重组布氏杆菌BP26蛋白和OMP31蛋白作为间接ELISA诊断抗原的研究 被引量：13

1

作者 陈伟业 王淑杰 +6 位作者 王永 胡森 王清华 辛九庆 佟有恩 黄克和 步志高 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期518-521,582,共5页

目的传统布氏杆菌病血清学方法因其抗原构成复杂,存在较严重的交叉免疫反应性,导致结果判定困难。BP26及OMP31分别为布氏杆菌细胞周质蛋白及外膜蛋白,在感染牛、绵羊、山羊、犬和人类均为优势免疫原,且在抗原性上具有较好的布氏杆菌种... 目的传统布氏杆菌病血清学方法因其抗原构成复杂,存在较严重的交叉免疫反应性,导致结果判定困难。BP26及OMP31分别为布氏杆菌细胞周质蛋白及外膜蛋白,在感染牛、绵羊、山羊、犬和人类均为优势免疫原,且在抗原性上具有较好的布氏杆菌种属特异性。方法以大肠杆菌表达、纯化的BP26和OMP31重组蛋白为包被抗原,初步建立了检测血清特异抗体的间接ELISA方法,并以现地牛布氏杆菌普查检测血清100份为样本,与传统的试管凝集试验进行了比较研究。结果试管凝集试验血清样本阳性率为15%(15/100);BP26包被抗原ELISA检测判为阳性的12个样本中有11为试管凝集反应阳性,相对阳性率为73.3%,二者阳性符合率为92%(11/12);而采用OMP31为包被抗原,阳性检出率为0(图5)。结论被检测区域阳性牛主要感染布氏杆菌为牛种布氏杆菌(B.abortus天然缺失OMP31基因);BP26作为间接ELISA包被抗原用于牛布氏杆菌血清学检测具有良好的特异性及较好的敏感性。 展开更多

关键词 布氏杆菌bp26 OMP31 间接ELISA 试管凝集试验

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马耳它布氏杆菌bp26基因缺失株的构建及鉴定 被引量：17

2

作者 胡森 郑孝辉 +8 位作者 王加兰 张倩 刘文兴 王喜军 乔祖建 刘林涛 高红霞 王君伟 步志高 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期583-586,共4页

为了建立马耳他布氏杆菌M5-90株弱毒疫苗株与野生株的鉴别诊断,本研究以bp26基因作为重组靶位点,以M5-90为亲本,利用bp26基因ORF外侧序列作为同源序列,将卡那霉素抗性基因(Kanr)整合到细菌基因组中,双交叉重组阳性菌株,经SDS-PAGE和west... 为了建立马耳他布氏杆菌M5-90株弱毒疫苗株与野生株的鉴别诊断,本研究以bp26基因作为重组靶位点,以M5-90为亲本,利用bp26基因ORF外侧序列作为同源序列,将卡那霉素抗性基因(Kanr)整合到细菌基因组中,双交叉重组阳性菌株,经SDS-PAGE和western blot试验表明迁移率约为29ku的BP26蛋白在亲本菌中表达并可被鼠抗BP26高免血清识别,而突变株M5-90-26反应结果为阴性,表明BP26蛋白在突变疫苗株M5-90-26中未表达。M5-90-26具备从血清学角度区分M5-90-26免疫与野生型布氏杆菌感染,对布氏杆菌病防制、监测及净化具有重要的意义。 展开更多

关键词 重组布氏杆菌 M5—90 bp26基因 突变株

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牛布鲁氏菌BP26间接ELISA检测方法的建立 被引量：11

3

作者 左玉柱 王增利 +2 位作者 路广计 王振来 郑丽丽 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期223-226,共4页

为建立检测牛布鲁氏菌(Brucella)血清抗体的间接ELISA方法,本研究将原核表达并纯化的Brucella外膜蛋白BP26作为包被抗原,采用方阵法确定包被抗原和待检血清的最佳工作浓度,经过对各种反应条件进行优化,建立了牛Brucella间接ELISA抗体检... 为建立检测牛布鲁氏菌(Brucella)血清抗体的间接ELISA方法,本研究将原核表达并纯化的Brucella外膜蛋白BP26作为包被抗原,采用方阵法确定包被抗原和待检血清的最佳工作浓度,经过对各种反应条件进行优化,建立了牛Brucella间接ELISA抗体检测方法。该方法对其他相关的牛病病原无交叉反应,其组内和组间的变异系数均小于10%,具有良好的重复性。对100份临床血清样品进行检测,同时将建立的间接ELISA方法与IDEXX公司的同类试剂盒进行比较,符合率为93%。本研究为布鲁氏菌病提供了一种简便的血清学诊断方法。 展开更多

关键词 牛布鲁氏菌 bp26蛋白 间接ELISA

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布鲁氏菌BP26蛋白的表达纯化及其抗原性的研究 被引量：8

4

作者 宫晓炜 景涛 +3 位作者 王国治 李恪梅 王秉翔 傅林锋 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1085-1088,共4页

目的获得布鲁氏菌感染血清学诊断优势抗原BP26重组蛋白。方法应用PCR技术从布鲁氏菌减毒株(104M)中扩增出bp26目的基因片段,将其克隆于表达载体PET30a中,并转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,用亲和层析纯化BP26重组蛋白,然后分别... 目的获得布鲁氏菌感染血清学诊断优势抗原BP26重组蛋白。方法应用PCR技术从布鲁氏菌减毒株(104M)中扩增出bp26目的基因片段,将其克隆于表达载体PET30a中,并转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,用亲和层析纯化BP26重组蛋白,然后分别用Western-blot,间接ELISA检测其抗原性。结果DNA测序及酶切鉴定证实PET-30a/bp26原核表达载体构建成功,并在大肠杆菌中高效表达,免疫印迹和间接ELISA实验证明BP26重组蛋白可与布鲁氏菌阳性血清产生特异性结合。结论成功获得了布鲁氏菌中序列全长为696bp,编码232个氨基酸的BP26蛋白,通过血清学反应证实,该蛋白为人和动物布鲁氏菌病临床诊断试剂盒的研发奠定了基础。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 bp26重组蛋白 抗原性

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布鲁氏菌bp26基因的原核表达及BP26-间接ELISA方法的初步建立 被引量：12

5

作者 唐利燕 陈创夫 +2 位作者 王远志 张辉 张红星 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2009年第4期437-440,共4页

为了表达并纯化布鲁氏菌BP26蛋白作为包被抗原,建立间接ELISA检测方法。方法:从布鲁氏菌疫苗株M5-90克隆bp26基因,在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中表达,纯化BP26蛋白,进行SDS-PAGE、Western-blot检测,将纯化的BP26蛋白包被ELISA板,建立检... 为了表达并纯化布鲁氏菌BP26蛋白作为包被抗原,建立间接ELISA检测方法。方法:从布鲁氏菌疫苗株M5-90克隆bp26基因,在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中表达,纯化BP26蛋白,进行SDS-PAGE、Western-blot检测,将纯化的BP26蛋白包被ELISA板,建立检测布鲁氏菌病的间接ELISA方法,用该方法检测42份绵羊血清,结果与标准试管凝集试验(SAT)进行比较。结果显示:正确表达并纯化了BP26蛋白,布鲁氏菌标准试管凝集试验检测的阳性率为30.85%(13/42);间接ELISA方法检测的阳性率为35.71%(15/42),二者阳性符合率为86.67%(13/ 15)。结论表达、纯化的BP26蛋白能够与布鲁氏菌阳性血清特异性结合,建立的ELISA方法比SAT方法更敏感。为以后M5-90疫苗株bp26基因缺失苗的应用提供配套性血清学检测奠定基础。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 bp26蛋白 间接ELISA 标准试管凝集实验

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布鲁氏菌bp26和OMP10基因的原核表达和鉴定 被引量：9

6

作者 陈瑶 李明 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期313-317,共5页

目的研究布鲁氏菌外膜蛋白OMP10和bp26基因的表达、克隆与测序,并对其进行初步的血清学鉴定。方法从布鲁氏菌基因组中获得OMP10和bp26基因连接入PMD18-T克隆质粒并测序,克隆入融合表达载体PGEX-4T-1,构建重组质粒PGEX-4T-1/OMP10和PGEX-... 目的研究布鲁氏菌外膜蛋白OMP10和bp26基因的表达、克隆与测序,并对其进行初步的血清学鉴定。方法从布鲁氏菌基因组中获得OMP10和bp26基因连接入PMD18-T克隆质粒并测序,克隆入融合表达载体PGEX-4T-1,构建重组质粒PGEX-4T-1/OMP10和PGEX-4T-1/bp26,在大肠杆菌中将该蛋白表达。用western-blot分析重组表达的GST-OMP10和GST-bp26的免疫学特性。结果成功构建了PGEX-4T-1/OMP10和PGEX-4T-1/bp26原核表达载体,并在大肠杆菌中成功表达了OMP10和bp26基因,布鲁氏菌免疫动物血清能特异性识别所表达的蛋白。结论布鲁氏菌外膜蛋白OMP10和bp26基因的成功表达,它可以与布鲁氏菌免疫血清产生特异性结合反应,为之后的抗原性以及免疫原性研究打下良好的物质基础。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 外膜蛋白OMP10 外膜蛋白bp26 免疫 诊断

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牛型布鲁氏菌外膜蛋白bp26基因的克隆与原核表达 被引量：3

7

作者 左玉柱 王增利 +1 位作者 郑丽丽 张占霞 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期91-95,共5页

根据GenBank中登录的牛型布鲁氏菌外膜蛋白bp26基因序列,设计了1对引物,采用PCR技术,牛流产病例分泌物为模板,扩增bp26的编码基因,得到1条753bp的片段。将其连入Simple-T载体中进行酶切和测序鉴定。测序正确后,将该基因插入到pET-28a(+... 根据GenBank中登录的牛型布鲁氏菌外膜蛋白bp26基因序列,设计了1对引物,采用PCR技术,牛流产病例分泌物为模板,扩增bp26的编码基因,得到1条753bp的片段。将其连入Simple-T载体中进行酶切和测序鉴定。测序正确后,将该基因插入到pET-28a(+)载体中构建原核表达载体,将此重组质粒转化到Rosetta(DE3)感受态细胞中,并用IPTG诱导,将诱导产物用SDS-PAGE和Western-blot检测。结果显示bp26基因可以在大肠杆菌中获得表达,表达产物分子质量约为29ku,与预计的蛋白分子质量一致。Western-blot试验证明,该蛋白可以与患牛布氏杆菌的阳性血清产生特异性结合反应,具有良好的抗原性。 展开更多

关键词 bp26基因 克隆 原核表达

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呼和浩特市区牛种布鲁菌bp26和omp10的克隆 被引量：1

8

作者 王军 王瑞 +3 位作者 杨莲茹 郭志亮 于翠玲 申之义 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2011年第2期70-75,共6页

为明确试验布鲁菌和参考布鲁菌菌株与基因库中布鲁菌外膜蛋白BP26和OMP10基因间的同源性。利用布鲁菌外膜蛋白bp26和omp10基因,针对试验布鲁菌和参考布鲁菌菌株进行克隆和序列分析。根据GenBank发表的布鲁菌bp26基因和omp10基因,分别设... 为明确试验布鲁菌和参考布鲁菌菌株与基因库中布鲁菌外膜蛋白BP26和OMP10基因间的同源性。利用布鲁菌外膜蛋白bp26和omp10基因,针对试验布鲁菌和参考布鲁菌菌株进行克隆和序列分析。根据GenBank发表的布鲁菌bp26基因和omp10基因,分别设计合成一对特异性引物,以提取的试验布鲁菌和2株参考布鲁菌的总DNA为模板,通过聚合酶链式反应(PCR)技术扩增得到bp26和omp10基因,回收纯化后将这两个基因分别连接到pMD18-T载体上,热激发转化受体菌大肠杆菌DH5α,质粒提取、PCR鉴定、测序。结果表明,bp26全长为995 bp,包含一个由753 bp组成的完整开放阅读框,试验菌株的同源性为100%,与参考菌株M5、S2的同源性分别为100%和99.9%,与参考序列S19、870的同源性分别为99.9%和100%。omp10全长531 bp,包含一个由396 bp组成的完整开放阅读框,试验菌株的同源性为100%,与参考菌株M5、S2的同源性均分别为100%,与参考序列544的同源性分别为99.7%。证实bp26基因和omp10基因在各种型间的同源性都在99%以上,表明这两个基因在布鲁菌属是高度保守的。 展开更多

关键词 布鲁菌 bp26 omp10 同源 分析

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布鲁菌bp26基因的原核表达及间接ELISA方法的临床初步应用 被引量：1

9

作者 谷海峰 郭港 +2 位作者 刘雪梅 李天惠 李鲁平 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2015年第3期43-47,共5页

构建诊断人布病的优势抗原BP26原核表达载体,并建立以该蛋白作为包被抗原的间接ELISA方法。人工合成bp26基因片段,构建原核表达载体pET30a-bp26,并转化入大肠埃希菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,Ni柱亲和纯化BP26重组蛋白,间接ELISA检测其... 构建诊断人布病的优势抗原BP26原核表达载体,并建立以该蛋白作为包被抗原的间接ELISA方法。人工合成bp26基因片段,构建原核表达载体pET30a-bp26,并转化入大肠埃希菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,Ni柱亲和纯化BP26重组蛋白,间接ELISA检测其抗原活性,并优化间接ELISA方法的各个参数,检测临床大量样本,对该方法性能进行评价。PCR鉴定及DNA测序证实pET30a-1bp26重组质粒构建成功,并在0.8mmol/L IPTG 20℃过夜诱导的条件下大量表达,经亲和纯化获得高纯度的可溶性BP26重组蛋白,间接ELISA结果显示该重组蛋白具有抗原活性,优化参数后,该方法的敏感度为70.00%,特异性为94.74%。成功获得高抗原活性的原核表达可溶性BP26重组蛋白,并建立用于临床特异性诊断人类布病的间接ELISA方法。 展开更多

关键词 bp26重组蛋白 间接ELISA 布鲁菌

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布鲁菌外膜蛋白Bp26在大肠埃希菌中的可溶性表达

10

作者 刘晓颖 姚志利 +3 位作者 陈立志 廉士珍 夏小成 冯二凯 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第1期32-35,共4页

为了获得布鲁菌外膜蛋白Bp26活性重组蛋白,以布鲁菌M5株菌体DNA为模板,应用PCR方法扩增得到Bp26基因,将该基因片段克隆到载体pET28a中,转化到E.coli BL21(DE3)中,在不同条件下诱导表达,对获得的菌体细胞超声破碎,通过SDS-PAGE鉴定是否... 为了获得布鲁菌外膜蛋白Bp26活性重组蛋白,以布鲁菌M5株菌体DNA为模板,应用PCR方法扩增得到Bp26基因,将该基因片段克隆到载体pET28a中,转化到E.coli BL21(DE3)中,在不同条件下诱导表达,对获得的菌体细胞超声破碎,通过SDS-PAGE鉴定是否为可溶性表达。结果表明,pET28aBp26重组质粒构建成功;终浓度为1.0mmol/L的IPTG在37℃下诱导,重组蛋白表达量最大;含乳糖成分的ZYM-5052培养基和终浓度为1.0mmol/L的IPTG在相同条件下诱导表达蛋白,ZYM-5052培养基可以更好的获得可溶性表达蛋白,为进一步利用大肠埃希菌系统表达生产高活性重组Bp26蛋白提供了一定的参考依据。 展开更多

关键词 布鲁茵菌 外膜蛋白bp26 乳糖 大肠埃希菌 表达

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布鲁氏菌BP26蛋白对鼠源树突状细胞分化及抗原提呈作用 被引量：4

11

作者 徐龙 曹小安 +6 位作者 刘永生 周建华 张广林 孙晶晶 李玲霞 赵永婕 胡永浩 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2020年第4期984-991,共8页

构建pET-30a-BP26并在大肠杆菌中表达获得重组布鲁氏菌BP26蛋白,研究重组表达蛋白对鼠髓源树突状细胞分化及抗原提呈作用。设计布鲁氏菌BP26蛋白引物,PCR扩增该基因并酶切、连接在pET-30a载体上。将构建成功的pET-30a-BP26转化至感受态... 构建pET-30a-BP26并在大肠杆菌中表达获得重组布鲁氏菌BP26蛋白,研究重组表达蛋白对鼠髓源树突状细胞分化及抗原提呈作用。设计布鲁氏菌BP26蛋白引物,PCR扩增该基因并酶切、连接在pET-30a载体上。将构建成功的pET-30a-BP26转化至感受态细胞BL21表达获得重组BP26蛋白。采用SDS-PAGE和Western-Blot检测蛋白表达量和反应原性后,用重组蛋白刺激BALB/C小鼠分离髓源树突状细胞(BM-DCs),观察BM-DCs的成熟分化并利用流式细胞术进行表型分析。成功获得BP26重组蛋白,SDS-PAGE和Western-Blot分析结果表明,BP26重组蛋白可溶性高且具有良好的反应原性,流式细胞术检测结果显示,BP26能刺激BM-DCs分化成熟和抗原提呈作用。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 bp26 鼠源树突状细胞 抗原提呈

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家畜布鲁氏菌BP26基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立 被引量：4

12

作者 臧金凤 尚佑军 +5 位作者 陈妍 吴锦艳 王光祥 张志东 刘湘涛 孙继国 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期100-104,111,共6页

利用原核表达的布鲁氏菌BP26蛋白作为标准抗原蛋白,建立布鲁氏菌病抗体检测方法。本试验从布鲁氏菌S2疫苗株通过PCR扩增获得BP26基因,构建融合表达质粒pET-28a-BP26后并转化BL21宿主菌,IPTG诱导表达,应用Western blot鉴定表达产物,并以... 利用原核表达的布鲁氏菌BP26蛋白作为标准抗原蛋白,建立布鲁氏菌病抗体检测方法。本试验从布鲁氏菌S2疫苗株通过PCR扩增获得BP26基因,构建融合表达质粒pET-28a-BP26后并转化BL21宿主菌,IPTG诱导表达,应用Western blot鉴定表达产物,并以纯化的重组蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件,建立布鲁氏菌病抗体ELISA检测方法。结果表明,通过反应条件优化确定抗原的适宜包被浓度为5μg/mL,血清适宜稀释度为1∶20,二抗的适宜工作浓度为1∶20 000;通过敏感性试验结果表明,当血清稀释至1∶1 280时,仍检测为阳性;通过批间、批内重复性试验,变异系数均小于10%,表明本检测方法具有较高的重复性。用该方法对100份临床样本进行检测,并与试管凝集试验(SAT)进行相符性验证,符合率为94%,为布鲁氏菌病临床血清抗体检测及流行病学调查提供了技术手段。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 bp26蛋白 间接酶联免疫吸附试验

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布鲁氏菌BP26抗体iELISA检测方法建立 被引量：3

13

作者 吕素芳 胡莉萍 +3 位作者 董炳梅 任洪林 莫玲 李峰 《家畜生态学报》 北大核心 2021年第10期69-74,共6页

将布鲁氏菌BP26蛋白基因克隆入pET-28a原核表达载体,经表达、纯化后进行Western blot分析。以该蛋白为包被抗原,建立布鲁氏菌BP26抗体iELISA检测方法,并进行特异性、敏感性、符合率等试验。结果表明:成功构建重组原核表达载体pET28a-BP... 将布鲁氏菌BP26蛋白基因克隆入pET-28a原核表达载体,经表达、纯化后进行Western blot分析。以该蛋白为包被抗原,建立布鲁氏菌BP26抗体iELISA检测方法,并进行特异性、敏感性、符合率等试验。结果表明:成功构建重组原核表达载体pET28a-BP26,表达和纯化后获得目的蛋白浓度为680μg/mL,Western blot显示与牛和羊血清均具有良好的免疫学活性;建立并优化了BP26抗体iELISA检测方法,抗原包被浓度为13.6μg/mL、血清稀释倍数为1∶100、封闭条件为1.5%乳清蛋白、37℃1 h,二抗稀释倍数为1:2000,37°显色15 min;用建立的iELISA检测方法与传统虎红平板凝集试验比较,413份羊血清样品的符合率为92.2%,186份牛血清样品的符合率为94.8%。该方法可大规模应用于临床牛和羊血清样品检测,为布鲁氏菌病抗体监测及净化提供技术支持。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 bp26 原核表达 间接ELISA

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流产布鲁菌BP26蛋白B细胞线性表位的鉴定 被引量：1

14

作者 羡东堡 高明春 +2 位作者 曹涤非 王晓东 王君伟 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1444-1448,共5页

为了对流产布鲁菌BP26蛋白进行抗原表位研究,设计了3个相互重叠15个氨基酸、覆盖整个BP26蛋白的重叠短肽,经克隆并在大肠杆菌中实现了融合表达。用流产型布鲁菌感染血清对3个融合蛋白进行免疫印迹分析,结果初步鉴定出BP26蛋白B细胞线性... 为了对流产布鲁菌BP26蛋白进行抗原表位研究,设计了3个相互重叠15个氨基酸、覆盖整个BP26蛋白的重叠短肽,经克隆并在大肠杆菌中实现了融合表达。用流产型布鲁菌感染血清对3个融合蛋白进行免疫印迹分析,结果初步鉴定出BP26蛋白B细胞线性抗原表位位于第51-165氨基酸区域。在此基础上,针对BP26 2(51-165aa)短肽,设计了5个相互重叠10个氨基酸的短肽片段,进一步鉴定出了BP26蛋白B细胞线性表位位于第109-141氨基酸区域。该结果为进一步探索BP26蛋白的结构和功能以及建立诊断方法奠定了基础。 展开更多

关键词 流产布鲁菌 bp26蛋白 B细胞 线性表位 鉴定

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布鲁氏菌BP26蛋白的原核表达及鉴定 被引量：2

15

作者 鲁友铭 李俊萱 +4 位作者 吴胜昔 曾政 黄恒 李令臣 侯力嘉 《重庆理工大学学报（自然科学）》 CAS 北大核心 2019年第10期185-190,共6页

为了实现布鲁氏菌BP26蛋白在原核宿主细胞进行高效表达,对布鲁氏菌BP26基因进行密码子优化,化学合成了BP26全基因,并将其克隆至pET30a(+)载体上,构建重组质粒pET30a(+)-bp26,转化至基因工程菌BL21(DE3),利用IPTG进行诱导表达。利用His-... 为了实现布鲁氏菌BP26蛋白在原核宿主细胞进行高效表达,对布鲁氏菌BP26基因进行密码子优化,化学合成了BP26全基因,并将其克隆至pET30a(+)载体上,构建重组质粒pET30a(+)-bp26,转化至基因工程菌BL21(DE3),利用IPTG进行诱导表达。利用His-tag镍柱纯化BP26重组蛋白,并对纯化后的重组蛋白进行鉴定。结果显示:重组质粒经Nde I与Xhol I双酶切,酶切产物通过琼脂糖凝胶电泳显示与目的产物条带大小一致;当诱导条件为IPTG浓度1 mmol/L,37℃诱导8 h时,重组蛋白的表达量最高;纯化后的目的蛋白经过Western Blot鉴定,显示在27.8 kD左右有一条明显的蛋白印迹条带,与预期大小相符。本研究成功实现了在大肠杆菌高效表达BP26蛋白,为后续布病检测新试剂的研制及疫苗的研发奠定了生物学基础。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 bp26重组蛋白 原核表达 镍柱纯化 蛋白免疫印迹

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布鲁氏菌BP26蛋白细菌样颗粒疫苗的制备和免疫学评价 被引量：1

16

作者 林海 涂飞 +4 位作者 李楠 孙洋 姜博文 纪雪 刘军 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第6期37-46,共10页

为了构建布鲁氏菌外膜蛋白BP26细菌样颗粒候选疫苗BLPs-BP26,并评价其免疫原性,本试验首先分别扩增羊种布鲁氏菌16M株编码BP26蛋白的整个基因序列和乳酸乳球菌MG1363株编码肽聚糖锚钩蛋白(PA)的整个基因序列,通过重叠延伸PCR技术将bp26... 为了构建布鲁氏菌外膜蛋白BP26细菌样颗粒候选疫苗BLPs-BP26,并评价其免疫原性,本试验首先分别扩增羊种布鲁氏菌16M株编码BP26蛋白的整个基因序列和乳酸乳球菌MG1363株编码肽聚糖锚钩蛋白(PA)的整个基因序列,通过重叠延伸PCR技术将bp26基因与PA基因连接构建融合基因bp26-PA,将融合基因bp26-PA克隆至pET-28a原核表达载体并诱导表达融合蛋白BP26-PA。将表达正确的BP26-PA融合蛋白与细菌样颗粒(BLPs)结合构建BLPs-BP26,通过SDS-PAGE、Western blot、间接免疫荧光和冷冻超薄切片对BLPs-BP26进行鉴定。将BLPs-BP26免疫小鼠,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠特异性IgG抗体水平,实时荧光定量反转录PCR(RT-qPCR)分析免疫小鼠脾脏组织中干扰素γ(IFN-γ)和白介素2(IL-2)的基因转录水平,ELISA方法检测免疫小鼠血清中IFN-γ和IL-2的蛋白表达水平。鉴定结果显示,BP26-PA蛋白成功展示在BLPs表面;免疫小鼠试验结果显示,小鼠血清特异性IgG抗体效价最高可达1∶1 024 000;与PBS组相比,BLPs-BP26组免疫小鼠脾脏组织中IFN-γ和IL-2基因的转录水平均极显著升高(P值分别为P<0.000 1和P<0.01),小鼠血清中IFN-γ的表达水平极显著升高(P<0.000 1)。结果表明,BLPs-BP26能刺激小鼠产生高水平的特异性IgG抗体,并可诱导小鼠产生细胞免疫应答。本试验为开发具有良好免疫原性且无安全隐患的布鲁氏菌新型疫苗提供了新的思路。 展开更多

关键词 表面展示技术 布鲁氏菌 bp26蛋白 细菌样颗粒疫苗

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布鲁氏菌Bp26蛋白原核表达的优化与间接ELISA检测方法的建立 被引量：1

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作者 刘尚博 王振华 +1 位作者 秦建华 郑可 《现代畜牧科技》 2024年第10期27-31,共5页

为原核表达布鲁氏菌Bp26蛋白,利用布鲁氏菌M5-90疫苗株扩增得到Bp26基因片段,克隆构建pET28a-XXA-HRV 3C-Bp26原核表达载体,通过诱导表达和Ni-NTA亲和纯化得到XXA-HRV 3C-Bp26重组蛋白,再使用PreScission Protease酶切得到无标签的Bp26... 为原核表达布鲁氏菌Bp26蛋白,利用布鲁氏菌M5-90疫苗株扩增得到Bp26基因片段,克隆构建pET28a-XXA-HRV 3C-Bp26原核表达载体,通过诱导表达和Ni-NTA亲和纯化得到XXA-HRV 3C-Bp26重组蛋白,再使用PreScission Protease酶切得到无标签的Bp26蛋白。通过SDS-PAGE和Western Blot试验结果,证明成功表达XXA-HRV 3C-Bp26重组蛋白,且蛋白是可溶性表达,并通过酶切获得了无任何标签的Bp26蛋白。以Bp26蛋白做为诊断抗原,初步建立布鲁氏菌间接ELISA检测方法,通过与商用布鲁氏菌ELISA检测试剂盒对256份羊血清样本进行检测,符合率为93.75%,证明建立的布鲁氏菌间接ELISA检测方法可以做为临床中的一种布鲁氏菌病检测方法。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 bp26蛋白 间接ELISA

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布鲁氏菌BP26抗原胶体金试剂盒的研制及功能初试 被引量：2

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作者 王婷 张正雷 +4 位作者 孙田华 张幸子 王彩霞 席仲兴 焦磊 《甘肃畜牧兽医》 2022年第10期56-58,62,共4页

目的:应用胶体金免疫层析技术建立一种快速检测布鲁氏菌抗体的方法,组装试剂盒并进行初步验证。方法:采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,标记重组布鲁氏菌BP26抗原和兔抗BP26多抗血清包被在硝酸纤维素膜上分别作为检测线和质控线,确... 目的:应用胶体金免疫层析技术建立一种快速检测布鲁氏菌抗体的方法,组装试剂盒并进行初步验证。方法:采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,标记重组布鲁氏菌BP26抗原和兔抗BP26多抗血清包被在硝酸纤维素膜上分别作为检测线和质控线,确定标记的最佳pH和最佳标记抗原量,检测试剂盒的灵敏度和重复性。结果:该试剂盒最佳标记pH值为6.7,最佳标记抗原量为20μl,试剂盒的灵敏度和重复性较好。结论:该试剂盒具有较好的灵敏度和重复性,整个检测过程可在15 min内完成,能够快速检测样品血清,适用于现场快速检测。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 bp26抗原 胶体金免疫层析技术 试剂盒

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鉴别布鲁菌病自然感染动物与疫苗免疫动物胶体金检测试纸条的研制 被引量：11

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作者 张付贤 李晓艳 +5 位作者 闫广谋 唐婕 杨延玲 路浩 郎需龙 王兴龙 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第7期79-82,共4页

用金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)标记胶体金技术制作金标垫,以亲和层析法纯化的BP26蛋白作为检测抗原(T线),研制胶体金快速检测试纸条。用建立的试纸条检测小鼠布鲁菌感染血清,可成功鉴别牛布鲁菌S19感染和BP26缺失疫苗株YZ-2免疫的小鼠。... 用金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)标记胶体金技术制作金标垫,以亲和层析法纯化的BP26蛋白作为检测抗原(T线),研制胶体金快速检测试纸条。用建立的试纸条检测小鼠布鲁菌感染血清,可成功鉴别牛布鲁菌S19感染和BP26缺失疫苗株YZ-2免疫的小鼠。试纸条检测与布鲁菌属同源性较近的几株细菌的阳性血清,结果无交叉反应;试纸条敏感性高于虎红平板凝集试验检测方法,近似于ELISA方法;准确性同于ELISA法,且更为简便快捷。该试纸条具有鉴别布鲁菌病自然感染和疫苗免疫的应用前景。 展开更多

关键词 布鲁菌病 bp26蛋白 胶体金试纸条 鉴别

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羊布鲁菌血清抗体iELISA方法的建立及应用 被引量：3

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作者 张广冻 陈梦茜 +4 位作者 李俊玫 刘欢 张建民 靳亚平 王爱华 《动物医学进展》 北大核心 2017年第7期6-11,共6页

为建立一种准确、快速、安全的羊布鲁菌检测方法,构建布鲁菌bp26基因的原核表达载体,用切胶-电洗脱的方法纯化重组GST-Bp26蛋白,并以纯化的重组GST-Bp26蛋白为包被抗原,优化反应条件,建立了羊布鲁菌血清抗体的iELISA方法。结果表明,所... 为建立一种准确、快速、安全的羊布鲁菌检测方法,构建布鲁菌bp26基因的原核表达载体,用切胶-电洗脱的方法纯化重组GST-Bp26蛋白,并以纯化的重组GST-Bp26蛋白为包被抗原,优化反应条件,建立了羊布鲁菌血清抗体的iELISA方法。结果表明,所建立的iELISA方法具有较好的特异性和敏感性,与虎红平板凝集试验结果具有良好的符合性,能够满足羊布鲁菌病临床检测需要,具有较好的临床应用价值。 展开更多

关键词 布鲁菌 bp26 原核表达 间接酶联免疫吸附试验

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