、亚细胞定位和组织特异表达分析方法对核转录因子EuNF-YB1进行研究,为深入了解其基本特征及在尾巨桉生长... 【目的】尾巨桉Eucalyptus urophylla×E.grandis作为重要的用材树种,具有广泛的用途和经济价值。通过克隆、生物信息学分析、亚细胞定位和组织特异表达分析方法对核转录因子EuNF-YB1进行研究,为深入了解其基本特征及在尾巨桉生长发育中的调控作用提供理论基础。【方法】以尾巨桉优良无性系DH3229的6月龄幼苗为试验材料,通过PCR技术,克隆获得EuNF-YB1,并通过生物信息学、亚细胞定位和组织特异性表达对其进行综合分析。【结果】EuNF-YB1基因编码区长度为534 bp,编码178个氨基酸,其分子量为19.10 kD,等电点为6.44,属于不稳定的亲水性蛋白。多序列比对分析表明,EuNF-YB1含有保守的DNA结合结构域、NF-YA的互作结构域及NF-YC的互作结构域,是一个典型的NF-YB转录因子。进化关系分析表明,EuNF-YB1与拟南芥AtNF-YB1和菊花CmNF-YB8蛋白有较近的亲缘关系。亚细胞定位试验结果表明,该蛋白定位于细胞核和细胞质中。组织特异性表达结果显示,EuNF-YB1基因在各组织中均有表达,尤其在花中表达水平最高。因此,推测EuNF-YB1基因在桉树生长发育尤其是开花调控中可能发挥着重要作用。【结论】尾巨桉EuNF-YB1基因的克隆及表达分析,揭示了EuNF-YB1基因在桉树生长发育尤其是开花调控中可能发挥着重要作用。 展开更多
关键词 尾巨桉 EuNF-YB1 生物信息学 亚细胞定位 表达分析
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马铃薯StSTOP1基因的克隆、亚细胞定位及基因家族成员鉴定
4
作者 黄美菁 吕春娜 +3 位作者 康嘉慧 周一帆 赵酏浛 王芳 《种子》 北大核心 2025年第3期1-9,16,共10页
为了探究StSTOP基因家族成员在马铃薯中的作用,对其进行生物信息学分析以及亚细胞定位检测。结果显示,筛选到的36个StSTOP基因家族成员在11条染色体上均有分布,蛋白长度在143~736个氨基酸之间,蛋白质分子量为16 451.97~75 366.80 Da,等... 为了探究StSTOP基因家族成员在马铃薯中的作用,对其进行生物信息学分析以及亚细胞定位检测。结果显示,筛选到的36个StSTOP基因家族成员在11条染色体上均有分布,蛋白长度在143~736个氨基酸之间,蛋白质分子量为16 451.97~75 366.80 Da,等电点为5.75~9.47,亚细胞定位预测大部分位于细胞核中。系统进化树分析显示,StSTOP和Ca.STOP1亲缘关系最近。顺式启动子作用元件预测分析表明,含有大量与环境、激素和生长发育等相关的顺式作用元件。共线性分析表明,不同物种中的StSTOP基因存在一定同源性。亚细胞定位结果显示,StSTOP1基因定位在细胞核。 展开更多
关键词 马铃薯 StSTOP1基因 生物信息学分析 亚细胞定位
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家蚕尿苷二磷酸-糖基转移酶x1亚型(BmUGTx1)的基因鉴定及亚细胞定位分析
5
作者 曹烨庆 李奕竺 +3 位作者 郭丹 郭会朵 钱荷英 李刚 《蚕业科学》 北大核心 2025年第1期25-32,共8页
尿苷二磷酸-糖基转移酶(UDP-glucuronosyltransferase,UGT)是一类重要的代谢酶家族,广泛分布于动物、植物、细菌及真菌等,在解毒代谢和生长发育过程中发挥重要作用。在家蚕基因组中鉴定出38个UGT基因,这些UGT主要分布在8条染色体上,CDS... 尿苷二磷酸-糖基转移酶(UDP-glucuronosyltransferase,UGT)是一类重要的代谢酶家族,广泛分布于动物、植物、细菌及真菌等,在解毒代谢和生长发育过程中发挥重要作用。在家蚕基因组中鉴定出38个UGT基因,这些UGT主要分布在8条染色体上,CDS长度从255 bp到3615 bp不等,亚细胞定位预测其编码的蛋白质大多数分布在质膜和细胞质中。构建BmUGTx 1-pIZT/V5-His-mCherry重组质粒,转染BmN细胞后发现BmUGTx1定位于细胞质中,与计算模型预测一致。qRT-PCR检测BmUGTx 1基因在家蚕各发育时期和各组织中均有转录,其中在幼虫期的表达量相对较高,在蛹期较低,组织中以气管丛、血淋巴、脂肪体中的表达量较高,生殖腺、丝腺、头部等组织中的表达量较低。BmUGTx 1在经口感染BmNPV后12 h、24 h、48 h的家蚕中肠和脂肪体中均表现出诱导性上调,暗示可能与BmNPV感染机制有关。 展开更多
关键词 家蚕 BmUGTx 1基因 表达分析 亚细胞定位
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小麦转录因子TaDL1生物信息学、亚细胞定位与表达分析
6
作者 沈益庭 刘怡辰 +1 位作者 韩俊杰 李卫华 《麦类作物学报》 北大核心 2025年第3期300-310,共11页
YABBY转录因子家族是一类植物特有的转录因子,在植物叶片生长和花器官建成方面发挥重要作用,其N端具有C2C2型锌指结构域,C端有螺旋-环-螺旋YABBY结构域。本研究以春小麦品种新春9号为材料,克隆到一个YABBY家族的TaDL1基因,其编码区全长6... YABBY转录因子家族是一类植物特有的转录因子,在植物叶片生长和花器官建成方面发挥重要作用,其N端具有C2C2型锌指结构域,C端有螺旋-环-螺旋YABBY结构域。本研究以春小麦品种新春9号为材料,克隆到一个YABBY家族的TaDL1基因,其编码区全长603 bp,编码201个氨基酸。经生物信息分析,TaDL1蛋白分子量为22765.21 Da,等电点为8.85,为不稳定亲水性蛋白。通过系统进化树和保守结构域分析,该基因属于YABBY家族的CRC亚家族成员,与水稻OsDL基因亲缘关系较近。经转化烟草进行瞬时表达分析,TaDL1蛋白定位在细胞核上。实时荧光定量分析发现,TaDL1基因在小麦幼穗和叶片中特异性表达,其中在叶片中表达量最高,幼穗中次之。该基因对盐和热胁迫响应,其中对盐胁迫响应最明显且在胁迫后2~24 h内有持续较高的表达量,推测该基因可能参与盐胁迫应答相关的信号途径。 展开更多
关键词 小麦 TaDL1基因 生物信息学 亚细胞定位 表达分析
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橡胶草TkGASA1基因克隆、表达及亚细胞定位分析
7
作者 李菱 赵慧敏 +2 位作者 叶德 唐朝荣 刘慧 《江西农业大学学报》 北大核心 2025年第4期890-899,共10页
【目的】橡胶草(Taraxacum kok-saghyz Rodin)是最有发展潜能的产胶替代植物,但还需要了解其生长和生殖发育调控机制以进行遗传改良。富含半胱氨酸的小肽基因Gibberellic Acid-stimulated arabidopsis(GASA)广泛参与调控植物多种生长和... 【目的】橡胶草(Taraxacum kok-saghyz Rodin)是最有发展潜能的产胶替代植物,但还需要了解其生长和生殖发育调控机制以进行遗传改良。富含半胱氨酸的小肽基因Gibberellic Acid-stimulated arabidopsis(GASA)广泛参与调控植物多种生长和生殖发育过程,克隆橡胶草GASA基因并分析其表达模式和亚细胞定位可为进一步解析GASA基因在橡胶草生长与生殖发育中的功能提供理论参考。【方法】以橡胶草种质资源系TK20为研究材料,利用转录组数据筛选到1个花中高表达的GASA基因,命名为TkGASA1。克隆得到TkGASA1并对其进行生物信息学分析,并通过实时荧光定量PCR(qPCR)检测TkGASA1在不同组织及不同花器官中的表达模式,再利用烟草瞬时转染检测TkGASA1的亚细胞定位。【结果】成功克隆出TkGASA1基因的编码序列(coding sequence,CDS),其全长为309 bp,编码的TkGASA1蛋白N端有1个信号肽,中间为高度可变的亲水区,C端是富含12个半胱氨酸残基的GASA结构域。TkGASA1为亲水性蛋白,二级结构由无规则卷曲(Random coil,c)和α-螺旋(Alpha helix,h)组成,而三级结构与青蒿(Artemisia annua)中的AaGAST1蛋白相似度较高。TkGASA1在花中检测到高表达,花梗和叶片中检测到低表达,根和胶乳中几乎检测不到表达,在不同花器官中,TkGASA1在花柱、柱头、冠毛和喙中均检测到较高的表达。蛋白亚细胞定位结果显示TkGASA1-GFP融合蛋白绿色荧光信号位于细胞质和细胞核中。【结论】橡胶草TkGASA1基因编码1个含有102个氨基酸的蛋白,该蛋白具有典型的GASA结构特征,定位在细胞质和细胞核中,TkGASA1主要在橡胶草花中高表达,且在花柱、柱头、冠毛和喙中也有较高的表达,本研究可为进一步分析TkGASA1基因功能提供理论依据。 展开更多
关键词 橡胶草 TkGASA1 生物信息学 表达分析 亚细胞定位
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大豆GmHORSTs基因生物信息学分析、盐胁迫响应表达及亚细胞定位研究
8
作者 李赵博 厉书媛 +5 位作者 周筱钰 元明浩 姜龙 刘明 赵俊淞 闻馨月 《大豆科学》 北大核心 2025年第4期35-47,共13页
CYP86A亚家族基因参与调控植物生长发育,特别是在植物响应逆境胁迫过程中发挥重要作用。本研究通过同源比对的方法鉴定AtHORST/AtCYP86A1在大豆中的同源基因GmHORSTs,随后通过生物信息学方法分析GmHORSTs基因的结构、启动子区域内顺式... CYP86A亚家族基因参与调控植物生长发育,特别是在植物响应逆境胁迫过程中发挥重要作用。本研究通过同源比对的方法鉴定AtHORST/AtCYP86A1在大豆中的同源基因GmHORSTs,随后通过生物信息学方法分析GmHORSTs基因的结构、启动子区域内顺式作用元件以及基因编码蛋白的理化性质、二级结构等,通过qRT-PCR技术研究GmHORSTs基因的组织表达模式、NaCl胁迫下的表达变化情况,利用烟草瞬时转染技术对GmHORSTs基因编码的蛋白进行亚细胞定位分析。结果表明:大豆CYP86A亚家族基因具有8个成员,其中GmHORSTa(Glyma.11G175900)和GmHORSTb(Glyma.14G192500)为AtHORST/AtCYP86A1的同源基因。GmHORSTa与GmHORSTb的基因结构高度相似,基因编码的蛋白均具有CYP450蛋白的特征结构位点,二者基因的启动子序列含有多种与生长发育、激素反应和胁迫响应相关的顺式作用元件,蛋白的理化性质存在明显差异,但是二级结构组成元件相同并且均为不具信号肽的跨膜蛋白。qRT-PCR分析表明,GmHORSTa与GmHORSTb基因为根特异表达基因,并且受NaCl胁迫诱导上调表达。亚细胞定位结果表明GmHORSTa与GmHORSTb蛋白均定位在内质网上。研究结果可为进一步解析GmHORSTs在盐胁迫应答过程中的功能提供参考。 展开更多
关键词 大豆 CYP86A1 盐胁迫 表达分析 亚细胞定位
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陆地棉GHWAT1-35基因的克隆及亚细胞定位
9
作者 马尚洁 李生梅 +4 位作者 杨涛 王红刚 赵康 庞博 高文伟 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1310-1317,共8页
【目的】研究陆地棉GHWAT1-35基因在棉花纤维发育过程中的作用。【方法】选用陆地棉系9花后不同时期的纤维为材料,克隆GHWAT1-35基因的全长cDNA序列,并进行生物信息学、实时荧光定量(qRT-PCR)分析及亚细胞定位。【结果】该基因全长1125 ... 【目的】研究陆地棉GHWAT1-35基因在棉花纤维发育过程中的作用。【方法】选用陆地棉系9花后不同时期的纤维为材料,克隆GHWAT1-35基因的全长cDNA序列,并进行生物信息学、实时荧光定量(qRT-PCR)分析及亚细胞定位。【结果】该基因全长1125 bp,编码374个氨基酸,相对分子量为40.231 kDa,理论等电点为8.74。GHWAT1-35蛋白与亚洲棉亲缘关系最近。GHWAT1-35基因在开花后15 d表达量显著升高,亚细胞定位预测表明该蛋白定位于细胞质膜上。将GHWAT1-35基因与pCAMIA1300-35S-YFP载体重组,构建融合表达载体,利用冻融法转化农杆菌,注射到烟草后观察到GHWAT1-35蛋白定位在细胞质膜上。【结论】陆地棉系9 GHWAT1-35基因在开花后15和20 DAP的表达量显著高于其他时期,pC1300∷35S-WAT-YFP融合蛋白定位于细胞质膜上。 展开更多
关键词 陆地棉 WAT1 基因克隆 生物信息学 亚细胞定位
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广藿香Trihelix转录因子家族基因PatGTL1的克隆、亚细胞定位及表达分析
10
作者 李俊仁 吴带娣 +1 位作者 赵公政 陈秀珍 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2024年第6期84-93,共10页
为了明确广藿香Trihelix转录因子家族成员PatGTL1的序列特征及表达特性,并为后续深入研究PatGTL1转录因子的功能奠定理论基础。首先,以广藿香为材料提取总RNA并反转录得到cDNA,以此为模板根据转录组序列设计特异性引物克隆PatGTL1基因,... 为了明确广藿香Trihelix转录因子家族成员PatGTL1的序列特征及表达特性,并为后续深入研究PatGTL1转录因子的功能奠定理论基础。首先,以广藿香为材料提取总RNA并反转录得到cDNA,以此为模板根据转录组序列设计特异性引物克隆PatGTL1基因,随后利用生物信息学软件分析预测其理化性质、结构特征和亲缘关系;构建pAN580-PatGTL1-EGFP融合表达载体并转化拟南芥原生质体,考察PatGTL1亚细胞定位;进一步利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定PatGTL1基因在广藿香不同组织中、外源茉莉酸甲酯(MeJA)处理及非生物胁迫(包括盐胁迫、干旱胁迫、冷胁迫)下的表达模式。结果表明,PatGTL1开放阅读框为1497 bp,编码498个氨基酸。PatGTL1为不稳定亲水蛋白,无跨膜结构和信号肽,含有42个丝氨酸磷酸化位点,含有2个GT1保守结构域。进化树分析表明,PatGTL1属于Trihelix转录因子家族的GT-2亚家族,与芝麻SiGTL1同源性较高。亚细胞定位结果表明,PatGTL1定位于细胞核。qRT-PCR分析显示,PatGTL1在广藿香的根、茎、嫩叶、成熟叶和老叶中均有表达,尤以嫩叶中的表达量最高;在MeJA处理后,PatGTL1的相对表达量显著提高,在3~24 h呈上升趋势;在盐胁迫3 h PatGTL1表达量最高;干旱胁迫后PatGTL1表达量显著低于对照;冷胁迫后PatGTL1表达量呈先上升后下降的趋势,在12 h表达量最高。研究结果丰富了广藿香Trihelix转录因子家族的研究。 展开更多
关键词 广藿香 Trihelix GTL1 基因克隆 表达模式 亚细胞定位
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NtSKP1-GFP植物表达载体的构建及亚细胞定位 被引量：17
11
作者 张付云 陈士云 +2 位作者 赵小明 白雪芳 杜昱光 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期144-148,共5页
用PCR技术扩增NtSKP1基因的编码区,定向克隆至表达载体pCAMBIA1302上构建用于瞬时表达NtSKP1蛋白的重组质粒。重组质粒经PCR和测序鉴定后用冻融法转入农杆菌LBA4404,进而经农杆菌LBA4404介导转入烟草悬浮细胞,激光共聚焦显微镜观察确定... 用PCR技术扩增NtSKP1基因的编码区,定向克隆至表达载体pCAMBIA1302上构建用于瞬时表达NtSKP1蛋白的重组质粒。重组质粒经PCR和测序鉴定后用冻融法转入农杆菌LBA4404,进而经农杆菌LBA4404介导转入烟草悬浮细胞,激光共聚焦显微镜观察确定其亚细胞定位。测序结果表明,插入片段与预期序列完全一致,与载体形成了一个完整的基因表达盒;亚细胞定位结果表明NtSKP1蛋白在胞浆和核部位均有分布。 展开更多
关键词 NtSKP1基因 植物表达载体 亚细胞定位
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葡萄VvGA2ox1基因克隆、亚细胞定位及时空表达分析 被引量：10
12
作者 王西成 王晨 +2 位作者 房经贵 孙欣 冷翔鹏 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期29-34,共6页
以‘藤稔’葡萄(Vitis vinifera×V.labrusca‘Fujiminori’)的花序、叶片和果实为试材,利用RT-PCR结合RACE技术,成功克隆了葡萄VvGA2ox1基因的cDNA序列,全长1 331 bp,共编码332个氨基酸。该基因在GenBank数据库的登录号为JQ608472... 以‘藤稔’葡萄(Vitis vinifera×V.labrusca‘Fujiminori’)的花序、叶片和果实为试材,利用RT-PCR结合RACE技术,成功克隆了葡萄VvGA2ox1基因的cDNA序列,全长1 331 bp,共编码332个氨基酸。该基因在GenBank数据库的登录号为JQ608472。序列比对结果表明:VvGA2ox1与矮牵牛和棉花同源基因的氨基酸序列相似度分别为71.26%和71.08%。进一步构建了VvGA2ox1的亚细胞定位表达载体,定位结果显示,VvGA2ox1蛋白定位于细胞膜上。半定量RT-PCR与定量RT-PCR结果均表明,VvGA2ox1在葡萄花序、叶片和果实等器官中均有表达,但在花序、幼叶和小果中的表达水平较高。 展开更多
关键词 葡萄 VvGA2ox1基因 亚细胞定位 时空表达
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香蕉Maasr1基因表达产物的亚细胞定位 被引量：6
13
作者 宁文彬 刘菊华 +2 位作者 徐碧玉 胡伟 金志强 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期2164-2167,共4页
利用SSH分离香蕉果实采后差异表达基因,获得香蕉的ASR基因,并将其命名为Maasr1。对该基因与香蕉采后成熟衰老进行相关性研究,发现其在果实采后早期表达上调。通过对Maasr1基因进行生物信息学分析表明,Maasr1基因编码的蛋白可能作为转录... 利用SSH分离香蕉果实采后差异表达基因,获得香蕉的ASR基因,并将其命名为Maasr1。对该基因与香蕉采后成熟衰老进行相关性研究,发现其在果实采后早期表达上调。通过对Maasr1基因进行生物信息学分析表明,Maasr1基因编码的蛋白可能作为转录因子定位于细胞核或细胞质中。为进一步深入研究该基因功能,构建了香蕉Maasr1基因与绿色荧光蛋白基因融合的植物表达载体pCAMBIA1304-Maasr1。利用基因枪转化法将重组载体转入洋葱表皮细胞瞬时表达,荧光显微镜检测结果表明,Maasr1基因表达产物定位在细胞核中,符合转录因子特性。 展开更多
关键词 香蕉 Maasr1基因 GFP表达载体 亚细胞定位
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从江香猪ApoA1基因的克隆及亚细胞定位研究 被引量：7
14
作者 赵佳福 段志强 +3 位作者 杨远青 嵇辛勤 王圆圆 孙成娟 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第7期1954-1960,共7页
试验旨在克隆从江香猪载脂蛋白A1(apolipoprotein A1,ApoA1)基因,研究ApoA1基因在真核细胞中的亚细胞定位情况。通过提取从江香猪总RNA,采用RT-PCR、目的基因的连接、转化等方法构建携带有绿色荧光蛋白的pEGFP-C1-ApoA1重组质粒,并经菌... 试验旨在克隆从江香猪载脂蛋白A1(apolipoprotein A1,ApoA1)基因,研究ApoA1基因在真核细胞中的亚细胞定位情况。通过提取从江香猪总RNA,采用RT-PCR、目的基因的连接、转化等方法构建携带有绿色荧光蛋白的pEGFP-C1-ApoA1重组质粒,并经菌落PCR、双酶切及测序鉴定正确后,转染HEK-293T细胞,36h后观察荧光,分析ApoA1蛋白在真核细胞中的亚细胞定位情况。结果表明,从江香猪ApoA1基因与GenBank上公布的野猪序列相比,有6处发生了碱基突变,其中5处为有义突变,分别导致180位氨基酸由丙氨酸变为谷氨酸、185位氨基酸由组氨酸变为谷氨酰胺、186位氨基酸由缬氨酸变为亮氨酰胺、209位氨基酸由天冬氨酸变为甘氨酸;PSORTⅡPrediction和荧光共定位试验结果均表明,ApoA1蛋白的表达主要集中在细胞外基质,约占总表达量的77.8%。本试验成功克隆了从江香猪ApoA1基因CDS区,且ApoA1蛋白的表达主要集中在细胞外基质中,为进一步构建ApoA1基因转基因动物模型、开展ApoA1基因与人类因肥胖引起的相关疾病关系的研究奠定基础。 展开更多
关键词 丛江香猪 ApoA1基因 pEGFP-C1载体 HEK-293T细胞 生物信息学分析 亚细胞定位
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内皮活化相关新基因EOLA1的亚细胞定位及组织表达 被引量：3
15
作者 梁自文 杨宗城 +2 位作者 罗向东 刘月明 蔡文琴 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期342-344,共3页
目的　研究内皮细胞高表达脂多糖相关因子 1(EOLA1)基因的亚细胞定位和组织表达特性 ,为对其进行进一步的功能研究打下基础。方法　构建EOLA1 EGFP(绿色荧光蛋白 )融合蛋白表达质粒 ,转染内皮细胞后瞬时表达 ,在激光共聚焦显微镜下观察E... 目的　研究内皮细胞高表达脂多糖相关因子 1(EOLA1)基因的亚细胞定位和组织表达特性 ,为对其进行进一步的功能研究打下基础。方法　构建EOLA1 EGFP(绿色荧光蛋白 )融合蛋白表达质粒 ,转染内皮细胞后瞬时表达 ,在激光共聚焦显微镜下观察EOLA1蛋白的亚细胞定位 ;通过人多组织Northern杂交研究EOLA1基因的组织表达。结果　EOLA1蛋白在正常人各组织中呈选择性表达 ,在人的心脏、骨骼肌、肾脏、肝脏和胎盘组织中有较强的表达 ,在结肠、脾脏和小肠中有较弱的表达 ,而在脑、胸腺、肺和外周白细胞中无表达 ;EOLA1蛋白主要定位于细胞浆 ,少量表达于细胞核。结论　EOLA1属胞内蛋白 ,可能在细胞内信号转导中起着作用。 展开更多
关键词 内皮细胞 基因 EOLA1 亚细胞定位 印迹法 RNA
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猪Prox1基因的染色体定位和亚细胞定位的研究 被引量：5
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作者 袁继红 龙欢 +1 位作者 田明芳 杨在清 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期351-357,共7页
在克隆猪Prox1基因(sProx1)的基础上,对猪Prox1基因进行染色体定位分析,并通过EGFP融合蛋白对该基因产物进行亚细胞水平定位。本研究将人和鼠的Prox1基因编码区在猪的ESTs数据库中进行检索,然后根据EST进行序列拼接并设计引物对猪Prox1... 在克隆猪Prox1基因(sProx1)的基础上,对猪Prox1基因进行染色体定位分析,并通过EGFP融合蛋白对该基因产物进行亚细胞水平定位。本研究将人和鼠的Prox1基因编码区在猪的ESTs数据库中进行检索,然后根据EST进行序列拼接并设计引物对猪Prox1基因编码区进行克隆。通过比对人、鼠及其他物种Prox1基因第二个内含子序列,设计引物扩增猪Prox1基因部分内含子,根据克隆得到的部分内含子序列设计引物,利用猪-仓鼠体细胞辐射杂种板(IMpRH)对猪Prox1基因进行染色体定位。根据已获得的猪Prox1基因编码区序列,构建猪Prox1基因的融合绿色荧光超表达载体EGFP-Prox1,并转染猪肾PK15细胞,12h后倒置荧光显微镜观察Prox1蛋白在亚细胞内的定位。结果表明:Prox1基因定位于猪第9号染色体长臂的26区,与标记SW1651紧密连锁;构建猪Prox1基因的真核表达载体pEGFP-N1-Prox1,融合蛋白EGFP-Prox1定位于PK15细胞的细胞核中。 展开更多
关键词 猪 Prox1 染色体定位 绿色荧光融合超表达载体 亚细胞定位
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小麦病程相关蛋白1基因的亚细胞定位及信号肽鉴定 被引量：5
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作者 张家瑞 孙僖 +4 位作者 梁芳 王菲 张艳俊 王海燕 刘大群 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期1-7,共7页
前期研究克隆获得了一个叶锈菌诱导的小麦病程相关蛋白1基因TaLr35PR1,明确了其基因结构和表达特征。本研究首先预测TaLr35PR1的信号肽和亚细胞定位情况,进而通过试验予以佐证。将信号肽编码的核酸序列克隆、连接到酵母信号肽诱捕载体pS... 前期研究克隆获得了一个叶锈菌诱导的小麦病程相关蛋白1基因TaLr35PR1,明确了其基因结构和表达特征。本研究首先预测TaLr35PR1的信号肽和亚细胞定位情况,进而通过试验予以佐证。将信号肽编码的核酸序列克隆、连接到酵母信号肽诱捕载体pSUC2T7M13ORI上,并转化到酵母蔗糖酶缺陷菌株YTK12中,明确了TaLr35PR1基因的信号肽具有分泌功能。同时,利用酶切连接的方法成功构建亚细胞定位重组体pCamA-TaLr35PR1-GFP,利用基因枪轰击技术瞬时转化洋葱表皮细胞。结果表明,pCamA-TaLr35PR1-GFP融合蛋白主要在细胞外表达,与亚细胞定位预测的结果一致。这些研究结果丰富了小麦病程相关蛋白1基因的研究内容,为进一步探索该类基因的生物学功能及其作用机制提供了研究基础。 展开更多
关键词 病程相关蛋白1 信号肽 分泌活性 亚细胞定位
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肝癌相关蛋白HCAP1的表达、抗体制备及其亚细胞定位 被引量：3
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作者 王俊茹 覃文新 +4 位作者 李锦军 杨艳华 潘勇 万大方 顾健人 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期26-28,共3页
目的 :肝癌相关基因HCAP1蛋白产物的表达、抗体的制备及其亚细胞定位。方法 :原核表达HCAP1蛋白 ;纯化的HCAP1蛋白免疫新西兰大白兔 ,制备多抗血清 ;Westernblot分析其在肝癌细胞株的表达 ;通过荧光免疫细胞化学进行亚细胞定位。结果 :... 目的 :肝癌相关基因HCAP1蛋白产物的表达、抗体的制备及其亚细胞定位。方法 :原核表达HCAP1蛋白 ;纯化的HCAP1蛋白免疫新西兰大白兔 ,制备多抗血清 ;Westernblot分析其在肝癌细胞株的表达 ;通过荧光免疫细胞化学进行亚细胞定位。结果 :获得了较纯的HCAP1表达蛋白和高效价的、高特异性的抗HCAP1的多抗血清 ,并且发现HCAP1大部分位于胞浆 ,少量分布于核仁。结论 :表达的HCAP1蛋白和抗HCAP1的多抗血清可用于HCAP1基因功能的研究 ;HCAP1功能场所可能位于核仁。 展开更多
关键词 肝癌 抗体 制备 HCAP1 表达 抗HCAP1多抗 亚细胞定位
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中国水仙NtSOC1基因克隆及亚细胞定位 被引量：8
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作者 武丹 吴菁华 张志忠 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1889-1895,共7页
以中国水仙‘金盏银台’为实验材料,采用RACE和RT-PCR技术获得1个与开花相关的转录因子(SOC1)的同源基因NtSOC1。NtSOC1的cDNA全长1 603bp,含有1个687bp开放阅读框,编码228个氨基酸。生物信息学分析表明,NtSOC1与单子叶植物的SOC1同源... 以中国水仙‘金盏银台’为实验材料,采用RACE和RT-PCR技术获得1个与开花相关的转录因子(SOC1)的同源基因NtSOC1。NtSOC1的cDNA全长1 603bp,含有1个687bp开放阅读框,编码228个氨基酸。生物信息学分析表明,NtSOC1与单子叶植物的SOC1同源基因的氨基酸序列较为相似,且在C末端同样含有一个保守性很高的SOC1motif序列,说明NtSOC1是属于SOC1/TM3亚家族基因。荧光定量PCR分析显示,NtSOC1在花芽分化阶段的表达量随着花芽的分化而升高,花芽分化结束时减少,表明NtSOC1基因可能参与中国水仙的花芽分化。成功构建了NtSOC1基因表达载体pCAMBIA1302-NtSOC1,通过农杆菌转化洋葱表皮对编码蛋白进行亚细胞定位结果显示,NtSOC1基因编码蛋白定位于细胞核,符合转录因子的亚细胞定位特征。该实验结果为进一步研究NtSOC1基因的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 中国水仙 NtSOC1基因 花发育 亚细胞定位
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内皮活化相关新基因EOLA1的体外表达及亚细胞定位 被引量：4
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作者 梁自文 杨宗城 +2 位作者 罗向东 刘月明 蔡文琴 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第18期1617-1619,共3页
目的　研究内皮细胞高表达脂多糖相关因子 1(Endothelial over expressedlipopolysaccharide associatedfactor 1,EOLA1)基因的体外表达和亚细胞定位 ,为进一步功能研究打下基础。方法　通过偶联转录 翻译系统体外表达EOLA1蛋白 ,并用... 目的　研究内皮细胞高表达脂多糖相关因子 1(Endothelial over expressedlipopolysaccharide associatedfactor 1,EOLA1)基因的体外表达和亚细胞定位 ,为进一步功能研究打下基础。方法　通过偶联转录 翻译系统体外表达EOLA1蛋白 ,并用变性凝胶电泳进行产物检测 ;构建EOLA1 EGFP(绿色荧光蛋白 )融合蛋白表达质粒 ,转染内皮细胞后瞬时表达 ,在激光共聚焦显微镜下观察EOLA1蛋白的亚细胞定位。结果　体外表达的EOLA1蛋白分子量约 18× 10 3,与预测结果相符合 ;EOLA1蛋白主要定位于细胞浆 ,少量表达于细胞核。结论　EOLA1属细胞内结构蛋白 ,可能是参与了炎症时细胞内信号转导。 展开更多
关键词 内皮细胞 内皮细胞高表达脂多糖相关因子1 亚细胞定位 体外表达
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