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左金丸水提取液提高ATG4B含量促进自噬抑制三阴性乳腺癌进展
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作者 朱会宇 刘雅琳 +3 位作者 王思嘉 刘馨慧 黄华 管翼飞 《北京工业大学学报》 北大核心 2025年第8期995-1003,共9页
为研究中药左金丸水提取液对乳腺癌进展的影响,选用正常乳腺上皮细胞(MCF10A)、乳腺癌细胞(MCF7)、三阴性乳腺癌细胞(MB231)进行体外细胞实验研究。通过肿瘤细胞表型分析,证实左金丸对三阴性乳腺癌发展有显著抑制作用,可显著抑制其增殖... 为研究中药左金丸水提取液对乳腺癌进展的影响,选用正常乳腺上皮细胞(MCF10A)、乳腺癌细胞(MCF7)、三阴性乳腺癌细胞(MB231)进行体外细胞实验研究。通过肿瘤细胞表型分析,证实左金丸对三阴性乳腺癌发展有显著抑制作用,可显著抑制其增殖能力、迁移能力、侵袭能力及克隆形成能力。同时,其对正常乳腺细胞无显著性影响。进一步通过蛋白筛选分析,发现左金丸可显著性提高MB231 ATG4B蛋白水平,并显著性促进细胞自噬进程。通过药物诱导体外实验,确认了激活自噬进程可显著抑制MB231的肿瘤表型。此外,采用CRISPR/Cas9技术建立ATG4B敲除的MB231细胞株,将左金丸水提取液暴露该模型细胞后,发现左金丸对三阴性乳腺癌的抑制作用及对胞内自噬的调控能力均显著性减弱。结果表明:ATG4B蛋白是左金丸在三阴性乳腺癌MB231中的高特异性靶点,左金丸水提取液可显著提高ATG4B的表达,进而促进细胞自噬进程,抑制三阴性乳腺癌进展。 展开更多
关键词 左金丸 三阴性乳腺癌 atg4b 自噬 肿瘤 侵袭
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三白草中ATG4B抑制剂的发现及活性测定 被引量:1
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作者 郑雪萍 伏园园 +2 位作者 夏凡 顾琼 李民 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1252-1257,1229,共7页
验证从三白草中提取的两个化合物XGN56和XGN59对自噬关键蛋白ATG4B酶活性的影响及对自噬的调节作用。分子对接的方法验证化合物与游离ATG4B及ATG4B-LC3复合体的氢键结合作用;SDS-PAGE法及荧光共振能量转移法(FRET)测定化合物(10μmol/L... 验证从三白草中提取的两个化合物XGN56和XGN59对自噬关键蛋白ATG4B酶活性的影响及对自噬的调节作用。分子对接的方法验证化合物与游离ATG4B及ATG4B-LC3复合体的氢键结合作用;SDS-PAGE法及荧光共振能量转移法(FRET)测定化合物(10μmol/L)抑制ATG4B的IC50值;LC3融合GFP荧光标签检测化合物(10μmol/L)对LC3荧光聚集的影响,并设置正常组、给药组和药物联用Baf(0.5μmol/L)组;过表达GFP-LC3的WT-MEF及ATG5-/--MEF细胞检测化合物诱导LC3荧光点的情况。结果显示,XGN56和XGN59能分别与游离ATG4B和ATG4B-LC3复合体形成氢键作用,且两者均能剂量依赖地抑制ATG4B的酶切活性,体外IC50分别为7.74μmol/L和8.00μmol/L,同时能够ATG5依赖地促进GFP标记的自噬体的生成(P<0.001)。结果表明,两个化合物可能是通过一定程度地抑制ATG4B的酶活性从而促进细胞自噬水平。 展开更多
关键词 atg4b 三白草 分子对接 抑制剂 自噬
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丙戊酸钠通过激活miR-34c-5p/ATG4B信号通路抑制SH-SY5Y细胞自噬 被引量:1
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作者 戴旭芳 闫小晶 +1 位作者 谢鹏 连继勤 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期1415-1420,共6页
目的探讨丙戊酸钠(VPA)对SH-SY5Y细胞中miR-34c-5p/ATG4B信号通路的激活作用及对自噬的影响。方法人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y用含10%胎牛血清的DMEM培养基常规培养,然后使用不同剂量VPA处理SH-SY5Y细胞24 h,采用定量PCR分析VPA处理对ATG... 目的探讨丙戊酸钠(VPA)对SH-SY5Y细胞中miR-34c-5p/ATG4B信号通路的激活作用及对自噬的影响。方法人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y用含10%胎牛血清的DMEM培养基常规培养,然后使用不同剂量VPA处理SH-SY5Y细胞24 h,采用定量PCR分析VPA处理对ATG4B m RNA与miR-34c-5p表达的影响,免疫印迹法分析VPA处理对ATG4B蛋白表达的影响,将含ATG4B启动子片段的报告质粒转染SH-SY5Y细胞,然后通过荧光素酶报告基因系统分析VPA处理对ATG4B启动子活性的影响,用VPA单独或联合转录抑制剂放线菌素D分别处理SH-SY5Y细胞不同时间,定量PCR分析检测不同处理对ATG4B mRNA稳定性的影响,用VPA单独或联合miR-34c-5p抑制剂处理细胞24 h,通过检测不同处理对ATG4B表达变化的影响,进而判断miR-34c-5p在VPA下调ATG4B表达中的作用,同时通过Western blot检测不同处理对LC3-II表达的影响,分析细胞自噬水平变化。结果 VPA可剂量依赖性降低SH-SY5Y细胞中ATG4B的mRNA和蛋白水平(P<0.05)。VPA处理不影响SHSY5Y细胞中ATG4B的启动子活性(P>0.05),但显著下调其mRNA的稳定性(P<0.05)。同时,VPA处理明显增强SH-SY5Y细胞中miR-34c-5p的表达水平(P<0.05)。使用miR-34c-5p抑制剂与VPA联合处理SH-SY5Y细胞,可逆转VPA对ATG4B表达的下调作用。VPA处理还下调了SH-SY5Y细胞中LC3-II的表达水平(P<0.05)。结论 VPA可能通过激活miR-34c-5p/ATG4B信号通路而抑制SH-SY5Y细胞自噬。 展开更多
关键词 丙戊酸钠 SH-SY5Y细胞 atg4b miR-34c-5p 自噬
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自噬相关蛋白ATG4B抑制剂的虚拟筛选及体外活性测定 被引量:2
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作者 伏园园 吴一诺 +7 位作者 喻秀 郭讷 张仁伟 刘翠 郑雪萍 戴琪 刘培庆 李民 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期321-326,共6页
目的通过计算机虚拟筛选和体外活性测定,筛选自噬相关蛋白ATG4B的特异性小分子抑制剂。方法基于ATG4B蛋白的晶体结构(PDB ID:2CY7)找出合适的对接口袋;用分子对接方法对SPECS数据库20万化合物进行虚拟筛选并确定候选化合物;用荧光共振... 目的通过计算机虚拟筛选和体外活性测定,筛选自噬相关蛋白ATG4B的特异性小分子抑制剂。方法基于ATG4B蛋白的晶体结构(PDB ID:2CY7)找出合适的对接口袋;用分子对接方法对SPECS数据库20万化合物进行虚拟筛选并确定候选化合物;用荧光共振能量转移方法(FRET)检测候选化合物对ATG4B的体外抑制活性并对其特异性进行验证。结果确定受体蛋白2CY7的site 5为最适的对接口袋;分子对接后经综合分析选择并购买30个代表性化合物做进一步活性测定。活性测定结果显示,AG-690/10400046能有效抑制ATG4B蛋白的活性,而对半胱氨酸蛋白酶家族的另一成员caspase-3无酶切抑制作用。结论建立了一种ATG4B蛋白抑制剂的虚拟筛选方法。筛选得到的化合物AG-690/10400046具有明显的体外抑制活性,为后续ATG4B抑制剂的生理功能研究奠定基础。 展开更多
关键词 atg4b 抑制剂 分子对接 虚拟筛选 自噬 活性口袋5
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