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反向Northern Blotting对小梅山猪下丘脑发育差异表达ESTs的鉴定 被引量:1
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作者 周春宝 潘孝青 +1 位作者 李霖 丁家桐 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2009年第3期22-24,共3页
用mRNA差异显示技术从小梅山猪下丘脑不同发育阶段,分离并筛选出3个差异表达ESTs,分别命名为MS01、MS02、MS03。利用地高辛DNA标记与检测技术反向Northern斑点杂交,对分离出来的ESTs进行鉴定结果理想。此法避免了同位素放射性污染,操作... 用mRNA差异显示技术从小梅山猪下丘脑不同发育阶段,分离并筛选出3个差异表达ESTs,分别命名为MS01、MS02、MS03。利用地高辛DNA标记与检测技术反向Northern斑点杂交,对分离出来的ESTs进行鉴定结果理想。此法避免了同位素放射性污染,操作简单,可防止DDRT-PCR过程中假阳性的出现,提高了试验准确性,是一种鉴定差异显示ESTs简单而有效的方法。 展开更多
关键词 小梅山猪 反向Northern blotting 下丘脑 ESTS 鉴定
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高内涵分析及Western blotting法在蛋白质核质分布研究中的应用及比较研究 被引量:4
2
作者 纪晓方 李丽英 常娜 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第5期616-620,共5页
目的使用不同方法对蛋白质的核质分布进行检测并比较差异。方法细胞经免疫荧光染色后使用高内涵分析(high content analysis,HCA)对蛋白质的细胞质或细胞核总荧光强度进行分析;分别提取胞质及胞核蛋白,使用Western blotting法对核质组... 目的使用不同方法对蛋白质的核质分布进行检测并比较差异。方法细胞经免疫荧光染色后使用高内涵分析(high content analysis,HCA)对蛋白质的细胞质或细胞核总荧光强度进行分析;分别提取胞质及胞核蛋白,使用Western blotting法对核质组分中的蛋白质含量进行鉴定。结果两种方法均可检测到蛋白质的出核转运;经定量分析,HCA法检测到的HuR蛋白质/核比升高倍数小于Western blotting法。结论使用HCA法检测蛋白质核质定位具有准确、客观、成本低、快捷、多参数等特点,不失为Western blotting的有效补充及替代方法。 展开更多
关键词 高内涵分析 WESTERN blotting 蛋白质核质分布
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肝脏特异性表达载体的构建及Western blotting检测 被引量:1
3
作者 张利涛 刘慧琳 曹以诚 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第1期100-104,共5页
研究靶向于肝细胞的组织特异性siRNA,实现siRNA基因治疗的组织特异性,可用于特异性治疗乙肝,突破RNA干扰技术在临床应用的一大障碍。用靶向于EGFP的siRNA(以下简称siEGFP)替代靶向于乙肝病毒保守区的siRNA,构建可以在肝细胞中特异性表... 研究靶向于肝细胞的组织特异性siRNA,实现siRNA基因治疗的组织特异性,可用于特异性治疗乙肝,突破RNA干扰技术在临床应用的一大障碍。用靶向于EGFP的siRNA(以下简称siEGFP)替代靶向于乙肝病毒保守区的siRNA,构建可以在肝细胞中特异性表达的载体,用来表达siRNA。将目标载体分别转染肝癌细胞HepG2、乳腺癌细胞MDB-MB-231、人胚肾细胞293,在蛋白质水平上检验siRNA抑制的组织特异性。Western blotting结果证实,siEGFP在肝组织来源的细胞系HepG2中抑制效率明显高于其他两组细胞。构建的载体可以在肝癌细胞系中特异性的表达siRNA,而在其他组织细胞中不表达,实现了组织特异性。进一步将siEGFP替换为抑制HBV表达的siRNA,同样可以实现肝脏特异性的表达。 展开更多
关键词 RNAI 组织特异性siRNA 肝脏特异性 EGFP WESTERN blotting
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Observation on Plant Leaf Transection by Gelatin Blotting
4
作者 TAN Dahai LI Fuheng +1 位作者 WANG Xiaocen HUANG Fushan 《Journal of Northeast Agricultural University(English Edition)》 CAS 2011年第3期7-11,共5页
Blotting was used to observe cell structures of leaf epidermis cells, and the key method of leaf transaction observation was paraffin section. The concentration, suitable solidification time, melting temperature of ge... Blotting was used to observe cell structures of leaf epidermis cells, and the key method of leaf transaction observation was paraffin section. The concentration, suitable solidification time, melting temperature of gelatin solution and the stain for the gelatin blotting were studied in this research. The results showed that the gelatin blotting could be used to study leaf transaction, it was benefit to make operation easily, and save time, money and so on 展开更多
关键词 gelatin solution blotting leaf transaction OBSERVATION
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Studies on the antioxidant properties of Staphylococcus epidermidis fermentation broth
5
作者 Wenlin Geng Ming Li Yuhua Cao 《日用化学工业(中英文)》 北大核心 2025年第10期1275-1283,共9页
In this work, Staphylococcus epidermidis (S. epidermidis) was used to prepare the fermentation broths with antioxidant activity. Through the optimization of the carbon source, three kinds of S. epidermidis fermentatio... In this work, Staphylococcus epidermidis (S. epidermidis) was used to prepare the fermentation broths with antioxidant activity. Through the optimization of the carbon source, three kinds of S. epidermidis fermentation broth were obtained and designated as SFB, Gly-SFB, and Glu-SFB, which were cultivated in beef protein medium and the beef protein medium supplemented with glycerol or glucose, respectively. The differences in antioxidant efficacy of SFB, Gly-SFB and Glu-SFB were investigated by evaluating intracellular ROS fluorescence intensity, SOD enzyme activity and MDA concentration. Gly-SFB and Glu-SFB exhibited a greater capacity to eliminate ROS as compared to that of SFB. The intracellular SOD enzyme activity increased as the concentrations of SFB and Gly-SFB increased. Nevertheless, the intracellular SOD enzyme activity was the highest after the treatment with Glu-SFB at the low concentrations. The intracellular MDA content reached a lower value after the treatment with Gly-SFB and Glu-SFB at lower concentrations, which was opposite to the case after the treatment with SFB. WB indicated that the S. epidermidis fermentation broth regulated the expression of relevant proteins in the Nrf2-Keap1 signaling pathway to exhibit the antioxidant effects. This indicates that the S. epidermidis fermentation broth promotes the expression of relevant proteins in the Nrf2-Keap1 signaling pathway, consequently, antioxidant benefits were exerted. The fermentation broth that were prepared by incorporating glycerol or glucose into the culture medium can augment their antioxidant activity. 展开更多
关键词 S.epidermidis fermentation broth ANTIOXIDANT Western blotting
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蔬菜病毒不同检测技术灵敏度的比较研究
6
作者 陈伟 姚洁 +4 位作者 冯明峰 李帅 蒋西子 蒋磊 江彤 《浙江农业学报》 北大核心 2025年第5期1072-1081,共10页
为了明确蔬菜病毒种类,探索快速、灵敏、低成本、高通量的病毒检测方法。将10种蔬菜病毒,烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,... 为了明确蔬菜病毒种类,探索快速、灵敏、低成本、高通量的病毒检测方法。将10种蔬菜病毒,烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)、番茄花叶病毒(Tomato mosaic virus,ToMV)、蚕豆萎蔫病毒(Broad bean wilt virus,BBWV)、芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)、小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)、番茄褪绿病毒(Tomato chlorosis virus,ToCV)、马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)和番茄环纹斑点病毒(Tomato zonate spot virus,TZSV)的cp基因质粒DNA顺次固定在同一张硝酸纤维素膜(NC膜)上,根据10种蔬菜病毒的cp基因序列制备地高辛(DIG)标记的特异性探针,利用dot-Southern blot方法一次性检测10种病毒。再采用dot-Southern blot、dot-Northern blot、PCR和ELISA方法检测TMV,比较不同检测方法的灵敏度。结果发现,dot-Southern blot方法可在同一张NC膜上一次性检出10种病毒的cp基因质粒DNA。dot-Southern blot检测TMV cp基因质粒DNA和cp基因cDNA的最低浓度分别为5×10^(-2)ng·μL^(-1)和5×10^(-1)ng·μL^(-1),dot-Northern blot检测感染TMV蔬菜样本总RNA的最低浓度为5×10^(-2)ng·μL^(-1),PCR检测TMV cp基因质粒DNA的最低浓度为5×10-3ng·μL^(-1),RT-PCR检测TMV cDNA的最低浓度为5×10^(-2)ng·μL^(-1),dot-ELISA和TAS-ELISA检测感染TMV蔬菜病汁液的最低浓度为9.8 ng·μL^(-1)和78 ng·μL^(-1)。说明dot-Southern blot能够一次性检出多种病毒,可用于蔬菜病毒复合侵染检测。dot-Southern blot、dot-Northern blot、RT-PCR和PCR等核酸检测方法的灵敏度相对较高,而ELISA检测方法的灵敏度相对较低。 展开更多
关键词 蔬菜病毒 检测方法 灵敏度 dot-Southern blot
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自体黄韧带干预TGF-β1/Smad3信号通路抑制兔硬膜外纤维瘢痕形成的实验研究
7
作者 王鹏 张德宝 +5 位作者 张杨 张海斌 时嘉 张少杰 李树文 吴一民 《中国临床解剖学杂志》 北大核心 2025年第1期69-75,共7页
目的通过对不同组别的兔分别行椎板切除术,对比其各组术后3、6周TGF-β1、Smad3蛋白表达量以及两者相应的mRNA表达水平,从而探讨自体黄韧带抑制腰椎术后硬膜外纤维瘢痕形成与TGF-β1/Smad3信号通路的关系。方法将于内蒙古医科大学实验... 目的通过对不同组别的兔分别行椎板切除术,对比其各组术后3、6周TGF-β1、Smad3蛋白表达量以及两者相应的mRNA表达水平,从而探讨自体黄韧带抑制腰椎术后硬膜外纤维瘢痕形成与TGF-β1/Smad3信号通路的关系。方法将于内蒙古医科大学实验动物中心购买的48只6~8月龄的日本大白兔,分为保留黄韧带组,自体脂肪回置组,不保留黄韧带组,对不同组别进行手术造模。术后对每组间的实验动物分别饲养3、6周后进行处死(3、6周各处死8只)。采用Western blot蛋白定量分析、RTPCR技术测定各组样本中的TGF-β1、Smad3蛋白含量及mRNA表达水平,并将以上数据分别进行组间比较,分析其差异性。结果①Western blot检测结果:3、6周保留组TGF-β1、Smad3蛋白表达量小于不保留组和脂肪组(P<0.05),不保留组和脂肪组之间并未发现明显差异。②RT-PCR结果显示:对于TGF-β1、Smad3两者的mRNA表达量而言,3、6周保留组明显小于不保留组和脂肪组(P<0.05),不保留组和脂肪组之间并未见明显差异。结论腰椎手术术后,会形成不同程度的硬膜外纤维瘢痕。若在术中保留自体黄韧带,可减少硬膜外成纤维细胞的形成,其机制与TGF-β1/Smad3信号通路有关。 展开更多
关键词 黄韧带 纤维瘢痕 TGF-β1/Smad3信号通路 Western blot RT-PCR技术
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条件性胰岛β细胞HLF基因敲除小鼠构建与鉴定
8
作者 侯梦龙 齐心语 +4 位作者 吴建凤 廖启超 马杰 周磊 李一星 《安徽医科大学学报》 北大核心 2025年第8期1432-1439,共8页
目的为了探究肝白血病因子(HLF)在糖尿病中的作用机制,构建条件性胰岛β细胞HLF基因敲除小鼠动物模型。方法在细胞水平上,通过CCK-8试验验证HLF抑制或过表达对MIN6细胞增殖的影响。通过RT-qPCR和Western blot,分别在mRNA水平和蛋白水平... 目的为了探究肝白血病因子(HLF)在糖尿病中的作用机制,构建条件性胰岛β细胞HLF基因敲除小鼠动物模型。方法在细胞水平上,通过CCK-8试验验证HLF抑制或过表达对MIN6细胞增殖的影响。通过RT-qPCR和Western blot,分别在mRNA水平和蛋白水平检测HLF抑制或过表达效果。将HLF flox/flox转基因小鼠与Pdx1-Cre+/-小鼠(C57BL/6J)杂交繁育,获得子代小鼠。利用PCR方法鉴定小鼠基因型,通过RT-qPCR技术和Western blot检测HLF基因在胰岛β细胞敲除小鼠(HLF flox/flox Cre+/-)和对照小鼠(HLF flox/flox)中的mRNA水平和蛋白水平表达差异,验证敲除效果。同时取2组小鼠的胰岛组织制作石蜡切片并进行苏木精-伊红(HE)染色分析。结果HLF基因抑制或过表达对MIN6细胞增殖无显著影响。在MIN6细胞中抑制HLF基因,其mRNA表达水平较对照组下降了74%,蛋白表达水平较对照组下降了60%;过表达HLF基因后,其mRNA表达水平为对照组的2.13倍,蛋白表达水平为对照组的1.8倍。敲除小鼠的HLF基因mRNA表达水平较对照组下降了89%,蛋白表达水平较对照组下降了65%。HE染色结果显示:敲除小鼠胰岛组织内细胞形态与对照小鼠无明显差异。抑制HLF使MIN6细胞中糖原含量提高约20%。结论成功构建HLF基因敲除小鼠,为研究HLF在糖尿病发病机制中的作用提供了动物模型。 展开更多
关键词 肝白血病因子 条件性胰岛β细胞 RT-QPCR Western blot 基因敲除 C57BL/6J小鼠
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CSF1R^(+/-)小鼠的构建和基因鉴定
9
作者 周园园 刘崇 +4 位作者 王安琪 张慧茹 邱佳琪 朱梦娟 涂佳杰 《安徽医科大学学报》 北大核心 2025年第5期884-889,共6页
目的构建集落刺激因子1受体杂合(CSF1R^(+/-))小鼠并分析其基因型,为疾病病理机制及药物靶点提供动物模型基础。方法根据Cre/Loxp系统设计一种线性化的靶向载体,在集落刺激因子1受体(CSF1R)基因第5外显子上游插入一个Loxp位点,在第5外... 目的构建集落刺激因子1受体杂合(CSF1R^(+/-))小鼠并分析其基因型,为疾病病理机制及药物靶点提供动物模型基础。方法根据Cre/Loxp系统设计一种线性化的靶向载体,在集落刺激因子1受体(CSF1R)基因第5外显子上游插入一个Loxp位点,在第5外显子下游插入一个双侧有Loxp位点的新霉素抗性盒(PGK-neo)。将线性化的靶向载体电穿孔至胚胎干细胞(ES)。将正确靶向的ES注射到C57BL/6J小鼠的胚泡中得到嵌合小鼠,与透明带3-Cre(Zp3-Cre)小鼠进行繁殖。新生小鼠出生后9~14天编号并剪鼠尾,提取小鼠的DNA,通过聚合酶链式反应(PCR)和琼脂糖凝胶电泳鉴定小鼠基因型,筛选出CSF1R^(+/-)小鼠。应用流式细胞术检测小鼠巨噬细胞中CSF1R的表达;Western blot检测小鼠组织中CSF1R的蛋白表达。结果琼脂糖凝胶电泳结果显示,野生小鼠(WT)扩增出453 bp的条带,CSF1R^(+/-)小鼠扩增出453 bp和650 bp的条带。流式细胞术结果显示,与WT组比较,CSF1R^(+/-)组小鼠的腹腔来源巨噬细胞(PM)和骨髓来源巨噬细胞(BMDM)中的CSF1R低表达(P<0.05)。Western blot结果显示,与WT组比较,CSF1R^(+/-)组小鼠脾脏、肾脏、脑组织中的CSF1R蛋白低表达(P<0.05)。结论成功构建、繁育和鉴定CSF1R^(+/-)小鼠,为进一步揭示CSF1R在免疫调节中的潜在机制研究提供动物模型基础。 展开更多
关键词 CSF1R PCR Western blot 流式细胞术 Cre/Loxp 动物模型
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猪衣原体ompA基因的原核表达与纯化及其蛋白功能预测
10
作者 李宁倩 禹思宇 +6 位作者 李桐菲 李文超 魏颖 谭建锡 胡忆文 唐连飞 刘伟 《湖南畜牧兽医》 2025年第5期29-33,共5页
为了将猪衣原体ompA基因作为目标抗原,为后续建立间接ELISA检测方法提供理论依据,开展了该基因的原核表达与纯化工作,并利用生物信息学方法对ompA蛋白的理化性质、亲疏水性、跨膜区域和抗原表位等进行了分析与预测。结果显示:该研究成... 为了将猪衣原体ompA基因作为目标抗原,为后续建立间接ELISA检测方法提供理论依据,开展了该基因的原核表达与纯化工作,并利用生物信息学方法对ompA蛋白的理化性质、亲疏水性、跨膜区域和抗原表位等进行了分析与预测。结果显示:该研究成功构建了重组质粒,并通过SDS-PAGE和Western blot确认该蛋白以包涵体形式表达,分子量约为27 kDa;该蛋白的预测分子质量为23.31921 kDa,理论等电点为4.37,不含跨膜区,属于亲水性蛋白,含有7个抗原决定簇,平均抗原倾向值为1.0316。结果表明:ompA蛋白具备良好的免疫反应性,是免疫反应中的关键成分,适合作为间接ELISA的包被抗原。该研究为深入理解猪衣原体的致病机制及开发相应的防控技术提供了理论基础。 展开更多
关键词 猪衣原体ompA基因 重组质粒 表达及纯化 Western blot验证 生物信息学预测 间接ELISA
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日粮纳米锌水平对公羊睾丸和附睾Cu-ZnSOD表达的影响 被引量:8
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作者 任有蛇 秦小伟 +4 位作者 郭丽娜 赵辉 刘文忠 张建新 张春香 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1622-1630,共9页
旨在研究日粮纳米锌对公羊睾丸和附睾铜锌超氧化物歧化酶基因(Cu-ZnSOD)mRNA和蛋白表达的影响。将16只9月龄体重相近、健康状况良好的晋中绵羊公羊随机分成4组,分别喂给基础日粮(对照组),基础日粮+纳米锌(50、100和150mg·kg-1 DM)... 旨在研究日粮纳米锌对公羊睾丸和附睾铜锌超氧化物歧化酶基因(Cu-ZnSOD)mRNA和蛋白表达的影响。将16只9月龄体重相近、健康状况良好的晋中绵羊公羊随机分成4组,分别喂给基础日粮(对照组),基础日粮+纳米锌(50、100和150mg·kg-1 DM)。预饲期10d,正试期80d。试验结束时采集绵羊睾丸和附睾组织。采用RT-PCR、Western blotting和免疫组化技术检测其Cu-ZnSOD mRNA、Cu-ZnSOD蛋白表达及在睾丸中定位情况。结果显示:绵羊睾丸和附睾组织Cu-ZnSOD mRNA表达量顺序是附睾头≥睾丸>附睾体>附睾尾。日粮添加50~100mg·kg-1纳米锌可增加其睾丸和附睾组织Cu-ZnSOD mRNA和蛋白表达量。免疫组化结果显示CuZnSOD在睾丸的生精细胞中有强阳性信号,间质细胞有弱阳性信号。综上表明,绵羊睾丸和附睾不同区段CuZnSOD mRNA和蛋白表达有差异。日粮添加适量锌可提高睾丸和附睾中Cu-ZnSOD mRNA和蛋白表达量,其作用机制仍需进一步研究。 展开更多
关键词 Cu-ZnSOD RT-PCR WESTERN blotting 睾丸 附睾 公羊
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Notch1信号途径在食管鳞癌细胞株EC9706的作用研究 被引量:11
12
作者 鲁照明 刘红涛 +2 位作者 许培荣 侯桂琴 薛乐勋 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2007年第13期740-743,共4页
目的:研究Notch1基因在食管癌细胞株中的表达及其对食管鳞癌细胞EC9706凋亡的影响。方法:通过免疫细胞化学检测Notch1基因在EC9706细胞中的表达。通过RT-PCR扩增Notch1基因,构建真核表达载体pcDNA3.1-Notch1,转染EC9706细胞,利用Western... 目的:研究Notch1基因在食管癌细胞株中的表达及其对食管鳞癌细胞EC9706凋亡的影响。方法:通过免疫细胞化学检测Notch1基因在EC9706细胞中的表达。通过RT-PCR扩增Notch1基因,构建真核表达载体pcDNA3.1-Notch1,转染EC9706细胞,利用Western blotting检测转染pcDNA3.1-Notch1载体12h,24h,48h,72h的食管癌细胞株与转染空载体食管癌细胞株中Notch1的表达,并观察每一时期食管癌细胞株的凋亡情况。结果:在食管癌细胞株中Notch1基因低表达,此外,转染Notch1后的细胞株Notch1表达量与转染空载体相比有明显差异(F=80.442,P<0.05)。经组间两两比较,实验组食管癌细胞株的Notch1的表达量在12h时比对照组食管癌细胞株的表达量显著增高(P<0.01),前者约为后者的4.6倍。但48h至72h时Notch1表达量实验组与对照组食管癌细胞株无显著性差异(P>0.05)。进一步通过倒置显微镜发现48h至72h细胞出现大量凋亡的现象。上述结果说明12hNotch1表达量的增加,使食管癌细胞EC9706中的Notch1信号途径得以激活,该途径激活后导致48h到72h时的细胞大量凋亡。结论:Notch1在食管癌细胞中的激活引起细胞大量凋亡,提示Notch1基因有可能成为治疗食管癌的新靶点。 展开更多
关键词 NOTCH1 EC9706 免疫细胞化学 WESTERN blotting
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从毕赤酵母中提取外源重组蛋白的超声破碎条件及优化 被引量:12
13
作者 戴佳锟 李燕 +5 位作者 马齐 关正君 张超 张艳婷 赵荣荣 尉亚辉 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第10期57-60,共4页
建立适用于从毕赤酵母菌中提取外源重组蛋白的超声破碎方法。采用Western Blotting免疫印记技术检测从毕赤酵母菌中提取的外源人脂联素蛋白活性,并以外源人脂联素蛋白活性作为考察指标,采用单因素和L9(33)正交试验设计,对超声破碎条件... 建立适用于从毕赤酵母菌中提取外源重组蛋白的超声破碎方法。采用Western Blotting免疫印记技术检测从毕赤酵母菌中提取的外源人脂联素蛋白活性,并以外源人脂联素蛋白活性作为考察指标,采用单因素和L9(33)正交试验设计,对超声破碎条件进行优化。结果表明:在外源人脂联素蛋白活性最高的情况下,超声破碎条件为超声破碎功率450W、时间25min、时间间隔(工作时间:间歇时间)10:10(s/s),此时细胞破碎率为(67.8±2.1)%。若在超声破碎时添加1mmol/L PMSF,虽对细胞破碎率并无显著影响,但外源人脂联素蛋白活性将会明显增高。 展开更多
关键词 毕赤酵母 超声破碎法 人脂联素蛋白 WESTERN blotting免疫印记技术
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家蚕30kD特异性变应原的分析、纯化与质谱鉴定 被引量:13
14
作者 刘志刚 张杰 林格 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期101-105,共5页
以Coca’s提取液分别提取到不同时期家蚕Bombyx mori的粗浸液,利用SDS-PAGE和Western blotting鉴定其特异性变应原,然后用DEAE-52离子交换层析及切胶纯化出30kD的特异性变应原,再经MALDI—TOF在线联机分析,所得质谱数据进入网站搜... 以Coca’s提取液分别提取到不同时期家蚕Bombyx mori的粗浸液,利用SDS-PAGE和Western blotting鉴定其特异性变应原,然后用DEAE-52离子交换层析及切胶纯化出30kD的特异性变应原,再经MALDI—TOF在线联机分析,所得质谱数据进入网站搜索分析。结果显示:1~5龄家蚕均有20条左右蛋白带,其中5龄家蚕有23条蛋白带,主带有11条(82、79、60、51、46、38、32、30、28、24和18kD)。选用家蚕过敏患者阳性血清进行免疫印迹,1-4龄家蚕均显示出82和79kD的特异性变应原;但只有5龄家蚕的30kD蛋白为特异性变应原,通过离子交换层析和经切胶纯化出30kD蛋白,再经MALDI—TOF—MS鉴定该蛋白为外膜蛋白。提示家蚕不同时期抗原成分有所变化,5龄家蚕新出现的30kD蛋白为特异性变应原。 展开更多
关键词 家蚕 过敏原 SDS-PAGE Western blotting 离子交换层析 质谱分析
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心肌缺血日负荷对新西兰兔血管内皮生长因子表达的影响 被引量:18
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作者 王骏 励建安 +3 位作者 金挺剑 陈子庆 顾劲扬 王元会 《中国康复医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期165-168,共4页
要目的:观察心肌缺血日负荷对新西兰兔血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:健康成年新西兰兔38只,体重2.0—2.5kg。根据日缺血次数随机分为2次/日组、4次/日组、6次/日组、假手术组以及正常组。将气囊梗阻器安装在冠状动脉左室支,... 要目的:观察心肌缺血日负荷对新西兰兔血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:健康成年新西兰兔38只,体重2.0—2.5kg。根据日缺血次数随机分为2次/日组、4次/日组、6次/日组、假手术组以及正常组。将气囊梗阻器安装在冠状动脉左室支,制作间断性心肌缺血模型。缺血负荷为2min/h,缺血刺激4周。取缺血区心肌观察形态学变化;WesternBlotting方法检测VEGF蛋白在缺血区心肌的表达水平;取兔术前和缺血刺激前、后24h血清检测肌钙蛋白(cTnI)。结果:气囊充气可以有效、迅速地诱发心肌缺血;与假手术组和正常组相比,缺血刺激2次/日组、4次/日组、6次/日组缺血心肌VEGF表达升高(P<0.05),各缺血刺激组间的VEGF表达无差异;各组左室支支配区未见心肌坏死和血栓形成;兔缺血刺激后24h血清肌钙蛋白无明显升高。结论:持续4周的间断性心肌缺血对心肌无损伤,可以显著提高缺血区心肌VEGF表达增加,不同刺激频率对其表达无明显影响。 展开更多
关键词 新西兰兔 血管内皮生长因子(VEGF) blotting VEGF表达 Western 心肌缺血模型 VEGF蛋白 血清肌钙蛋白 形态学变化 性心肌缺血 缺血区 冠状动脉 缺血负荷 血清检测 气囊充气 缺血心肌 血栓形成 心肌坏死 刺激频率 正常组
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绢丝昆虫柳蚕的生物学特性和卵黄原蛋白鉴定 被引量:9
16
作者 董胜张 刘朝良 +1 位作者 汪泰初 朱保建 《蚕业科学》 CAS CSCD 2003年第4期439-442,共4页
柳蚕 (ActiasseleneH櫣bner)是一种野生绢丝昆虫。通过室内饲养的方法 ,观察了柳蚕的生物学特性和卵孔的显微特征 ,在合肥地区的幼虫 4眠 5龄 ,二化性 ,蛹滞育 ,染色体n =31,全龄期达 4 0d以上。通过SDS PAGE和Westernblotting鉴定 ... 柳蚕 (ActiasseleneH櫣bner)是一种野生绢丝昆虫。通过室内饲养的方法 ,观察了柳蚕的生物学特性和卵孔的显微特征 ,在合肥地区的幼虫 4眠 5龄 ,二化性 ,蛹滞育 ,染色体n =31,全龄期达 4 0d以上。通过SDS PAGE和Westernblotting鉴定 ,柳蚕的卵黄原蛋白是由大小 2个亚基组成 ,分子量分别为 175kD和 4 5kD ,存在组织、时期。 展开更多
关键词 柳蚕 野生绢丝昆虫 生物学特性 卵黄原蛋白 卵孔 WESTERN blotting鉴定 SDS-PAGE 分子量
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内源性H_2S对糖尿病肾病细胞外基质积聚的作用 被引量:7
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作者 黄雯 李晓璐 +2 位作者 陈燊 张红 杨敏 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2009年第2期133-136,共4页
目的观察糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠肾组织中纤维黏连蛋白(fibronectin,FN)分布及含量变化,探讨内源性硫化氢(H2S)对糖尿病肾病细胞外基质积聚的作用。方法雄性SD大鼠28只用数字表法随机分为对照组、DN组、H2S干预组和胱... 目的观察糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠肾组织中纤维黏连蛋白(fibronectin,FN)分布及含量变化,探讨内源性硫化氢(H2S)对糖尿病肾病细胞外基质积聚的作用。方法雄性SD大鼠28只用数字表法随机分为对照组、DN组、H2S干预组和胱硫醚-γ裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)阻断剂组,每组7只。用免疫组织化学法及Western blotting免疫印迹法检测各组大鼠肾组织中FN分布及含量。结果1)对照组大鼠FN主要分布于系膜基质和肾小囊壁;DN组和CSE阻断剂组大鼠肾小球基质中FN的分布增加;与DN组及CSE阻断剂组比较,H2S组大鼠FN的分布明显减少。2)与对照组比较,DN组大鼠FN的含量增加,Western blotting检测结果显示,DN组(48896±779)与对照组(38531±902)比较差异有统计学意义(P<0.01);与DN组、CSE阻断剂组比较,H2S组中FN的含量下降,Western blotting结果显示,H2S干预组(42737±1196)与DN组(48896±779)、CSE阻断剂组(48252±1068)比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论内源性H2S可抑制DN大鼠肾脏中细胞外基质的过度积聚,延缓糖尿病肾病的病理改变。 展开更多
关键词 硫化氢 糖尿病肾病 纤维黏连蛋白 WESTERN blotting
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甘草总黄酮对高脂条件下罗非鱼肝损伤的保护作用 被引量:5
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作者 杜金梁 曹丽萍 +6 位作者 贾睿 顾郑琰 何勤 徐跑 JENEY Galina 马玉忠 殷国俊 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2021年第10期1826-1835,共10页
为了研究甘草总黄酮对高脂饲料造成的罗非鱼(Oreochromis niloticus)脂肪肝损伤是否具有保护作用,随机将180尾健康无伤罗非鱼分成6组,即对照组、高脂饲料模型组和4个不同浓度甘草总黄酮组(0.05、0.10、0.50、1.00 g·kg^(-1)甘草总... 为了研究甘草总黄酮对高脂饲料造成的罗非鱼(Oreochromis niloticus)脂肪肝损伤是否具有保护作用,随机将180尾健康无伤罗非鱼分成6组,即对照组、高脂饲料模型组和4个不同浓度甘草总黄酮组(0.05、0.10、0.50、1.00 g·kg^(-1)甘草总黄酮),每组30尾。饲喂90 d后,采集罗非鱼各实验组肝,测定肝匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)活性、还原型谷胱甘肽(GSH)活性、丙二醛(MDA)含量、甘油三酯(TG)含量、总胆固醇(TC)含量、总抗氧化能力(T-AOC)水平,Western blotting法检测肝中核转录因子-κB P65(NF-κB P65)和核转录因子-κB C-Rel(NF-κB C-Rel)蛋白表达水平,RT-PCR法测定肝中微粒体甘油三酸酯转移蛋白(MTTP)和载脂蛋白B100(ApoB100)基因表达情况。结果表明:与对照组相比,高脂饲料模型组罗非鱼肝匀浆中TG、TC、MDA含量极显著(P<0.01)升高,GSH活性、SOD活性、T-AOC水平均极显著(P<0.01)降低;MTTP和ApoB100 mRNA表达水平降低(P<0.01或P<0.05);Western blotting结果显示,NF-κB P 65和C-Rel蛋白表达水平升高。饲料中加入甘草总黄酮后,与高脂饲料模型组相比,罗非鱼肝中GSH活性、SOD活性、T-AOC水平不同程度提高,TC、TG、MDA含量和NF-κB P65、C-Rel蛋白表达水平不同程度降低,MTTP和ApoB100的mRNA表达水平升高,以0.50 g·kg^(-1)甘草总黄酮组效果较好。说明甘草总黄酮对于罗非鱼脂肪肝损伤具有一定的保护作用,可以缓解高脂饲料造成的脂肪肝损伤。 展开更多
关键词 甘草 总黄酮 罗非鱼 脂肪肝 基因表达 Western blotting
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棉花咖啡酸-O-甲基转移酶基因的原核表达及蛋白纯化鉴定 被引量:8
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作者 李波 倪志勇 +1 位作者 石庆华 范玲 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1738-1743,共6页
为获得大量高纯度的GhCOMT2蛋白以便研究其功能和性质,以pMD18-GhCOMT2质粒为模板,PCR扩增GhCOMT2基因的cDNA编码区,构建原核表达载体pET-28a-GhCOMT2,经酶切鉴定并测序后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,并采用Western blottin... 为获得大量高纯度的GhCOMT2蛋白以便研究其功能和性质,以pMD18-GhCOMT2质粒为模板,PCR扩增GhCOMT2基因的cDNA编码区,构建原核表达载体pET-28a-GhCOMT2,经酶切鉴定并测序后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,并采用Western blotting方法鉴定表达产物。结果表明:在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中成功表达了与标签蛋白融合的GhCOMT2蛋白,大小约为40.062 kD,浓度为0.62 mg/mL。重组蛋白的最佳诱导条件为:0.2 mmol/LIPTG在16℃诱导12 h。重组蛋白以可溶形式高效表达,用蛋白标签亲和层析柱(HisTrapTMHP)获得纯化重组蛋白,Western blotting分析表明其能与His多克隆抗体起特异性反应。 展开更多
关键词 GhCOMT2 原核表达 蛋白纯化 WESTERN blotting
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雄激素受体基因在绵羊公羔不同组织中的表达特性及性腺中的定位 被引量:4
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作者 李振 任有蛇 +3 位作者 焦光月 白元生 秦小伟 张春香 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1251-1257,共7页
旨在研究雄激素受体(Androgen receptors,ARs)基因在绵羊公羔不同组织中的表达特性及在性腺中的定位。本研究以QRT-PCR法检测各组织ARmRNA表达规律,免疫组化技术对睾丸和附睾中AR进行定位分析,蛋白质印迹技术对AR蛋白表达量进行定性研... 旨在研究雄激素受体(Androgen receptors,ARs)基因在绵羊公羔不同组织中的表达特性及在性腺中的定位。本研究以QRT-PCR法检测各组织ARmRNA表达规律,免疫组化技术对睾丸和附睾中AR进行定位分析,蛋白质印迹技术对AR蛋白表达量进行定性研究。结果显示:(1)AR在不同组织中均有不同程度的表达,其中在睾丸和心脏中大量表达;(2)在附睾头、体、尾部单层柱状上皮细胞和间质细胞中检测到较弱的阳性信号;睾丸组织间质细胞、精原细胞、管周肌样细胞检测到强阳性信号。综上表明:AR在绵羊不同组织中广泛表达,AR在性腺的发育和精子的成熟过程以及对心脏的保护方面发挥重要作用,其作用机制需进一步研究。 展开更多
关键词 雄激素受体基因(AR) 绵羊 QRT-PCR WESTERN blotting 睾丸 附睾
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