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叶酸缺乏的小鼠胚胎干细胞ES-D3中miR-302a、Bcl2L11表达观察及其靶向关系预测和验证
被引量：
2
1
作者
梁燕
曹丁丁
+2 位作者
李媛媛
刘卓
吴建新
《山东医药》
CAS
2020年第30期40-44,共5页
目的观察叶酸缺乏的小鼠胚胎干细胞系ES-D3中微小RNA302a(miR-302a)、Bcl2L11的表达变化,并对miR-302a与Bcl2L11的靶向关系进行预测和验证。方法取适量ES-D3细胞,置于缺乏叶酸的培养液中培养,分别于培养0、24、48、72 h(A、B、C、D组)...
目的观察叶酸缺乏的小鼠胚胎干细胞系ES-D3中微小RNA302a(miR-302a)、Bcl2L11的表达变化,并对miR-302a与Bcl2L11的靶向关系进行预测和验证。方法取适量ES-D3细胞,置于缺乏叶酸的培养液中培养,分别于培养0、24、48、72 h(A、B、C、D组)时收集细胞,实时荧光定量PCR法检测miR-302a、Bcl2L11 mRNA,Western blotting法检测细胞Bcl2L11蛋白(BimEL、BimL及BimS蛋白)。生物信息学软件预测Bcl2L11与miR-302a的靶向结合位点。以小鼠3T3细胞基因组DNA为模板,设计3’UTR扩增引物,PCR扩增基因的3’UTR序列,将其克隆到pmiR-RB-REPORT双荧光素酶报告载体中,构建Bcl2L11-3’UTR野生载体;设计突变引物将靶标序列突变,构建突变载体,miRNA-302a mimics及Negative Control分别与Bcl2L113’UTR双报告基因野生载体及突变载体共转染,分别为1组(Bcl2L113’UTR野生型载体+Negative Control)、2组(Bcl2L113’UTR野生型载体+miR-302a mimics)、3组(Bcl2L113’UTR突变型载体+Negative Control)、4组(Bcl2L113’UTR突变型载体+miR-302a mimics),转染后测算各组报告基因hRluc的相对荧光值,验证miR-302a与Bcl2L11是否存在相互作用。结果A、B、C、D组细胞miR-302a相对表达量分别为1.00±0.20、0.65±0.32、0.50±0.22、0.43±0.24,与A组比较,D组miR-302a相对表达量下降(P<0.05);A、B、C、D组细胞Bcl2L11 mRNA相对表达量分别为1.00±0.00、1.22±0.19、1.82±0.37、3.49±0.45,与A组比较,D组Bcl2L11 mRNA相对表达量升高(P<0.05);A、B、C、D组细胞BimEL相对表达量分别为0.86±0.02、0.87±0.03、0.92±0.02、1.10±0.06,与A组比较,C、D组BimEL相对表达量升高(P<0.05);A、B、C、D组细胞BimL相对表达量分别为0、0.09±0.02、0.16±0.04、0.26±0.03,与A组比较,B、C、D组BimL相对表达量升高(P<0.05);A、B、C、D组细胞BimS相对表达量分别为0、0、0.11±0.04、0.18±0.04,与A组比较,C、D组BimS相对表达量升高(P<0.05)。miR-302a和Bcl2L11存在相互作用。1、2、3、4组报告基因hRluc的相对荧光值分别为1.00±0.07、0.64±0.02、1.00±0.03、0.95±0.06,与其他组比较,2组相对荧光值降低(P<0.05)。结论叶酸缺乏的ES-D3细胞中miR-302a表达下调、Bcl2L11 mRNA及蛋白表达上调。miR-302a与Bcl2L11基因有较强的相互作用,胚胎干细胞凋亡过程中Bcl2L11为miR-302a的靶基因。
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关键词
微小RNA
微小RNA302a
凋亡调节蛋白
bcl2l11
基因
叶酸缺乏
胚胎干细胞
细胞凋亡
胚胎发育
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职称材料
miR-665靶向BCL 2L11调控武安山羊成肌细胞增殖
2
作者
冯婧
盛辉
+5 位作者
张效生
郭晓飞
姚大为
李玉鹏
陈龙宾
张金龙
《畜牧兽医学报》
北大核心
2025年第2期582-590,共9页
旨在利用分子生物学方法探究miR-665靶向调控BCL 2L11对山羊成肌细胞增殖的影响。本研究选取1月龄和9月龄的健康山公羊各3只,各年龄段体重均接近且饲养环境相同。本试验通过RT-qPCR分析BCL 2L11在武安山羊不同组织中的表达情况;利用RT-q...
旨在利用分子生物学方法探究miR-665靶向调控BCL 2L11对山羊成肌细胞增殖的影响。本研究选取1月龄和9月龄的健康山公羊各3只,各年龄段体重均接近且饲养环境相同。本试验通过RT-qPCR分析BCL 2L11在武安山羊不同组织中的表达情况;利用RT-qPCR检测了不同月龄武安山羊背最长肌组织中BCL 2L11和miRNA-665的表达情况;构建了BCL 2L113′UTR野生型和突变型载体,以及miR-665 mimics和对照组,将其共转染到HEK293T细胞,通过使用双荧光素酶报告基因检测系统鉴定了miR-665与BCL 2L11存在靶向性关系。在山羊成肌细胞转染miR-665 mimic及阴性对照,采用RT-qPCR检测了细胞凋亡标志因子XIAP和Fas表达水平,同时利用EdU试验分析miR-665过表达对山羊成肌细胞增殖的影响。结果表明,BCL 2L11在背最长肌组织中高表达;miR-665和BCL 2L11在9月龄和1月龄山羊背最长肌组织中表达情况存在差异,miR-665在1月龄的表达量高于9月龄,而BCL2L11则相反,两者存在负调控现象;通过双荧光素酶报告分析显示,当转染过表达miR-665 mimic后,显著抑制了BCL 2L11荧光素酶的活性,同时靶基因BCL 2L11的mRNA表达水平也明显降低。为进一步验证miR-665的功能,转染miR-665 mimic后发现细胞凋亡标志基因XIAP与Fas的表达量也显著降低;EdU试验分析显示,过表达miR-665后促进了成肌细胞的增殖。综上所述,在山羊背最长肌组织中miR-665作为BCL 2L11的调控元件,能够显著抑制山羊成肌细胞中BCL 2L11的表达水平,当miR-665过表达后,能够促进成肌细胞的增殖情况。
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关键词
miR-665
BCL
2L11
肌肉
武安山羊
成肌细胞
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职称材料
题名
叶酸缺乏的小鼠胚胎干细胞ES-D3中miR-302a、Bcl2L11表达观察及其靶向关系预测和验证
被引量：
2
1
作者
梁燕
曹丁丁
李媛媛
刘卓
吴建新
机构
山东第一医科大学附属省立医院
首都儿科研究所
出处
《山东医药》
CAS
2020年第30期40-44,共5页
基金
北京市医院管理中心儿科学科协同发展中心专项经费(XTZD20180402)。
文摘
目的观察叶酸缺乏的小鼠胚胎干细胞系ES-D3中微小RNA302a(miR-302a)、Bcl2L11的表达变化,并对miR-302a与Bcl2L11的靶向关系进行预测和验证。方法取适量ES-D3细胞,置于缺乏叶酸的培养液中培养,分别于培养0、24、48、72 h(A、B、C、D组)时收集细胞,实时荧光定量PCR法检测miR-302a、Bcl2L11 mRNA,Western blotting法检测细胞Bcl2L11蛋白(BimEL、BimL及BimS蛋白)。生物信息学软件预测Bcl2L11与miR-302a的靶向结合位点。以小鼠3T3细胞基因组DNA为模板,设计3’UTR扩增引物,PCR扩增基因的3’UTR序列,将其克隆到pmiR-RB-REPORT双荧光素酶报告载体中,构建Bcl2L11-3’UTR野生载体;设计突变引物将靶标序列突变,构建突变载体,miRNA-302a mimics及Negative Control分别与Bcl2L113’UTR双报告基因野生载体及突变载体共转染,分别为1组(Bcl2L113’UTR野生型载体+Negative Control)、2组(Bcl2L113’UTR野生型载体+miR-302a mimics)、3组(Bcl2L113’UTR突变型载体+Negative Control)、4组(Bcl2L113’UTR突变型载体+miR-302a mimics),转染后测算各组报告基因hRluc的相对荧光值,验证miR-302a与Bcl2L11是否存在相互作用。结果A、B、C、D组细胞miR-302a相对表达量分别为1.00±0.20、0.65±0.32、0.50±0.22、0.43±0.24,与A组比较,D组miR-302a相对表达量下降(P<0.05);A、B、C、D组细胞Bcl2L11 mRNA相对表达量分别为1.00±0.00、1.22±0.19、1.82±0.37、3.49±0.45,与A组比较,D组Bcl2L11 mRNA相对表达量升高(P<0.05);A、B、C、D组细胞BimEL相对表达量分别为0.86±0.02、0.87±0.03、0.92±0.02、1.10±0.06,与A组比较,C、D组BimEL相对表达量升高(P<0.05);A、B、C、D组细胞BimL相对表达量分别为0、0.09±0.02、0.16±0.04、0.26±0.03,与A组比较,B、C、D组BimL相对表达量升高(P<0.05);A、B、C、D组细胞BimS相对表达量分别为0、0、0.11±0.04、0.18±0.04,与A组比较,C、D组BimS相对表达量升高(P<0.05)。miR-302a和Bcl2L11存在相互作用。1、2、3、4组报告基因hRluc的相对荧光值分别为1.00±0.07、0.64±0.02、1.00±0.03、0.95±0.06,与其他组比较,2组相对荧光值降低(P<0.05)。结论叶酸缺乏的ES-D3细胞中miR-302a表达下调、Bcl2L11 mRNA及蛋白表达上调。miR-302a与Bcl2L11基因有较强的相互作用,胚胎干细胞凋亡过程中Bcl2L11为miR-302a的靶基因。
关键词
微小RNA
微小RNA302a
凋亡调节蛋白
bcl2l11
基因
叶酸缺乏
胚胎干细胞
细胞凋亡
胚胎发育
Keywords
microRNA
microRNA-302a
apoptosis-regulated proteins
bcl2l11
gene
folate deficiency
embryonic stem cells
apoptosis
embryonic development
分类号
R394.3 [医药卫生—医学遗传学]
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职称材料
题名
miR-665靶向BCL 2L11调控武安山羊成肌细胞增殖
2
作者
冯婧
盛辉
张效生
郭晓飞
姚大为
李玉鹏
陈龙宾
张金龙
机构
天津市农业科学院畜牧兽医研究所
天津市畜禽分子育种与生物技术重点实验室
天津市畜禽健康养殖工程技术中心
出处
《畜牧兽医学报》
北大核心
2025年第2期582-590,共9页
基金
天津市科技计划项目(23YFZCSN00170,23ZYCGSN00090)
天津市自然科学基金(23JCYBJC00260)
天津市农业科学院种业创新项目(2024ZYCX012)。
文摘
旨在利用分子生物学方法探究miR-665靶向调控BCL 2L11对山羊成肌细胞增殖的影响。本研究选取1月龄和9月龄的健康山公羊各3只,各年龄段体重均接近且饲养环境相同。本试验通过RT-qPCR分析BCL 2L11在武安山羊不同组织中的表达情况;利用RT-qPCR检测了不同月龄武安山羊背最长肌组织中BCL 2L11和miRNA-665的表达情况;构建了BCL 2L113′UTR野生型和突变型载体,以及miR-665 mimics和对照组,将其共转染到HEK293T细胞,通过使用双荧光素酶报告基因检测系统鉴定了miR-665与BCL 2L11存在靶向性关系。在山羊成肌细胞转染miR-665 mimic及阴性对照,采用RT-qPCR检测了细胞凋亡标志因子XIAP和Fas表达水平,同时利用EdU试验分析miR-665过表达对山羊成肌细胞增殖的影响。结果表明,BCL 2L11在背最长肌组织中高表达;miR-665和BCL 2L11在9月龄和1月龄山羊背最长肌组织中表达情况存在差异,miR-665在1月龄的表达量高于9月龄,而BCL2L11则相反,两者存在负调控现象;通过双荧光素酶报告分析显示,当转染过表达miR-665 mimic后,显著抑制了BCL 2L11荧光素酶的活性,同时靶基因BCL 2L11的mRNA表达水平也明显降低。为进一步验证miR-665的功能,转染miR-665 mimic后发现细胞凋亡标志基因XIAP与Fas的表达量也显著降低;EdU试验分析显示,过表达miR-665后促进了成肌细胞的增殖。综上所述,在山羊背最长肌组织中miR-665作为BCL 2L11的调控元件,能够显著抑制山羊成肌细胞中BCL 2L11的表达水平,当miR-665过表达后,能够促进成肌细胞的增殖情况。
关键词
miR-665
BCL
2L11
肌肉
武安山羊
成肌细胞
Keywords
miR-665
BCL 2L11
muscle
Wu’an goat
myoblast
分类号
S827.2 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
叶酸缺乏的小鼠胚胎干细胞ES-D3中miR-302a、Bcl2L11表达观察及其靶向关系预测和验证
梁燕
曹丁丁
李媛媛
刘卓
吴建新
《山东医药》
CAS
2020
2
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职称材料
2
miR-665靶向BCL 2L11调控武安山羊成肌细胞增殖
冯婧
盛辉
张效生
郭晓飞
姚大为
李玉鹏
陈龙宾
张金龙
《畜牧兽医学报》
北大核心
2025
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