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pEGFP-C2-ASIC2a真核表达载体的构建及其在大鼠关节软骨细胞中的表达
1
作者
倪文琳
唐杰
+2 位作者
潘春晓
葛金芳
陈飞虎
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2014年第3期304-308,共5页
目的通过构建真核表达pEGFP-C2-ASIC2a质粒,转染大鼠关节软骨细胞,建立ASIC2a在关节软骨细胞中过表达的模型,观察ASIC2a mRNA及其蛋白在细胞中的表达。方法从大鼠脑组织中提取目的基因ASIC2a,并用EcoRⅠ和KpnⅠ进行双酶切,同时用这两种...
目的通过构建真核表达pEGFP-C2-ASIC2a质粒,转染大鼠关节软骨细胞,建立ASIC2a在关节软骨细胞中过表达的模型,观察ASIC2a mRNA及其蛋白在细胞中的表达。方法从大鼠脑组织中提取目的基因ASIC2a,并用EcoRⅠ和KpnⅠ进行双酶切,同时用这两种酶双酶切质粒pEGFPC2,将其酶切产物按常规方法连接并转化入大肠杆菌DH5a,挑单克隆菌进行培养,提取质粒,再通过双酶切鉴定及测序后,用Lipofectamine 2000将所构建质粒转染入关节软骨细胞,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,使用RT-PCR和Western blot法检测ASIC2a mRNA和蛋白表达,以鉴定模型建立成功与否。结果进行双酶切鉴定目的条带清晰准确,转染后可在荧光显微镜下观察到绿色荧光表达,通过RT-PCR可发现mRNA转录,Western blot法可发现目的蛋白表达。结论成功构建重组pEGFP-C2-ASIC2a表达载体,将用于进一步观察ASICs对软骨细胞的影响。
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关键词
asic2a
PEGFP-C2
软骨细胞
基因表达
蛋白表达
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职称材料
电针“内关”穴对心肌缺血大鼠ASIC2、ASIC3蛋白及基因表达影响的实验研究
被引量：
4
2
作者
王树东
董宝强
张立德
《中华中医药学刊》
CAS
北大核心
2015年第6期1360-1363,共4页
目的:实验通过电针"内关"穴,观察其对心肌缺血大鼠ASIC2、ASIC3蛋白及基因表达的影响。方法:选用健康SPF级雄性SD大鼠50只,体质量(230±50)g,由辽宁长生生物技术有限公司提供,采用随机对照方法分为正常组(A)、模型组(B)...
目的:实验通过电针"内关"穴,观察其对心肌缺血大鼠ASIC2、ASIC3蛋白及基因表达的影响。方法:选用健康SPF级雄性SD大鼠50只,体质量(230±50)g,由辽宁长生生物技术有限公司提供,采用随机对照方法分为正常组(A)、模型组(B)、内关组(C)、列缺组(D)、非经非穴组(E),每组10只。四肢皮下多点注射异丙肾上腺素。剂量:85 mg/kg,日1次,连续两次成模。造模成功后,分别进行电针治疗。1周后,各组SD大鼠腹腔注射水合氯醛(1 m L/100 g),活体分离大鼠左心室心肌,置于EP管中,放入-70℃冰箱,Western blot法检测各组ASIC2、ASIC3蛋白表达,Realtime RT-PCR法检测各组ASIC2、ASIC3的基因表达,并应用2^(-△Ctof)得出各组大鼠ASIC2、ASIC3的基因表达多少。腹主动脉抽血,离心后通过ELISA法检测肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)含量。结果:电针"内关"穴可降低心肌缺血大鼠ASIC2、ASIC3蛋白及基因表达,降低肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)含量,与模型组比较有显著差异(P<0.01)。结论:电针"内关"穴可降低心肌缺血大鼠ASIC2、ASIC3蛋白及基因表达,从而抑制酸敏感离子通道开放,有效改善心肌缺血大鼠心肌细胞的损伤。
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关键词
内关
ASIC2
ASIC3
蛋白
基因
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职称材料
题名
pEGFP-C2-ASIC2a真核表达载体的构建及其在大鼠关节软骨细胞中的表达
1
作者
倪文琳
唐杰
潘春晓
葛金芳
陈飞虎
机构
安徽医科大学药学院
出处
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2014年第3期304-308,共5页
基金
国家自然科学基金(编号:81271949)
文摘
目的通过构建真核表达pEGFP-C2-ASIC2a质粒,转染大鼠关节软骨细胞,建立ASIC2a在关节软骨细胞中过表达的模型,观察ASIC2a mRNA及其蛋白在细胞中的表达。方法从大鼠脑组织中提取目的基因ASIC2a,并用EcoRⅠ和KpnⅠ进行双酶切,同时用这两种酶双酶切质粒pEGFPC2,将其酶切产物按常规方法连接并转化入大肠杆菌DH5a,挑单克隆菌进行培养,提取质粒,再通过双酶切鉴定及测序后,用Lipofectamine 2000将所构建质粒转染入关节软骨细胞,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,使用RT-PCR和Western blot法检测ASIC2a mRNA和蛋白表达,以鉴定模型建立成功与否。结果进行双酶切鉴定目的条带清晰准确,转染后可在荧光显微镜下观察到绿色荧光表达,通过RT-PCR可发现mRNA转录,Western blot法可发现目的蛋白表达。结论成功构建重组pEGFP-C2-ASIC2a表达载体,将用于进一步观察ASICs对软骨细胞的影响。
关键词
asic2a
PEGFP-C2
软骨细胞
基因表达
蛋白表达
Keywords
asic2a
pEGFP-C2
chondrocytes
gene expression
protein expression
分类号
R593.22 [医药卫生—内科学]
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职称材料
题名
电针“内关”穴对心肌缺血大鼠ASIC2、ASIC3蛋白及基因表达影响的实验研究
被引量：
4
2
作者
王树东
董宝强
张立德
机构
辽宁中医药大学
出处
《中华中医药学刊》
CAS
北大核心
2015年第6期1360-1363,共4页
基金
国家重点基础研究发展计划(973计划)项目(2012CB518503)
文摘
目的:实验通过电针"内关"穴,观察其对心肌缺血大鼠ASIC2、ASIC3蛋白及基因表达的影响。方法:选用健康SPF级雄性SD大鼠50只,体质量(230±50)g,由辽宁长生生物技术有限公司提供,采用随机对照方法分为正常组(A)、模型组(B)、内关组(C)、列缺组(D)、非经非穴组(E),每组10只。四肢皮下多点注射异丙肾上腺素。剂量:85 mg/kg,日1次,连续两次成模。造模成功后,分别进行电针治疗。1周后,各组SD大鼠腹腔注射水合氯醛(1 m L/100 g),活体分离大鼠左心室心肌,置于EP管中,放入-70℃冰箱,Western blot法检测各组ASIC2、ASIC3蛋白表达,Realtime RT-PCR法检测各组ASIC2、ASIC3的基因表达,并应用2^(-△Ctof)得出各组大鼠ASIC2、ASIC3的基因表达多少。腹主动脉抽血,离心后通过ELISA法检测肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)含量。结果:电针"内关"穴可降低心肌缺血大鼠ASIC2、ASIC3蛋白及基因表达,降低肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)含量,与模型组比较有显著差异(P<0.01)。结论:电针"内关"穴可降低心肌缺血大鼠ASIC2、ASIC3蛋白及基因表达,从而抑制酸敏感离子通道开放,有效改善心肌缺血大鼠心肌细胞的损伤。
关键词
内关
ASIC2
ASIC3
蛋白
基因
Keywords
Neiguan
ASIC2
ASIC3
proteins
genome
分类号
R245 [医药卫生—针灸推拿学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
pEGFP-C2-ASIC2a真核表达载体的构建及其在大鼠关节软骨细胞中的表达
倪文琳
唐杰
潘春晓
葛金芳
陈飞虎
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2014
0
在线阅读
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职称材料
2
电针“内关”穴对心肌缺血大鼠ASIC2、ASIC3蛋白及基因表达影响的实验研究
王树东
董宝强
张立德
《中华中医药学刊》
CAS
北大核心
2015
4
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