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低氧、低氧训练对AMPKα2三种不同基因状态鼠骨骼肌GLUT4表达及肌糖原含量的影响 被引量:9
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作者 龚豪杰 张楠 +2 位作者 姚璐 谢谨 张缨 《体育科学》 CSSCI 北大核心 2010年第5期41-48,共8页
目的:研究2周低氧、低氧训练对AMPKα2三种不同基因状态鼠骨骼肌GLUT4表达及肌糖原含量的影响,以探讨低氧、低氧训练对小鼠骨骼肌GLUT4基因和蛋白表达的影响及可能机制。方法:野生小鼠和AMPKα2高表达转基因小鼠,AMPKα2基因敲除小鼠各3... 目的:研究2周低氧、低氧训练对AMPKα2三种不同基因状态鼠骨骼肌GLUT4表达及肌糖原含量的影响,以探讨低氧、低氧训练对小鼠骨骼肌GLUT4基因和蛋白表达的影响及可能机制。方法:野生小鼠和AMPKα2高表达转基因小鼠,AMPKα2基因敲除小鼠各30只,分别随即分为常氧对照组、低氧暴露组和低氧训练组。低氧暴露组小鼠于低氧房(模拟海拔4000m高度,氧浓度约为12.3%)低氧暴露2周,低氧训练组小鼠2周低氧暴露同时每天于同浓度低氧房中跑台运动1h,跑台速度12m/min。最后一次跑台训练后12h取材,测定小鼠骨骼肌GLUT4基因和蛋白表达、AMPKα2蛋白表达以及肌糖原水平。结果:1)野生鼠,2周低氧暴露以及2周低氧训练后GLUT4基因和蛋白含量,与常氧对照组相比均显著增加,且低氧训练组小鼠比低氧暴露组增加更为显著。2)AMPKα2的高表达小鼠与野生鼠相比,2周低氧暴露后GLUT4蛋白和基因含量并没有显著差异,而经过2周低氧训练后,AMPKα2的高表达鼠骨骼肌GLUT4蛋白和基因表达量比野生鼠增加更为显著。3)AMPKα2基因敲除小鼠骨骼肌GLUT4表达量2周低氧训练后与野生鼠相比无显著差异,而2周低氧暴露后显著低于野生鼠。结论:1)低氧及低氧训练均能引起骨骼肌GLUT4表达的增多,且低氧和训练引起的GLUT4表达的增多可能有叠加效应。2)在低氧+训练双重刺激下,AMPKα2的高表达参与了调节GLUT4基因和蛋白表达的增加。3)低氧暴露引起的GLUT4基因和蛋白表达的增加至少部分是依赖AMPKα2调节,而在低氧+训练双重刺激下,机体还可以募集其他的信号通路完全代偿AMPKα2对GLUT4表达的调节作用。 展开更多
关键词 ampkα2高表达转基因小鼠 ampkα2基因敲除小鼠 GLUT4 肌糖原 低氧训练
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pCAG-3×flag-PP2A Cα转基因小鼠构建及高表达系的筛选 被引量:1
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作者 周建丽 赖娅娜 +1 位作者 李树珍 曾文滔 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期283-287,共5页
目的:构建过表达pCAG-3×flag-PP2A Cα转基因小鼠,筛选高表达稳定遗传系,建立PP2A Cα基因相关功能研究模型动物。方法:将Flag蛋白标签序列与鼠源PP2A Cαc DNA转录本设计成融合基因,插入CAG启动子下游,构建过表达载体pCAG-3×... 目的:构建过表达pCAG-3×flag-PP2A Cα转基因小鼠,筛选高表达稳定遗传系,建立PP2A Cα基因相关功能研究模型动物。方法:将Flag蛋白标签序列与鼠源PP2A Cαc DNA转录本设计成融合基因,插入CAG启动子下游,构建过表达载体pCAG-3×flag-PP2A Cα。通过原核显微注射技术,将线性化pCAG-3×flag-PP2A Cα质粒注射入受精卵雄原核,构建pCAG-3×flag-PP2A Cα过表达模型小鼠,PCR筛选阳性过表达小鼠。提取阳性过表达小鼠组织总蛋白,在蛋白质水平分析转基因小鼠3×flag-PP2A Cα的表达。结果:PCR鉴定及测序结果证实,pCAG-3×flag-PP2A Cα转基因载体及过表达pCAG-3×flag-PP2A Cα转基因小鼠模型构建成功。Western blot筛选转基因高表达系小鼠。结论:筛选得到pCAG-3×flag-PP2A Cα高表达稳定遗传系小鼠。 展开更多
关键词 pCAG-3×flag-PP2A 转基因小鼠 表达
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hβ2m/HLA-B2704双转基因小鼠的制备及β2m对HLA-B2704表达的影响
3
作者 陈占昆 吕厚山 +3 位作者 王东 蒋东芳 艾京 王申五 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期327-331,共5页
制备hβ2m HLA B2 70 4双转基因小鼠 ,研究hβ2m对HLA B2 70 4表达的影响 .通过hβ2m转基因小鼠和HLA B2 70 4转基因小鼠交配 ,出生动物及后代经PCR初步筛选 ,采用Southern杂交对经PCR初步筛选的hβ2m HLA B2 70 4双转基因阳性小鼠基因... 制备hβ2m HLA B2 70 4双转基因小鼠 ,研究hβ2m对HLA B2 70 4表达的影响 .通过hβ2m转基因小鼠和HLA B2 70 4转基因小鼠交配 ,出生动物及后代经PCR初步筛选 ,采用Southern杂交对经PCR初步筛选的hβ2m HLA B2 70 4双转基因阳性小鼠基因组DNA标本作进一步鉴定 .阳性者进行RT PCR和流式细胞光度术检测其在mRNA和蛋白水平的表达 .hβ2m阳性小鼠和HLA B2 70 4阳性小鼠交配 ,生仔鼠 6 7只 ,其中 2 8只仔鼠同时整合hβ2m和HLA B2 70 4基因 .Southern杂交证实 ,阳性鼠同时都含有hβ2m和HLA B2 70 4基因 .阳性小鼠的皮肤、结肠、睾丸和脾脏组织中均有HLA B2 70 4和hβ2m基因的mRNA表达 ,其外周血淋巴细胞膜上HLA B2 70 4基因的蛋白表达为 35 87% ,在HLA B2 70 4单转基因小鼠外周血淋巴细胞膜上HLA B2 70 4基因的蛋白表达为 7 87% (Histogramsta tistics) .成功地制备了hβ2m HLA B2 70 4双转基因小鼠 .在hβ2m HLA B2 70 4双转基因小鼠的外周血淋巴细胞膜上 ,HLA B2 70 4基因在蛋白水平表达较高 ,而在HLA B2 70 4单转基因小鼠中则表达不明显 .hβ2m可与HLA B2 70 4重链分子结合 。 展开更多
关键词 人β2微球蛋白 HLA-B2704 转基因小鼠 表达 强直性脊柱炎
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不同强度运动对AMPKα2三种不同基因状态鼠MEF2/GLUT4 DNA结合活性的影响 被引量:12
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作者 龚豪杰 谢谨 +2 位作者 张楠 姚璐 张缨 《体育科学》 CSSCI 北大核心 2011年第2期55-63,共9页
目的:研究不同强度跑台运动对AMPKα2三种不同基因状态鼠MEF2/GLUT4DNA结合活性及GLUT4基因表达的影响,以探讨运动提高骨骼肌MEF2/GLUT4DNA结合活性及GLUT4基因表达可能机制。方法:野生小鼠和AMPKα2高表达转基因小鼠,AMPKα2基因敲除... 目的:研究不同强度跑台运动对AMPKα2三种不同基因状态鼠MEF2/GLUT4DNA结合活性及GLUT4基因表达的影响,以探讨运动提高骨骼肌MEF2/GLUT4DNA结合活性及GLUT4基因表达可能机制。方法:野生小鼠和AMPKα2高表达转基因小鼠,AMPKα2基因敲除小鼠各30只,分别随机分为安静对照组、低强度(12m/min)跑台运动组和高强度(20/min)跑台运动组。运动时间均为1h。运动后3h取材。Westernblot法测定AMPK(THr72)磷酸化水平。CHIP法测定MEF2/GLUT4DNA结合活性。Real-TimePCR法测定GLUT4mRNA含量。结果:1)野生鼠1h不同强度跑台运动后,GLUT4基因表达量显著增加的同时,伴随着骨骼肌核内MEF2/GLUT4DNA结合活性的显著增加;2)AMPKα2高表达转基因鼠1h不同强度跑台运动后,其骨骼肌细胞核内MEF2/GLUT4DNA结合活性及GLUT4基因表达量,均比野生鼠增加更为显著;3)AMPKα2敲除鼠1h不同强度跑台运动后,骨骼肌核内MEF2/GLUT4DNA结合活性显著低于野生鼠,但GLUT4基因表达量与野生鼠相比没有显著差异。结论:1)运动通过提高MEF2/GLUT4DNA结合活性而提高GLUT4表达;2)AMPKα2参与调解了运动诱导的MEF2/GLUT4DNA结合活性及GLUT4基因表达量的升高;3)虽然AMPKα2参与调节了运动诱导的MEF2/GLUT4DNA结合活性的提高,但机体还可以募集其他的信号通路代偿AMPKα2对GLUT4表达的调节作用。 展开更多
关键词 ampkα2高表达转基因小鼠 ampkα2基因敲除小鼠 MEF2 GLUT4 动物实验
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腭裂相关基因甲状腺转录因子-2转基因小鼠的生物学特征 被引量:4
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作者 黄磊 石冰 +2 位作者 郑谦 蒙田 王 《华西口腔医学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第4期345-349,共5页
目的建立腭裂相关基因甲状腺转录因子-2(TTF-2)转基因小鼠模型,利用转基因动物模型研究TTF-2基因的活动规律和表达模式发生变化时对腭突发育过程产生的影响。方法采用聚合酶链反应法扩增C57BL/6J小鼠基因组TTF-2基因,将其定向插入pBROAD... 目的建立腭裂相关基因甲状腺转录因子-2(TTF-2)转基因小鼠模型,利用转基因动物模型研究TTF-2基因的活动规律和表达模式发生变化时对腭突发育过程产生的影响。方法采用聚合酶链反应法扩增C57BL/6J小鼠基因组TTF-2基因,将其定向插入pBROAD3-mcs载体,构建重组表达质粒pBROAD3-TTF-2,利用显微注射技术把线性化表达载体注射到受精卵的雄原核中,建立TTF-2转基因小鼠。利用特异引物聚合酶链反应和Southern blot方法鉴定转基因小鼠的基因型,采用免疫组织化学法检测TTF-2基因在转基因小鼠腭突组织中的表达。结果共注射原核期受精卵982枚,发育为2-细胞胚胎的580枚,均移植入48个假孕受体昆明白小鼠中,得到胎鼠68只。提取基因组DNA,发现有13只转基因阳性的胎鼠。免疫组织化学法检测显示TTF-2在转基因小鼠腭突中持续表达。结论通过显微注射法使外源基因pBROAD3-TTF-2整合入小鼠基因组中,成功建立了腭突持续表达TTF-2的转基因小鼠模型,其表现型为腭裂。 展开更多
关键词 甲状腺转录因子-2 持续表达 转基因小鼠 腭裂
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共表达3种纤维素降解酶的转基因小鼠模型的建立与分析 被引量:2
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作者 何祖勇 刘志国 +2 位作者 孙燕霞 丛佩清 陈瑶生 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1162-1169,共8页
本研究旨在应用转基因技术制作能特异性分解纤维素和木质素的转基因单胃动物,对于培育高饲料转化率的家畜具有重要的研究意义。利用2A肽策略构建由EF1α启动子驱动的可同时表达3种能够降解纤维素和木质素的酶(EGXA、BGL4和XYNB)的真核... 本研究旨在应用转基因技术制作能特异性分解纤维素和木质素的转基因单胃动物,对于培育高饲料转化率的家畜具有重要的研究意义。利用2A肽策略构建由EF1α启动子驱动的可同时表达3种能够降解纤维素和木质素的酶(EGXA、BGL4和XYNB)的真核表达载体,并通过原核显微注射技术获得同时表达3种酶的转基因小鼠。经检测发现,2A肽能够介导3种酶同时在HEK293A细胞中正常表达。通过酶活分析、Western blot和免疫组织化学等检测发现,3种酶均能在转基因小鼠消化系统各组织中表达,并且具有正常活性。本研究结果表明,在EF1α启动子的控制下,2A肽能够在小鼠中介导EGXA、BGL4和XYNB的正常表达,并成功建立表达外源纤维素酶和木质素酶的转基因小鼠模型,为培育具有高饲料转化率的动物奠定研究基础。 展开更多
关键词 Β-葡萄糖苷酶 纤维素酶 表达 转基因小鼠 木聚糖酶 2A肽
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抗人p185^(erbB2)人-鼠嵌合抗体真核表达载体的构建表达及活性测定 被引量:2
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作者 姜北海 刘文斌 +2 位作者 孟麟 吴健 寿成超 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期491-495,共5页
目的 :HER2 /neu过度表达见于多种恶性肿瘤。作为肿瘤抗原 ,p185 erbB2 是一个理想的肿瘤治疗靶点。本实验在既往工作基础上 ,构建嵌合型抗p185 erbB2 单克隆抗体 (单抗 )的真核表达载体 ,并在CHO dhfr-细胞中表达 ,从而降低鼠源性抗体... 目的 :HER2 /neu过度表达见于多种恶性肿瘤。作为肿瘤抗原 ,p185 erbB2 是一个理想的肿瘤治疗靶点。本实验在既往工作基础上 ,构建嵌合型抗p185 erbB2 单克隆抗体 (单抗 )的真核表达载体 ,并在CHO dhfr-细胞中表达 ,从而降低鼠源性抗体的免疫原性 ,为进一步的应用研究奠定基础。方法 :RT -PCR扩增p185 erbB2 单抗 1 2的轻、重链可变区基因 ,插入嵌合抗体真核表达载体pWSD2中 ,脂质体转染CHO dhfr-细胞。经RT -PCR、间接ELISA、Westernblot检测人 -鼠嵌合抗体的表达水平 ,用ELISA、免疫沉淀方法对嵌合抗体的亲和力和特异性进行初步鉴定。此外 ,采用MTT比色法检测嵌合抗体对高表达p185 erbB2 的乳腺癌细胞系SKBR3的生长抑制作用。结果 :用RT -PCR、间接ELISA、Westernblot方法证明人 -鼠嵌合抗体在CHO dhfr-细胞中表达 ;ELISA检测提示嵌合抗体与高表达p185 erbB2的细胞反应阳性 ,与低表达p185 erbB2 的细胞反应阴性 ;免疫沉淀结果表明嵌合抗体可与p185 erbB2 分子特异性结合 ;MTT比色法检测表明嵌合抗体对过表达p185 erbB2 的乳腺癌细胞SKBR3的生长有抑制作用。结论 :CHO dhfr-细胞表达的人 -鼠嵌合抗体可与p185 erbB2 特异性结合 ,并可抑制高表达p185 erbB2 的肿瘤细胞生长 ,表明抗人p185 erbB2 人 展开更多
关键词 p185^erbB2 人-嵌合抗体 真核表达载体 CHO 表达 RT-PCR 乳腺癌细胞 特异性结合 HER2/NEU 重链可变区
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利用SDS-PAGE鉴定转基因小麦HMW-GS的表达类型和后代遗传 被引量:3
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作者 杨凤萍 梁荣奇 +2 位作者 陈绪清 韩立新 张晓东 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2005年第2期1-4,共4页
采用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)在蛋白质水平上对T2~T5代小麦转基因株系高分子量谷蛋白亚基(HMW GS)的遗传表达及其分离进行了鉴定和分析。结果发现,外源1Dx5和1Dy10基因在T2代部分株系中表达;在有的株系中出现了原亚基(8亚基)... 采用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)在蛋白质水平上对T2~T5代小麦转基因株系高分子量谷蛋白亚基(HMW GS)的遗传表达及其分离进行了鉴定和分析。结果发现,外源1Dx5和1Dy10基因在T2代部分株系中表达;在有的株系中出现了原亚基(8亚基)的缺失或沉默和新亚基(暂定8 )的产生,因而检测出2+5+10+12,2+5+7+8 +10+12,5+7+10,2+7+10+12的多种类型。对2+5+10+12型株系进行了多代跟踪分析,发现其在T2~T5代陆续发生分离,存在于不同单株、不同单穗的子粒和同一单粒后代之间。经筛选,获得了天然不存在的亚基类型为2+5+10+12,2+10+12,2+5+12等稳定表达的种质创新株系。 展开更多
关键词 SDS-PAGE HMW-GS 转基因小麦 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 类型 后代 鉴定 分子量谷蛋白亚基 蛋白质水平 遗传表达 跟踪分析 稳定表达 新株系 分离 2 单株 子粒 种质
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早期“强制性使用”对局灶性脑梗死大鼠大脑皮层微管相关蛋白-2表达的影响 被引量:2
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作者 槐雅萍 贾子善 宋华勤 《中国康复医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期264-266,共3页
目的:探讨早期“强制性使用”对局灶性脑梗死大鼠大脑皮层微管相关蛋白-2(M A P-2)表达的影响。方法:70只W istar大鼠随机分为假手术(D)组(10只)和手术组(60只),后者制作成右侧大脑中动脉阻塞(M CAO)模型,24h后再分为患侧前肢固定(A)组... 目的:探讨早期“强制性使用”对局灶性脑梗死大鼠大脑皮层微管相关蛋白-2(M A P-2)表达的影响。方法:70只W istar大鼠随机分为假手术(D)组(10只)和手术组(60只),后者制作成右侧大脑中动脉阻塞(M CAO)模型,24h后再分为患侧前肢固定(A)组、未固定(B)组和健侧前肢固定(C)组,每组20只。21天后解除固定,于M CA O后21天和28天时,用免疫组化的方法检测梗死灶周围大脑皮质M AP-2的表达。结果:与D组相比,手术组大鼠梗死灶周围皮质M AP-2阳性神经元数量明显减少,但光密度值增高(P<0.05或P<0.01);手术组大鼠梗死灶周围皮质M AP-2阳性细胞数及光密度值,B组高于A组,A组高于C组(P<0.05)。结论:脑缺血损伤可刺激M AP-2的表达,肢体固定或过度使用对梗死灶周围皮质部分神经元代偿性高表达M A P-2有不利影响,其中患侧前肢过度使用的影响尤其明显。 展开更多
关键词 局灶性脑梗死 微管相关蛋白-2 大脑皮层 强制性 早期 右侧大脑中动脉阻塞 MAP-2 Wistar大 光密度值 过度使用 神经元数量 脑缺血损伤 梗死灶 MCAO 大脑皮质 免疫组化 0.05 肢体固定 手术 周围 前肢 24h 细胞数 表达
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日粮诱导肥胖小鼠日粮中添加5、7、45-三羟基异黄酮改变肝基因表达
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《饲料工业》 2005年第10期16-16,共1页
据报导,5,7,45-三羟基异黄酮可通过过氧化物酶受体α-HepG2细胞的活化提高影响脂肪酸代谢基因的表达。5,7,45-三羟基异黄酮对于人类的肥胖和高血脂类的油脂变态的治疗应用有很大的潜力。我们通过饲喂高脂日粮诱导肥胖小鼠,利用cDN... 据报导,5,7,45-三羟基异黄酮可通过过氧化物酶受体α-HepG2细胞的活化提高影响脂肪酸代谢基因的表达。5,7,45-三羟基异黄酮对于人类的肥胖和高血脂类的油脂变态的治疗应用有很大的潜力。我们通过饲喂高脂日粮诱导肥胖小鼠,利用cDNA微排列研究5,7,45-三羟基异黄酮对肝cDNA的形成轮廓的影响。C57BL/6J雄鼠(每组10只)分别喂给低脂13粮、高脂13粮或高脂+2g/kg5,7,45-三羟基异黄酮日粮12周。 展开更多
关键词 异黄酮 三羟基 日粮 肥胖 基因表达 小鼠 诱导 HepG2细胞 添加 cDNA 脂肪酸代谢 过氧化物酶 治疗应用 受体
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口腔上皮白细胞介素-1α的过表达可导致牙周病
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作者 赵蕾 《国外医学(口腔医学分册)》 2005年第3期246-246,共1页
关键词 白细胞介素-1Α 口腔上皮 牙周病 表达 Res IL-1Α 特征性症状 角质细胞 细胞来源 转基因 牙周炎 启动子 角蛋白 相关性 表达
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