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siRNA干扰BMI-1基因对膀胱癌EJ细胞增殖的调控作用及其机制 被引量:6
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作者 崔学江 朱定军 +3 位作者 韩金利 梁武 苏嘉锐 谢文练 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1519-1524,共6页
目的:对比观察膀胱癌EJ细胞及人膀胱移行上皮细胞中BMI-1基因及下游p16INK4a、p14ARF基因的mRNA及蛋白表达水平,探讨siRNA干扰BMI-1基因后对EJ细胞增殖的影响及其调控机制。方法:细胞免疫荧光观察BMI-1、p16INK4a和p14ARF蛋白在EJ细胞... 目的:对比观察膀胱癌EJ细胞及人膀胱移行上皮细胞中BMI-1基因及下游p16INK4a、p14ARF基因的mRNA及蛋白表达水平,探讨siRNA干扰BMI-1基因后对EJ细胞增殖的影响及其调控机制。方法:细胞免疫荧光观察BMI-1、p16INK4a和p14ARF蛋白在EJ细胞中表达情况及定位。Real-time RT-PCR检测EJ细胞及膀胱正常移行上皮细胞中3种基因的表达水平,Western blotting检测蛋白水平。构建干扰BMI-1基因siRNA,通过脂质体转染导入EJ细胞中,设立空白对照和阴性干扰对照组,检测BMI-1及下游p16、p14基因表达水平及蛋白表达水平的变化;以CCK-8检测细胞生长观察siRNA干扰BMI-1表达对EJ细胞增殖的抑制作用;用流式细胞术分析细胞凋亡的改变。结果:BMI-1mRNA及蛋白水平在EJ细胞表达高于膀胱移行上皮细胞,而p16INK4a和p14ARFmRNA及蛋白在EJ细胞表达水平稍低于膀胱移行上皮细胞。siRNA干扰BMI-1后可以上调EJ细胞中其下游p16和p14 mRNA及蛋白水平,使EJ细胞增殖能力下降,细胞凋亡增多。结论:siRNA干扰BMI-1基因表达对EJ细胞的体外生长具有明显的抑制作用,其作用机制与上调其下游p16INK4a、p14ARF基因的表达有关。 展开更多
关键词 b细胞异性莫洛尼白血病插入位点1 p16INK4a/p14ARF RNA干扰 EJ细胞
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敲减BMI-1表达诱导HeLa细胞G_1期阻滞 被引量:1
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作者 陈凤花 李一荣 +1 位作者 王琳 胡丽华 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期134-139,共6页
B细胞特异性莫洛尼氏白血病毒插入位点1(B-cell specific moloney leukemia virus insertionsite1,BMI-1)在多种恶性肿瘤中高表达.为探索BMI-1在宫颈癌发生发展过程中的生物学作用,将构建成功并已鉴定为有效序列的短发夹状RNA(short hai... B细胞特异性莫洛尼氏白血病毒插入位点1(B-cell specific moloney leukemia virus insertionsite1,BMI-1)在多种恶性肿瘤中高表达.为探索BMI-1在宫颈癌发生发展过程中的生物学作用,将构建成功并已鉴定为有效序列的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体BMI-1shRNA2和BMI-1shRNA4,转染人宫颈癌细胞系HeLa并筛选稳定转染细胞株,Western印迹检测BMI-1蛋白表达,实时荧光定量RT-PCR检测周期素依赖性激酶抑制剂p16INK4a(cyclin-dependentkinase inhibitor p16INK4a)、人类端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)、同源盒A9(homeoboxA9,HOXA9)、同源盒B4(homeoboxB4,HOXB4)和同源盒C13(homeoboxC13,HOXC13)基因mRNA的表达变化,PI染色流式细胞仪检测细胞周期变化.结果表明,在稳定转染BMI-1shRNA2、BMI-1shRNA4的HeLa细胞中,显著抑制BMI-1蛋白表达,上调p16INK4a、HOXA9和HOXC13三者mRNA表达,而hTERT和HOXB4两者mRNA的表达水平无明显改变,同时G1期细胞增加、S期细胞减少,提示敲减BMI-1表达诱导HeLa细胞G1期阻滞,BMI-1可能是宫颈癌基因治疗的靶分子. 展开更多
关键词 b细胞异性莫洛尼白血病插入位点1(bmi-1) 短发夹状RNA(shRNA) 周期素依赖性激酶抑制剂p16INK4a 同源盒A9 同源盒C13
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过表达BMI-1对HeLa细胞中HOX基因表达和细胞周期的影响 被引量:2
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作者 陈凤花 李一荣 +1 位作者 王琳 胡丽华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期2366-2370,共5页
目的:将构建成功的真核表达载体pEGFP-BMI-1转染宫颈癌细胞系HeLa,检测其对同源盒(HOX)基因表达和细胞周期的影响。方法:采用脂质体转染法,将质粒pEGFP-BMI-1DNA瞬时转染HeLa细胞,确定融合蛋白B细胞特异性莫洛尼氏白血病毒插入位点1-加... 目的:将构建成功的真核表达载体pEGFP-BMI-1转染宫颈癌细胞系HeLa,检测其对同源盒(HOX)基因表达和细胞周期的影响。方法:采用脂质体转染法,将质粒pEGFP-BMI-1DNA瞬时转染HeLa细胞,确定融合蛋白B细胞特异性莫洛尼氏白血病毒插入位点1-加强型绿色荧光蛋白(BMI-1-EGFP)表达后,实时荧光定量RT-PCR方法检测转染前后HeLa细胞中周期素依赖性激酶抑制剂P16INK4a、人类端粒酶逆转录酶(hTERT)、同源盒A9(HOXA9)、同源盒B4(HOXB4)和同源盒C13(HOXC13)mRNA的表达变化,PI染色流式细胞仪检测细胞周期。结果:(1)在HeLa细胞中过表达BMI-1显著下调P16INK4a、HOXA9和HOXC13 mRNA的表达,分别平均降低为对照组的9.2%、10.9%和69.7%(P<0.01),而hTERT和HOXB4 mRNA的表达变化无显著差异(P>0.05)。(2)pEGFP-BMI-1转染HeLa细胞后,G1期细胞由65.68%减少至50.53%,S期细胞则由27.17%增加至39.59%(P<0.01)。结论:真核表达载体pEGFP-BMI-1转染HeLa细胞过表达外源性BMI-1,显著下调P16INK4a、HOXA9和HOXC13的表达,同时G1期细胞减少、S期细胞增加,这可能是BMI-1参与肿瘤发生发展的机制之一。 展开更多
关键词 b细胞异性莫洛尼白血病插入位点1 周期素依赖性激酶抑制剂P16INK4a 同源盒A9 同源盒C13
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LncRNA-PVT 1/miR-15 a/Bmi-1通路调控HGC-27胃癌细胞的体外增殖 被引量:2
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作者 侯婧瑛 吴雅娴 +3 位作者 金小岩 凌辉 于霆峰 王凌云 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期703-713,共11页
【目的】探讨lncRNA-PVT1/miR-15a/Bmi-1通路在胃癌细胞体外增殖中的调控作用。【方法】分别研究PVT1,miR-15a及Bmi-1在HGC-27胃癌细胞体外增殖中的作用。体外培养的人胃癌细胞株HGC-27分为如下组别:①空白对照组、si-PVT1(转染PVT1 siR... 【目的】探讨lncRNA-PVT1/miR-15a/Bmi-1通路在胃癌细胞体外增殖中的调控作用。【方法】分别研究PVT1,miR-15a及Bmi-1在HGC-27胃癌细胞体外增殖中的作用。体外培养的人胃癌细胞株HGC-27分为如下组别:①空白对照组、si-PVT1(转染PVT1 siRNA)和si-PVT1 NC(转染PVT1 siRNAscramble阴性对照);②空白对照组、miR-15a(转染miR-15a模拟物)和miR-15a NC(转染miR-15a模拟物的阴性对照)。③空白对照组、si-Bmi-1(转染Bmi-1的siRNA)和si-Bmi-1 NC(转染Bmi-1的siRNAscramble阴性对照)。采用MTS法检测上述组别的细胞增殖情况。在抑制PVT1后检测不同组别PVT1、miR-15a和Bmi-1的表达情况。为验证miR-15a与Bmi-1之间的调节关系,将HGC-27胃癌细胞株分为3组:空白对照、miR-15a(转染miR-15a模拟物)和miR-15a NC(转染模拟物阴性对照),检测各组miR-15a和Bmi-1的表达情况。通过生物信息学网站预测PVT1与miR-15a以及miR-15a与Bmi-1的潜在结合位点。采用双荧光素酶报告基因技术验证PVT1与miR-15a以及miR-15a和Bmi-1之间的靶向调节关系。在前述基础上,逆向验证PVT1、miR-15a和Bmi-1三者之间的调控关系。【结果】抑制PVT1、Bmi-1或者过表达miR-15a后,HGC-27胃癌细胞的OD490值以及增殖率在0 h后的不同时间点均出现显著降低(P<0.01);抑制PVT1后,Bmi-1的表达出现降低,而miR-15a表达增高(P<0.01);转染miR-15a后,miR-15a表达升高,而Bmi-1表达出现降低(P<0.01)。与空白对照和miR-15a模拟物阴性对照组相比,PVT1以及Bmi-1野生型报告基因的萤光素酶活性在miR-15a模拟物组呈现显著降低,两者分别下降约56%和32%左右(P<0.01)。与空白对照组和si-PVT1 NC组相比,si-PVT1组PVT1和Bmi-1表达明显下降,miR-15a表达升高,在si-PVT1组加入miR-15a inhibitor之后,miR-15a表达下降,PVT1和Bmi-1的表达降低均出现了逆转;而si-PVT1组加入miR-15a后,miR-15a表达升高,在si-PVT1组加入miR-15a之后,miR-15a表达升高,PVT1和Bmi-1的表达出现进一步下降。【结论】LncRNA-PVT1能够通过靶向抑制miR-15a上调Bmi-1(lncRNA-PVT1/miR-15a/Bmi-1通路),进而促进胃癌细胞的体外增殖。 展开更多
关键词 长链非编码RNA-PVT1 微小RNA-15a b细胞异性莫洛白血病插入位点-1 胃癌细胞 增殖
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类转录激活因子效应物核酸酶介导的E-cad和Bmi-1基因联合干预鼻咽癌的体外研究 被引量:8
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作者 罗婷婷 严爱芬 +6 位作者 刘连 蒋泓 冯翠兰 刘冠男 刘芳 唐冬生 周天鸿 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期229-239,共11页
目的:检测类转录激活因子效应物核酸酶(transcription activator-like effector nuclease,TALEN)介导的E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)、B细胞特异性莫洛尼氏白血病毒插入位点1(B-lymphoma Moloney murine leukemia virus insertion regi... 目的:检测类转录激活因子效应物核酸酶(transcription activator-like effector nuclease,TALEN)介导的E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)、B细胞特异性莫洛尼氏白血病毒插入位点1(B-lymphoma Moloney murine leukemia virus insertion region-1,Bmi-1)基因联合干预对鼻咽癌细胞生物学行为的影响。方法:构建多位点基因打靶载体p UC-DS1-E-cad-2ANeo-DS2(以下简称E-cad打靶载体)和p UC-DS1-Bmi-1 sh RNA-Zeo-DS2(以下简称Bmi-1打靶载体),将E-cad打靶载体、Bmi-1打靶载体及佛山科学技术学院分子医学研究院前期构建的TALEN载体以不同组合转染鼻咽癌CNE-2细胞。采用PCR检测靶基因的整合,Western印迹检测靶基因蛋白表达水平变化,细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖能力变化,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡变化,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力变化。结果:靶基因E-cad和Bmi-1 sh RNA表达元件成功整合到鼻咽癌CNE-2细胞的基因组中;转染后鼻咽癌CNE-2细胞中E-cad的蛋白表达水平明显上升,Bmi-1的蛋白表达水平明显下降;干预E-cad及Bmi-1不影响细胞的增殖、周期和凋亡,但显著抑制细胞的迁移和侵袭能力,且E-cad和Bmi-1联合干预比单独干预更能显著抑制鼻咽癌CNE-2细胞体外迁移能力(均P<0.01)。结论:TALEN介导的E-cad和Bmi-1联合干预能有效抑制鼻咽癌CNE-2细胞的体外迁移和侵袭,可为人类癌症的基因治疗建立前期的实验基础。 展开更多
关键词 类转录激活因子效应物核酸酶 E-钙黏蛋白 b细胞异性莫洛尼白血病插入位点1 基因打靶 鼻咽癌
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口腔黏膜癌变过程中Bmi-1及P16蛋白的表达及意义 被引量:2
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作者 李咏 王春风 +3 位作者 赵光叶 刘一龙 黄元清 蔡杨 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1051-1055,共5页
目的:了解Bmi-1及P16蛋白在口腔黏膜癌变过程中的表达情况,探讨Bmi-1-P16通路在口腔鳞癌发生发展中的作用及意义。方法::正常口腔黏膜10例、上皮异常增生31例、口腔鳞癌61例的石蜡包埋组织,采用免疫组化SP法检测Bmi-1及P16表达情况,分... 目的:了解Bmi-1及P16蛋白在口腔黏膜癌变过程中的表达情况,探讨Bmi-1-P16通路在口腔鳞癌发生发展中的作用及意义。方法::正常口腔黏膜10例、上皮异常增生31例、口腔鳞癌61例的石蜡包埋组织,采用免疫组化SP法检测Bmi-1及P16表达情况,分析二者的相关性及其临床病理学意义。结果:Bmi-1在正常口腔黏膜、上皮异常增生及OSCC组织中的阳性率分别为0%、29%(9/31)和62.3%(38/61);P16在正常、上皮异常增生及OSCC组中的阳性率分别为100%(10/10)、77.4%(24/31)和47.5%(29/61)。OSCC中Bmi-1阳性率在P16阴性组高于P16阳性组,差异有统计学意义(P<0.05),Spearman相关分析显示两者间具负相关关系(r=-0.414,P<0.05)。Bmi-1阳性表达及Bmi-1高表达且P16失表达与OSCC临床分期及淋巴结转移密切相关(P<0.05)。结论:Bmi-1过表达是口腔黏膜癌变过程中的早期事件,口腔鳞癌中Bmi-1过表达可能与P16失表达有关并与临床分期及淋巴结转移密切相关,有可能作为临床评估口腔鳞癌浸润、转移和预后的参考指标之一。 展开更多
关键词 b细胞异性莫洛白血病插入位点-1 P16蛋白 癌前损害 口腔鳞状细胞
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