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基于间接ELISA的鲤血清CyHV-3 pORF65抗体检测方法的建立
被引量：
2
1
作者
马艳平
郝乐
+5 位作者
梁志凌
马江耀
李盈
柯浩
刘振兴
曹俊明
《南方水产科学》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第3期113-119,共7页
鲤疱疹病毒3型(cyprinid herpesvirus 3,Cy HV-3)囊膜蛋白ORF65基因全长1 785 bp,编码594个氨基酸。该研究在稀有密码子分析及信号肽与跨膜结构预测的基础上,将p ORF65中的N端信号肽与C端跨膜区段删除后进行密码子优化与基因合成,将合...
鲤疱疹病毒3型(cyprinid herpesvirus 3,Cy HV-3)囊膜蛋白ORF65基因全长1 785 bp,编码594个氨基酸。该研究在稀有密码子分析及信号肽与跨膜结构预测的基础上,将p ORF65中的N端信号肽与C端跨膜区段删除后进行密码子优化与基因合成,将合成的截短ORF65(truncated ORF65)插入p ET32a(+)载体,构建了p ET32a-trun ORF65;进一步采用DNAstar、ABCpred、Bepi Pred 1.0软件预测了p ORF65的5个B细胞表位优势区段,以合成的截短ORF65为模板,通过SOE-PCR将5个B细胞表位优势区段编码序列融合后插入p ET32a(+)载体,构建了p ET32a-mod ORF65。重组质粒分别转入BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导,SDS-PAGE和Western-blot分析,p ET32a-mod ORF65获得高效表达,表达的融合蛋白分子量为56.4 k D。此外,利用r Protein G亲和层析纯化了锦鲤(Cyprinus carpio haematopterus)血清Ig M,免疫小鼠,制备了鼠抗锦鲤Ig M多克隆抗体。在上述研究的基础上,将纯化的p ORF65作为包被抗原,鼠抗锦鲤Ig M多克隆抗体作为检测抗体,建立了间接ELISA方法,该方法可以检测p EGFP-ORF65 DNA疫苗免疫锦鲤后产生的特异性抗体。
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关键词
鲤疱疹病毒3型
ORF65
b细胞表位融合表达
rProtein
G亲和层析
ELISA
抗体特异性检测
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职称材料
题名
基于间接ELISA的鲤血清CyHV-3 pORF65抗体检测方法的建立
被引量：
2
1
作者
马艳平
郝乐
梁志凌
马江耀
李盈
柯浩
刘振兴
曹俊明
机构
广东省农业科学院动物卫生研究所广东省畜禽疫病防治研究重点实验室农业部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站
出处
《南方水产科学》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第3期113-119,共7页
基金
国家自然科学基金项目(31402347)
广东省科技计划项目(2016A020210029)
+1 种基金
广州市科技计划项目(201707010216)
广东省海洋与渔业厅渔港建设和渔业产业发展专项(A201701C04)
文摘
鲤疱疹病毒3型(cyprinid herpesvirus 3,Cy HV-3)囊膜蛋白ORF65基因全长1 785 bp,编码594个氨基酸。该研究在稀有密码子分析及信号肽与跨膜结构预测的基础上,将p ORF65中的N端信号肽与C端跨膜区段删除后进行密码子优化与基因合成,将合成的截短ORF65(truncated ORF65)插入p ET32a(+)载体,构建了p ET32a-trun ORF65;进一步采用DNAstar、ABCpred、Bepi Pred 1.0软件预测了p ORF65的5个B细胞表位优势区段,以合成的截短ORF65为模板,通过SOE-PCR将5个B细胞表位优势区段编码序列融合后插入p ET32a(+)载体,构建了p ET32a-mod ORF65。重组质粒分别转入BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导,SDS-PAGE和Western-blot分析,p ET32a-mod ORF65获得高效表达,表达的融合蛋白分子量为56.4 k D。此外,利用r Protein G亲和层析纯化了锦鲤(Cyprinus carpio haematopterus)血清Ig M,免疫小鼠,制备了鼠抗锦鲤Ig M多克隆抗体。在上述研究的基础上,将纯化的p ORF65作为包被抗原,鼠抗锦鲤Ig M多克隆抗体作为检测抗体,建立了间接ELISA方法,该方法可以检测p EGFP-ORF65 DNA疫苗免疫锦鲤后产生的特异性抗体。
关键词
鲤疱疹病毒3型
ORF65
b细胞表位融合表达
rProtein
G亲和层析
ELISA
抗体特异性检测
Keywords
cyprinid herpesvirus 3
ORF65
b
cell epitope fusion expression
rProtein G affinity chromatography
ELISA
specificanti
b
ody detection
分类号
S917.1 [农业科学—水产科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于间接ELISA的鲤血清CyHV-3 pORF65抗体检测方法的建立
马艳平
郝乐
梁志凌
马江耀
李盈
柯浩
刘振兴
曹俊明
《南方水产科学》
CAS
CSCD
北大核心
2018
2
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