Bifidobacterium bifidum ATCC 29521 β-半乳糖苷酶的生物信息学分析、异源表达及其酶学性质 被引量：1

1

作者 符长春 杨瑞金 仝艳军 《食品科学》 北大核心 2025年第6期98-107,共10页

本研究旨在为低聚半乳糖(galactooligosaccharide,GOS)的合成提供新的双歧杆菌酶源,对Bifidobacterium bifidum ATCC 29521的β-半乳糖苷酶(β-gal^(^(ATCC29521)))进行生物信息学分析,并在Escherichia coli BL21(DE3)中实现异源表达。... 本研究旨在为低聚半乳糖(galactooligosaccharide,GOS)的合成提供新的双歧杆菌酶源,对Bifidobacterium bifidum ATCC 29521的β-半乳糖苷酶(β-gal^(^(ATCC29521)))进行生物信息学分析,并在Escherichia coli BL21(DE3)中实现异源表达。研究β-gal^(ATCC29521)的异源表达条件和发酵优化条件、酶学性质及其在乳清体系合成GOS的应用。生物信息学分析表明β-gal^(ATCC29521)属于糖苷水解酶家族2,不存在信号肽和跨膜区。发酵优化实验结果表明,E.coli BL21(DE3)-pET28a-β-gal^(ATCC29521)重组菌在含有10 g/L蔗糖、12 g/L胰蛋白胨、24 g/L酵母粉的培养基中,且0.05 mmol/L的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷在27℃诱导培养16 h后,酶活力可达318.03 U/mL。粗酶液经过镍柱亲和层析得到电泳纯蛋白,其最适pH值和最适温度分别为7.5和40℃。β-gal^(ATCC29521)纯化酶在温度10~30℃和pH 6.5~9.0范围内表现出良好的稳定性。Mn^(2+)和Mg^(2+)可显著提高酶活性,Cu^(2+)和Fe^(3+)则显著抑制酶活性。以乳清为底物合成GOS时,该酶的产率为29.83%。研究结果表明β-gal^(ATCC29521)在GOS的制备领域中具有潜在的应用价值。 展开更多

关键词 低聚半乳糖 Β-半乳糖苷酶 Bifidobacterium bifidum atcc 29521 发酵优化 酶学性质

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大肠杆菌菌株ATCC 25922碱性磷酸酶的原核表达、纯化及其活性研究 被引量：6

2

作者 高明春 李雪萌 +1 位作者 张润祥 王君伟 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期48-53,共6页

使用常规PCR法以大肠杆菌菌株ATCC 25922基因组为模板,克隆到该菌株的碱性磷酸酶成熟肽基因,并将其构建到原核表达载体pET-30a（＋）的Bam HⅠ、XhoⅠ之间,获得重组表达载体pET-30a-EAP。并且我们将pET-30a-EAP转化到大肠杆菌RosettaTM... 使用常规PCR法以大肠杆菌菌株ATCC 25922基因组为模板,克隆到该菌株的碱性磷酸酶成熟肽基因,并将其构建到原核表达载体pET-30a（＋）的Bam HⅠ、XhoⅠ之间,获得重组表达载体pET-30a-EAP。并且我们将pET-30a-EAP转化到大肠杆菌RosettaTM（DE3）pLysS中,经IPTG诱导表达后,获得大小为52ku的目的蛋白EAP。经试验证明该蛋白以可溶形式为主。进而,高效表达的重组碱性磷酸酶经亲和层析法纯化后被用于活性鉴定。pNPP的显色反应与去磷酸化试验证实来自ATCC 25922的重组碱性磷酸酶具有催化磷酸单酯水解活性,而且酶热稳定性高、有效工作温度范围大,与其他蛋白融合表达时仍保持酶活性。以上研究结果为大肠杆菌菌株ATCC 25922碱性磷酸酶的规模化生产及在免疫酶技术领域中的应用提供了重要的参考依据。 展开更多

关键词 大肠杆菌碱性磷酸酶 atcc25922 表达纯化 活性鉴定

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ATCC碱性纤维素酶产生菌产酶特性的重新确定 被引量：3

3

作者 孔舒 刘刚 +1 位作者 刘森林 邢苗 《深圳大学学报（理工版）》 EI CAS 北大核心 2005年第3期253-257,共5页

研究美国典型培养物保藏中心(ATCC)提供的菌株ATCC21833(HorikoshiK定名为芽孢杆菌Bacillussp.N4)的纤维素酶合成基因后,发现该基因与HorikoshiK定名的N4基因并不具有同源性.为此重新研究了该菌株的产酶特征和所产生碱性纤维素酶的部分... 研究美国典型培养物保藏中心(ATCC)提供的菌株ATCC21833(HorikoshiK定名为芽孢杆菌Bacillussp.N4)的纤维素酶合成基因后,发现该基因与HorikoshiK定名的N4基因并不具有同源性.为此重新研究了该菌株的产酶特征和所产生碱性纤维素酶的部分酶学特性.结果表明,羧甲基纤维素为最适宜的碳源,在以羧甲基纤维素、蛋白胨和酵母抽提物为主要组分的培养基中进行培养,碱性纤维素酶的活性可以达到0.64U/mL,所产生的碱性纤维素的最适pH值为10.0,最适反应温度为40℃.其产酶特性和酶学性质和N4菌株有较大差异. 展开更多

关键词 芽孢杆菌 碱性纤维素酶 羧甲基纤维素 atcc

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近平滑假丝酵母ATCC 7330的生长条件优化 被引量：3

4

作者 罗华军 刘云 +5 位作者 王亚宁 邱勇 余华顺 戴秋红 姚鹃 龚大春 《化学与生物工程》 CAS 2019年第2期12-16,共5页

通过单因素实验和正交实验,对近平滑假丝酵母ATCC 7330生长的营养元素和发酵条件进行了优化。结果表明,近平滑假丝酵母ATCC 7330生长的最优培养基配方为:MgSO_40.8g·L^(-1)、(NH_4)_2HPO_4 16g·L^(-1)、蔗糖25.98g·L^(-1... 通过单因素实验和正交实验,对近平滑假丝酵母ATCC 7330生长的营养元素和发酵条件进行了优化。结果表明,近平滑假丝酵母ATCC 7330生长的最优培养基配方为:MgSO_40.8g·L^(-1)、(NH_4)_2HPO_4 16g·L^(-1)、蔗糖25.98g·L^(-1)、酵母浸粉12g·L^(-1),最适发酵初始pH值为5.0,最适通风量为3.0L·min^(-1),在此条件下,菌体量比优化前提高110%。该研究为近平滑假丝酵母ATCC 7330整细胞催化应用奠定了基础。 展开更多

关键词 近平滑假丝酵母atcc7330 生长特性 培养基 发酵条件 优化

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标准菌株ATCC 16404的分类学进展及影响 被引量：4

5

作者 姚粟 程池 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期134-137,共4页

作为丝孢类真菌的代表菌株,标准菌株ATCC 16404被列入包括《美国药典》在内的各类标准中。2008年,Jan Houseknecht等人通过表型结合基因型的多相鉴定技术,确认该菌株为巴西曲霉(Aspergillus brasiliensis)。2010年新版《美国药典》和世... 作为丝孢类真菌的代表菌株,标准菌株ATCC 16404被列入包括《美国药典》在内的各类标准中。2008年,Jan Houseknecht等人通过表型结合基因型的多相鉴定技术,确认该菌株为巴西曲霉(Aspergillus brasiliensis)。2010年新版《美国药典》和世界微生物菌种数据中心(WDCM)编制的《培养基相关参考菌株目录》采纳了该菌株新的分类学描述。这一变化会导致各国对标准中涉及的黑曲霉标准菌株重新进行分类学鉴定,并对内部相关的SOP进行修改。文中详细介绍了该菌株的历史、基本特征、在标准中的应用情况以及新的多相分类鉴定研究进展。 展开更多

关键词 标准菌株 atcc 16404 黑曲霉 巴西曲霉

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近平滑假丝酵母ATCC 7330中羰基还原酶双水相萃取工艺研究 被引量：2

6

作者 王伟 刘云 +3 位作者 余华顺 戴秋红 姚鹃 龚大春 《化学与生物工程》 CAS 2020年第1期8-12,共5页

研究了聚乙二醇(PEG)/硫酸铵[(NH4)2SO4]双水相体系萃取近平滑假丝酵母ATCC 7330粗酶液中羰基还原酶的工艺,考察了无机盐种类、PEG分子量及其质量分数、(NH4)2SO4质量分数、萃取温度、萃取时间等因素对羰基还原酶纯化倍数的影响。确定... 研究了聚乙二醇(PEG)/硫酸铵[(NH4)2SO4]双水相体系萃取近平滑假丝酵母ATCC 7330粗酶液中羰基还原酶的工艺,考察了无机盐种类、PEG分子量及其质量分数、(NH4)2SO4质量分数、萃取温度、萃取时间等因素对羰基还原酶纯化倍数的影响。确定最优的双水相萃取条件为:(NH4)2SO4质量分数15%、PEG1000质量分数19%、萃取温度16℃、萃取时间15 min,在此条件下,羰基还原酶的纯化倍数可达6倍。为近平滑假丝酵母ATCC 7330中羰基还原酶在手性化合物的绿色合成中的应用奠定了基础。 展开更多

关键词 近平滑假丝酵母atcc 7330 羰基还原酶 PEG/(NH4)2SO4 双水相萃取

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Acidithiobacillus ferrooxidans ATCC23270与矿物吸附过程的热量变化及不同条件下代谢热的基础研究 被引量：1

7

作者 王秀美 柳建设 +4 位作者 李邦梅 朱建裕 王铧泰 闫颖 邱冠周 《高校地质学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期256-262,共7页

用微量热技术研究了不同条件下Acidithiobacillus ferrooxidans ATCC23270（以下简写为A.ferrooxidans ATCC23270）与硫化矿吸附过程的热量变化以及不同细菌浓度、不同的初始pH值及不同的培养条件下细菌的代谢产热情况。研究发现,矿浆浓... 用微量热技术研究了不同条件下Acidithiobacillus ferrooxidans ATCC23270（以下简写为A.ferrooxidans ATCC23270）与硫化矿吸附过程的热量变化以及不同细菌浓度、不同的初始pH值及不同的培养条件下细菌的代谢产热情况。研究发现,矿浆浓度0.03g/mL,细菌浓度1.7×10^8个/mL的时候细菌与矿物的吸附放热最大。不同条件培养的细菌胞外多聚物的组成不同,与矿物吸附的反应热也不相同,黄铁矿培养细菌胞外多聚物含量最高,反应热也最高,说明细菌胞外多聚物在吸附过程中起重要作用。用微量热法能够很好地反映出细菌生长代谢过程中每个微观时刻的热量变化。对于A.ferrooxidans ATCC23270,最佳的代谢产热条件为：pH值为2.0和2.3,细菌浓度为3.0×10^8个/mL。不同培养条件下的细菌的生长代谢热不同,2039＋FeSO4培养的代谢热最大、放热最快。 展开更多

关键词 微量热技术 A.ferrooxidans atcc23270 吸附 代谢热

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Streptomyces sahachiroi ATCC 33158中启动子P_(aziU1)的克隆及表达 被引量：1

8

作者 周俊 何璟 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期26-31,共6页

为鉴定和分析aziU1基因的启动子PaziU1,将该基因上游183bp的DNA片段和组成型强启动子PermE*(作为阳性对照)分别克隆到启动子探针载体pIJ8660中,以增强型的绿色荧光蛋白基因(egfp)作为报告基因,通过检测菌丝体中绿色荧光的强弱,对PaziU1... 为鉴定和分析aziU1基因的启动子PaziU1,将该基因上游183bp的DNA片段和组成型强启动子PermE*(作为阳性对照)分别克隆到启动子探针载体pIJ8660中,以增强型的绿色荧光蛋白基因(egfp)作为报告基因,通过检测菌丝体中绿色荧光的强弱,对PaziU1的启动子活性进行了定性和定量分析。PaziU1在3种不同的链霉菌Streptomyces sahachiroi、Streptomyces lividans ZX1和Streptomyces albus中均表现出启动子活性。PaziU1的启动子活性在初始培养的36h略低于PermE*,在培养48h后,PaziU1的表达活性高于PermE*。结果表明,Pazi U1与PermE*一样,是一个可以在链霉菌中组成型表达的强启动子。 展开更多

关键词 STREPTOMYCES sahachiroi atcc 33158 PermE* 启动子探针载体 PaziU1 增强型绿色荧光蛋白(EGFP) 组成型强启动子

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Lactobacillus rhamnosus ATCC53103和Escherichia coli ATCC8739对结直肠癌细胞CT26增殖及凋亡的影响

9

作者 郑芸 钱秀萍 +2 位作者 陈代杰 戈梅 毛文伟 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期1153-1157,1162,共6页

目的:探究Lactobacillus rhamnosus ATCC53103、Escherichia coli ATCC8739对CT26细胞增殖、迁移及凋亡的影响。方法:以CT26细胞为研究对象,1∶100加入L.rhamnosus ATCC53103与E.coli ATCC8739,定植培养一定时间后,分别采用台盼蓝染色... 目的:探究Lactobacillus rhamnosus ATCC53103、Escherichia coli ATCC8739对CT26细胞增殖、迁移及凋亡的影响。方法:以CT26细胞为研究对象,1∶100加入L.rhamnosus ATCC53103与E.coli ATCC8739,定植培养一定时间后,分别采用台盼蓝染色法、划痕法、流式细胞仪检测细胞的增殖、迁移以及凋亡,采用RT-PCR与Western blot方法检测凋亡基因caspase-3、caspase-9、bcl-2、bax、fas的转录水平与表达情况。结果:L.rhamnosus ATCC53103和E.coli ATCC8739对CT26细胞的增殖与迁移有抑制作用,并促进CT26细胞的凋亡。两者相比较,L.rhamnosus ATCC53103的作用更为缓和。经RT-PCR和Western blot检测发现,L.rhamnosus ATCC53103使得CT26细胞凋亡基因caspase-3、caspase-9的表达上调,而E.coli使得CT26细胞凋亡基因caspase-3表达下调。结论:L.rhamnosus ATCC53103和E.coli ATCC8739能抑制CT26细胞的增殖、迁移,促进细胞的凋亡,L.rhamnosus ATCC53103可能通过线粒体相关途径使细胞发生凋亡;而E.coli ATCC8739则不是通过caspase-3执行细胞的凋亡作用。 展开更多

关键词 LACTOBACILLUS rhamnosus atcc53103 ESCHERICHIA COLI atcc8739 CT26 凋亡

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产青霉素酰化酶的大肠杆菌ATCC11105在两水相系统中的动力学性质研究

10

作者 曹学君 孟祥安 +3 位作者 刘彦明 邬行彦 姜增莲 杨莉娟 《中国抗生素杂志》 CSCD 北大核心 1994年第1期3-5,20,共4页

本文研究了产青霉素酰化酶的大肠杆菌ＡＴＣＣ１１１０５在ＰＥ６２００００－ＤｅｘｔｒａｎＴ７０两水相系统中的动力学行为，并与在磷酸盐缓冲液中的动力学行为进行了对照。产青霉素酰化酶的菌体在两水相体系中的Ｋ＿ｍ值为４．３５... 本文研究了产青霉素酰化酶的大肠杆菌ＡＴＣＣ１１１０５在ＰＥ６２００００－ＤｅｘｔｒａｎＴ７０两水相系统中的动力学行为，并与在磷酸盐缓冲液中的动力学行为进行了对照。产青霉素酰化酶的菌体在两水相体系中的Ｋ＿ｍ值为４．３５ｍｍｏｌ／Ｌ，最适ｐＨ值为８．０，最适温度为５５℃，最稳定ｐＨ值为６．０～７．０，最稳定温度为３０℃；在磷酸盐缓冲液中Ｋ＿ｍ值为７．２０ｍｍｏｌ／Ｌ，最适ｐＨ值为８．０，最适温度为６５℃，最稳定ｐＨ值为８．０，最稳定温度为３５℃。 展开更多

关键词 大肠杆菌 atcc11105 青霉素 酰化酶

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瑞士乳杆菌ATCC 15009对干酪成熟的影响

11

作者 温阿祎 王希璠 +1 位作者 郭慧媛 冷小京 《中国奶牛》 2014年第2期25-29,共5页

干酪的成熟是形成干酪特有的风味、质地和组织状态以及影响加工成本的最关键工艺。添加辅助发酵剂是目前较为成熟的一种促进干酪成熟的方法。本文将不同剂量的瑞士乳杆菌ATCC?15009作为辅助发酵剂添加到古达奶酪中,通过检测奶酪成熟过... 干酪的成熟是形成干酪特有的风味、质地和组织状态以及影响加工成本的最关键工艺。添加辅助发酵剂是目前较为成熟的一种促进干酪成熟的方法。本文将不同剂量的瑞士乳杆菌ATCC?15009作为辅助发酵剂添加到古达奶酪中,通过检测奶酪成熟过程中的乳酸菌自溶情况、可溶性氮含量以及感官评定等指标分析了ATCC?15009对奶酪成熟的影响。结果证明瑞士乳杆菌ATCC?15009具有很强的自溶能力,可以有效分解蛋白质并促进干酪的成熟,同时改善干酪的风味。 展开更多

关键词 干酪 成熟 瑞士乳杆菌atcc 15009 自溶 可溶性氮 LACTOBACILLUS helveticus atcc 15009 SN(Soluble Nitrogen)

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近平滑假丝酵母ATCC 7330对不同取代基乙酮类底物的催化效果

12

作者 刘云 王伟 +6 位作者 郭金玲 任立伟 罗华军 余华顺 戴秋红 姚鹃 龚大春 《化学与生物工程》 CAS 2020年第2期17-21,共5页

通过对接模拟和催化转化实验研究了近平滑假丝酵母ATCC 7330对10种不同取代基乙酮类底物的催化效果。结果表明:近平滑假丝酵母ATCC 7330整细胞催化对芳环取代乙酮类底物的光学选择性优于脂环取代乙酮类底物,对氨基苯乙酮的光学选择性最... 通过对接模拟和催化转化实验研究了近平滑假丝酵母ATCC 7330对10种不同取代基乙酮类底物的催化效果。结果表明:近平滑假丝酵母ATCC 7330整细胞催化对芳环取代乙酮类底物的光学选择性优于脂环取代乙酮类底物,对氨基苯乙酮的光学选择性最高,与模拟对接预测的结合能大小一致;从催化剂周转数来看,近平滑假丝酵母ATCC 7330整细胞对10种不同取代基乙酮类底物的催化能力大小依次为对氯苯乙酮=邻氯苯乙酮>1-萘乙酮>对氨基苯乙酮>环戊基乙酮>环己基乙酮>邻氨基苯乙酮>1-(1H-茚-4-基)乙酮>苯乙酮>环丙基乙酮,与对接模拟预测有一定差距。说明近平滑假丝酵母ATCC 7330整细胞的催化能力除了与结合能有关外,还与细胞的渗透性、反应溶剂等因素有关。 展开更多

关键词 近平滑假丝酵母atcc 7330 乙酮类底物 底物适应性 催化效果

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谷氨酸棒杆菌ATCC13032原生质体的制备与再生

13

作者 张媛媛 刘建忠 《中国调味品》 CAS 北大核心 2011年第9期41-44,50,共4页

以谷氨酸棒杆菌ATCC13032为出发菌,研究了青霉素浓度及溶菌酶浓度对原生质体形成率的影响,以及氯化钙和二甲基亚砜等物质的添加对其再生率的影响。结果表明最佳青霉素浓度及溶菌酶浓度分别为0.6U/mL和1mg/mL,在此条件下谷氨酸棒杆菌ATCC... 以谷氨酸棒杆菌ATCC13032为出发菌,研究了青霉素浓度及溶菌酶浓度对原生质体形成率的影响,以及氯化钙和二甲基亚砜等物质的添加对其再生率的影响。结果表明最佳青霉素浓度及溶菌酶浓度分别为0.6U/mL和1mg/mL,在此条件下谷氨酸棒杆菌ATCC13032原生质体形成率达96%。为进一步提高原生质体再生率,尝试了4种添加物,其中氯化钙及二甲基亚砜能显著提高原生质体再生率。当3g/L氯化钙和10mL/L的二甲基亚砜组合添加时原生质体再生率更可达34%,是未添加的2.1倍,达到采用夹层法培养能获得再生率的最大值。 展开更多

关键词 谷氨酸棒杆菌atcc13032 原生质体 再生

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绿脓杆菌ATCC27853的耐药性变化

14

作者 苏建荣 马纪平 《首都医科大学学报》 CAS 2002年第2期182-183,共2页

关键词 绿脓杆菌atcc27853 耐药性 抗生素 药敏试验

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Streptomyces sahachiroi ATCC 33158中Ⅱ型聚酮合酶基因sahA的功能分析 被引量：2

15

作者 李华 鲁慧囡 何璟 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期12-17,共6页

以酮基合酶基因KSa的简并性引物对Streptomyces sahachiroi基因组进行扩增,发现除了已知的阿嗪霉素B生物合成基因簇以外,还存在一个潜在的聚酮合酶(PKS)基因sahA。对sahA编码的氨基酸序列进行同源性比对及进化树分析,结果表明,sahA属于... 以酮基合酶基因KSa的简并性引物对Streptomyces sahachiroi基因组进行扩增,发现除了已知的阿嗪霉素B生物合成基因簇以外,还存在一个潜在的聚酮合酶(PKS)基因sahA。对sahA编码的氨基酸序列进行同源性比对及进化树分析,结果表明,sahA属于Ⅱ型聚酮合酶基因家族,与合成孢子色素的基因亲缘关系较近。通过单交换中断sahA基因后,链霉菌孢子的颜色由铅灰色变为白色,而产孢时间、孢子的产量以及其抗紫外线的能力都没有变化,对抗生素阿嗪霉素B的产量也没有影响。初步证实这个潜在的Ⅱ型聚酮合酶基因sahA很可能与S.sahachiroi孢子色素的生物合成有关。 展开更多

关键词 STREPTOMYCES sahachiroi atcc 33158 Ⅱ型聚酮合酶 孢子色素 进化树分析 单交换

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Streptomyces sahachiroi ATCC 33158中一个Ⅲ型聚酮合酶基因的克隆及功能分析 被引量：2

16

作者 强慧玲 原海亮 何璟 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期13-20,共8页

从链霉菌Streptomyces sahachiroi ATCC 33158基因组中克隆到1个聚酮合酶(polyketide synthase,PKS)基因orf18。生物信息学及进化树分析表明它可能属于rppA类Ⅲ型PKS基因。通过RT-PCR证实了该基因在野生型S.sahachiroi中是可以进行转录... 从链霉菌Streptomyces sahachiroi ATCC 33158基因组中克隆到1个聚酮合酶(polyketide synthase,PKS)基因orf18。生物信息学及进化树分析表明它可能属于rppA类Ⅲ型PKS基因。通过RT-PCR证实了该基因在野生型S.sahachiroi中是可以进行转录表达的。HPLC和LC-MS分析的结果表明orf18在S.lividans中异源表达时可产生1,3,6,8-四羟基萘(THN),并且发现该基因也可以在革兰氏阴性菌Pseudomonas stutzeri中异源表达并产生明显的棕红色色素。证明orf18编码的蛋白属于RppA类Ⅲ型PKS,可催化THN的合成,而产物THN在革兰氏阴性菌P.stutzeri中可进一步氧化及聚合形成棕红色色素。 展开更多

关键词 链霉菌atcc 33158 Ⅲ型PKS RT-PCR 异源表达 1 3 6 8-四羟基萘

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解藻酸弧菌株ATCC 17749中海藻酸裂解酶基因的克隆与鉴定 被引量：1

17

作者 胥晴晴 朱云霞 +2 位作者 王克平 叶江 张惠展 《华东理工大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期29-34,41,共7页

以解藻酸弧菌株(Vibrio alginolyticus)ATCC 17749为研究对象,利用生物信息学寻找并预测得到5个可能的海藻酸裂解酶基因algV1、algV2、algV3、algV4和algV5。通过构建5个以pET-28a(+)为载体的大肠杆菌表达质粒pET28a-algV1、pET28a-algV... 以解藻酸弧菌株(Vibrio alginolyticus)ATCC 17749为研究对象,利用生物信息学寻找并预测得到5个可能的海藻酸裂解酶基因algV1、algV2、algV3、algV4和algV5。通过构建5个以pET-28a(+)为载体的大肠杆菌表达质粒pET28a-algV1、pET28a-algV2、pET28a-algV3、pET28a-algV4和pET28a-algV5,实现了5个基因的异源表达,并经海藻酸裂解酶定量和定性的活性分析,确定5个基因的编码产物都具有海藻酸裂解酶活性,其中重组的algV1、algV2和algV3为胞外酶,algV4和algV5为胞内酶。 展开更多

关键词 解藻酸弧菌atcc 17749 海藻酸裂解酶 大肠杆菌 异源表达 酶活测定

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金黄色葡萄球菌ATCC25923人工感染BALB/c雌鼠肾脏组织PRNP和PRND的表达变化研究 被引量：2

18

作者 孙康永杰 魏亚琴 +6 位作者 杨宇泽 万学瑞 樊杰 赵波 赵云海 郭容霞 王川 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期988-992,1013,共6页

目的为了研究细胞型朊蛋白和Doppel蛋白在金黄色葡萄球菌感染中的作用。方法本实验用金黄色葡萄球菌ATCC25923感染BALB/c雌鼠后,分别在1~7 d内解剖小鼠,进行组织抹片革兰氏染色和石蜡切片制作,最后采用荧光定量PCR检测PRNP和PRND在1~7 ... 目的为了研究细胞型朊蛋白和Doppel蛋白在金黄色葡萄球菌感染中的作用。方法本实验用金黄色葡萄球菌ATCC25923感染BALB/c雌鼠后,分别在1~7 d内解剖小鼠,进行组织抹片革兰氏染色和石蜡切片制作,最后采用荧光定量PCR检测PRNP和PRND在1~7 d中的相对表达量。结果金黄色葡萄球菌最先出现在肾脏,且对肾脏组织有损伤作用;PRNP和PRND基因在每个时段的表达量都高于空白对照组,其中PRNP在第1 d的表达量最高,为空白对照组的6.1倍,PRND在第2 d的表达量最高,为空白对照组的13.1倍。结论小鼠肾脏的PRNP和PRND的mRNA表达水平随着金黄色葡萄球菌感染的时间发生变化。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌atcc25923 PRNP基因 PRND基因 荧光定量PCR

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红花籽粕对紫色色杆菌ATCC12472群体感应抑制作用 被引量：2

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作者 王海亮 牛俊丽 +3 位作者 南珊珊 李佳橙 聂存喜 张文举 《饲料研究》 CAS 北大核心 2021年第19期85-88,共4页

试验旨在以群体感应相关性状紫色色杆菌ATCC12472产生的紫色素为评价指标研究红花籽粕对群体感应抑制作用。采用倍比稀释法测定不同终浓度红花籽粕提取物对紫色色杆菌ATCC12472的最小抑菌浓度(MIC)及生长抑制作用;采用指示菌平板法和色... 试验旨在以群体感应相关性状紫色色杆菌ATCC12472产生的紫色素为评价指标研究红花籽粕对群体感应抑制作用。采用倍比稀释法测定不同终浓度红花籽粕提取物对紫色色杆菌ATCC12472的最小抑菌浓度(MIC)及生长抑制作用;采用指示菌平板法和色素产量抑制法定性、定量检测在亚抑菌浓度下红花籽粕提取物对紫色色杆菌ATCC12472紫色素产生的抑制作用。结果显示,红花籽粕对紫色色杆菌ATCC12472的MIC为300 g/L,亚抑菌浓度下红花籽粕提取物对紫色色杆菌ATCC12472的生长无显著抑制作用(P>0.05);亚抑菌浓度下红花籽粕提取物对紫色色杆菌ATCC12472紫色素的产生均具有抑制作用,其终浓度为25、50、100、200 g/L红花籽粕提取物对紫色色杆菌ATCC12472紫色素的抑制率分别为7.5%、26.4%、32.5%、62.7%。研究表明,红花籽粕中的某些活性物质对紫色色杆菌ATCC12472的群体感应具有抑制作用。 展开更多

关键词 红花籽粕 紫色色杆菌atcc12472 群体感应抑制

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蓝杆藻ATCC 51142中α-酮戊二酸脱羧酶的克隆与表达 被引量：1

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作者 谢琮琮 许文武 +5 位作者 李至敏 王小琴 雷国风 张伟 黄婷 李志敏 《江苏农业科学》 2018年第19期37-39,共3页

α-酮戊二酸脱羧酶催化α-酮戊二酸的非氧化脱羧生成琥珀酸半醛,其在琥珀酸半醛脱氢酶的作用下转化为琥珀酸,蓝藻的三羧酸循环由于这2个酶的存在而变得完整。Blast序列分析发现,蓝杆藻ATCC 51142中cce4227基因编码α-酮戊二酸脱羧酶。... α-酮戊二酸脱羧酶催化α-酮戊二酸的非氧化脱羧生成琥珀酸半醛,其在琥珀酸半醛脱氢酶的作用下转化为琥珀酸,蓝藻的三羧酸循环由于这2个酶的存在而变得完整。Blast序列分析发现,蓝杆藻ATCC 51142中cce4227基因编码α-酮戊二酸脱羧酶。为了证实cce4227基因编码蛋白的催化功能,从蓝杆藻ATCC 51142基因组中克隆cce4227基因,然后构建pET28a-cce4227表达质粒。将该质粒与p Tf16分子伴侣质粒共转化BL21(DE3)大肠杆菌感受态细胞后进行重组蛋白的诱导表达。利用镍亲和层析方法对cce4227蛋白进行分离纯化,得到纯度> 95%的cce4227蛋白,菌体蛋白收率约为12 mg/g。酶动力学测试表明,cce4227蛋白是1个焦磷酸硫胺素(TPP)依赖型的α-酮戊二酸脱羧酶。 展开更多

关键词 蓝杆藻atcc51142 α-酮戊二酸脱羧酶 基因克隆 重组表达 蛋白质纯化

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