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异养硝化好氧反硝化菌株Agrobacterium tumefaciens LAD9羟胺氧化酶的分离纯化 被引量:2
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作者 陈倩 马涛 王婷 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期69-73,共5页
羟氨氧化酶(Hydroxylamine oxidase,HAO)的作用方式直接决定了异养硝化好氧反硝化细菌的代谢途径,分离得到纯度较高的HAO也就成为研究这类细菌脱氮机制的重要环节。以异养硝化好氧反硝化细菌Agrobacterium tumefaciens LAD9为代表,建立... 羟氨氧化酶(Hydroxylamine oxidase,HAO)的作用方式直接决定了异养硝化好氧反硝化细菌的代谢途径,分离得到纯度较高的HAO也就成为研究这类细菌脱氮机制的重要环节。以异养硝化好氧反硝化细菌Agrobacterium tumefaciens LAD9为代表,建立了该菌株HAO的分离纯化方法:首先采用渗透压休克法提取细胞周质液,然后采用DEAE Sepharose CL-6B离子交换层析和Sephacryl S-100凝胶过滤层析对细胞周质液进行分离纯化。结果表明,经过离子交换层析可得到分子量分别为55.3、35.7和19.2kD的杂蛋白,进一步经过凝胶过滤层析即可得到电泳纯的HAO,纯化倍数为5.79,产率为39.71%。对其酶学性质的初步研究表明,该菌株HAO的分子量为18.8 kD,能够将羟胺氧化为亚硝酸盐氮,且Fe2+的加入可显著增强其酶活。 展开更多
关键词 脱氮 羟胺氧化酶 分离纯化 agrobacterium TUMEFACIENS LAD9 异养硝化好氧反硝化
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一株脱有机硫菌Agrobacterium tumefaciens W3的分离鉴定及特性的研究 被引量:3
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作者 邱乐泉 杨琳 钟卫鸿 《浙江工业大学学报》 CAS 北大核心 2009年第5期520-524,共5页
从杭州炼油厂的土壤中筛选到的能降解二苯并噻吩(Dibenzothiophene,DBT)的菌株,并进行了显微形态、生理生化分析和16S rDNA序列分析,将其鉴定为Agrobacteriumtume faciens W3;对该菌株的降解产物分析表明,其降解DBT的终产物为2-羟基... 从杭州炼油厂的土壤中筛选到的能降解二苯并噻吩(Dibenzothiophene,DBT)的菌株,并进行了显微形态、生理生化分析和16S rDNA序列分析,将其鉴定为Agrobacteriumtume faciens W3;对该菌株的降解产物分析表明,其降解DBT的终产物为2-羟基联苯(2-hydroxybiphenyl,2-HBP),符合4-S脱硫途径;对该菌株的部分脱硫特性进行分析表明,5 g/L葡萄糖,3 g/L NH4Cl,0.15 mmol/L DBT,初始pH 6.9-7.5为其适宜的培养条件,培养时间72-96 h可达到最大生长,脱硫效果可达83%. 展开更多
关键词 生物脱硫 二苯并噻吩 根癌土壤杆菌W3
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发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes) Ri T-DNA遗传转化丝石竹(Gypsophila paniculata)的研究 被引量:1
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作者 王敬文 陆秀华 蒋晶 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 1992年第3期253-256,T001,共5页
近年来,已发展出遗传转化高等植物的一些新技术,其中有些技术如脂质体融合,微注射技术和电击导入都是基于动物细胞培养方面的工作,而另一些技术是来自于植物界独特的天然转化系统,其中包括已知能遗传转化高等植物的农杆菌(Agrobacterium... 近年来,已发展出遗传转化高等植物的一些新技术,其中有些技术如脂质体融合,微注射技术和电击导入都是基于动物细胞培养方面的工作,而另一些技术是来自于植物界独特的天然转化系统,其中包括已知能遗传转化高等植物的农杆菌(Agrobacterium)的二个种,即致瘤农杆菌(A.tumefaciens)和发根农杆菌(A.rhizogenes),这二个种都能够将其致病质粒Ti或Ri所携带的DNA序列(T-DNA)插入到双子叶植物细胞核基因组中。pTi诱发寄主产生根基肿瘤,pRi诱发寄主产生毛状根。二者的差别可能是毛状根可以从毛状根培养物获得具有完整的T-DNA序列的有生育能力的再生植株,而从致病农杆菌(A.tumefaciens)菌株所诱发的肿瘤很难获得再生植株。因此,利用发根农杆菌(A.rhizogenes)pRi作为遗传转化高等植物的基因克隆载体的研究和应用日益受到重视。 展开更多
关键词 丝石竹 发根农杆菌 遗传 转化
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放射形土壤杆菌(Agrobacterium radiobacter)K84菌株发酵条件及其生物制剂 被引量:1
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作者 陈龙英 吴印青 +1 位作者 范林华 韩勤更 《上海农业学报》 CSCD 1996年第1期50-55,共6页
对作物根癌病具有良好防治效果的放射形土壤杆菌(Agrobacteriumradiobacter)K84进行了发酵试验,确定了培养基配方及培养条件。最适发酵周期为24~30h;发酵液含活菌体数达5×1012/mL。... 对作物根癌病具有良好防治效果的放射形土壤杆菌(Agrobacteriumradiobacter)K84进行了发酵试验,确定了培养基配方及培养条件。最适发酵周期为24~30h;发酵液含活菌体数达5×1012/mL。为该制剂的商品化提供了一整套试验数据。发酵液经后处理而制成的生物农药产品定名为“根癌宁”(Decaling)。 展开更多
关键词 根癌病 放射形土壤杆菌 发酵 根癌宁 生物农药
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发根土壤杆菌(Agrobacterium rhizogenes)在芸薹属作物上的高效遗传转化(英文) 被引量:5
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作者 何玉科 R.E.Voorrips 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 1989年第4期1-8,共8页
利用发根土壤杆菌(Agrobacterium rhizogenes)在甘蓝、花椰菜、抱子甘蓝和油菜的下胚轴切段上进行遗传转化。在这些植物基因型中,花椰菜的转化培养获得了最高的根诱导频率,而甘蓝的转化培养得到了最高的转化频率。同菌株LBA9365和LBA849... 利用发根土壤杆菌(Agrobacterium rhizogenes)在甘蓝、花椰菜、抱子甘蓝和油菜的下胚轴切段上进行遗传转化。在这些植物基因型中,花椰菜的转化培养获得了最高的根诱导频率,而甘蓝的转化培养得到了最高的转化频率。同菌株LBA9365和LBA8490相比,发根土壤杆菌LBA9402诱导的根数较多。沿着下胚轴依次截取切段进行转化培养,结果发现从子叶下切段到根系上面的切段,其根诱导频率呈阶梯状上升趋势。在切段上的单根转移培养之前,截取下胚轴切段(此切段仍保留有所有的根)上1~2mm长的顶端部分,转移到固体培养基上培养,结果大大提高了转化频率。 展开更多
关键词 发根农杆菌 芸薹属 根诱导频率 转化频率
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Strain Cultivation Stage and Infectious Concentration on Soybean Cotyledonary Node via Agrobacterium–mediated Transformation System
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作者 WU Xiaoxia 1,LIU Weiting 2,LI Jing 1,LIU Shanshan 1,WANG Zhikun 1,and LI Wenbin 1 1 College of Agriculture,Northeast Agricultural University,Chinese Education Ministry and Provincial Key Laboratory of Soybean Biology,Harbin 150030,China 2 Heilongjiang Academy of Agricultural Sciences,Harbin 150086,China 《Journal of Northeast Agricultural University(English Edition)》 CAS 2010年第2期1-6,共6页
In soybean cotyledonary transformation,Agrobacterium infection is influenced by many factors.The cultivation stage of Agrobacterium strain and infectious concentration were studied in this research.Results showed that... In soybean cotyledonary transformation,Agrobacterium infection is influenced by many factors.The cultivation stage of Agrobacterium strain and infectious concentration were studied in this research.Results showed that the highest rate of resistant shoots was obtained when the strain cultivation concentration was OD 600 =0.6,and the infectious concentration was OD 600 =0.5.Seven soybean cultivars in North China were also screened for high susceptibility to Agrobacterium and three genotypes were found to be s... 展开更多
关键词 soybean cotyledonary node agrobacterium tumefaciens strain cultivation stage infectious concentration
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Agrobacterium-mediated Transformation and Regeneration by Direct Shoot Organogenesis in Cotton (G. hirsutum)
7
作者 G.BALASUBRAMANI J.AMUDHA +2 位作者 P.A.KUMAR A.B.DONGRE C.D.MAYEE 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2002年第S1期87-87,共1页
Genotype independent transformation andregeneration of Indian cotton(Gossypiumhirsutum L.)cultivar was standardized with Bt-Cry 1A(b)gene by Agrobacterium-mediation.Apical meristem of elite G.hirsutum cultivarLRK-516 ... Genotype independent transformation andregeneration of Indian cotton(Gossypiumhirsutum L.)cultivar was standardized with Bt-Cry 1A(b)gene by Agrobacterium-mediation.Apical meristem of elite G.hirsutum cultivarLRK-516 and LRA 5166 were co-cultivated withA.tumefaciens LBA 4404 carrying synthetic Bt- 展开更多
关键词 COTTON agrobacterium COTTON ELITE CULTIVAR Transformation REGENERATION carrying standardized MEDIATION
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Study on Transformation of Oriental Hybrid Lily by Agrobacterium-mediated
8
作者 FAN Jinping ZHANG Chen ZHANG Yingying ZHOU Xiaojie CHE Daidi 《Journal of Northeast Agricultural University(English Edition)》 CAS 2009年第3期13-16,共4页
An efficient procedure was described for the transformation of the monocotyledonous oriental hybrid lily, Lilium cv. Siberia. by Agrobacterium-mediated genetic transformation via leaves regeneration, The leaves of lea... An efficient procedure was described for the transformation of the monocotyledonous oriental hybrid lily, Lilium cv. Siberia. by Agrobacterium-mediated genetic transformation via leaves regeneration, The leaves of leaflets which derived from bulbs were sliced into 1.0 cm long and were co-cultivated with A. tumefaciens strain LBA4404/pB2AE12, which harbored a vector carrying the neomycin phosphotransferase, DREB2A genes in the T-DNA region. The suitable genetic transformation condition was determined as follows: the bacterial concentration reached 0.5-0.6 (OD600), 15 min infection time, 20 mg.L^-1 acetosyingone, and 10.6 mmol.L^-1 NH4NO3 medium was used for co-cultivation 3 days, delayed 7 days for selecting by 30 mg.L^-1 kanamycin containing regeneration medium. Efficient shoot regeneration was observed on MS medium supplemented with 1.0 mg.L^-1 naphthaleneacetic acid, 0.5 mg.L^-1 benzyladenine and 0.1 mg.L^-1 Kinetin after about 6 weeks culture. The presence ofDREB2A gene in the genomic DNA of regenerated plants was detected by means of PCR analysis. 展开更多
关键词 oriental hybrid lily agrobacterium tumefaciens PCR
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根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)对毛白杨五种防御酶系统的影响 被引量:2
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作者 王召元 袁玉欣 +3 位作者 杜克久 王颖 侯西成 王艳芬 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期31-35,共5页
用野生根癌农杆菌接种毛白杨后,定期测定叶片内5种酶活性的动态变化,旨在揭示毛白杨对根癌农杆菌侵染后的生理响应,阐明杨树根癌病的病害生理。毛白杨接种病原菌后,SOD、POD、PPO前期活性高于对照,有1个酶活高峰,后期下降接近对照;CAT出... 用野生根癌农杆菌接种毛白杨后,定期测定叶片内5种酶活性的动态变化,旨在揭示毛白杨对根癌农杆菌侵染后的生理响应,阐明杨树根癌病的病害生理。毛白杨接种病原菌后,SOD、POD、PPO前期活性高于对照,有1个酶活高峰,后期下降接近对照;CAT出现2个酶活高峰,25 d虽有下降,但一直高于对照;PAL活性变化幅度比较小,基本保持在对照水平,与对照相比差异不显著。研究结果表明:SOD和CAT对根癌农杆菌最敏感,POD和PPO次之,PAL敏感性最差。 展开更多
关键词 毛白杨 根癌农杆菌 超氧化物歧化酶 过氧化物酶 过氧化氢酶 多酚氧化酶 苯丙氨酸解氨酶
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根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导培育富含叶黄素的基因工程小球藻(Chlorella vulgaris)的研究 被引量:2
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作者 马瑞娟 林祥志 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期159-164,共6页
采用基因克隆技术构建双元载体pCAMBIA2301-idi,通过电转转入农杆菌LBA4404中。利用根癌农杆菌介导的转化方法,将pCAMBIA2301-idi质粒的T-DNA区转入小球藻,以G418抗性基因(NPTⅡ)作为筛选标记,筛选出阳性转化子。通过PCR扩增表明idi基因... 采用基因克隆技术构建双元载体pCAMBIA2301-idi,通过电转转入农杆菌LBA4404中。利用根癌农杆菌介导的转化方法,将pCAMBIA2301-idi质粒的T-DNA区转入小球藻,以G418抗性基因(NPTⅡ)作为筛选标记,筛选出阳性转化子。通过PCR扩增表明idi基因和NPTⅡ基因已经整合到小球藻基因组中。测定转化子的生物量,结果表明大部分转化子的生物量与野生型相似。测定转化子小球藻干粉的叶黄素含量,发现转化子叶黄素含量最高达到0.84mg/g,与野生型相比提高了30.95%。进一步分析藻液中叶黄素的产量,发现转化子的叶黄素产量最高达到1.98mg/L,比野生型提高了36.77%。 展开更多
关键词 小球藻 农杆菌 遗传转化 idi基因 叶黄素
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IAA高产菌-农杆菌(Agrobacterium)对小球藻生长代谢的影响 被引量:1
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作者 张安龙 孙文昕 +3 位作者 苏琰儒 陈佳琛 刘珂轶 张波 《陕西科技大学学报》 北大核心 2021年第4期21-27,39,共8页
以一株分离自小球藻培养体系中的IAA高产菌-农杆菌(Agrobacterium)为研究对象,从生物量积累-抗氧化系统响应-转录组学不同层次揭示了农杆菌对藻细胞生长代谢的影响机制.结果表明,农杆菌与相当浓度水平的外源IAA相比,对小球藻的生长具有... 以一株分离自小球藻培养体系中的IAA高产菌-农杆菌(Agrobacterium)为研究对象,从生物量积累-抗氧化系统响应-转录组学不同层次揭示了农杆菌对藻细胞生长代谢的影响机制.结果表明,农杆菌与相当浓度水平的外源IAA相比,对小球藻的生长具有更高的促进作用;农杆菌可提高小球藻可溶性糖和蛋白的含量,分别达到纯藻体系的1.34倍和1.43倍;农杆菌可显著提高小球藻SOD活性和降低MDA的含量.转录组学分析结果显示:对基因进行GO功能分类注释,细胞组分包含的unigene最多.与纯藻体系相比,添加细菌体系和添加外源IAA体系分别有246和966个基因显著下调,有1394和1115个基因显著上调,且共同的差异基因有948个. 展开更多
关键词 小球藻 农杆菌 IAA 共培养体系 转录组学
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一种农杆菌介导的糜子高效遗传转化方法
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作者 夏启玉 降彦苗 +5 位作者 刘亚男 李海权 程汝宏 郭安平 刘国庆 赵辉 《热带作物学报》 北大核心 2025年第1期44-50,共7页
糜子(Panicum miliaceum L.)是我国传统的粮食作物,截至目前,针对糜子遗传转化方法的研究仍较少,本研究旨在建立农杆菌介导的糜子高效遗传转化方法。以糜子品种冀黍5号的成熟种子为外植体,在CIM和MSD诱导培养基上分别诱导糜子的胚性愈伤... 糜子(Panicum miliaceum L.)是我国传统的粮食作物,截至目前,针对糜子遗传转化方法的研究仍较少,本研究旨在建立农杆菌介导的糜子高效遗传转化方法。以糜子品种冀黍5号的成熟种子为外植体,在CIM和MSD诱导培养基上分别诱导糜子的胚性愈伤,以其作为转化受体材料,用含植物表达载体的农杆菌侵染60min并共培养6d,转接至含0.025g/L潮霉素的筛选培养基上筛选出抗性愈伤,接着在含0.015g/L潮霉素的分化培养基上分化,最后在含0.015g/L潮霉素的生根培养基上生根成苗,用载体特异性引物对再生植株进行PCR检测,鉴定其是否为阳性转基因植株。根据多个批次的转化实验统计糜子的抗性再生植株的筛选效率和转化效率。结果表明:CIM和MSD诱导培养基均能诱导出糜子胚性愈伤,但CIM培养基诱导的糜子胚性愈伤效果更好;糜子胚性愈伤在被农杆菌侵染及与农杆菌共培养后,经在含潮霉素的培养基上筛选、分化和生根后获得多株抗性再生糜子植株,3次试验获得的糜子抗性再生植株的PCR鉴定阳性率为100%,平均转化效率为30%以上。本研究成功建立了农杆菌介导的糜子遗传转化方法,操作简单,转化效率高,成本低廉,且转化不受季节限制,能规模化开展,为糜子的遗传改良提供有效的技术手段。 展开更多
关键词 糜子 农杆菌 遗传转化 转化效率
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农杆菌介导微型月季遗传转化中抗生素的优化
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作者 李燕 黄婧 +1 位作者 张启香 张敏 《江苏林业科技》 2025年第2期1-9,共9页
通过对3种抗生素的筛选,确立最适抑制农杆菌过度生长、促进微型月季愈伤组织生长与分化的抗生素及其浓度,从而建立稳定而有效的微型月季遗传转化体系。结果表明:微型月季叶片培养于150 mg/L头孢噻肟钠培养基可抑制农杆菌生长且利于材料... 通过对3种抗生素的筛选,确立最适抑制农杆菌过度生长、促进微型月季愈伤组织生长与分化的抗生素及其浓度,从而建立稳定而有效的微型月季遗传转化体系。结果表明:微型月季叶片培养于150 mg/L头孢噻肟钠培养基可抑制农杆菌生长且利于材料生长分化。侵染最佳条件为:侵染菌液OD_(600)为0.5—0.6,侵染5—10 min,共培养2 d。‘荷仙姑’‘彩虹’和‘笑脸’微型月季阳性愈伤的PCR阳性率分别为26.4%,18.4%和31.2%。该研究结果为微型月季农杆菌遗传转化的抗生素选择和培育条件的优化提供一定参考。 展开更多
关键词 微型月季 遗传转化 抗生素 培养 农杆菌
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植物非组培遗传转化体系及其应用 被引量:2
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作者 冯梦琦 王若雨 +4 位作者 司马璐 姜楠 翟晓巧 赵振利 范国强 《华中农业大学学报》 北大核心 2025年第2期228-242,共15页
植物高效稳定的遗传转化体系是基因功能解析和分子育种的重要技术支撑,然而组织培养体系不完善严重阻碍其在诸多植物尤其作物中的应用。为了解决上述问题,近年来建立了不少高效的非组培遗传转化体系。本文着重综述农杆菌介导的非组培遗... 植物高效稳定的遗传转化体系是基因功能解析和分子育种的重要技术支撑,然而组织培养体系不完善严重阻碍其在诸多植物尤其作物中的应用。为了解决上述问题,近年来建立了不少高效的非组培遗传转化体系。本文着重综述农杆菌介导的非组培遗传转化体系,包括花器官侵染法、切-浸-芽(cut-dip-budding,CDB)递送法、依赖再生活力的活体注射递送法(regenerative activity-dependent in planta injection delivery,RAPID)、种子侵染法、发育调控基因(development regulatory,DR)辅助转化法和病毒递送法在植物中的应用现状、转化效率影响因素和基因编辑应用;总结了不依赖农杆菌的花粉管通道法、粒子轰击法和纳米递送法在植物中的应用,旨在为更多物种建立高效、简便、基因型不依赖的非组培遗传转化体系提供参考,助力植物功能基因研究和分子育种实践。 展开更多
关键词 植物遗传转化 非组培 农杆菌 基因编辑 基因型不依赖
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‘京枣39’叶片遗传转化体系的建立 被引量:2
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作者 马灵 袁轶 +6 位作者 杨爽 高艺 陈学勋 焦立军 刘巍巍 薄文浩 庞晓明 《华中农业大学学报》 北大核心 2025年第1期43-49,共7页
为建立‘京枣39’高效遗传转化体系,以‘京枣39’叶片为外植体进行遗传转化,探究卡那霉素(kanamycin,Kan)质量浓度、头孢噻肟(cefotaxime, Cef)和特美汀(timentin, Tim)抑菌质量浓度、预培养时间、不同菌液浓度、侵染时间、乙酰丁香酮(a... 为建立‘京枣39’高效遗传转化体系,以‘京枣39’叶片为外植体进行遗传转化,探究卡那霉素(kanamycin,Kan)质量浓度、头孢噻肟(cefotaxime, Cef)和特美汀(timentin, Tim)抑菌质量浓度、预培养时间、不同菌液浓度、侵染时间、乙酰丁香酮(acetosyringone, AS)浓度及共培养时间对‘京枣39’叶片转化率的影响。结果显示‘,京枣39’叶片最佳遗传转化条件为,5 mg/L Kan选择压,50 mg/L Cef、250 mg/L Tim抑菌质量浓度,预培养4 d,农杆菌菌液OD600 nm值为0.6,侵染时间20 min,共培养基添加200μmol/L AS,共培养4 d。荧光检测和PCR试验证实外源目的基因已成功整合到‘京枣39’基因组中,实现了农杆菌介导的‘京枣39’叶片的遗传转化。 展开更多
关键词 根癌农杆菌 遗传转化 ‘京枣39’ 叶片 抗性筛选
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马铃薯川芋50遗传转化及基因编辑体系的建立
16
作者 文博霖 万敏 +8 位作者 胡建军 王克秀 景晟林 王心悦 朱博 唐铭霞 李兵 何卫 曾子贤 《生物技术通报》 北大核心 2025年第4期88-97,共10页
【目的】构建马铃薯川芋50的遗传转化体系和基因编辑体系。【方法】以四川省主导品种川芋50无菌脱毒组培苗茎段和叶片为外植体,用农杆菌介导法将含有植物敲除载体质粒pJCV55-StU6-200-StUBI10-T#01转化马铃薯外植体,分析4种不同植物激... 【目的】构建马铃薯川芋50的遗传转化体系和基因编辑体系。【方法】以四川省主导品种川芋50无菌脱毒组培苗茎段和叶片为外植体,用农杆菌介导法将含有植物敲除载体质粒pJCV55-StU6-200-StUBI10-T#01转化马铃薯外植体,分析4种不同植物激素配比的培养基体系对马铃薯愈伤组织诱导和分化的影响,探究川芋50的基因编辑、阳性植株鉴定方法。【结果】1)最适马铃薯川芋50遗传转化的培养基体系为B体系。茎段和叶片预培养及愈伤组织诱导的培养基配方分别为:MS基础盐+20 g/L蔗糖+1 mL/L 1000×N&N维生素(1000×Nitsch&Nitsch Vitamin Solution,1000×N&N维生素)+1.0 mg/L TZR(trans-zeatin-riboside,TZR)+0.0278 mg/L GA_(3)(gibberellin A_(3),GA_(3))+0.02 mg/L NAA(1-naphthaleneacetic acid,NAA)+2.0 g/L Phytagel和MS基础盐+20 g/L蔗糖+1 mL/L 1000×N&N维生素+0.5 mg/L TZR+2.5 mg/L IAA(indole acetic acid,IAA)+2.0 g/L Phytagel,愈伤诱导率分别为93%和88%。愈伤组织分化的培养基为:MS基础盐+20 g/L蔗糖+1 mL/L 1000×N&N维生素+2.0 mg/L TZR+10 mg/L GA_(3)+2.0 g/L Phytagel;2)证明了二次生根筛选法可准确鉴定马铃薯转基因阳性植株,准确率100%;3)建立了针对川芋50的农杆菌介导CRISPR/Cas9基因编辑体系,编辑率63%。【结论】通过对愈伤再生过程中各个影响因素进行试验以及利用农杆菌介导的CRISPR/Cas9技术进行编辑,建立了马铃薯川芋50的遗传转化体系和基因编辑体系。 展开更多
关键词 马铃薯 川芋50 根癌农杆菌 遗传转化 基因编辑 CRISPR/Cas9
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农杆菌介导的梭梭种子遗传转化体系初探
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作者 娜菲莎·木则帕尔 孙朗 +6 位作者 王萍 任燕萍 马丽 程聪 姚正培 王波 张桦 《中国草地学报》 北大核心 2025年第7期13-20,共8页
以梭梭种子为材料,在农杆菌种类、浓度、侵染时间优化条件后,进一步探索乙酰丁香酮(AS)、头孢霉素(Cef)、除草剂草铵膦(PPT)浓度对遗传转化的影响。结果表明:适合梭梭种子侵染的农杆菌菌株为GV3101,将带有伤口的梭梭种子在OD_(600)为0.... 以梭梭种子为材料,在农杆菌种类、浓度、侵染时间优化条件后,进一步探索乙酰丁香酮(AS)、头孢霉素(Cef)、除草剂草铵膦(PPT)浓度对遗传转化的影响。结果表明:适合梭梭种子侵染的农杆菌菌株为GV3101,将带有伤口的梭梭种子在OD_(600)为0.6的菌液中侵染10 min,在MS+150μmol/L AS培养基中共培养2 d后,转移至含头孢霉素的抗性培养基(MS+250 mg/mL Cef)中延迟筛选10~14 d,再在含有草铵膦的抗性筛选培养基(MS+250 mg/mL Cef+1.0 mg/L PPT)经过21~28 d培养,得到抗PPT梭梭苗,利用PCR检测和GUS染色验证,获得转基因阳性植株,转化率为1.6%~5.2%。 展开更多
关键词 梭梭种子 农杆菌介导 转化效率
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发根农杆菌介导的黄瓜CsPIP2;4过表达复合植株获得及耐盐性鉴定
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作者 陈思 陈梅 +2 位作者 赖梦霞 杜长霞 樊怀福 《河北农业大学学报》 北大核心 2025年第3期58-64,共7页
为明确CsPIP2;4在黄瓜盐胁迫耐性中的功能,本研究将含有pCAMBIA2300s载体的空质粒和pCAMBIA2300s:CsPIP2;4质粒分别转入发根农杆菌K599菌株中,通过下胚轴注射法获得根系CsPIP2;4过表达(OP)复合植株和空载(EV)复合植株。比较了盐胁迫处理... 为明确CsPIP2;4在黄瓜盐胁迫耐性中的功能,本研究将含有pCAMBIA2300s载体的空质粒和pCAMBIA2300s:CsPIP2;4质粒分别转入发根农杆菌K599菌株中,通过下胚轴注射法获得根系CsPIP2;4过表达(OP)复合植株和空载(EV)复合植株。比较了盐胁迫处理后2个不同复合植株形态特征,丙二醛(MDA)、可溶性糖和可溶性蛋白含量以及超氧化物歧化酶(SOD)活性差异。结果表明:与EV复合植株相比,盐胁迫下OP复合黄瓜植株长势更好,叶片失绿和边缘焦枯症状较轻,根系更发达。同时,叶片MDA含量和SOD活性降低,可溶性蛋白含量和可溶性糖含量升高,在胁迫7 d后各指标均达到显著或极显著差异水平。综上可知,CsPIP2;4正调控黄瓜植株的耐盐性且与其促进可溶性糖和可溶性蛋白等渗透调节物质积累密切相关。 展开更多
关键词 黄瓜 CsPIP2 4 发根农杆菌 复合植株 盐胁迫
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发根农杆菌介导的蓝莓遗传转化体系的建立
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作者 邬婷婷 刘凉琴 +5 位作者 姜燕琴 葛春峰 田亮亮 刘梦溪 曾其龙 於虹 《果树学报》 北大核心 2025年第8期1897-1904,共8页
【目的】建立蓝莓(Vaccinium corymbosum)简单、快速、经济的发根农杆菌转化体系。【方法】以蓝美1号蓝莓地栽植株当年生绿枝的茎段为外植体,使用携带GFP过表达质粒的发根农杆菌K599,在不同菌液浓度及不同添加剂组合(乙酰丁香酮和表面... 【目的】建立蓝莓(Vaccinium corymbosum)简单、快速、经济的发根农杆菌转化体系。【方法】以蓝美1号蓝莓地栽植株当年生绿枝的茎段为外植体,使用携带GFP过表达质粒的发根农杆菌K599,在不同菌液浓度及不同添加剂组合(乙酰丁香酮和表面活性剂)的筛选条件下,通过注射蓝莓茎段的芽点及两端切口进行侵染,利用GFP荧光检测和DNA检测进行转基因株系验证。【结果】GFP荧光检测发现茎段芽点及下端切口处分别产生表达荧光信号的侧芽及毛状根;在菌液OD600值为0.5~1.5的浓度区间,OD600值为1.0时诱导率最高达42.31%;不同添加剂组合对诱导率具有较大影响,200μmol·L-1乙酰丁香酮加0.05%表面活性剂的添加剂组合中诱导率最高达42.50%;最早在培养45 d时取材鉴定蓝莓遗传转化株系,从20个随机样本中测得14株转化植株,预期最高转化率为29.75%。【结论】建立了简单、快速的发根农杆菌介导的蓝美1号蓝莓遗传转化体系,为蓝莓的基因功能研究和良种选育提供技术支持。 展开更多
关键词 蓝美1号 遗传转化 发根农杆菌
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农杆菌介导的建兰品种市长红遗传转化体系的建立
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作者 周彬 曹桦 +3 位作者 陆琳 张钰莹 李涵 李东徽 《云南农业大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第4期111-119,共9页
【目的】探究农杆菌介导的建兰遗传转化体系。【方法】以建兰品种市长红(Cymbidium ensifolium‘Shizhanghong’)单龙根扩繁得到的根状茎作为试验材料,筛选影响其遗传转化的农杆菌菌株、乙酰丁香酮浓度和抗生素质量浓度,研究影响农杆菌... 【目的】探究农杆菌介导的建兰遗传转化体系。【方法】以建兰品种市长红(Cymbidium ensifolium‘Shizhanghong’)单龙根扩繁得到的根状茎作为试验材料,筛选影响其遗传转化的农杆菌菌株、乙酰丁香酮浓度和抗生素质量浓度,研究影响农杆菌介导建兰遗传转化效率和再生效率的主要因素。【结果】市长红遗传转化的最佳菌株为EHA105,乙酰丁香酮最适浓度为200μmol/L,潮霉素最佳质量浓度为40 mg/L。为保证高转化率和高再生率,市长红的最佳侵染体系为:预培养10 d后,在OD600值为0.4~0.6的农杆菌侵染液中振荡20 min,最后在黑暗条件下共培养3 d。通过筛选的最佳遗传转化条件,经绿色荧光蛋白鉴定、抗生素筛选、PCR和qRT-PCR检测,最终在180个市长红的根状茎中得到17株转基因阳性植株,转化率为9.44%。【结论】本研究建立了农杆菌介导的建兰品种市长红遗传转化体系,为其转基因育种奠定了基础。 展开更多
关键词 建兰品种市长红 根状茎 农杆菌侵染 遗传转化 绿色荧光蛋白(GFP)
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