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猪胸膜肺炎放线杆菌Apx毒素的研究进展
1
作者 张欣 马魁 罗满林 《广东畜牧兽医科技》 2006年第5期15-17,共3页
猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的细菌性呼吸道传染病。Apx毒素(actinbacillus pleuropneumoniae toxin)是由胸膜肺炎放线杆菌分泌的一类溶血毒素,在胸膜肺炎放线杆菌致病过程中,Apx... 猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的细菌性呼吸道传染病。Apx毒素(actinbacillus pleuropneumoniae toxin)是由胸膜肺炎放线杆菌分泌的一类溶血毒素,在胸膜肺炎放线杆菌致病过程中,Apx毒素起了重要的作用。 展开更多
关键词 胸膜肺炎放线杆菌 apx毒素 猪
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胸膜肺炎放线杆菌在不同培养基中生长、生物膜形成及Apx毒素分泌能力的差异研究 被引量：5
2
作者 吕佩帅 张丽红 +4 位作者 丁小松 郭芳芳 崔一芳 曹晓亚 徐福洲 《动物医学进展》 北大核心 2022年第1期6-11,共6页
为比较胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清1型~12型菌株在不同培养基中的生长、生物膜形成以及Apx毒素分泌能力的差异,选用5种细菌培养基BHI、LB、MHB、PPLO和TSB,首先测定APP不同血清型菌株在5种培养基中的生长曲线,进而测定不同血清型菌株在5... 为比较胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清1型~12型菌株在不同培养基中的生长、生物膜形成以及Apx毒素分泌能力的差异,选用5种细菌培养基BHI、LB、MHB、PPLO和TSB,首先测定APP不同血清型菌株在5种培养基中的生长曲线,进而测定不同血清型菌株在5种培养基中的生物膜形成能力,同时测定这些菌株对20种抗菌药物的耐药性,最后测定APP血清1型菌株在5种培养基中添加CaCl_(2)对ApxⅠ毒素分泌的影响。结果显示,APP不同血清型菌株在BHI和TSB中生长较好,而在MHB、LB和PPLO生长较差;在不同培养基中培养24 h生物膜形成能力为MHB>BHI>TSB>LB>PPLO,血清3、4、7型和12型参考菌株生物膜形成能力较强;药敏结果显示,APP不同血清型菌株仅对万古霉素耐药;Apx毒素分泌结果显示,ApxⅠ在MHB、LB和PPLO中表达量显著高于BHI和TSB,而且培养基中添加5 mmol/L CaCl_(2)后ApxⅠ分泌量显著增加。研究结果可为分析APP不同血清型菌株在不同培养基中的生物学特性以及疫苗研制提供参考。 展开更多
关键词 胸膜肺炎放线杆菌 生长曲线 生物膜形成 apx毒素
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猪胸膜肺炎放线杆菌Apx毒素的分子生物学与致病机理 被引量：2
3
作者 胡成名 文心田 +1 位作者 曹三杰 黄小波 《动物医学进展》 CSCD 2007年第7期94-98,共5页
猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌（App）引起的猪的一种呼吸道传染病。到目前为止,APP已经被分离鉴定出了15种血清型（1~15）。15种血清型的APP能产生属于RTX毒素家族的4种Apx毒素,分别为ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ和ApxⅣ。ApxⅠ操纵... 猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌（App）引起的猪的一种呼吸道传染病。到目前为止,APP已经被分离鉴定出了15种血清型（1~15）。15种血清型的APP能产生属于RTX毒素家族的4种Apx毒素,分别为ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ和ApxⅣ。ApxⅠ操纵子包含有ApxⅠC、A、B、D 4个基因;ApxⅠ毒素含有13个富含甘氨酸的重复区。ApxⅡ操纵子仅包括结构基因ApxⅡA和激活基因ApxⅡC,而无分泌基因;ApxⅡ蛋白含有8个甘氨酸的序列重复。ApxⅢ操纵子与ApxⅠ操纵子相同,具有一个完整的操纵子;ApxⅢ在N-末端有3个疏水区,在C末端部分有13个富含甘氨酸的区域。Apx毒素的致病机理为先由没有活性的前体蛋白转变为有活性的ApxA蛋白,再由有活性的ApxA蛋白侵害细胞。 展开更多
关键词 胸膜肺炎放线杆菌 apx毒素 分子生物学 致病机理
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突变缺失Apx毒素分泌蛋白基因apxⅢB和apxⅢD的胸膜肺炎放线杆菌血清2型的构建与鉴定
4
作者 Park C 邱文英 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第2期124-124,共1页
经鉴定,Apx毒素是猪胸膜肺炎的病原体—胸膜肺炎放线杆菌的重要毒力因子。在一些胸膜肺炎放线杆菌血清型中,Apx毒素是由apxⅢB和apxⅢD编码后经细胞膜分泌的。为了构建1株抗胸膜肺炎放线杆菌的活疫苗株,笔者将胸膜肺炎放线杆菌血清2型菌... 经鉴定,Apx毒素是猪胸膜肺炎的病原体—胸膜肺炎放线杆菌的重要毒力因子。在一些胸膜肺炎放线杆菌血清型中,Apx毒素是由apxⅢB和apxⅢD编码后经细胞膜分泌的。为了构建1株抗胸膜肺炎放线杆菌的活疫苗株,笔者将胸膜肺炎放线杆菌血清2型菌株-1536的apxⅢB和apxⅢD基因进行灭活,从而构建DeltaapxⅢB/DapxⅢD突变株(1536DeltaBDeltaD)。用活的1536DeltaBDeltaD胸膜肺炎放线杆菌对猪进行免疫后,能保护猪免于同源的野生型胸膜肺炎放线杆菌1536的攻击。因此,被损坏的Apx毒素分泌物可使胸膜肺炎放线杆菌的毒力减弱,并可作为开发胸膜肺炎放线杆菌弱毒疫苗的有效策略。 展开更多
关键词 胸膜肺炎放线杆菌 apx毒素 分泌蛋白基因apxⅢB和apxⅢD 弱毒疫苗
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胸膜肺炎放线杆菌ApxII毒素结构基因的原核表达以及重组蛋白的免疫原性分析 被引量：7
5
作者 王春来 刘思国 +3 位作者 王牟平 彭永刚 宫强 孔宪刚 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期63-66,共4页
猪传染性胸膜肺炎(Porcine infectious pleuropneumonia)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的猪的一种呼吸道疾病。本实验以APP血清7型的一株现地分离株L25-4株为研究对象,对其分泌的ApxⅡ毒素的结构基因... 猪传染性胸膜肺炎(Porcine infectious pleuropneumonia)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的猪的一种呼吸道疾病。本实验以APP血清7型的一株现地分离株L25-4株为研究对象,对其分泌的ApxⅡ毒素的结构基因apxⅡA进行了全基因克隆和测序,并利用原核表达载体pGEX-6P-1在E.coli中进行了原核表达。表达产物以包涵体形式存在,包涵体蛋白经过洗涤后作为抗原用于Western-blotting免疫印迹实验,结果表明重组的ApxⅡA蛋白具有良好的免疫原性。 展开更多
关键词 胸膜肺炎放线杆菌 apxⅡ毒素 原核表达 免疫原性
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抗猪胸膜肺炎放线杆菌ApxIV毒素单克隆抗体的制备及初步应用 被引量：2
6
作者 张志妮 张伟娟 +5 位作者 林燕清 顾万军 黄良宗 朱军 姚丰华 朱国强 《中国动物传染病学报》 CAS 2009年第4期36-42,共7页
据猪胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae,App）apxⅣ毒素基因5′端的保守区域设计一对特异性引物,应用PCR方法扩增出致病性App1~12血清型菌株的保守5′端序列片段,构建的重组质粒pETapxⅣN经IPTG诱导表达出分子量大小为... 据猪胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae,App）apxⅣ毒素基因5′端的保守区域设计一对特异性引物,应用PCR方法扩增出致病性App1~12血清型菌株的保守5′端序列片段,构建的重组质粒pETapxⅣN经IPTG诱导表达出分子量大小为35.3kDa的可溶性重组蛋白。以亲和层析试剂盒纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备抗ApxⅣ毒素单克隆抗体（McAb）。以间接ELISA法筛选到两株分泌稳定、抗体亚类均为IgGl的杂交瘤细胞5B7和5C11,其培养上清和小鼠腹水抗体效价分别为1∶64、1∶128和1∶64 000、1∶128 000.两株单抗与临床猪瘟病毒、猪圆环病毒、猪呼吸道繁殖障碍综合征病毒、猪黄、白痢产肠毒素大肠杆菌和猪肺疫多杀性巴氏杆菌感染阳性血清均不发生交叉反应,显示出良好的特异性.竞争性结合试验表明两株单抗识别不同的抗原结合表位.以（NH4）2SO4盐析法纯化的5C11小鼠腹水单抗包被酶标板,生物素标记纯化的5B7单抗建立了检测ApxⅣ毒素的双抗体夹心ELISA法,其包被单抗最佳工作浓度为4μg/ml,生物素标记单抗最佳工作浓度为0.8μg/mL,对重组表达ApxⅣ毒素（rApxⅣ）的最低检出量为60pg/mL。从10份临床病猪血清样本中检出6份ApxⅣ毒素阳性,与细菌分离鉴定和PCR结果相符合,结果表明此法可用于App感染的临床诊断。 展开更多
关键词 猪胸膜肺炎放线杆菌 apxⅣ毒素 表达 单克隆抗体
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胸膜肺炎放线杆菌Apxll毒素的基因序列特征
7
作者 王春来 刘思国 +3 位作者 邵美丽 宫强 郭设平 王勇 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期653-657,共5页
为了深入地了解胸膜肺炎放线杆菌(APP)分泌的ApxⅡ毒素的分子结构及序列特征,本实验以一株APP 7型现地分离株L25-4株为实验材料,对其分泌的ApXⅡ毒素的结构基因apxⅡA及其上游启动子区进行了PCR扩增和测序。结果表明APP7型L25-4株apxⅡ... 为了深入地了解胸膜肺炎放线杆菌(APP)分泌的ApxⅡ毒素的分子结构及序列特征,本实验以一株APP 7型现地分离株L25-4株为实验材料,对其分泌的ApXⅡ毒素的结构基因apxⅡA及其上游启动子区进行了PCR扩增和测序。结果表明APP7型L25-4株apxⅡA基因与其它血清型apxⅡA基因核苷酸序列同源性达99．5%以上,氨基酸序列同源性达98．5%以上。在ApxⅡA蛋白的N末端有3个大的疏水结构域,分布在240～422位氨基酸之间。在ApxⅡA蛋白的C末端有富含甘氨酸(Gly)和天门冬氨酸(Asp)的九肽(nonapeptides)重复序列Leu/Ile/Phe-Xaa-Gly-Gly-Xaa-Gly-Asm/Ssp-Asp-Xaa,串连重复9次。这些结构域的起始氨基酸的位置分别为374、503、630、735、753、762、771、780和802。推定的赖氨酸酰基化作用位点为557位氨基酸,与E．coli的HlyA相比,在688位氨基酸处少了一个赖氨酸酰基化作用位点。apxⅡA基因启动子-10区序列为AATAAT,-35区序列为TTAAT,-10区与-35区间隔序列为11个碱基。 展开更多
关键词 胸膜肺炎放线杆菌 apxⅡ毒素 序列特征
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猪传染性胸膜肺炎疫苗抗原ApxⅡ在谷氨酸棒杆菌中的表达及发酵条件优化 被引量：2
8
作者 程世前 康竞艺 +3 位作者 陈萌轩 刘秀霞 杨艳坤 白仲虎 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第12期2310-2316,共7页
猪胸膜肺炎放线杆菌是一种高度传染性、致死性呼吸道疾病,已造成养猪业严重损失。细胞毒素ApxⅡ是猪胸膜肺炎PCP(Porcine contagious pleuropneumonia)的主要抗原之一,可以作为猪胸膜肺炎疫苗的有效成分。谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium ... 猪胸膜肺炎放线杆菌是一种高度传染性、致死性呼吸道疾病,已造成养猪业严重损失。细胞毒素ApxⅡ是猪胸膜肺炎PCP(Porcine contagious pleuropneumonia)的主要抗原之一,可以作为猪胸膜肺炎疫苗的有效成分。谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)具有无内毒素和较发达分泌系统的优点,是非常有潜力的重组细菌疫苗蛋白质表达系统。利用C.glutamicum表达系统生产ApxⅡ,实现其高效稳定表达,可为疫苗生产提供技术基础。前期研究已构建ApxⅡ分泌表达菌株,为进一步提高ApxⅡ的表达产量,通过在24孔板发酵优化,得到最优的培养基为CGXⅡ-YT,最优的表达温度为30℃,IPTG浓度为1.0 mmol/L,加入IPTG前培养6 h,发酵培养时间为24 h。进一步在摇瓶中放大发酵培养结果与24孔板发酵培养结果相同。最后在容积为5 L发酵罐中对ApxⅡ进行表达,与使用基础发酵培养基发酵相比,使用CGXⅡ-YT发酵培养基,且在优化后的发酵条件下ApxⅡ表达量明显提高,达到了114.60 mg/L。本研究实现了ApxⅡ在谷氨酸棒杆菌中的分泌表达,为其进一步扩大化生产提供了基础。 展开更多
关键词 细胞毒素apxⅡ 谷氨酸棒杆菌 表达
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猪胸膜肺炎放线杆菌新疆株的分离鉴定及ApxⅣA基因的克隆与序列分析 被引量：1
9
作者 郝成武 王永霞 +1 位作者 李尚华 马勋 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第5期166-169,共4页
从新疆北疆4个规模化猪场的20份发病猪病料中分离到1株细菌。经形态染色镜检、培养特性、生化特性和部分生物学特性试验鉴定为猪胸膜肺炎放线杆菌。根据猪胸膜肺炎放线杆菌ⅣA毒素基因特异性引物进行PCR扩增,得到1条与预期大小一致的242... 从新疆北疆4个规模化猪场的20份发病猪病料中分离到1株细菌。经形态染色镜检、培养特性、生化特性和部分生物学特性试验鉴定为猪胸膜肺炎放线杆菌。根据猪胸膜肺炎放线杆菌ⅣA毒素基因特异性引物进行PCR扩增,得到1条与预期大小一致的2427bp的条带,将PCR产物纯化后克隆至pMD19-T载体上并测序。结果表明,该片段的碱基序列与GenBank中参考序列的同源性为98%,并与三株标准株比较,同源性分别为98.23%、99.46%和98.06%。 展开更多
关键词 分离 鉴定 apxⅣ毒素基因克隆 序列分析
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