小鼠白细胞介素18基因克隆、测序及重组质粒pIRES-IL18-B7.1的构建 被引量：1

1

作者 金光辉 田梅 +1 位作者 金顺子 刘树铮 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期125-127,共3页

目的 :克隆小鼠白细胞介素 1 8( m IL- 1 8)编码区的 c DNA序列并构建其表达载体。方法 :利用逆转录多聚酶链反应 ( RT- PCR)法 ,以小鼠脾细胞 m RNA为模板 ,扩增获得全长 m IL-1 8,与 p MD1 8T连接作全自动测序 ,并利用基因重组技术构... 目的 :克隆小鼠白细胞介素 1 8( m IL- 1 8)编码区的 c DNA序列并构建其表达载体。方法 :利用逆转录多聚酶链反应 ( RT- PCR)法 ,以小鼠脾细胞 m RNA为模板 ,扩增获得全长 m IL-1 8,与 p MD1 8T连接作全自动测序 ,并利用基因重组技术构建包含 m IL- 1 8和 B7.1的双基因表达质粒 p IRES- IL1 8- B7.1。结果 :经测序证实获得的 m IL- 1 8序列与文献报道完全一致 ,并成功构建了表达质粒。结论 :成功克隆了 m IL- 1 8的 c DNA,并构建了双基因表达载体 p IRES- IL1 8- B7. 展开更多

关键词 白细胞介素18/免疫学 b7.1 逆转录聚合酶链反应/方法 pIRES—IL18-b7.1表达载体

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ZnPcS_2P_2介导的光动力疗法联合mGM-CSF、mB7.1基因修饰的瘤苗治疗小鼠淋巴瘤 被引量：5

2

作者 黄慧芳 陈元仲 +1 位作者 吴勇 李乃农 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期99-102,共4页

目的研究两亲性酞菁锌光敏剂ZnPcS2P2介导的光动力疗法(ZnPc-PDT)联合GM-CSF、B7.1基因修饰的EL-4细胞,对小鼠淋巴瘤的抑制作用。方法应用反复多次转染的方法,分别将逆转录病毒pLXSN、pLXSNmGM-CSF、pLXS-NmB7.1导入EL-4细胞,分别命名为... 目的研究两亲性酞菁锌光敏剂ZnPcS2P2介导的光动力疗法(ZnPc-PDT)联合GM-CSF、B7.1基因修饰的EL-4细胞,对小鼠淋巴瘤的抑制作用。方法应用反复多次转染的方法,分别将逆转录病毒pLXSN、pLXSNmGM-CSF、pLXS-NmB7.1导入EL-4细胞,分别命名为EL-4/pLXSN、EL-4/GM和EL-4/B7。进行ZnPc-PDT时,经荷瘤小鼠的尾静脉注射ZnPcS2P2,4h后局部用波长670nm的激光照射瘤体;光源为670nm的半导体激光仪。将40只荷瘤小鼠分为5组,每组8只,即对照组(不做任何处理)、EL-4/B7+EL-4/GM对照组、ZnPc-PDT对照组、ZnPc-PDT+EL-4/pLXSN对照组、ZnPc-PDT+EL-4/B7+EL-4/GM实验组。隔天测量瘤块的大小,观察荷瘤小鼠淋巴瘤的生长情况,并计算瘤块的相对体积(RTV)。观察荷瘤小鼠的生存期及瘤组织的病理学改变。结果实验组的生存率高于各个对照组(P<0.01)。Zn-Pc-PDT组小鼠的生存期略高于EL-4/B7+EL-4/GM组(P=0.01)。结论mB7.1、mGM-CSF基因修饰的瘤苗可显著增强ZnPc-PDT的抗肿瘤效应。 展开更多

关键词 PDT 酞菁锌 淋巴瘤 GM—CSF b7.1 免疫基因治疗

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CCK-8对LPS作用下巨噬细胞B7.1和B7.2表达及其协同刺激功能的影响 被引量：3

3

作者 张风华 李淑瑾 +7 位作者 丛斌 张正茂 朱桂军 马春玲 丛军 刘宁 倪志宇 付丽红 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1271-1275,共5页

目的探讨八肽胆囊收缩素（CCK-8）对LPS活化的巨噬细胞B7．1和B7．2表达及其协同刺激功能的影响。方法用CCK-8（10^-12～10^-6）mol·L^-1和（或）脂多糖（LPS）孵育小鼠腹腔巨噬细胞，采用流式细胞术分析细胞表面B7．1和B7．2含量... 目的探讨八肽胆囊收缩素（CCK-8）对LPS活化的巨噬细胞B7．1和B7．2表达及其协同刺激功能的影响。方法用CCK-8（10^-12～10^-6）mol·L^-1和（或）脂多糖（LPS）孵育小鼠腹腔巨噬细胞，采用流式细胞术分析细胞表面B7．1和B7．2含量的变化，用免疫磁珠从小鼠脾细胞分离CD4^＋T细胞，按4：1数量比与腹腔巨噬细胞[预先用LPS、CCK-8和（或）抗B7．1抗体、抗B7．2抗体、CCK1R拮抗剂CR1409、CCK2R拮抗剂CR2945孵育24h]共同体外培养，同时加入ConA5mg·L^-1，采用^3H参入法测定CD4^＋T细胞增殖反映巨噬细胞的协同刺激活性。结果CCK-8可以下调LPS诱导的巨噬细胞的B7．1和B7．2表达，抑制LPS活化的巨噬细胞的协同刺激活性。CCK-8的作用呈剂量依赖性，最大效应剂量在（10^-7-10^-9）mol·L^-1之间。CR1409及CR2945均能逆转CCK-8的上述作用，且CR1409的作用较CR2945更明显。抗B7．1抗体和抗B7．2抗体可减轻LPS活化的巨噬细胞协同刺激活性。结论CCK-8通过下调LPS诱导的巨噬细胞B7．1和B7．2表达而抑制其协同刺激活性，该作用由CCK1R及CCK2R介导，其中CCK1R起主要介导作用。 展开更多

关键词 CCK-8 b7.1 B7.2 LPS 巨噬细胞 协同刺激

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抗CD28+B7.1单抗共刺激T细胞诱导肝癌细胞凋亡的第二信使系统研究 被引量：4

4

作者 杨红 彭立胜 +1 位作者 钟肖芬 黄树林 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第10期541-543,共3页

目的 :探讨T淋巴细胞活化、增殖、诱导肝癌细胞凋亡过程中第二信使系统的调控机制。方法 :用CD2 8+B7 1(CD80 )单克隆抗体共刺激T淋巴细胞诱导肝癌细胞 (BLE 740 2 )凋亡 ,测定不同诱导时间T细胞内cAMP、cGMP和Ca2 + 的浓度改变及肝癌... 目的 :探讨T淋巴细胞活化、增殖、诱导肝癌细胞凋亡过程中第二信使系统的调控机制。方法 :用CD2 8+B7 1(CD80 )单克隆抗体共刺激T淋巴细胞诱导肝癌细胞 (BLE 740 2 )凋亡 ,测定不同诱导时间T细胞内cAMP、cGMP和Ca2 + 的浓度改变及肝癌细胞凋亡情况。结果 :活化的T淋巴细胞中 ,cAMP浓度在初期短暂升高 ,继而快速下降 ,作用于肝癌细胞后逐步回升至 1～ 2倍 ,而细胞内cGMP的浓度急剧升高 6～ 7倍 ,Ca2 + 浓度也显著增加 2～ 3倍 ,且均在第 4天达最高值 ,与癌细胞的凋亡呈正相关。结论 :T淋巴细胞内第二信使系统cAMP、cGMP和Ca2 + 的水平与细胞的活化增殖、杀伤效应密切相关。 展开更多

关键词 抗CD28+b7.1(CD80)单抗 细胞凋亡 cAMP cGMP Ca^2+ 第二信使系统 肝癌

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GHA预激化疗方案对难治性急性髓系白血病和骨髓增生异常综合征的疗效及其与共刺激分子B7.1表达的关系 被引量：6

5

作者 陈银霞 马肖容 +3 位作者 张王刚 刘捷 曹星梅 何爱丽 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2008年第5期1002-1005,共4页

本研究探讨G-CSF联合高三尖杉酯碱(homoharringtonine)和小剂量阿糖胞苷(cytarabine,Ara-C)的GHA预激化疗方案治疗难治性急性髓系白血病(AML)和骨髓增生异常综合征(MDS)的临床疗效和不良反应,寻求高效低毒的新型化疗方案,探索其与共刺... 本研究探讨G-CSF联合高三尖杉酯碱(homoharringtonine)和小剂量阿糖胞苷(cytarabine,Ara-C)的GHA预激化疗方案治疗难治性急性髓系白血病(AML)和骨髓增生异常综合征(MDS)的临床疗效和不良反应,寻求高效低毒的新型化疗方案,探索其与共刺激分子B7.1的关系。应用GHA标准预激化疗方案G-CSF[200μg/(m2·d)皮下注射,第1-14天];高三尖杉酯碱[1mg/(m2·d)静脉点滴,第1-14天];阿糖胞苷[10mg/m2,皮下注射,每12小时1次,第1-14天]治疗79例难治性急性髓系白血病和21例骨髓增生异常综合征,与传统MA方案化疗组比较,观察临床疗效和不良反应、治疗相关死亡率并随访。应用免疫荧光法检测各组肿瘤细胞上共刺激分子B7.1的表达并与临床疗效比较。结果表明:GHA预激化疗治疗后难治性AML缓解率60.7%(完全缓解率43%,部分缓解率17.7%),治疗MDS有效率52.4%。粒细胞缺乏发生率25%,平均持续时间3.5天。重症感染发生率3%,无严重出血、消化道反应,心、肝、肾功能损害轻微,患者均痊愈。治疗相关死亡率为零。AML-M2组、AML-M5组完全缓解率较高(60.9%,61.9%),最长持续缓解期已4年。各组肿瘤细胞上共刺激分子B7.1表达阳性率差异较大(0%-66.7%),正常对照组为0,AML-M2组和AML-M5组明显高于其它AML组和正常对照组,且表达率与预激化疗疗效呈正相关。结论:GHA预激化疗方案治疗难治性急性髓系白血病和骨髓增生异常综合征疗效肯定,不良反应较轻,无严重毒副作用和治疗相关死亡率,无病生存期长,是高效低毒的新型化疗方案。肿瘤细胞上共刺激分子B7.1表达可能与预激化疗疗效有关,其机理尚需进一步研究。 展开更多

关键词 预激化疗 急性髓系白血病 骨髓增生异常综合征 b7.1

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肝癌细胞稳定转染B7.1后的免疫学特性 被引量：5

6

作者 李增山 隋延仿 +1 位作者 叶菁 郭爱林 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第2期148-151,共4页

目的探讨赋予肝癌细胞第二信号分子B7.1、增强癌细胞与淋巴细胞之间的识别与激活作用 ,从而达到增强淋巴细胞对肝癌细胞的杀伤或抑制作用。方法利用逆转录方法 ,转染B7.1分子至包装细胞系PA317。筛选获得高滴度的克隆后 ,以病毒上清感... 目的探讨赋予肝癌细胞第二信号分子B7.1、增强癌细胞与淋巴细胞之间的识别与激活作用 ,从而达到增强淋巴细胞对肝癌细胞的杀伤或抑制作用。方法利用逆转录方法 ,转染B7.1分子至包装细胞系PA317。筛选获得高滴度的克隆后 ,以病毒上清感染肝癌细胞 ,使其表达B7.1分子 ,最后以LDH释放法测定LAK细胞的细胞毒活性。结果肝癌细胞可稳定表达B7.1分子 ,阳性率达94.3% ,未转染的细胞无表达 ;其所诱发的LAK细胞的细胞毒活性明显强于未转染的肝癌细胞组(P<0.01)。结论B7.1分子在淋巴细胞与癌细胞之间的识别过程中起着重要作用 ,可介导淋巴细胞对癌细胞的粘附和识别 ,从而增强淋巴细胞的杀伤作用。这一结果可为今后进一步深入研究B7.1的作用机制 ,以及与其它细胞因子、粘附分子的相互作用打下基础。 展开更多

关键词 肝癌细胞 b7.1 免疫学特性

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同时表达4-1BBL B7.1及B7.2三个共刺激分子基因小鼠肝癌细胞系的建立和意义 被引量：3

7

作者 李国强 王学浩 +1 位作者 印洁 俞悦 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2006年第22期1261-1264,共4页

目的:建立同时表达4-1BBL、B7.1及B7.2三个共刺激分子基因小鼠原发性肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)细胞系。方法:将B7.1和B7.2全长cDNA的质粒酶切,构建pcDNA3.1-B7.1-IRES-B7.2重组子,酶切法鉴定。用阳离子脂质体(Lipofectamin... 目的:建立同时表达4-1BBL、B7.1及B7.2三个共刺激分子基因小鼠原发性肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)细胞系。方法:将B7.1和B7.2全长cDNA的质粒酶切,构建pcDNA3.1-B7.1-IRES-B7.2重组子,酶切法鉴定。用阳离子脂质体(LipofectamineReagent)将重组子转染H22,经均霉素(Hygromycin,300!g/ml)筛选,阳性克隆命名为H22-CD80/CD86+细胞。逆转录-聚合酶链反应(reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR)检测目的基因在H22-CD80/CD86+变异株的表达。采用同样方法将pCI-neo-4-1BBL质粒转入H22-CD80/CD86+细胞,G418筛选,阳性克隆命名为H22-CD80/CD86/CD137L+细胞。流式细胞仪检测三种基因在细胞克隆中的表达。结果:pcDNA3.1-B7.1-IRES-B7.2重组子经酶切鉴定,同时获得B7.1(862bp)和B7.2(984bp)目的基因片段和5.6kbp线性化pcDNA3.1载体片段;重组子测序结果与Genebank中B7.1和B7.2序列相符,证实构建成功。RT-PCR及FCM检测结果显示B7.1、B7.2及4-1BBL基因分别在H22-CD80/CD86+细胞及H22-CD80/CD86/CD137L+细胞中获得稳定、高效联合表达。结论:pcDNA3.1-B7.1-IRES-B7.2重组子构建正确,H22-CD80/CD86/CD137L+变异株可同时稳定表达B7.1、B7.2和4-1BBL三个共刺激分子基因。 展开更多

关键词 基因重组 癌肝细胞 b7.1 B7.2 4-1BBL

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B7.1及SEA基因共转染肝癌细胞的初步研究 被引量：2

8

作者 张宇梅 隋延仿 +2 位作者 严泉剑 李增山 于军 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期313-314,340,共3页

目的获得可表达共刺激分子B7.1和超抗原分子SEA的肝癌细胞株，检测其表达。方法用免疫组织化学方法，筛选表达B7.1及SEA的肝癌细胞阳性克隆。用流式细胞仪检测B7.1表达的阳性率，ELISA检测上清中SEA的含量。结果获得表达B7.1和SEA的肝... 目的获得可表达共刺激分子B7.1和超抗原分子SEA的肝癌细胞株，检测其表达。方法用免疫组织化学方法，筛选表达B7.1及SEA的肝癌细胞阳性克隆。用流式细胞仪检测B7.1表达的阳性率，ELISA检测上清中SEA的含量。结果获得表达B7.1和SEA的肝癌细胞株，培养上清中SEA的含量达10～14×10-8g/L。结论建立了免疫细胞在肝癌细胞上的SEA和B7.1联合识别效应系统。 展开更多

关键词 肝癌细胞 b7.1基因 SEA基因 肝癌 共转染

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B7.1基因的表达对肝癌细胞生物学特性的影响 被引量：3

9

作者 张宇梅 隋延仿 李增山 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第3期268-270,共3页

目的　观察B7 1基因表达对肝癌细胞增殖特性的影响及诱发杀伤性T淋巴细胞 (CTL)细胞毒活性的变化。方法　用细胞计数法和流式细胞仪 (FCM)测定细胞生长曲线、DNA含量及细胞周期的变化。同时测定CTL对转染B7 1基因前后肝癌细胞的细胞毒... 目的　观察B7 1基因表达对肝癌细胞增殖特性的影响及诱发杀伤性T淋巴细胞 (CTL)细胞毒活性的变化。方法　用细胞计数法和流式细胞仪 (FCM)测定细胞生长曲线、DNA含量及细胞周期的变化。同时测定CTL对转染B7 1基因前后肝癌细胞的细胞毒作用。结果　转染B7 1基因后 ,肝癌细胞的增殖受到一定影响 :生长延缓、增殖幅度降低和倍增时间延长。CTL对转染B7 1基因的肝癌细胞杀伤明显增强。结论　转染B7 1基因的肝癌细胞出现了一定的增殖抑制现象 ,提示B7 展开更多

关键词 肝癌细胞 b7.1基因 生长曲线 细胞周期 细胞毒

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人B7.1真核表达载体的构建、鉴定及其在白血病细胞上表达的实验研究 被引量：1

10

作者 马肖容 张王刚 +2 位作者 田玮 陈银霞 刘捷 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2009年第2期450-454,共5页

本研究构建包含人B7.1cDNA的重组真核表达载体pDisplay-hB7.1并鉴定,实现其在白血病细胞株HL-60细胞上的表达,获得HL60-hB7.1。应用分子克隆、PCR法扩增人B7.1基因片段,采用ApaI、SalI分别双酶切PCR产物和表达载体pHook,纯化后的酶切产... 本研究构建包含人B7.1cDNA的重组真核表达载体pDisplay-hB7.1并鉴定,实现其在白血病细胞株HL-60细胞上的表达,获得HL60-hB7.1。应用分子克隆、PCR法扩增人B7.1基因片段,采用ApaI、SalI分别双酶切PCR产物和表达载体pHook,纯化后的酶切产物由T4DNA连接酶连接,转导大肠杆菌DH5α;应用ApaI、SalI双酶切和DNA序列分析技术进一步鉴定阳性克隆pDisplay-hB7.1,应用脂质体转化技术将B7.1转染HL-60细胞,同一标本分别采用直接免疫荧光法、SABC法及FACS法鉴定hB7.1在HL-60细胞上的表达,阳性细胞命名为HL60-hB7.1。结果表明,PCR法扩增出约620bp的基因片段;连接产物转导感受态细胞后,共筛选出5个阳性克隆,均可经ApaI、SalI双酶切出大小约620bp的基因片段,与人B7.1基因片段大小相符,提示重组载体构建成功。进一步DNA序列分析证明人B7.1基因序列和读码框架正确,与文献报道人B7.1cDNA序列一致,无基因突变。直接免疫荧光法鉴定表明,HL60-hB7.1阳性细胞数为70%,SABC法鉴定为65%,FACS法鉴定为92.7%。经以上鉴定证实hB7.1cDNA已成功转染HL-60细胞株并在其膜上高效表达,获得了HL60-hB7.1。结论:应用分子克隆方法可成功构建人B7.1(CD80)重组真核表达载体,并稳定、高效表达B7.1-于HL-60细胞胞膜上,推测应用这种方案制备的瘤苗可能具有免疫治疗和免疫保护作用。 展开更多

关键词 b7.1真核表达载体 白血病 基因治疗 免疫治疗

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HLA-I分子对B7.1共刺激作用的影响 被引量：1

11

作者 李增山 隋延仿 叶菁 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第9期466-468,共3页

目的 :研究HLA I分子表达与B7 1分子的共刺激作用的相互关系 ,以探讨在肿瘤细胞所诱发的免疫排斥反应中共刺激分子对抗原递呈机制的影响。方法 :通过流式细胞仪 (FCM)检测转染共刺激分子B7 1编码基因前后其表面HLA I分子的表达情况。利... 目的 :研究HLA I分子表达与B7 1分子的共刺激作用的相互关系 ,以探讨在肿瘤细胞所诱发的免疫排斥反应中共刺激分子对抗原递呈机制的影响。方法 :通过流式细胞仪 (FCM)检测转染共刺激分子B7 1编码基因前后其表面HLA I分子的表达情况。利用单克隆抗体阻断细胞表面HLA I分子 ,以外周血混合淋巴细胞对阻断前后的细胞行杀伤实验。结果 :表达B7 1的肝癌细胞其表面HLA I分子表达明显增高 (P <0 0 1) ,而γ INF刺激对细胞表面HLA I分子的表达情况并无影响(P >0 0 5 )。T淋巴细胞对转染后细胞的杀伤作用远远大于未转染组 (P <0 0 1) ,当表面HLA I分子被阻断后 ,T淋巴细胞的杀伤效应几乎降至零点。结论 :转染B7 1后肝癌细胞高表达HLA I分子 ,增强抗原提呈作用的同时又表达第二信号—共刺激分子B7 1,从而可诱发更强的免疫排斥反应。 展开更多

关键词 肝癌细胞 b7.1 HLA-1 细胞毒 共刺激作用

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B7.1、GM-CSF基因修饰的EL-4细胞激发小鼠抗淋巴瘤免疫反应 被引量：5

12

作者 杨旭伟 陈元仲 +3 位作者 林振兴 陈英玉 兰小鹏 林景娟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期359-362,共4页

目的　研究B7.1、GM CSF基因修饰的淋巴瘤瘤苗进行恶性淋巴瘤免疫基因治疗的有效性。方法　用逆转录病毒载体分别将B7.1和GM CSF基因导入小鼠淋巴瘤细胞EL 4中 ,得到EL 4 /B7和EL 4 /GM转基因瘤苗细胞。观察EL 4 /B7和EL 4 /GM瘤苗细胞... 目的　研究B7.1、GM CSF基因修饰的淋巴瘤瘤苗进行恶性淋巴瘤免疫基因治疗的有效性。方法　用逆转录病毒载体分别将B7.1和GM CSF基因导入小鼠淋巴瘤细胞EL 4中 ,得到EL 4 /B7和EL 4 /GM转基因瘤苗细胞。观察EL 4 /B7和EL 4 /GM瘤苗细胞对荷淋巴瘤小鼠的免疫治疗作用 ,以及预先接种过EL 4 /B7或 /和EL 4 /GM瘤苗的小鼠 ,对野生型EL 4细胞致瘤性作用的影响 ,并检测接种EL 4 /B7或 /和EL 4 /GM瘤苗的小鼠血浆IL 2及TNF α的水平 ,及其脾淋巴细胞对野生型EL 4的细胞毒效应。另外 ,检测经EL 4 /B7、EL 4 /GM刺激后的小鼠脾淋巴细胞的增殖程度。结果　①经EL 4 /B7、EL 4 /GM细胞注射后 ,荷瘤小鼠的淋巴瘤生长速度变慢、生存时间延长 ,淋巴瘤组织中出现大量的炎症细胞 ;②接种一定数量的EL 4 /B7、EL 4 /GM细胞的小鼠 ,能抵抗野生型EL 4细胞的攻击 ;③接种瘤苗的小鼠血浆IL 2的水平明显升高 ,而TNF α的水平无明显变化 ;④接种瘤苗的小鼠脾淋巴细胞 ,对野生型EL 4细胞有明显的细胞毒效应 ;EL 4 /B7、EL 4 /GM细胞能刺激小鼠脾淋巴细胞明显增殖。结论　B7.1、GM CSF基因修饰的EL 4细胞 ,能有效地激发C5 7BL/ 6小鼠的抗淋巴瘤免疫反应 ,且B7.1基因与GM 展开更多

关键词 b7.1 GM-CSF 免疫基因治疗 淋巴瘤

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IL-2-TNFα融合基因与B7.1基因联合修饰的肿瘤的疫苗作用

13

作者 刘雪丰 张连峰 +2 位作者 张铭 马耀文 蔡有余 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2000年第2期98-106,共9页

目的　改进基因修饰的肿瘤细胞疫苗的效力。方法　在小鼠乳腺癌细胞系EMF6 和一个已被含有IL - 2和TNFα融合基因的逆转录病毒载体XdF转染的EMF6 亚系 (T2 -EMF6)中表达B7 1基因。结果　免疫 /侵袭实验表明 ,与单基因转导的肿瘤细胞相比... 目的　改进基因修饰的肿瘤细胞疫苗的效力。方法　在小鼠乳腺癌细胞系EMF6 和一个已被含有IL - 2和TNFα融合基因的逆转录病毒载体XdF转染的EMF6 亚系 (T2 -EMF6)中表达B7 1基因。结果　免疫 /侵袭实验表明 ,与单基因转导的肿瘤细胞相比 ,IL - 2-TNFα/B7 1共同修饰的肿瘤细胞具有较低的致瘤性和较优的疫苗效力 (P <0 0 5)。在各种肿瘤细胞的免疫接种后三周 ,进行混合淋巴细胞培养实验和51 Cr释放实验来检测动物的细胞免疫活性 ,IL - 2 -TNFα和B7 1共同作用诱导了比其中的任意一个单独作用更强的抗肿瘤应答 (比IL - 2 -TNFα高 2 5% ,比B7 1高 2 0 % )。结论　IL - 2 -TNFα和B7 1协同作用可提高他们所修饰的肿瘤细胞的疫苗效力。 展开更多

关键词 b7.1 IL-2 TNF 肿瘤细胞 疫苗效力 融合基因 联合 免疫接种 动物 释放

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B7.1胞外编码区的真核表达及其生物活性

14

作者 杨章民 王一理 司履生 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期526-529,共4页

目的　真核表达B7.1细胞外编码区以研究其生物学活性。方法　电穿孔法将重组质粒pDisplay/B7.1(V +C)导入人子宫颈癌细胞株 ,免疫组化及核酸原位杂交法分别检测其蛋白及mRNA表达 ,3 H TdR掺入法测定表达物对T细胞的刺激作用 ;MTT法研究... 目的　真核表达B7.1细胞外编码区以研究其生物学活性。方法　电穿孔法将重组质粒pDisplay/B7.1(V +C)导入人子宫颈癌细胞株 ,免疫组化及核酸原位杂交法分别检测其蛋白及mRNA表达 ,3 H TdR掺入法测定表达物对T细胞的刺激作用 ;MTT法研究转染细胞 T细胞混合培养引发的细胞毒性杀伤作用。结果　B7.1细胞外区在Hela细胞表面表达 ,所表达的B7.1细胞外区在抗CD3单抗存在的情况下具有刺激T细胞活化的特性 ,重组质粒转染的Hela细胞与T细胞混合培养可引起细胞毒性杀伤。结论　真核表达的B7.1(V +C)具有T细胞共刺激活性 ,可用于构建肿瘤免疫治疗之双功能分子。 展开更多

关键词 b7.1 细胞外区 真核表达 生物活性

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约氏疟原虫子孢子感染对大鼠腹腔巨噬细胞B7.1、B7.2分子表达的影响

15

作者 宋蓓 张锡林 +1 位作者 段建华 吕杨 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第20期2024-2026,共3页

目的研究约氏疟原虫感染后协同刺激分子B7.1、B7.2在大鼠腹腔巨噬细胞的表达情况,探讨B7.1、B7.2分子在宿主抵抗疟原虫感染免疫中的作用。方法利用约氏疟原虫感染大鼠的动物模型,分别在感染约氏疟原虫子孢子后2、12、24、48、72h分离获... 目的研究约氏疟原虫感染后协同刺激分子B7.1、B7.2在大鼠腹腔巨噬细胞的表达情况,探讨B7.1、B7.2分子在宿主抵抗疟原虫感染免疫中的作用。方法利用约氏疟原虫感染大鼠的动物模型,分别在感染约氏疟原虫子孢子后2、12、24、48、72h分离获得大鼠腹腔巨噬细胞,通过免疫荧光及激光扫描共聚焦显微镜技术定量分析B7.1、B7.2分子表达情况。结果在宿主感染约氏疟原虫后巨噬细胞B7.1、B7.2分子表达增加;B7.1上调较缓慢,并在72h后出现回落;B7.2上调非常迅速,在48h达到峰值,从72h开始略有下降;在所选时间范围内B7.2的表达水平始终高于B7.1(P<0.05)。结论疟原虫子孢子感染大鼠后,B7.1、B7.2分子表达水平发生改变,提示协同刺激因子参与了宿主免疫系统活化,推测该现象与受疟原虫感染哺乳动物机体的免疫防御、免疫调控密切相关。 展开更多

关键词 b7.1 B7.2 约氏疟原虫 抗原递呈细胞 激光扫描共聚焦显微镜

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Anti-CD3 scFv-B7.1真核表达载体的构建及在COS-7细胞中的初步表达

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作者 杨章民 孔令洪 +2 位作者 来宝长 王一理 司履生 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期542-544,548,共4页

目的　构建anti CD3scFv B7.1真核表达载体 ,并进行初步表达。方法　采用重叠延伸拼接法 (splicingbyoverlapextention ,SOE)将anti CD3scFv和B7.1(V +C)两个基因片段通过spacer序列连接 ,将融合基因克隆入T载体 ,并测序证实。在此基础... 目的　构建anti CD3scFv B7.1真核表达载体 ,并进行初步表达。方法　采用重叠延伸拼接法 (splicingbyoverlapextention ,SOE)将anti CD3scFv和B7.1(V +C)两个基因片段通过spacer序列连接 ,将融合基因克隆入T载体 ,并测序证实。在此基础上构建真核表达载体pcDNA/anti CD3scFv B7.1,并经脂质体法转染COS 7细胞 ,免疫组织化学法检测表达。结果　获得了序列与预期完全相同的融合基因 ;构建了抗CD3scFv B7.1融合基因真核表达载体 ;在COS 7细胞中获得初步表达。结论　成功构建及表达抗CD3scFv B7.1融合基因真核表达载体 ,为进一步研究抗CD3scFv B7. 展开更多

关键词 Anti-CD3 scFv-b7.1 COS-7细胞 抗CD3单链抗体 基因表达 肿瘤 生物治疗 真核表达载体

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GHA及新型联合预激化疗方案治疗难治性急性髓系白血病和骨髓增生异常综合征的队列研究 被引量：14

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作者 马肖容 王瑾 +12 位作者 张王刚 陈银霞 曹星梅 何爱丽 刘捷 王剑利 古流芳 雷博 张鹏宇 赵万红 杨云 王芳侠 徐燕 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期369-374,共6页

目的:本文探讨GHA(G-CSF+高三尖杉酯碱+小剂量阿糖胞苷)及GHAA和GHTA等新型联合预激化疗方案治疗难治性急性髓系白血病(AML)和骨髓增生异常综合征(MDS)的临床疗效和不良反应,寻求高效低毒的新型化疗方案,并探索其与共刺激分子B7.1的关... 目的:本文探讨GHA(G-CSF+高三尖杉酯碱+小剂量阿糖胞苷)及GHAA和GHTA等新型联合预激化疗方案治疗难治性急性髓系白血病(AML)和骨髓增生异常综合征(MDS)的临床疗效和不良反应,寻求高效低毒的新型化疗方案,并探索其与共刺激分子B7.1的关系。方法:应用GHA标准预激化疗方案,即G-CSF 100μg/(m2·d)皮下注射,d 0-14;高三尖杉酯碱1.0 mg/(m2·d)静脉点滴,d 1-14;阿糖胞苷(Ara-C)7.5-10 mg/(m2·d)皮下注射,q12h,d 1-14,以及GHAA、GHTA等联合预激化疗(联合阿柔比星20 mg d 1-7或吡柔比星20 mg d 1-7)治疗74例难治性急性髓系白血病和46例骨髓增生异常综合征(RAEB和RAEBT),与常规化疗组(MA、TAE方案)56例比较,分别观察不同方案的临床疗效,不良反应,治疗相关死亡率并随访生存;同时应用免疫荧光法检测各组肿瘤细胞上共刺激分子B7.1的表达并与临床疗效比较。结果:1预激化疗组治疗难治性AML缓解率67.56%(CR率54.05%,PR率13.51%),疗效显著优于常规化疗组(P<0.05),其中AML-M2组、AML-M5组CR率(65.51%,61.90%)显著高于其它AML亚型(P<0.05),最长持续缓解已4年,2治疗MDS缓解率60.87%(CR率45.65%,PR率15.22%),预激化疗组疗效也显著优于常规化疗组(P<0.05)。3与GHA标准预激化疗相比,无论难治性AML还是MDS,新型联合预激化疗缓解率较高,其中AML缓解率为85.18%,MDS缓解率为81.25%,均有显著性差异(P<0.05)。4化疗后出现粒细胞缺乏及血小板减少、贫血等,平均持续时间7-14 d,重症感染发生率1%,无严重出血、消化道反应和心、肝、肾功能损害,治疗相关死亡率为零。预激化疗组主要观察指标与常规化疗组相比,Ⅲ/Ⅳ毒副作用明显减轻,安全性好,具有统计学差异(P<0.05)。5AML和MDS以及不同类型B7.1表达阳性率差异较大,AML-M2组、AML-M5组明显高于其它AML组(P<0.05)。同一病例B7.1表达与预激化疗疗效呈正相关,即化疗有效病例B7.1表达往往阳性,而B7.1表达阴性者的治疗几乎无效。结论:含有高三尖杉酯碱的GHA和GHAA、GHTA等联合预激化疗方案治疗难治性急性髓系白血病和骨髓增生异常综合征的疗效肯定,不良反应较轻,无严重毒副作用和治疗相关死亡率,尤其是新型GHAA和GHTA等新型联合预激化疗较传统GHA更优,是高效低毒的新型化疗方案。肿瘤细胞上的共刺激分子B7.1表达可能与预激化疗疗效有关,其机理尚需进一步研究。 展开更多

关键词 预激化疗 急性髓系白血病 骨髓增生异常综合征 b7.1共刺激分子

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低剂量电离辐射在C57BL/6J小鼠肿瘤基因-放疗方案中的作用 被引量：1

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作者 武宁 张海玉 +1 位作者 金顺子 刘树铮 《辐射防护》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期193-196,249,共5页

为探讨低剂量电离辐射在C57BL/6J小鼠肿瘤基因-放疗方案中的作用,对荷瘤小鼠采用不同的治疗方案(单纯多次大剂量局部照射、单次大剂量局部照射加多次低剂量全身照射、pEgr-IL18-B7.1基因联合放疗),观察其对肿瘤重量、全肺表面转移结节... 为探讨低剂量电离辐射在C57BL/6J小鼠肿瘤基因-放疗方案中的作用,对荷瘤小鼠采用不同的治疗方案(单纯多次大剂量局部照射、单次大剂量局部照射加多次低剂量全身照射、pEgr-IL18-B7.1基因联合放疗),观察其对肿瘤重量、全肺表面转移结节数以及肿瘤间质微血管密度的影响。结果显示,采用单纯放疗和基因-放疗与对照组相比均能显著降低肿瘤重量、全肺表面转移结节数和肿瘤间质微血管密度;单纯放疗方案中应用单次大剂量局部照射加多次低剂量全身照射与单纯多次大剂量局部照射相比,在降低治疗剂量的同时,能达到相近似的抑瘤效果。在基因-放疗方案中,基因导入联合单次大剂量局部照射后加多次低剂量全身照射的治疗效果明显优于联合应用常规多次大剂量局部照射。提示低剂量电离辐射可以通过减轻肿瘤负荷、减少肿瘤远处转移和抑制肿瘤间质血管形成,增强基因-放疗方案的抑瘤作用。 展开更多

关键词 低剂量电离辐射 C57BL/6J小鼠 pEgr-IL18-b7.1重组质粒 基因-放疗

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CCK-8对内毒素血症小鼠腹腔巨噬细胞B7．1和B7．2表达及协同刺激功能的影响

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作者 张风华 李淑瑾 +6 位作者 丛斌 张正茂 朱桂军 丛军 马春玲 倪志宇 付丽红 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期2445-2449,共5页

目的:探讨八肽胆囊收缩素(CCK-8)对内毒素血症小鼠腹腔巨噬细胞B7.1和B7.2表达及其协同刺激活性的影响。方法:将BALB/c小鼠随机分组(n=4),分别腹腔注射生理盐水(0.2-0.3 mL/mouse),LPS(100μg/mouse)和/或CCK-8(5 nmol/mouse)及CR1409(... 目的:探讨八肽胆囊收缩素(CCK-8)对内毒素血症小鼠腹腔巨噬细胞B7.1和B7.2表达及其协同刺激活性的影响。方法:将BALB/c小鼠随机分组(n=4),分别腹腔注射生理盐水(0.2-0.3 mL/mouse),LPS(100μg/mouse)和/或CCK-8(5 nmol/mouse)及CR1409(100μg/mouse)、CR2945(100μg/mouse)。12 h后收集并纯化腹腔巨噬细胞。采用流式细胞术分析细胞表面B7.1和B7.2含量的变化。用免疫磁珠从小鼠脾细胞分离CD4+T细胞,按4∶1数量比与上述处理的腹腔巨噬细胞共同体外培养,同时加入ConA5 mg/L,采用[3H]掺入法测定CD4+T细胞增殖,反映巨噬细胞的协同刺激活性。结果:整体应用CCK-8作用小鼠腹腔巨噬细胞,与对照组相比,CCK-8可上调静息小鼠腹腔巨噬细胞B7.2的表达,而对B7.1的表达则无影响;并且CCK-8使CD4+T细胞[3H]-TdR的掺入率升高,即促进其增殖,增强巨噬细胞的协同刺激活性。CCK-8降低LPS活化的内毒素血症小鼠腹腔巨噬细胞B7.1和B7.2的表达并且降低CD4+T细胞的[3H]-TdR掺入率,即抑制其增殖,抑制其协同刺激活性。CR1409及CR2945均能逆转CCK-8的上述作用,且CR1409的作用较CR2945更明显。结论:CCK-8通过上调巨噬细胞B7.2表达而增强其协同刺激活性;并且降低LPS活化的内毒素血症小鼠腹腔巨噬细胞B7.1和B7.2的表达,抑制其协同刺激活性。该作用由CCK1R及CCK2R共同介导,其中CCK1R起主要介导作用。 展开更多

关键词 胆囊收缩素 巨噬细胞b7.1 巨噬细胞B7.2 内毒素血症

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抗肿瘤免疫基因治疗剂pVAX-IL-12-GB的构建及体内外表达验证 被引量：1

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作者 董金凯 高江平 +5 位作者 阎瑾琦 张亮 肖毅 王伟 王晓雄 于继云 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期760-765,共6页

目的构建能够同时表达人免疫调节因子IL-12,GM-CSF和B7.1的新型抗肿瘤免疫基因治疗剂pVAX-IL-12-GB,验证以上免疫调节因子基因在293T细胞的表达以及IL-12基因在活体内的表达。方法将人IL-12基因克隆到早期构建好的pVAX-IRES-GM-CSF-B7.... 目的构建能够同时表达人免疫调节因子IL-12,GM-CSF和B7.1的新型抗肿瘤免疫基因治疗剂pVAX-IL-12-GB,验证以上免疫调节因子基因在293T细胞的表达以及IL-12基因在活体内的表达。方法将人IL-12基因克隆到早期构建好的pVAX-IRES-GM-CSF-B7.1真核表达质粒的上游,将其构建成为pVAX-IL-12-GB重组质粒;利用脂质体法瞬时转染293T细胞,RT-PCR检测IL-12和GM-CSF-B7.1基因的转录,ELISA法检测细胞上清中上游IL-12基因和下游GM-CSF基因的蛋白表达,流式细胞术及免疫荧光检测下游B7.1基因的表达;利用电穿孔方法递送质粒进入小鼠股四头肌,免疫组化法检测IL-12基因在小鼠活体内的表达情况。结果双酶切以及PCR鉴定获得的片段均与预期的片段大小一致,测序分析证实IL-12基因序列完全正确;瞬时转染293T细胞后,分别验证了人IL-12,GM-CSF和B7.1基因的mRNA转录和蛋白表达;电穿孔递送质粒后,活体肌肉组织内同样可以检测到IL-12基因的表达。结论成功构建了可以同时表达人IL-12,GM-CSF和B7.1的新型抗肿瘤免疫基因治疗剂,为下一步开展肿瘤免疫基因治疗研究奠定了坚实的基础。 展开更多

关键词 肿瘤 免疫基因治疗 IL-12 GM-CSF B7-1 电穿孔 体内外表达

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